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沉默NUPR1基因对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及机制研究
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作者 李星欣 曾沉思 +2 位作者 杨泽松 黎安茂 陈建斌 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期146-151,共6页
目的:探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法:以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自... 目的:探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法:以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自噬相关基因(ATG5和Beclin1)mRNA水平。构建含有靶向抑制NUPR1基因表达的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)序列的NUPR1-shRNA慢病毒载体,并将其转染人多发性骨髓瘤U266细胞。实验分为未转染组、阴性对照转染组和转染组,qRT-PCR、Western Blot检测NUPR1干扰效果、3组细胞自噬相关指标(ATG5、Beclin1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)及相关通路蛋白(p-AKT/T-AKT、p-mTOR/T-mTOR)的表达;单丹磺酰戊二酸(monodansylcadaverine,MDC)染色后,荧光显微镜下观察自噬囊泡的聚集。结果:人多发性骨髓瘤U266细胞较正常人骨髓单个核细胞及转染组细胞NUPR1(F=7.747,P=0.004)、Beclin1(F=5.548,P=0.013)和ATG5(F=4.031,P=0.034)mRNA水平明显增高。转染组NUPR1(F=9.798,P=0.013)、ATG5(F=7.017,P=0.027)、Beclin1(F=7.213,P=0.025)和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(F=7.040,P=0.027)蛋白表达较未转染组和阴性对照转染组明显降低,而P62(F=52.622,P=0.000)、p-AKT/T-AKT(F=6.584,P=0.031)和p-mTOR/T-mTOR(F=7.950,P=0.021)蛋白表达明显增高;转染组细胞胞质内自噬囊泡聚集明显减少(F=12.172,P=0.008)。结论:人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1高表达,自噬水平较正常人骨髓单个核细胞高。沉默NUPR1可下调U266细胞自噬水平。NUPR1基因可能通过AKT/mTOR通路调节U266细胞自噬。 展开更多
关键词 核蛋白1 多发性骨髓瘤 自噬 AKT/mTOR信号通路
PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响 预览
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作者 刘芳 戴经纬 +1 位作者 刘丽娜 赵毅 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第12期2048-2051,共4页
目的:探讨PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为两组:pcDNA3.0组与pcDNA3.0-PTEN组,分别转染pcDNA3.0质粒、pcDNA3.0-PTEN质粒2μg,转染48 h收集细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,... 目的:探讨PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为两组:pcDNA3.0组与pcDNA3.0-PTEN组,分别转染pcDNA3.0质粒、pcDNA3.0-PTEN质粒2μg,转染48 h收集细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,双染法检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞蛋白表达。结果:pcDNA3.0-PTEN组的细胞存活率低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA3.0组对比,pcDNA3.0-PTEN组的细胞凋亡率显著上升,对比差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.0-PTEN组的PTEN蛋白表达量高于pcDNA3.0组,Akt、mTOR蛋白表达量低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PTEN基因过表达可通过抑制Akt-mTOR信号通路,提高乳腺癌细胞凋亡指数,降低细胞增殖活性,从而发挥抑癌作用。 展开更多
关键词 PTEN基因 乳腺癌 细胞增殖 Akt-mTOR信号通路
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孕前皮质酮诱导对小鼠产后抑郁行为及AKT/mTOR信号通路的作用
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作者 马瑶 严瑶瑶 +6 位作者 周童 宋亚蓓 曹彩云 陈刚 王福顺 王薇 薛文达 《湖北中医药大学学报》 2019年第2期9-13,共5页
