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3D培养体系富集外周血中的循环肿瘤干细胞的研究
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作者 周鲁林 张文 +3 位作者 段新春 郭丽萍 冯林 张开泰 《中国肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期381-386,共6页
[目的]探究建立3D培养体系富集外周血中的循环肿瘤干细胞。[方法]应用阴性筛选的方法富集外周血中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),随后利用3D培养体系将富集得到的细胞进行培养。采用免疫荧光、定量RT-PCR对3D培养的前... [目的]探究建立3D培养体系富集外周血中的循环肿瘤干细胞。[方法]应用阴性筛选的方法富集外周血中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),随后利用3D培养体系将富集得到的细胞进行培养。采用免疫荧光、定量RT-PCR对3D培养的前列腺癌LNCaP细胞系、肺癌H2347细胞系的干性表型特征进行分析。使用肺癌患者的血液样本分离CTCs进行3D培养验证该方法的可行性。[结果]在光镜下可观察到,在3D培养体系中从外周血分离的前列腺癌LNCaP细胞增殖形成肿瘤细胞微球。免疫荧光结果显示,在3D培养条件下成团生长的前列腺癌LNCaP细胞表达EpCAM和CD133。在3D无血清培养条件下,LNCaP细胞系成球率为18.67%±3.06%。前列腺癌LNCaP细胞在3D培养体系中与普通2D培养相比,干性相关基因CD133、CD44和ABCG2表达水平明显增高,3D培养的肺癌H2347细胞与普通2D培养相比,干性相关基因CD133表达水平明显升高。肺腺癌患者肺静脉血分离CTCs 3D培养,可形成多个微型肿瘤细胞微球(称为肺癌类器官)。在光镜下观察,同一个患者培养获得的肺癌类器官呈现不同的形态结构特征。[结论]利用3D培养体系能够培养外周血中的CTCs,并富集得到CD133+的肿瘤干细胞。肺癌患者的CTCs 3D培养能够形成肺癌类器官,并能够展现CTCs的异质性。 展开更多
关键词 循环肿瘤细胞 循环肿瘤干细胞 3D培养 类器官
HepaRG和HepG2细胞聚球体的生长形态、细胞色素P450酶和白蛋白表达及对药物肝毒性敏感性的比较
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作者 孟镇锴 李晓旭 +4 位作者 瞿文生 吴纯启 钟武 李云峰 王全军 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期44-53,共10页
目的对比研究人肝祖细胞HepaRG和人肝癌HepG2细胞体外3D聚球体在生长形态、功能蛋白表达和在药物肝毒性检测中敏感性的差异,为体外药物肝毒性检测模型的选择提供实验依据。方法以每孔100个细胞的密度分别将HepaRG和HepG2细胞接种于低吸... 目的对比研究人肝祖细胞HepaRG和人肝癌HepG2细胞体外3D聚球体在生长形态、功能蛋白表达和在药物肝毒性检测中敏感性的差异,为体外药物肝毒性检测模型的选择提供实验依据。方法以每孔100个细胞的密度分别将HepaRG和HepG2细胞接种于低吸附96孔板,构建体外3D肝细胞聚球体。于接种后第3,7,14和21天镜下观察各聚球体的形态,拍照并测定其平均直径;采用实时荧光PCR、免疫荧光染色和Western蛋白印迹法检测2种细胞聚球体中6种细胞色素P450(CYP450)酶和白蛋白mRNA和蛋白表达水平;分别用硫胺素、非阿尿苷、对乙酰氨基酚、苯溴马隆、环磷酰胺、异烟肼和奈法唑酮在2种细胞聚球体上单次或重复给药,采用CCK8法检测细胞存活率,并计算药物半数抑制浓度(IC50)。结果 HepaRG与HepG2细胞聚球体的体积随培养时间延长而增大,接种后第7,14和21天,HepaRG细胞聚球体平均直径分别为317.5,334.3和397.8μm,均小于同期HepG2细胞聚球体(P<0.01);实时荧光PCR结果显示,接种后第7和14天,HepaRG细胞聚球体CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4和白蛋白mRNA表达水平分别上调261.7,55.7,277.1,9.9,44.3,280.7和3.9倍,均高于同期HepG2细胞聚球体(P<0.01);免疫荧光染色和Western蛋白印迹法结果显示,接种后第10天,HepaRG细胞聚球体中CYP1A2,CYP2B6,CYP2C9,CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4和白蛋白的蛋白表达水平分别为同期HepG2细胞聚球体的2.1,1.6,1.9,1.6,1.6,2.2和1.9倍(P<0.05,P<0.01)。重复给药,非阿尿苷、对乙酰氨基酚、苯溴马隆、环磷酰胺、异烟肼和奈法唑酮抑制HepaRG细胞聚球体细胞存活的IC50分别为3.35,2.42,0.37,7.51,3.92和1.11 mmol·L-1,对Hep G2细胞聚球体的IC50分别为36.49,>40,0.87,>20,35.74和2.57 mmol·L-1;单次给药,上述6种药物对2种细胞聚球体细胞存活的IC50均>重复给药IC50,同样对HepRG细胞聚球体的IC50<对HepG2的IC50。结论与HepG2细胞聚球体比较,HepaRG细胞聚球体体� 展开更多
