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Shox2对窦房结发育和起搏细胞命运的遗传调控
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作者 宋颖楠 李华 胡雪峰 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第3期501-507,共7页
窦房结控制着心脏跳动的节律,是心脏传导系统中电生理信号产生及传导的初级起搏点,该结构的缺陷可能会导致各种类型的心律失常。矮小身材同源异型框基因2(short stature homeobox 2, Shox2)是同源异型框基因家族的一个成员,对窦房结的... 窦房结控制着心脏跳动的节律,是心脏传导系统中电生理信号产生及传导的初级起搏点,该结构的缺陷可能会导致各种类型的心律失常。矮小身材同源异型框基因2(short stature homeobox 2, Shox2)是同源异型框基因家族的一个成员,对窦房结的发育和正常功能的行使至关重要。研究表明, Shox2的突变会导致小鼠窦房结发育不全,并产生窦性心动过缓和心律失常的症状。人类和小鼠Shox2的突变还被发现与心房颤动(房颤)的发生紧密相关。另外, Shox2可以通过抑制NK2型同源异型框基因5(NK2 homeobox 5, Nkx2.5)的表达来调控遗传网络,以维持窦房结中起搏细胞的命运,是起搏细胞分化的关键基因。该文综述了Shox2基因对窦房结发育和起搏细胞命运的调控机制,进一步探究房颤发生的原因,为研发新型生物起搏器提供理论依据。 展开更多
关键词 Shox2 窦房结 房颤 起搏细胞 生物起搏器
骨形态发生蛋白和Wnt信号通路在心脏发育及生物起搏中的研究进展 预览
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作者 王凤媛 黄从新 《心血管病学进展》 CAS 2019年第1期9-12,共4页
心脏胚胎发育过程由骨形态发生蛋白(BMP)、Wnt、Notch等信号通路共同调控,其中BMP和Wnt信号通路是心脏胚胎发育过程中两条重要的信号通路。BMP通过由转化生长因子-β超家族转导的Smad和TAK1两条信号途径诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。... 心脏胚胎发育过程由骨形态发生蛋白(BMP)、Wnt、Notch等信号通路共同调控,其中BMP和Wnt信号通路是心脏胚胎发育过程中两条重要的信号通路。BMP通过由转化生长因子-β超家族转导的Smad和TAK1两条信号途径诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。Wnt信号通路对胚胎发育、细胞极性决定、细胞特异性分化、心血管系统发育具有重要的调控作用,在心脏胚胎发育早期促进中胚层的形成,在后期抑制其向心肌细胞分化;但这两条信号通路共同诱导干细胞向心肌细胞分化的效率高于BMP或Wnt信号通路的诱导效率。BMP和Wnt信号通路共同诱导干细胞分化的心肌细胞,不仅为药物实验、心脏疾病研究提供体外模型,而且也为构建生物起搏器提供重要基础。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白信号通路 WNT信号通路 心脏发育 生物起搏器
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腺病毒介导短发夹RNA沉默Nkx2.5基因对乳鼠心肌细胞的影响
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作者 杨安康 谌晶晶 +3 位作者 罗强 张健 杨媚 黄从新 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2019年第1期39-44,共6页
目的探讨腺病毒介导短发夹RNA下调Nkx2.5基因表达对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞(NRVMs)的影响。方法采用胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法分离NRVMs,随机分为阴性对照组(NC组)和实验组。实验组转染携带靶向Nkx2.5的RNA干扰序列(短发夹RNA,shRNA... 目的探讨腺病毒介导短发夹RNA下调Nkx2.5基因表达对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞(NRVMs)的影响。方法采用胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法分离NRVMs,随机分为阴性对照组(NC组)和实验组。实验组转染携带靶向Nkx2.5的RNA干扰序列(短发夹RNA,shRNA)和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒Ad-Nkx2.5-shRNA-GFP,NC组转染等量的仅携带GFP的对照组腺病毒Ad-GFP。以不同感染复数(MOI)转染细胞选取最适MOI,按最适MOI转染NRVMs 48h后,采用实时荧光聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹检测Nkx2.5沉默效果,保证沉默效果之后,检测起搏细胞发育相关转录因子(Tbx3、Tbx18、Shox2和Isl1)、起搏相关离子通道超极化激活环核苷酸门控通道4型(HCN4)和缝隙链接蛋白40(Cx40)mRNA和蛋白水平变化,采取免疫荧光法检测HCN4蛋白的表达。结果分离培养的原代NRVMs 48h呈现成簇搏动,α-actin检测心肌纯度达0.91±0.01,转染NRVMs的最适MOI=20,构建的病毒可有效下调Nkx2.5水平(P<0.05);下调心肌细胞Nkx2.5水平后,起搏细胞发育相关转录因子、HCN4表达水平升高(P<0.05),心室肌相关缝隙连接蛋白Cx40表达水平下降(P<0.05)。荧光显微镜观察实验组红色荧光即离子通道HCN4表达强于对照组。结论下调Nkx2.5可将NRVMs重编程为起搏样细胞。 展开更多
关键词 心血管病学 腺病毒载体 RNA干扰 NKX2.5 心肌细胞 生物起搏