目的观察孕前慢性皮质酮诱导产后抑郁(PPD)模型小鼠行为改变及其分子机制。方法C57BL/6N母鼠进行皮质酮注射,造模4周,然后与正常公鼠交配,分娩后分为空白组和孕前皮质酮诱导组,于造模4周和分娩3周时进行行为学测试。蛋白免疫印迹法(West... 目的观察孕前慢性皮质酮诱导产后抑郁(PPD)模型小鼠行为改变及其分子机制。方法C57BL/6N母鼠进行皮质酮注射,造模4周,然后与正常公鼠交配,分娩后分为空白组和孕前皮质酮诱导组,于造模4周和分娩3周时进行行为学测试。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(m TOR)总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果小鼠造模后和产后体重均明显下降(P<0.01),悬尾测试不动时间(TST)均显著增加(P<0.01);强迫游泳测试(FST)结果中模型组小鼠在造模4周时不动时间明显增长(P<0.01),产后3周时无明显差异(P>0.05);陌生环境摄食测试结果中模型组首次进食潜伏时间显著增加(P<0.01),在摄食总量上,造模4周时明显下降(P<0.01),产后3周时无明显差异(P>0.05)。Western blot结果显示,模型组小鼠海马中总AKT、总mTOR蛋白表达无明显变化(P>0.05),p-AKT(P<0.05)、p-mTOR(P<0.01)表达显著下降。结论慢性皮质酮孕前注射可诱导C57BL/6N小鼠出现产后抑郁表型,其发病机制可能与AKT-mTOR信号通路活性下降有关。 展开更多
关键词 产后抑郁 皮质酮 海马 AKT-mTOR信号通路
2-D-脱氧葡萄糖对二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响及机制 预览
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作者 谢敏 李红霞 +5 位作者 顾馨仪 郝舒捷 王仁军 刘庆平 秦建中 张帆 《山东医药》 CAS 2019年第2期1-5,共5页
目的观察己糖激酶抑制剂2-D-脱氧葡萄糖(2-DG)对降糖药二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的2-DG、二甲双胍单药或联合作用于人结肠癌HT-29细胞,采用台盼蓝染色法测算细胞死亡率观察细胞活力,MTT掺入法... 目的观察己糖激酶抑制剂2-D-脱氧葡萄糖(2-DG)对降糖药二甲双胍抑制人结肠癌细胞作用的影响,并探讨其机制。方法将不同浓度的2-DG、二甲双胍单药或联合作用于人结肠癌HT-29细胞,采用台盼蓝染色法测算细胞死亡率观察细胞活力,MTT掺入法测算细胞存活率观察细胞增殖能力,流式细胞术以AnnexinV/PI双染色法测算细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞中的蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(TOR)信号通路相关蛋白[AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、核糖体p70S6激酶(p70S6K)、磷酸化核糖体p70S6激酶(p-p70S6K)]、自噬相关蛋白p62。结果不同浓度2-DG(1、5、10mmol/L)和二甲双胍(5、10mmol/L)联合处理24h后,HT-29细胞死亡率均高于单药处理细胞(P均<0.05);在2-DG、二甲双胍均为10mmol/L时,HT-29细胞死亡率最高(P均<0.01)。以10mmol/L2-DG与不同浓度的二甲双胍(0、1、5、10、15、20mmol/L)联合处理48h,在二甲双胍浓度≥5mmol/L后HT-29细胞存活率低于单药处理的细胞(P均<0.05),10mmol/L时HT-29细胞存活率最低(P均<0.01),20mmmol/L时HT-29细胞存活率未继续明显降低。不同浓度2-DG(5、10mmol/L)和10mmol/L二甲双胍联合处理24h,仅10mmol/L2-DG与二甲双胍处理时HT-29细胞凋亡率高于单药处理细胞(P均<0.05),且细胞中p-AKT、p-p70S6K、p62蛋白相对表达量低于单药处理细胞(P均<0.05)。结论2-DG能增强二甲双胍抑制人结肠癌HT-29细胞活力、增殖和诱导细胞凋亡的作用,以10mmol/L2-DG时增强作用最明显;其作用机制可能与两者协同抑制AKT/mTOR信号通路及细胞自噬有关。 展开更多
关键词 结直肠癌 2-D-脱氧葡萄糖 二甲双胍 AKT/mTOR信号通路 细胞自噬 p62蛋白
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苏氨酸通过调节蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路促进断奶仔猪肠道黏膜黏液蛋白表达 预览
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作者 毛湘冰 陈代文 +7 位作者 余冰 何军 虞洁 郑萍 罗钧秋 罗玉衡 王曲圆 王慧芬 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3699-3705,共7页
本试验旨在探讨饲粮补充苏氨酸提高肠道黏膜黏液蛋白表达的可能机制。试验选取10头健康的21日龄断奶的"杜×长×大"仔猪,采用单因子试验设计,分成2个组(每组5个重复,每个重复1头猪),分别饲喂真可消化苏氨酸水平为0.7... 本试验旨在探讨饲粮补充苏氨酸提高肠道黏膜黏液蛋白表达的可能机制。试验选取10头健康的21日龄断奶的"杜×长×大"仔猪,采用单因子试验设计,分成2个组(每组5个重复,每个重复1头猪),分别饲喂真可消化苏氨酸水平为0.74%(基础饲粮)和0.89%的饲粮(在基础饲粮中补充苏氨酸的试验饲粮),试验期为21 d。结果显示:饲粮中补充苏氨酸对断奶仔猪的平均日增重和平均日采食量没有显著影响(P>0.05),但显著降低了料重比(P<0.05),显著提高了空肠和回肠黏膜中黏液蛋白1和2的含量(P<0.05),也显著提高了空肠和回肠黏膜中黏液蛋白1和2的mRNA表达量(P<0.05),并显著刺激了仔猪空肠和回肠黏膜中蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、核糖体40S小亚基S6蛋白激酶和真核起始因子4E结合蛋白1的磷酸化(P<0.05)。由此得出,饲粮中补充苏氨酸(使真可消化苏氨酸水平达到0.89%)可促进仔猪肠道黏液蛋白的产生,而这不仅与其可改善黏液蛋白基因的转录,而且可能与其激活蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路有关。 展开更多