关键词 3D培养 HepaRG细胞 HEPG2细胞 细胞色素P450酶 肝细胞毒性
食管鳞状细胞癌组织体外3D培养
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作者 梁亚冰 张满 +1 位作者 杜华 杨凌 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第3期456-460,共5页
该文将新鲜的食管鳞状细胞癌组织剪成细小的碎块,和基质胶(matrigel)混合在96孔板中进行培养。在培养2、4、6、8、10、12、14、16、18天时取出并固定、石蜡包埋、切片,进行HE染色和Ki-67、P63、P40、细胞角蛋白5/6免疫组织化学实验。HE... 该文将新鲜的食管鳞状细胞癌组织剪成细小的碎块,和基质胶(matrigel)混合在96孔板中进行培养。在培养2、4、6、8、10、12、14、16、18天时取出并固定、石蜡包埋、切片,进行HE染色和Ki-67、P63、P40、细胞角蛋白5/6免疫组织化学实验。HE染色显示,培养的肿瘤组织与原组织基本相同。随着培养时间的延长,组织块变得小,且肿瘤组织有萎缩和退化的现象。随体外培养时间的增加, P40和P63蛋白在肿瘤细胞中的表达变少。Ki-67蛋白在肿瘤组织中表达的强度和比率都随着培养时间的延长而减弱。综上所述,食管鳞状细胞癌的一部分特性会随着体外培养时间的延长而发生变化,所以体外培养天数越短越好。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 3D培养 KI-67 P63 P40 细胞角蛋白5/6
3D培养在神经胶质瘤研究中的应用 预览
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作者 孙慧 赵丽娇 +2 位作者 鲁静 巩培 万方 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第6期1090-1094,共5页
传统的肿瘤研究依赖于肿瘤细胞系构建肿瘤模型,并在细胞基础上测定肿瘤细胞的耐药性等,但在临床实验中大多数肿瘤药物以失败告终,其中最主要的原因是细胞系不能模拟肿瘤细胞在人体内微环境的特性,3D培养技术在肿瘤研究中的应用愈加广泛... 传统的肿瘤研究依赖于肿瘤细胞系构建肿瘤模型,并在细胞基础上测定肿瘤细胞的耐药性等,但在临床实验中大多数肿瘤药物以失败告终,其中最主要的原因是细胞系不能模拟肿瘤细胞在人体内微环境的特性,3D培养技术在肿瘤研究中的应用愈加广泛。本文主要从3D培养在神经胶质瘤研究中的应用进行综述。 展开更多
关键词 3D培养 神经胶质瘤 肿瘤微环境
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培养基或水凝胶球添加胰岛素铁硒转运蛋白对软骨细胞去分化的影响
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作者 刘鑫成 孟星星 +1 位作者 张煜珅 范宏斌 《中国骨与关节损伤杂志》 2019年第4期361-364,共4页
目的在负载软骨细胞的海藻酸钠水凝胶球和/或含血清的培养液中添加胰岛素铁硒转运蛋白(ITS)成分,观察其对软骨细胞去分化的影响。方法用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P2。实验组分为4组:(1)复合细... 目的在负载软骨细胞的海藻酸钠水凝胶球和/或含血清的培养液中添加胰岛素铁硒转运蛋白(ITS)成分,观察其对软骨细胞去分化的影响。方法用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P2。实验组分为4组:(1)复合细胞的2%海藻酸钠水凝胶球在常规培养液中进行3D培养,即M-B-组(M:medium,常规培养液;B:Beads,水凝胶球;+和-分别指含与不含ITS成分);(2)复合细胞的2%海藻酸钠水凝胶球在含1%ITS的培养液进行3D培养,即M+B-组;(3)复合细胞的2%海藻酸钠+1%ITS的水凝胶球在常规培养液中进行3D培养,即M-B+组;(4)复合细胞的2%海藻酸钠+1%ITS的水凝胶球在含1%ITS的培养液中进行3D培养,即M+B+组。