关键词 苏氨酸 断奶仔猪 肠道黏液蛋白 Akt/mTOR信号通路
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温经止痛方对子宫内膜异位症模型大鼠AKT/mTOR信号通路的影响 预览
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作者 黄艳辉 冯丹 +4 位作者 丑丹 刘佳 祁慧 刘雯雯 王静 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期21-28,共8页
目的探讨温经止痛方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)模型大鼠AKT/mTOR通路相关分子表达的影响。方法将建模成功的75只雌性成熟Wistar大鼠随机分为5组,加假手术组共6组,各15只,分别给予温经止痛方中药高、中、低剂量、内美通(孕三烯... 目的探讨温经止痛方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)模型大鼠AKT/mTOR通路相关分子表达的影响。方法将建模成功的75只雌性成熟Wistar大鼠随机分为5组,加假手术组共6组,各15只,分别给予温经止痛方中药高、中、低剂量、内美通(孕三烯酮)胶囊、生理盐水灌胃给药。Real-time PCR、免疫组化法测异位、在位内膜上AKT、mTOR mRNA和蛋白表达。ELISA法检测血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量。结果子宫内膜异位症模型大鼠在位、异位内膜上AKT及mTOR mRNA及其蛋白含量显著高于正常对照组(P<0.01),中药高剂量组、西药(孕三烯酮)组在位、异位内膜AKT、mTOR mRNA表达含量明显低于造模组(P<0.05),EMS模型组血清VEGF水平均高于正常对照组(P<0.01)。温阳化瘀法中药高、低剂量组、西药组血清VEGF水平明显低于模型组(P<0.01);中药中剂量组亦低于模型组(P<0.05)。结论子宫内膜异位症发生与AKT/mTOR信号通路、以及VEGF表达水平有关。温经止痛方可有效抑制AKT/mTOR信号通路,降低血清VEGF的表达,从而抑制异位内膜的粘附、侵袭、血管生成。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 AKT/mTOR信号通路 血管内皮生长因子 中医药 大鼠
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华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡效果观察及机制探讨 预览
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作者 史磊 张耀勇 田爱霞 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2018年第4期178-181,共4页
目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡效果,并探讨其作用机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实... 目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡效果,并探讨其作用机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率。培养48h后荧光定量PCR检测ART、roTOR、Caspase3、Bax和Bel-2mRNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显著高于对照组(P〈0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P〈0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显著高于对照组,实验组间两两比较差异均有统计学意义(P〈0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、roTOR、Bcl-2mRNA表达量与对照组相比均显著降低(P〈0.05),Bax和Caspase-3mRNA表达量均显著增加(P〈0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关。 展开更多
关键词 肝癌 华蟾毒精 增殖凋亡 BAX/BCL-2 Caspase-3 AKT/mTOR信号通路
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PGAM1通过激活Warburg效应调控宫颈癌细胞恶性生物学行为的机制研究 预览
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作者 傅柳陶 王青元 +1 位作者 卫兵 王文艳 《安徽医科大学学报》 北大核心 2018年第9期1398-1402,共5页