培养14d后,各组取水凝胶球进行光镜下直接观察;活死细胞染色观察细胞存活状态;CCK-8试剂检测细胞活力;包埋切片,采用HE染色观察细胞形态;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测软骨细胞Ⅱ型胶原(ColⅡ)和Sox9基因的表达情况。结果活死细胞染色的实验结果显示,4组水凝胶球负载的软骨细胞均具有良好的生长状态,只在镜下见到少量死亡细胞;CCK-8实验结果显示培养液中添加ITS比海藻酸钠水凝胶球内增加ITS更能促进软骨细胞增殖;qRT-PCR结果显示,无论在培养液还是水凝胶球内添加ITS,软骨细胞ColⅡ和Sox9的表达均无显著差异。结论ITS可以提高海藻酸钠水凝胶球3D培养的软骨细胞的增殖能力,且在培养液中添加ITS对此表现更为显著;但在3D培养体系中,ITS尚不能在特异性软骨细胞相关基因表达上表现出强有力的抑制去分化作用。 展开更多
关键词 软骨细胞 海藻酸钠 水凝胶 3D培养 胰岛素铁硒传递蛋白 ITS 组织工程
姜黄素和硫酸镁联合应用协同促进炎性软骨细胞的逆分化 预览
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作者 王洋 宋卓悦 李广恒 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第9期1410-1415,共6页
背景:骨性关节炎是老年人疼痛和致残的常见原因,其根本原因在于不适当的机械应力、炎症递质和生化因子的共同作用。姜黄素已被证明具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、神经保护、心脏保护、辐射防护以及治疗骨关节炎等作用,硫酸镁(MgSO4)... 背景:骨性关节炎是老年人疼痛和致残的常见原因,其根本原因在于不适当的机械应力、炎症递质和生化因子的共同作用。姜黄素已被证明具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤、神经保护、心脏保护、辐射防护以及治疗骨关节炎等作用,硫酸镁(MgSO4)同样具有缓解关节疼痛,促进关节破坏的作用。目的:探究姜黄素和MgSO4联合应用协同促进炎性软骨细胞逆分化的作用机制。方法:原代培养炎性软骨细胞,在体外单层培养条件下,细胞增殖实验检测炎性软骨细胞的增殖情况。实验细胞分为4组,进行体外3D诱导逆分化培养,炎性软骨细胞组为炎性软骨细胞单独培养,姜黄素组采用姜黄素干预培养,MgSO4组为采用MgSO4干预培养,联合治疗组为姜黄素+MgSO4联合干预培养,共培养18 d。结果与结论:①细胞增殖实验显示,第3代炎性软骨细胞早期增殖速率较高,分化程度较低;②定量PCR检测显示,联合治疗组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和SOX9 mRNA表达量均高于姜黄素组或MgSO4组(P<0.01);③体外3D诱导分化培养中联合治疗组的大体标本的尺寸和软骨逆分化的阿尔新蓝染色、番红O染色的阳性区域均明显高于其他3组(P<0.01);④TUNEL染色显示,联合治疗组及MgSO4组凋亡特异性染色的阳性区域均明显小于另外2组(P<0.01);⑤结果证实,联合应用姜黄素和MgSO4具有协同促进炎性软骨细胞逆分化的作用。 展开更多
关键词 骨性关节炎 姜黄素 硫酸镁 3D培养 软骨细胞 炎性软骨细胞 软骨细胞逆分化 软骨退变 细胞增殖 组织工程
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类器官技术在肿瘤研究中的应用与展望 预览
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作者 高坚钧 秦伟 +1 位作者 王浩 钟翔宇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第7期1136-1141,共6页
背景:作为一类新型的体外模型,类器官能用于研究正常组织器官的生理特性,也能稳定地维持肿瘤细胞在体内的特征,同时可应用于抗肿瘤药物筛选和个性化治疗。目的:简述类器官技术的发展历程及现状,综述其在肿瘤研究中的应用。方法:第一作者... 背景:作为一类新型的体外模型,类器官能用于研究正常组织器官的生理特性,也能稳定地维持肿瘤细胞在体内的特征,同时可应用于抗肿瘤药物筛选和个性化治疗。目的:简述类器官技术的发展历程及现状,综述其在肿瘤研究中的应用。方法:第一作者以"类器官,肿瘤研究,3D培养,干细胞;Organoid,Three-dimensional culture,Cancer research,Stem cell"为关键词,检索2013年5月至2018年5月期间收录在CNKI、PubMed数据库中的相关文献,文献类型包括临床研究、基础研究及综述类文章,排除与文章研究目的无关及重复性的文献,最终纳入47篇文献进行综述。结果与结论:肿瘤类器官为癌症研究和治疗提供了可靠的模型,特别是为个性化癌症治疗开辟了新的视野。肿瘤来源的类器官是源自组织或肿瘤特异性干细胞的三维组织细胞簇,它可模拟体内肿瘤特征及肿瘤细胞异质性。目前,科研人员通过优化各种培养条件成功产生了许多肿瘤类器官,包括结肠癌、前列腺癌、胃癌、乳腺癌和胰腺癌、宫内膜/卵巢癌、子宫癌肉瘤、尿路上皮癌和肾癌等。但类器官培养具有明显的局限性,其中之一就是该模型中神经、血管及免疫细胞缺乏,这就使其不能完全表现出器官的全部特征,对于疾病过程的模拟也只能是部分重现。 展开更多