目的探讨磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在宫颈癌组织中的表达情况以及可能的生物学机制。方法收集行手术切除的67例宫颈癌患者的新鲜宫颈癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组化法检测PGAM1的表达情况并分析与患者病理特征的关系。构建PGAM1... 目的探讨磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在宫颈癌组织中的表达情况以及可能的生物学机制。方法收集行手术切除的67例宫颈癌患者的新鲜宫颈癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组化法检测PGAM1的表达情况并分析与患者病理特征的关系。构建PGAM1基因沉默稳转Hela宫颈癌细胞株,分析PGAM1基因沉默对Hela细胞凋亡和增殖活性的影响。采用qRT-PCR和Western blot法检测PGAM1对Akt/m TOR信号通路关键分子的影响。结果 (1)宫颈癌组织中PGAM1高表达率为58.21%,明显高于癌旁组织(P〈0.05)。(2)不同临床分期、分化程度、浸润深度的患者宫颈癌组织中PGAM1的高表达率差异有统计学意义(P〈0.05)。(3)Hela细胞sh PGAM1基因沉默后,细胞凋亡率较空白对照组(NC组)明显增加,细胞增殖活性明显降低(P〈0.05)。(4)Hela细胞sh PGAM1基因沉默后,与NC组比较,PTEN mRNA和蛋白相对表达量明显上调,而p-Akt、p-m TOR mRNA和蛋白相对表达量明显降低(P〈0.05)。结论肿瘤组织PGAM1蛋白高表达与宫颈癌的发生、发展有关,通过激活Akt/m TOR信号通路诱导的Warburg效应,促使肿瘤细胞的增殖,抑制其凋亡。 展开更多
关键词 磷酸甘油酸变位酶1 宫颈癌 Warburg效应 糖代谢 Akt/mTOR信号通路
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不同时间的热处理对大鼠肌肉Akt/mTOR信号途径的影响
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作者 包巴图 包金海 内藤久士 《内蒙古大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第3期289-295,共7页
热处理会诱导骨骼肌中肌肉蛋白的合成及肌肉肥大,同时刺激细胞信号途径.另外,有报道表明38℃以上的热处理以温度依赖性方式激活细包内信号途径.然而,骨骼肌细胞中热刺激对信号途径的持续性影响方面鲜有报道.因此,分析了热处理对大鼠骨... 热处理会诱导骨骼肌中肌肉蛋白的合成及肌肉肥大,同时刺激细胞信号途径.另外,有报道表明38℃以上的热处理以温度依赖性方式激活细包内信号途径.然而,骨骼肌细胞中热刺激对信号途径的持续性影响方面鲜有报道.因此,分析了热处理对大鼠骨骼肌中信号途径的作用.利用Western blot技术检测热处理后不同时间点(30,60和90min)的腓肠肌及比目鱼肌中Akt/mTOR信号途径蛋白Akt,mTOR,p70S6K及4E-BP1的磷酸化水平及热激蛋白HSP72的表达水平.结果表明,Akt及mTOR的磷酸化水平没有变化,磷酸化的p70S6K及4E-BP1水平有所上调,而热激蛋白HSP72的水平有所下调. 展开更多
关键词 大鼠 肌肉 热处理 Akt/mTOR信号途径 磷酸化 蛋白水平
沉默PGAM1基因对食管癌细胞生物学功能的影响 预览
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作者 吴丹婷 崔瑶 +2 位作者 刘秋雨 刘明月 孔令非 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期769-774,共6页
目的 探讨沉默磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)基因对食管癌细胞生物学功能的影响及可能机制。方法 收集2016年7月至2017年6月间在我院行手术切除的67例食管癌及对应癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测PGAM1表达并分析其表达与临床病理... 目的 探讨沉默磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)基因对食管癌细胞生物学功能的影响及可能机制。方法 收集2016年7月至2017年6月间在我院行手术切除的67例食管癌及对应癌旁正常组织,采用免疫组化SP法检测PGAM1表达并分析其表达与临床病理特征的关系。PGAM1 shRNA(shPGAM1组)或shRNA-NC(NC组)转染至食管癌Eca-109细胞,分析PGAM1基因沉默对Eca-109细胞凋亡和增殖的影响。采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting法检测PGAM1对Akt/mTOR信号通路关键分子的影响。结果 食管癌组织中PGAM1高表达率为58.2%(39/67),高于癌旁组织的31.3%(21/67),差异有统计学意义( P <0.05)。PGAM1表达与临床分期、分化程度、浸润深度有关( P <0.05),而与年龄、性别、淋巴结转移等无关( P >0.05)。shPGAM1组和NC组中PGAM1 mRNA表达量分别为0.48±0.10和1.01±0.14,差异有统计学意义( P <0.05)。MTT法检测结果显示,培养24、48、72、96 h后,shPGAM1组Eca-109细胞增殖率分别为(87.65±7.42)%、(79.34±9.11)%、(70.17±6.84)%、(60.36±7.95)%,明显低于NC组,差异有统计学意义( P <0.05)。48 h后shPGAM1组和NC组的Eca-109细胞凋亡率分别为(45.36±5.38)%和(24.81±4.67)%,差异有统计学意义( P <0.05);shPGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的葡萄糖消耗量分别为(56.84±11.35)%和(99.87±10.48)%,shPGAM1组和NC组Eca-109细胞培养上清的乳酸含量分别为(48.02±10.18)%和(99.00±12.35)%,差异均有统计学意义( P <0.05)。shPGAM1组细胞的PTEN表达量高于NC组( P <0.05),而p-Akt、p-mTOR表达量均低于NC组( P <0.05)。结论 PGAM1高表达与食管癌的发生、发展有关,通过激活Akt/mTOR信号通路诱导的Warburg效应,促使肿瘤细胞增殖,抑制其凋亡。 展开更多
关键词 食管癌 磷酸甘油变位酶1(PGAM1) Warburg效应 糖代谢 Akt/mTOR信号通路
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不同温度热处理对大鼠骨骼肌Akt/mTOR信号通路的影响