关键词 类器官 3D培养 肿瘤研究 干细胞 个性化治疗 生物材料 肿瘤 组织工程
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小鼠胎肝细胞透明质酸3D培养体系的建立
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作者 颜洁心 王怡 王韫芳 《生物化学与生物物理进展》 CSCD 北大核心 2018年第5期567-574,共8页
为了利用透明质酸建立小鼠胎肝细胞3D培养体系,分离获得胚胎12-14d胎肝细胞,利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养,并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系.胎肝细胞在2D体系中呈现克隆状生长.分离培养获得的肝... 为了利用透明质酸建立小鼠胎肝细胞3D培养体系,分离获得胚胎12-14d胎肝细胞,利用KM培养基进行初步2D肝干/祖细胞的筛选培养,并利用透明质酸及KM培养基配制水凝胶建立3D细胞培养体系.胎肝细胞在2D体系中呈现克隆状生长.分离培养获得的肝干/祖细胞,克隆在透明质酸建立的3D培养体系保持增殖活性,并进一步获得肝细胞功能特性,表现为3D培养上清中白蛋白合成和尿素水平显著增加.定量PCR结果显示,随着3D培养时间的延长,其肝细胞干性标志如AFP、CK19、Ep CAM、Prox1等表达水平都大幅度降低且接近成年小鼠肝脏表达水平.本研究成功建立基于透明质酸的小鼠胎肝细胞的3D无血清培养体系,并可促进小鼠胎肝细胞的肝细胞功能进一步成熟. 展开更多
关键词 胎肝细胞 3D培养 透明质酸
类器官研究进展及其在胃癌中的应用 预览
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作者 陈伟 张常华 何裕隆 《消化肿瘤杂志(电子版)》 2018年第3期127-133,共7页
胃癌是我国主要癌肿之一,发病率和死亡率均位居全部癌症第二位。受制于研究模型的缺乏,胃癌发生机制、胃癌治疗药物开发等研究进展缓慢。类器官(Organoid)是干细胞在体外三维环境中培养所形成的细胞结构;通过体外模拟细胞在体内的... 胃癌是我国主要癌肿之一,发病率和死亡率均位居全部癌症第二位。受制于研究模型的缺乏,胃癌发生机制、胃癌治疗药物开发等研究进展缓慢。类器官(Organoid)是干细胞在体外三维环境中培养所形成的细胞结构;通过体外模拟细胞在体内的生存环境,类器官技术能够高效培养原代细胞,包括正常细胞、肿瘤细胞。来自肿瘤的类器官被称为“瘤器官”(Tumoroid);瘤器官具有很高的“保真性”,能够保持原肿瘤的组织细胞形态、基因组学特征和药敏特征等。由于瘤器官的重要性.全球各种瘤器官生物样本库纷纷被建立起来。在胃癌方面,德国和日本近期分别建立大样本胃癌瘤器官生物样本库,对于研究胃癌发生、胃癌个体化治疗等具有重要意义。本综述针对类器官在胃癌研究中应用的前沿研究进行总结,向大家介绍该领域内的最新进展。 展开更多
关键词 胃癌 类器官 3D培养
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人乳腺癌细胞MDA-MB-231三维培养模型的构建 预览
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作者 彭雪梅 刘永文 张海燕 《山西大同大学学报:自然科学版》 2018年第4期34-38,共5页
本研究旨在摸索一种体外构建人乳腺癌细胞MDA-MB-231三维(3D)培养的新方法,以期建立一种能够模拟体内肿瘤细胞真实形态的理想模型。利用该培养模型比较分析MDA-MB-231与正常乳腺上皮细胞MCF-10A 3D形态发生过程中极性形成的差异,主要... 本研究旨在摸索一种体外构建人乳腺癌细胞MDA-MB-231三维(3D)培养的新方法,以期建立一种能够模拟体内肿瘤细胞真实形态的理想模型。利用该培养模型比较分析MDA-MB-231与正常乳腺上皮细胞MCF-10A 3D形态发生过程中极性形成的差异,主要是采用3D腺泡免疫荧光染色技术对顶部极性标记GM130和底部极性标记Laminin-5的定位进行比较研究,结果发现在3D培养10 d,MDA-MB-231形成了一种近似体内的球形结构,confocol层切MDA-MB-231球体的赤道轴发现,相对于MCF-10A形态发生形成的极性空腔腺泡,MDA-MB-231形成的是一种极性紊乱的实心球结构,其顶部极性标记GM130呈无规则分布、底部极性标记Laminin-5向球体中心内渗,这些结果与体内乳腺癌细胞去极性的特征相吻合,表明该3D培养模型可为深入阐明乳腺癌细胞MDA-MB-231恶化转移及抗癌药物作用机制等研究提供可靠的实验模型。 展开更多
关键词 乳腺癌 MDA-MB-231 3D培养 极性
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脂肪干细胞联合筋膜干细胞修复大鼠骨性关节炎
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作者 田进翔 刘宏建 +4 位作者 辛超飞 卢文龙 张彬 李广恒 许建中 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1734-1736,共3页
目的探讨联合使用脂肪间充质干细胞和筋膜间充质干细胞治疗大鼠骨性关节炎的效果。方法从大鼠腹股沟处脂肪垫分离脂肪间充质干细胞、后肢骨骼肌筋膜分离筋膜间充质干细胞,经鉴定后扩增培养,两种细胞按不同比例混合,分为A组(1:0)、... 目的探讨联合使用脂肪间充质干细胞和筋膜间充质干细胞治疗大鼠骨性关节炎的效果。方法从大鼠腹股沟处脂肪垫分离脂肪间充质干细胞、后肢骨骼肌筋膜分离筋膜间充质干细胞,经鉴定后扩增培养,两种细胞按不同比例混合,分为A组(1:0)、B组(5:1)、C组(1:1)、D组(1:5)、E组(0:1),F(O:O)组,总数为1×10。,注射进由碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎关节腔内。干细胞注射治疗12周后获取各组大鼠后肢膝关节标本,分别进行大体和病理组织学评估。结果分离的脂肪间充质干细胞、筋膜间充质干细胞CD29、CD71、CD90阳性表达,CD45阴性表达;均可以进行多向诱导分化;当两种细胞按1:1混合治疗时大体观得分:A组(4.25±0.96)、B组(4.83±1.11)、D组(4.41±0.90)、E组(4.91±0.79)、F组(5.75±1.21)均高于C组(2.92±0.79,P=0.010)、病理组织学评分A组(8.16±1.46)、B组(7.41±1.78)、D组(8.08±1.44)、E组(8.83±1.47)、F组(15.58±2.77)均高于C组(5.83±1.85,P=0.010)。结论脂肪间充质干细胞联合筋膜间充质干细胞关节混合比例为1:1时,软骨修复效果最佳。 展开更多
关键词 骨性关节炎 间充质干细胞 3D培养 关节腔注射 诱导分化 软骨修复
3D培养脐带间充质干细胞治疗1型糖尿病及其免疫调控机制 预览
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作者 刘可娜 李栋 杨光升 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第5期692-697,共6页
背景:脐带间充质干细胞可分化成胰岛β细胞用于移植治疗1型糖尿病,但需要进一步提高疗效,并研究其免疫调节机制。目的:观察3D培养的脐带间充质干细胞移植对1型糖尿病小鼠的疗效及免疫调节机制。方法:组织贴壁法分离脐带间充质干细... 背景:脐带间充质干细胞可分化成胰岛β细胞用于移植治疗1型糖尿病,但需要进一步提高疗效,并研究其免疫调节机制。目的:观察3D培养的脐带间充质干细胞移植对1型糖尿病小鼠的疗效及免疫调节机制。方法:组织贴壁法分离脐带间充质干细胞并进行3D培养,扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物;采用链脲佐菌素诱导1型糖尿病小鼠模型,2D干细胞移植组和3D干细胞移植组于造模7 d后尾静脉注射脐带间充质干细胞(5×106/只),对照组和模型组小鼠注射等体积生理盐水。移植后每周检测各组小鼠空腹血糖,连续4周;移植后30 d,制备小鼠单个脾细胞悬液,流式细胞术检测T细胞亚群变化;移植后30 d,ELISA试剂盒检测各组小鼠血清中细胞因子白细胞介素4,白细胞介素10,白细胞介素2,γ-干扰素水平。结果与结论:①3D培养体系下脐带间充质干细胞生长良好,高表达细胞表面标志物CD44,CD73、CD90和CD105;②细胞移植2-4周后,小鼠血糖水平显著下降,与模型组相比差异有显著性意义(P<0.05);3D干细胞移植组血糖水平低于2D干细胞移植组,第4周差异有显著性意义(P<0.05);③与模型组相比,干细胞移植组Th1细胞百分比下降,Th2细胞与Treg细胞百分比显著升高(P<0.01);与2D干细胞移植组相比,3D干细胞移植组Th1细胞亚群百分比降低,Th2细胞亚群和Treg细胞百分比升高(P<0.05);④与模型组相比,干细胞移植组白细胞介素2和γ-干扰素水平降低,而白细胞介素4和白细胞介素10水平明显升高;与2D干细胞移植组相比,3D干细胞移植组白细胞介素2水平降低,白细胞介素4和白细胞介素10水平升高(P<0.05);⑤结果表明,3D培养的脐带间充质干细胞移植治疗1型糖尿病小鼠效果优于2D培养的脐带间充质干细胞,其机制可能与上调调节性T细胞,维护体内Th1/T 展开更多