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作者 包巴图 包金海 内藤久士 《内蒙古大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第6期605-611,共7页
热处理会诱导应急蛋白,从而促进细胞蛋白质合成并进一步导致肌肉肥大.但热处理对细胞内蛋白质合成中主要信号通路Akt/mTOR信号途径的影响鲜有报道.本研究分析了热处理对大鼠骨骼肌中Akt/mTOR信号途径的作用.利用Westernblot技术... 热处理会诱导应急蛋白,从而促进细胞蛋白质合成并进一步导致肌肉肥大.但热处理对细胞内蛋白质合成中主要信号通路Akt/mTOR信号途径的影响鲜有报道.本研究分析了热处理对大鼠骨骼肌中Akt/mTOR信号途径的作用.利用Westernblot技术检测了不同温度(37℃、38℃、39℃、40℃)的热处理对大鼠腓肠肌及比目鱼肌中Akt/mTOR信号途径蛋白Akt,mTOR,p70S6K及4E-BPl的磷酸化水平及热激蛋白HSP72的表达水平.结果表明39℃、40℃的热处理能够激活Akt及下游p70S6K的活性而对于热激蛋白HSP72的表达水平没有影响. 展开更多
关键词 大鼠 肌肉 热处理 Akt/mTOR信号途径 磷酸化 蛋白水平
OTUD7B在急性髓系白血病细胞中的功能及机制 预览
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作者 龚秀峰 吴英理 +1 位作者 赵倩 雷虎 《上海交通大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期18-23,共6页
目的· 探讨OTUD7B 在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞中的生物学效应与作用机制。方法· 检测AML 患者外周血单个核细胞中OTUD7B 基因的表达和AML 患者骨髓单个核细胞中OTUD7B 蛋白的表达。利用TCGA 数据... 目的· 探讨OTUD7B 在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞中的生物学效应与作用机制。方法· 检测AML 患者外周血单个核细胞中OTUD7B 基因的表达和AML 患者骨髓单个核细胞中OTUD7B 蛋白的表达。利用TCGA 数据库验证OTUD7B 与AML 患者生存期的关系。构建M2 型AML 小鼠模型,检测模型小鼠骨髓、脾脏和肝脏中OTUD7B 的表达。在白血病细胞株HL60 和kasumi1 中过表达OTUD7B,检测OTUD7B 蛋白对细胞活率及细胞周期的影响;在稳定表达OTUD7B 的HL60 和kasumi1 细胞株中,检测AKT/mTOR 通路蛋白的变化;过表达AKT1 后检测OTUD7B 引起的细胞生长抑制的变化。结果· OTUD7B在各个类型AML 患者原代细胞中表达量均较低。OTUD7B 表达量与AML 患者的生存期密切相关。与野生型小鼠比较,M2 型AML 小鼠骨髓、肝脏及脾脏中OTUD7B 的表达量均较低。HL60 和kasumi1 细胞中过表达OTUD7B 能够显著抑制细胞活率,降低S 期细胞的比例,并显著抑制AKT 和mTOR 蛋白的磷酸化;过表达AKT1 后能够部分逆转OTUD7B 对细胞的生长抑制作用。结论· OTUD7B 在原代AML 患者细胞及M2 型AML 小鼠的骨髓、肝脏和脾脏中低表达,并且OTUD7B 表达量低的患者生存期更短。OTUD7B 过表达能明显抑制AML 细胞HL60 和kasumi1 的细胞活率,并且显著抑制细胞进入S 期。OTUD7B 过表达对AML 细胞的抑制效应可能与抑制AKT/mTOR 信号通路的活化有关。 展开更多
关键词 OTUD7B 急性髓系白血病 增殖抑制 AKT/mTOR信号通路
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哇巴因调控Akt/mTOR信号通路诱导U87-MG细胞死亡的机制研究 预览
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作者 杨小飒 李培炎 +4 位作者 李杰 衣泰龙 徐忠伟 涂悦 程世翔 《中国医药导报》 CAS 2017年第3期4-7,共4页
目的 探讨哇巴因(ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞死亡的影响及具体机制。方法 将培养的U87-MG细胞随机分为正常对照(Control)组和ouabain组,分别加入常规培养基和不同浓度ouabain(0.05、0.5、2.5、25μmol/L)干预24 h,光学显微镜观... 目的 探讨哇巴因(ouabain)对人胶质瘤U87-MG细胞死亡的影响及具体机制。方法 将培养的U87-MG细胞随机分为正常对照(Control)组和ouabain组,分别加入常规培养基和不同浓度ouabain(0.05、0.5、2.5、25μmol/L)干预24 h,光学显微镜观察ouabain干预后24 h细胞的形态改变,MTT实验检测细胞活力,免疫印迹法(Western blot)检测Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR的表达变化。结果 与Control组比较,ouabain显著降低U87-MG细胞活力(均P〈0.01),且呈现浓度依赖性;高浓度ouabain(2.5、25μmol/L)与Control组相比能够降低U87-MG细胞中p-Akt、m TOR和p-m TOR的表达(均P〈0.01)。结论 高浓度ouabain可能通过抑制胞内Akt/m TOR信号通路,降低肿瘤细胞活力并最终引起细胞死亡。 展开更多
关键词 哇巴因 胶质瘤 人胶质瘤U87-MG细胞 Akt/mTOR信号通路
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独一味单体抑制脊髓背角内AKT—mTOR信号通路缓解大鼠神经病理性痛 被引量:2
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作者 仇子钰 张凉 +3 位作者 王晗 杨云舒 伍潇潇 张维 《中国药师》 CAS 2017年第11期1932-1937,共6页