关键词 干细胞 3D培养 脐带间充质干细胞 表面标志物 1型糖尿病 血糖 免疫调节 T细胞亚群 调节性T细胞 细胞因子
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3D培养人工皮肤组织黑色素瘤模型建立及评价 预览
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作者 谢敏 李明英 +3 位作者 张帆 刘庆平 秦建中 迟彦 《山东医药》 2018年第25期27-30,共4页
目的建立体外人工皮肤组织黑色素瘤模型,为研究黑色素肿瘤侵袭和转移的机制及药物筛选奠定基础。方法采用3D培养技术,制备体外人工皮肤组织黑色素瘤C8161、A375模型。应用不同浓度血清(0.5%、5%)优化模型的最优培养条件。HE和免疫荧... 目的建立体外人工皮肤组织黑色素瘤模型,为研究黑色素肿瘤侵袭和转移的机制及药物筛选奠定基础。方法采用3D培养技术,制备体外人工皮肤组织黑色素瘤C8161、A375模型。应用不同浓度血清(0.5%、5%)优化模型的最优培养条件。HE和免疫荧光观察该模型基底膜形成情况,检测黑色素瘤细胞C8161、A375侵袭能力。应用单层细胞培养检测细胞生长速度和细胞分泌E-钙黏素情况。采用Transwell实验检测不同黑色素瘤细胞侵袭能力。结果体外人工皮肤组织肿瘤模型建立成功,血清浓度0.5%为最佳3D培养条件。构建的人工皮肤组织肿瘤模型形成的基底膜良好,黑色素瘤细胞在此模型中发生侵袭和转移,且C8161侵袭能力强于A375细胞。侵袭力较弱的A375细胞增殖速度高于侵袭力较强的C8161细胞。C8161和A375细胞均不产生E-钙黏素。结论成功建立体外人工皮肤组织肿瘤模型,血清浓度为0.5%为最佳3D培养条件;黑色素瘤细胞的侵袭与生长速度并无直接关系,且失去E-钙黏素表达能力并不是导致肿瘤细胞侵袭的必要条件。 展开更多
关键词 恶性黑色素瘤 人工皮肤组织黑色素瘤模型 3D培养
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干细胞3D支架的研究进展 被引量:4
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作者 徐竹 诸葛启钏 黄李洁 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期112-117,共6页
干细胞是一类具有无限增殖潜能,可自我更新的细胞,不同的培养或诱导条件下能够分化成为不同的细胞类型。目前,随着医学治疗手段及干细胞研究的不断发展,发现干细胞可应用于很多疾病的治疗,干细胞临床应用日益广泛,逐渐成为科研工作者研... 干细胞是一类具有无限增殖潜能,可自我更新的细胞,不同的培养或诱导条件下能够分化成为不同的细胞类型。目前,随着医学治疗手段及干细胞研究的不断发展,发现干细胞可应用于很多疾病的治疗,干细胞临床应用日益广泛,逐渐成为科研工作者研究的热点。然而干细胞移植进入生物体后繁殖效率很低,无法达到需求的量,因此如何对干细胞在生物体外进行大量培养扩增、在生物体内如何更稳定地增殖分化成为迫切需要解决的难题。当前干细胞最主要的培养方法仍是2D培养,2D培养无法模拟体内的3D微环境,繁殖效率较低,正是由于2D培养局限性太多,促使国内外学者对3D培养技术和3D支架材料进行深入探索,并取得了大量成果。对3D培养技术在干细胞中的发展与应用进行概述和展望。 展开更多
关键词 干细胞 3D微环境 3D培养 支架
人腹膜假黏液瘤原代细胞培养及鉴定 预览
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作者 张海红 张保华 王亚南 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第7期1010-1014,共5页
目的 体外培养和扩增腹膜假黏液瘤(PMP)原代细胞,为腹膜假黏液瘤的研究及药物筛选提供基础。方法用胶原酶消化法分离5例腹膜假黏液瘤样本并进行原代细胞培养,然后用染色体核型分析鉴定培养的细胞是否为肿瘤细胞;再用PAS染色检测细胞... 目的 体外培养和扩增腹膜假黏液瘤(PMP)原代细胞,为腹膜假黏液瘤的研究及药物筛选提供基础。方法用胶原酶消化法分离5例腹膜假黏液瘤样本并进行原代细胞培养,然后用染色体核型分析鉴定培养的细胞是否为肿瘤细胞;再用PAS染色检测细胞中性黏多糖;3D细胞培养模拟肿瘤在体内的状态;HE染色观察3D细胞的组织形态;裸鼠成瘤实验检测原代细胞的致瘤性。结果 PMP细胞原代培养5例均成功;2D培养的细胞贴壁增殖,形态为多边形鹅卵石样排列,可传代到18代;染色体核型分析显示大多数细胞是亚二倍体核型的肿瘤细胞;细胞PAS染色阳性,说明培养的原代细胞内含有黏液;3D培养的类器官与体内肿瘤组织形态相似;裸鼠成瘤率低,且形成的肿瘤与患者PMP相似度不高。结论 PMP原代细胞可在体外培养和扩增。 展开更多
关键词 腹膜假黏液瘤 原代培养 3D培养
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肠道类器官在精准医学中的应用 被引量:1
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作者 王楚 高建军 华国强 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2017年第2期171-179,共9页
类器官3D培养是一种新兴的用来研究组织成体干细胞生长、分化、器官形成的体外研究系统.目前,肠道类器官的3D培养是将分离的肠道隐窝或干细胞植入含有多种生长因子的基质胶中,在基质3D支撑下生成具有肠道上皮样结构的微型空心球体,这些... 类器官3D培养是一种新兴的用来研究组织成体干细胞生长、分化、器官形成的体外研究系统.目前,肠道类器官的3D培养是将分离的肠道隐窝或干细胞植入含有多种生长因子的基质胶中,在基质3D支撑下生成具有肠道上皮样结构的微型空心球体,这些球体被称为肠道类器官.该类器官包含有所有种类的肠道功能上皮细胞,能最大程度模拟肠道组织,故也称之为"迷你肠".结直肠肿瘤细胞也可以利用该3D体系培养得到肿瘤类器官.这些肠道类器官可被广泛应用于炎症性肠病、肠道损伤再生、肠癌等多种肠道疾病的研究.本综述讨论了关于肠道干细胞的最新研究进展,正常类器官和肿瘤类器官的培养,同时还将探讨类器官在疾病建模和组织再生、基因修复、肿瘤个性化治疗等精准医学方面的应用. 展开更多
关键词 肠道干细胞 类器官 肿瘤类器官 3D培养
3D与平面培养条件下马鹿茸间充质干细胞的生长特性比较 预览
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作者 郑永富 张兆琴 +2 位作者 王姗姗 陈晓利 韩春梅 《塔里木大学学报》 2017年第3期14-18,共5页
细胞体外3D培养技术更有利于细胞功能的表达和发挥,是细胞组织工程的重要研究内容。马鹿鹿茸间充质干细胞(MSCs)是一种新发现的成体干细胞,具有向软骨分化的能力。【目的】为了深入研究鹿茸MSCs细胞特性及软骨分化机制,【方法】利... 细胞体外3D培养技术更有利于细胞功能的表达和发挥,是细胞组织工程的重要研究内容。马鹿鹿茸间充质干细胞(MSCs)是一种新发现的成体干细胞,具有向软骨分化的能力。【目的】为了深入研究鹿茸MSCs细胞特性及软骨分化机制,【方法】利用水凝胶为支撑材料进行3D培养,与细胞平面培养方式对比,分析鹿茸MSCs的生长特性与变化。【结果】结果表明,3D培养组生长呈团状,形态呈梭型。两种培养法细胞生长曲线相似,培养至48h后细胞进入对数生长期,平台期即培养144h之后3D培养组细胞密度显著高于平面培养组(P〈0.05);对两种方法培养312h(13d)的细胞进行PI染色,3D培养组细胞凋亡率(32.67±11.08%)低于平面培养组(37.18±10.21%),但两组间没有显著差异。 展开更多
关键词 鹿茸间充质干细胞(MSCs) 3D培养 细胞密度 凋亡
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使用透明质酸钠复合海藻酸钠水凝胶球3D培养软骨细胞抑制细胞去分化的研究 被引量:1
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作者 刘鑫成 孟星星 +3 位作者 祝瑞 张煜坤 成西侠 范宏斌 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第16期3049-3053,3098共6页