目的:观察鞘内给予独一味单体8—O-乙酰山栀苷甲酯(8-O—acetyl—SM,8-OaS)对慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内丝苏氨酸蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶点(the mammalian target of rapamycin,mTOR)信号... 目的:观察鞘内给予独一味单体8—O-乙酰山栀苷甲酯(8-O—acetyl—SM,8-OaS)对慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内丝苏氨酸蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)-哺乳动物雷帕霉素靶点(the mammalian target of rapamycin,mTOR)信号转导通路表达的影响。方法:采用大鼠腰5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)构建神经病理性痛模型,使用Von—Frey细丝连续观察造模后大鼠术侧后足的痛阈改变;应用Western blot法定量分析大鼠腰膨大节段AKT和mTOR的磷酸化水平;采用免疫荧光组织化学染色观察pAKT和磷酸化mTOR(pmTOR)在脊髓背角内的细胞定位。结果:由行为学数据可见,SNL模型大鼠机械性痛阈明显降低(P〈0.01)。术后1—7d鞘内连续给予8-OaS进行人为干预,与给药前对比差异有统计学意义(P〈0.05);免疫荧光双重标记记实验结果显示,脊髓背角内pAKT与星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)存在大量共表达,pmTOR在星形胶质细胞和神经元上均观察到大量阳性染色。Western blot实验结果提示,8-OaS能显著下调脊髓背角内pAKT和pmTOR蛋白的表达水平。结论:鞘内给予8-OaS可有效缓解由SNL诱导的机械性痛阈,其机制可能是8-OaS通过下调脊髓背角内AKT—roTOR信号通路的表达水平,进而抑制了星形胶质细胞的活化,从而达到缓解神经病理性痛的效果。 展开更多
关键词 8-O-乙酰山栀苷甲酯 脊神经结扎 星形胶质细胞 AKT-mTOR信号通路 大鼠
顺铂通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬 被引量:3
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作者 林琼燕 生秀杰 +2 位作者 刘娟 熊汉真 王沂峰 《肿瘤预防与治疗》 2017年第5期337-342,共6页
目的:探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/m TOR信号通路在其中的作用。方法:透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 fusi... 目的:探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/m TOR信号通路在其中的作用。方法:透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 fusionprotein II,LC3II)的荧光聚集情况。采用Westerblot检测m TOR通路中的PI3K、AKT及m TOR蛋白的表达。结果:顺铂(20μg/m L)能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组(P〈0.05);与对照组(20μg/m L-0h组)相比较,自噬相关蛋白-LC3Ⅱ的表达随着时间延长表达增加(P〈0.05)。磷酸化AKT1、磷酸化m TOR及PI3Kp85蛋白表达水平随着时间延长表达下降。胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与顺铂共培养组自噬小体及LC3Ⅱ蛋白表达少于顺铂组,但高于对照组。结论:顺铂可能通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路,从而诱导子宫内膜癌细胞发生自噬。 展开更多
关键词 顺铂 子宫内膜癌 自噬 PI3K/AKT/m TOR信号通路
益气活血方对心肌缺血大鼠Akt/mTOR信号通路的影响 被引量:3
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作者 刘文臣 郭书文 +8 位作者 郑乘龙 王惠 张璐 吴佳妮 刘俊丽 黄小楼 李芳赫 谭晓波 蔡倩 《北京中医药大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期376-384,共9页
目的依托大鼠心肌缺血模型,探讨蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)信号通路在心肌中的表达及益气活血方对其的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为模型组、培哚普利组、芪参益气滴丸组、益气活血方组和假手术组,结扎左冠状动... 目的依托大鼠心肌缺血模型,探讨蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)信号通路在心肌中的表达及益气活血方对其的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为模型组、培哚普利组、芪参益气滴丸组、益气活血方组和假手术组,结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死模型,术后第2天灌胃给药。以第7、28天为观测时间点。超声检测各组大鼠心脏功能和结构的变化,HE染色观察心肌病理形态改变,Western blot、RT-PCR法和免疫组化法检测大鼠心肌梗死区边缘Akt、m TOR及磷酸化表达水平。结果第7、28天,与假手术组相比,模型组大鼠心脏左室射血分数(LVEF)、左室短轴率(LVFS)显著降低(P〈0.01),第7天模型组大鼠左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P〈0.01),第28天模型组大鼠LVESV和左室舒张末期容积(LVEDV)显著增大(P〈0.01);与模型组相比,各给药组第28天LVEF、LVFS升高,LVEDV和LVESV显著降低(P〈0.01)。模型组梗死区边缘室壁变薄,心肌细胞数量减少,心肌细胞排列紊乱,炎性细胞浸润;各给药组梗死区边缘心肌细胞排列紊乱,心肌细胞数量减少。模型组磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)/m TOR值增高(P〈0.05),Akt、m TOR mRNA表达显著增高(P〈0.01),p-Akt、p-m TOR阳性细胞率明显增高(P〈0.01);各给药组p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR比值增高(P〈0.05),Akt、m TOR m-RNA表达增强(P〈0.05或P〈0.01),各给药组均可明显提高pAkt、p-m TOR阳性细胞率水平(P〈0.05)。结论益气活血方能够改善心肌缺血大鼠心脏功能,可能通过激活心脏自我保护机制Akt/m TOR信号通路产生保护心肌细胞的作用。 展开更多
关键词 急性心肌梗死 益气活血方 蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路 大鼠
EPHA2通过增强Akt/mTOR信号通路促进SGC-7901细胞的增殖 预览 被引量:5
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作者 李国栋 王洋洋 +1 位作者 刘玉河 李湘奇 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期128-133,共6页
背景与目的:EPHA2能够促进胃癌细胞中CyclinD1的表达及胃癌细胞的细胞周期进程,从而增强胃癌细胞的增殖能力,但EPHA2调控胃癌细胞中CyclinDI的表达及胃癌细胞的细胞周期进程的分子机制依然不明确。Akt/mTOR信号通路能够通过促进胃... 背景与目的:EPHA2能够促进胃癌细胞中CyclinD1的表达及胃癌细胞的细胞周期进程,从而增强胃癌细胞的增殖能力,但EPHA2调控胃癌细胞中CyclinDI的表达及胃癌细胞的细胞周期进程的分子机制依然不明确。Akt/mTOR信号通路能够通过促进胃癌细胞中CyclinD1的表达及胃癌细胞的细胞周期进程增强胃癌细胞的增殖能力,且有研究表明EPHA2能够激活Akt/mTOR信号通路。基于此,该研究探讨了Akt/mTOR信号通路在EPHA2促胃癌细胞增殖中的作用。方法:采用蛋白[质]印迹法(Westernblot)检测过表达EPHA2和敲低EPHA2表达对SGC-7901细胞中Akt、mTOR和4EBPl磷酸化的影响。使用Akt抑制剂MK2206和mTOR抑制剂RAD001分别处理转染空载体病毒的SGC.7901-NC细胞和过表达EPHA2的SGC-7901-EPHA2细胞,分别通过CCK8、流式细胞术和Westernblot检测细胞增殖、细胞周期及周期相关蛋CyclinD1的表达。结果:过表达EPHA2增强SGC-7901细胞中Akt、mTOR和4EBPl的磷酸化,敲低EPHA2的表达抑制SGC-7901细胞中Akt、mTOR和4EBPl的磷酸化。MK2206和RAD001处理细胞时,EPHA2过表达对SGC-7901细胞增殖、细胞s期和CyclinD1表达的促进作用被显著抑制。结论:EPHA2通过增强Akt/mTOR信号通路促进胃癌细胞SGC-7901的增殖能力,提示我们将来针对EPHA2高表达的胃癌患者或许可以采用Akt抑制剂和mTOR抑制剂予以个体化治疗。 展开更多
关键词 EPHA2 Akt/mTOR信号通路 胃癌 SGC-7901细胞
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shRNA干扰mTOR基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖抑制及其作用机制研究 被引量:2
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作者 郑瑞玑 黄轶群 马旭东 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期49-52,共4页
目的 探讨RNA干扰沉默mTOR基因后对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 设计针对mTOR基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建mTOR shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,采用实时定量PCR及West... 目的 探讨RNA干扰沉默mTOR基因后对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 设计针对mTOR基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建mTOR shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,采用实时定量PCR及Western blot方法鉴定其干扰效果;用MTT法绘制细胞生长曲线,经流式细胞术检测细胞凋亡的变化,用Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、procaspase-3 、procaspase-9及mTOR下游底物激酶P70S6K、p-P70S6K的表达.结果 mTOR shRNA转染Jeko-1细胞后,mTOR基因的mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.05);转染组增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P<0.05),mTOR shRNA转染48 h后,凋亡率为(36.62±3.24)%,而Neg-shRNA组和空白对照组分别为(2.58±1.04)%、(1.24±0.30)%,差异有统计学意义(P<0.05);凋亡相关蛋白 Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9的表达下降,而Bax表达上升,mTOR下游底物激酶P70S6K未见明显变化,而其活性形式p-P70S6K的表达下降.结论 干扰沉默mTOR基因后可通过抑制mTOR信号通路的活性,抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,激活凋亡相关蛋白诱导细胞凋亡. 展开更多