目的:验证海藻酸钠(Alginate,Alg)水凝胶球添加透明质酸钠(Sodiumhyaluronate,HA)后,对大鼠膝软骨细胞体外3D培养时软骨细胞去分化的抑制情况。方法:用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P2... 目的:验证海藻酸钠(Alginate,Alg)水凝胶球添加透明质酸钠(Sodiumhyaluronate,HA)后,对大鼠膝软骨细胞体外3D培养时软骨细胞去分化的抑制情况。方法:用Ⅱ型胶原酶消化法获取2周龄SD大鼠膝关节原代软骨细胞,体外培养传代至P2。细胞分为2组,1组用2%海藻酸钠水凝胶球3D培养(Alg组),另一组用2%海藻酸钠+1%透明质酸钠的水凝胶球3D培养(Alg/rtA组),采用正交法制作海藻酸钠水凝胶球。培养14天后,两组各取水凝胶球进行死活细胞染色观察细胞状态。其他水凝胶球收集后用4%多聚甲醛固定,30%蔗糖溶液脱水,OCT(Optimalcuttingtemperaturecompound)包埋剂包埋切片,采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,HE染色)、甲苯胺蓝染色观察软骨细胞形态;采用阿利新蓝染色观察对比糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)含量;采用免疫荧光染色对比Ⅱ型胶原(CollagentypeⅡ,ColⅡ)含量;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测软骨细胞ColⅡ和聚蛋白多糖(Aggrecan,ACAN)的表达情况。结果:死活细胞染色显示两组水凝球内软骨细胞状态良好,几乎无死细胞;阿利新蓝染色显示Alg/HA组与Alg组相比软骨细胞分泌更多的GAG;免疫荧光染色显示Alg/rtA组比Alg组软骨细胞内含更多的Ⅱ型胶原;Westernblot显示Alg/HA组软骨细胞比Alg组ColⅡ的蛋白表达更多。结论:含透明质酸钠的海藻酸钠水凝胶可以更好地维持软骨细胞的表型。抑制软骨细胞去分化。 展开更多
关键词 软骨细胞 透明质酸钠 海藻酸钠 水凝胶 3D培养
类器官及其在肿瘤研究中的应用 被引量:2
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作者 李飞 高栋 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第4期394-400,共7页
类器官(organoid)作为一种新型的肿瘤研究模型能够高度模拟原位组织的生理结构和功能,可以稳定地维持肿瘤细胞在体内的特征,同时也适用于高通量的药物筛选和个性化治疗。此外,类器官模型又是干细胞研究的有力工具,可以在体外重构具有... 类器官(organoid)作为一种新型的肿瘤研究模型能够高度模拟原位组织的生理结构和功能,可以稳定地维持肿瘤细胞在体内的特征,同时也适用于高通量的药物筛选和个性化治疗。此外,类器官模型又是干细胞研究的有力工具,可以在体外重构具有部分生理功能的类器官组织。基于这些优点,类器官模型将会在肿瘤和干细胞研究中扮演着越来越重要的角色。该综述将从类器官的发展简史、主要类型、研究应用和未来展望四个方面进行讨论。 展开更多
关键词 类器官 3D培养 肿瘤研究 干细胞
3D HepG2细胞药物肝毒性评价模型的建立及其在药物安全性评价中的应用 被引量:2
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作者 李丹丹 汤响林 +5 位作者 谭洪玲 梁乾德 王宇光 马增春 肖成荣 高月 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1313-1317,共5页
该研究采用磁悬浮3维(3D)培养技术建立了3D Hep G2细胞评价模型,并应用此模型对典型的肝毒性药物进行了简单评价。Hep G2细胞形成稳定3D结构后,采用免疫组化技术检测了Hep G2细胞在2D,3D培养条件下的糖原储存能力,并应用RT-PCR技术对... 该研究采用磁悬浮3维(3D)培养技术建立了3D Hep G2细胞评价模型,并应用此模型对典型的肝毒性药物进行了简单评价。Hep G2细胞形成稳定3D结构后,采用免疫组化技术检测了Hep G2细胞在2D,3D培养条件下的糖原储存能力,并应用RT-PCR技术对比研究了Hep G2细胞在2D,3D不同培养条件下Ⅰ相、Ⅱ相药物代谢酶、药物转运体、核受体及肝细胞特异标志性分子白蛋白(ALB)等相关基因的mRNA表达水平。免疫组化结果显示,Hep G2细胞在3D培养条件下具有丰富的糖原储存能力,此特性与人肝组织相类似。此外,在3D培养条件下,Hep G2细胞绝大部分药物代谢酶、转运体、核受体及ALB的mRNA表达水平与2D相比均有不同程度的上调。在药物肝毒性评价方面,该实验选用了典型的肝毒性药物对乙酰氨基酚(APAP)和近年来肝毒性报道较多的中药何首乌Polygonum multiflorum Thunb.及补骨脂Psoraleae corylifolia L.进行单剂量和重复剂量(7 d)给药实验;在重复剂量给药实验中,3D Hep G2细胞表现出更高的敏感性。应用磁悬浮3D培养技术建立的3D Hep G2细胞模型无论在形态上还是功能上都更接近于人的肝组织,是较好的3D肝毒性评价模型。 展开更多
关键词 3D培养 肝毒性 评价模型
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