关键词 套细胞淋巴瘤 mTOR基因 RNA干扰 Akt/mTOR信号途径
抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠Akt—mTOR信号通路的影响 被引量:2
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作者 麻志恒 钟利平 +1 位作者 余柯娜 何立群 《上海中医药杂志》 2015年第11期67-70,90共5页
目的观察抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性。肾脏纤维化小鼠磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)及Akt,roTORmRNA表达的影响,从Akt—roTOR信号通路角度探讨抗纤灵的作用机制。方法C57BL/6J雄性小鼠采用5... 目的观察抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性。肾脏纤维化小鼠磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)及Akt,roTORmRNA表达的影响,从Akt—roTOR信号通路角度探讨抗纤灵的作用机制。方法C57BL/6J雄性小鼠采用5/6肾切除制备慢性肾脏纤维化模型。2周后根据肌酐水平将手术组小鼠分为模型组、雷帕霉素组和抗纤灵组,同时设立假手术组,每组10只。雷帕霉素组、抗纤灵组分别给予雷帕霉素(0.8μ/g)、抗纤灵(20g/k)每天0.5ml灌胃治疗,模型组和假手术组灌胃等量蒸馏水。连续用药8周后处死小鼠,检测各组小鼠肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白(24hUP)含量;采用蛋白质印迹法(Western blotting)、RT—PCR检测肾脏组织中p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt、roTORmRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组Scr、BUN、24hUP、p-Akt、p-mTOR蛋白及Akt、roTOR mRNA显著升高(P〈0.05,P〈0.01)。与模型组比较,雷帕霉素组、抗纤灵组Scr、UN、24hUP、p-Akt、p-roTOR蛋白及Akt,mTORmRNA均有所降低(P〈0.05,P〈0.01)。雷帕霉素组与抗纤灵组比较,在降低Scr、24hUP方面,抗纤灵组明显优于雷帕霉素组(P〈0.05);在降低p-mTOR蛋白及mTORmRNA方面,雷帕霉素优于抗纤灵组(P〈0.05)。结论抗纤灵可能通过调节Akt—mTOR信号通路,对肾纤维化有一定的改善作用。 展开更多
关键词 抗纤灵 慢性肾纤维化 Akt-mTOR信号通路
甲亢宁胶囊对Graves病小鼠甲状腺功能及Akt/mTOR信号通路的影响 被引量:7
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作者 李青穆 魏军平 +1 位作者 李敏 孟淑华 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1119-1124,共6页
目的 观察甲亢宁胶囊干预下Graves病小鼠甲状腺功能的改善情况及Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达变化,探讨甲亢宁胶囊治疗Graves病可能的分子机制。方法 用... 目的 观察甲亢宁胶囊干预下Graves病小鼠甲状腺功能的改善情况及Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达变化,探讨甲亢宁胶囊治疗Graves病可能的分子机制。方法 用表达促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor)A亚单位的重组腺病毒(Ad-TSHRα-289)免疫BALB/c雌鼠建立Graves病动物模型。将70只造模成功小鼠按随机数字表法分为模型组(20只)、甲亢宁胶囊干预组(中药组,25只)、甲巯咪唑片干预组(西药组,25只),另设正常对照组(正常组,15只)和空载病毒对照组(空载组,20只,注射Ad-null)。中药组予1.5 g/(kg·d)甲亢宁胶囊混悬液灌胃,西药组予2.5 mg/(kg·d)甲巯咪唑混悬液灌胃,其余各组每日予同体积生理盐水灌胃,药物干预5周。各组最终选取6个样本,观察小鼠甲状腺组织的病理变化;放射免疫法测定小鼠血清甲状腺素(thyroxine,T4),三碘甲状腺素原氨酸(triiodothyronine,T3),促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)及促甲状腺激素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)水平;Western blot法测定小鼠甲状腺组织Akt、p-Akt、mTOR及p-mTOR的表达量。结果(1)模型组甲状腺呈增生性改变,滤泡增大,大小不一,间质血管浸润。中药和西药组甲状腺组织结构明显恢复,滤泡增生有所缓解。(2)与正常组、空载组比较,模型组TRAb、T4及T3水平升高(P〈0.01),p-Akt/β-actin、p-Akt/Akt、p-mTOR/β-actin及p-mTOR/mTOR比值均升高。 展开更多
关键词 甲亢宁胶囊 GRAVES病 蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路
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