缓慢性心律失常的发病机制及中西医治疗现状 预览
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作者 李玉琴 王静 +2 位作者 李欣欣 马晓慧 李志裕 《医学综述》 2019年第16期3221-3226,3231共7页
缓慢性心律失常(BA)是一类以心率减慢为特征的临床疾病,发病机制复杂,涉及心肌细胞离子通道基因变异、离子通道功能异常、自主神经系统功能异常、心肌组织病变等。西医治疗手段以植入起搏器为主,近年来中药在治疗BA方面也有确切的临床... 缓慢性心律失常(BA)是一类以心率减慢为特征的临床疾病,发病机制复杂,涉及心肌细胞离子通道基因变异、离子通道功能异常、自主神经系统功能异常、心肌组织病变等。西医治疗手段以植入起搏器为主,近年来中药在治疗BA方面也有确切的临床疗效。中医理论认为,BA的根本病机在于心肾阳虚,不同辨证分型治法不同。中药安全性较高,协同现代西医治疗方法治疗BA,不仅肯定了西医治疗的快速性和中药治疗的安全性,还为BA的临床研究提供了新思路。 展开更多
关键词 缓慢性心律失常 离子通道 自主神经 生物起搏器 中药
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转录因子Tbx18导入人诱导多潜能干细胞分化的心肌细胞构建起搏样细胞的实验研究 预览 被引量:1
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作者 王芸 吴福建 +1 位作者 兰峰 任学军 《心肺血管病杂志》 2018年第4期354-358,共5页
目的:研究转录因子Tbx18能否转染人诱导多潜能干细胞分化的心肌细胞(hiPSC-CMs)并使其向起搏细胞分化。方法:纯化接种hiPSC-CMs,构建重组腺病毒-绿色荧光蛋白Ad-(GFP)-Tbx18载体,转染hiPSC-Cs为实验组,转染只含GFP的腺病毒组及空... 目的:研究转录因子Tbx18能否转染人诱导多潜能干细胞分化的心肌细胞(hiPSC-CMs)并使其向起搏细胞分化。方法:纯化接种hiPSC-CMs,构建重组腺病毒-绿色荧光蛋白Ad-(GFP)-Tbx18载体,转染hiPSC-Cs为实验组,转染只含GFP的腺病毒组及空白未转染组作为对照。转染后定期检测细胞的变化情况,荧光倒置显微镜计数转染后细胞的搏动频率变化情况;RT-PCR测定起搏细胞特异性基因的表达。结果:实验组hiPSC-CM的搏动频率高于对照组[(61.3±13.6)vs.(33.0±1.67)次/min,P〈0.05)]。实验组起搏特异性基因HCN4的表达较对照组明显增加,KIR2.1、SCN5A、CX43等心室肌特异性基因表达较对照组下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:Tbx18基因可成功转染hiPSCCMs,并使之转化为窦房结样起搏细胞。 展开更多
关键词 转录因子Tbx18 诱导多潜能干细胞 生物起搏
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缝隙连接蛋白α7促进骨髓间充质干细胞转化为心脏起搏样细胞的实验研究
6
作者 林毅漳 张晨亮 +2 位作者 肖华 林树 宋治远 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期875-881,共7页
目的探讨缝隙连接蛋白α7(GJA7)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs),经与乳鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)共培养,诱导心脏起搏样细胞相关基因表达的变化。方法构建携带GJA7... 目的探讨缝隙连接蛋白α7(GJA7)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs),经与乳鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)共培养,诱导心脏起搏样细胞相关基因表达的变化。方法构建携带GJA7基因的慢病毒载体,转染rMSCs,经嘌呤霉素加压筛选纯化后,与NRVMs共培养。分为RFP(red fluorescent protein,红色荧光蛋白)-rMSCs组(A组)、GJA7-RFP-rMSCs组(B组)、RFP-rMSCs+NRVMs组(C组)、GJA7-RFP-rMSCs+NRVMs组(D组)4组。荧光定量PCR法检测心脏起搏细胞相关基因(HCN4、GJA7、Tbx3、Tbx18)及工作心肌细胞相关基因(Cx43、Nkx2.5)的表达。全细胞膜片钳检测各组细胞起搏电流(If)。结果携带GJA7基因的慢病毒载体成功转染rMSCs,经嘌呤霉素加压筛选,转染效率高达95%以上。RT-qPCR结果显示,D组HCN4、GJA7、Tbx3、Tbx18表达较其他各组明显增高(P〈0.05);C组Nkx2.5、Cx43则较其他组表达明显升高(P〈0.05)。全细胞膜片钳检测结果显示,仅D组记录到超极化激活的内向电流,该电流具有明显时间电压依赖性,且可被Cscl(4 mmol/L)阻断,符合If电流特性。结论经GJA7基因修饰并通过与心肌细胞共培养,使rMSCs在体外诱导出具有If电流的心脏起搏样细胞。 展开更多
关键词 缝隙连接蛋白α7 缝隙连接蛋白 骨髓间充质干细胞 共培养 生物起搏
生物起搏中的病毒载体 预览
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作者 张健 黄从新 《心血管病学进展》 CAS 2018年第1期20-24,共5页
随着分子生物学和基因工程学的进展,为了弥补电子起搏器的不足,生物起搏器应运而生。基因治疗作为构建生物起搏器的一个切实可行的方法,指通过载体将目的基因导入宿主并使其表达,以达到治疗的目的。而病毒载体是实现基因递送的前提条件... 随着分子生物学和基因工程学的进展,为了弥补电子起搏器的不足,生物起搏器应运而生。基因治疗作为构建生物起搏器的一个切实可行的方法,指通过载体将目的基因导入宿主并使其表达,以达到治疗的目的。而病毒载体是实现基因递送的前提条件,不同病毒载体在研究应用中均存在一定的优势和局限,现就生物起搏中常用的病毒载体(慢病毒、腺病毒和腺相关病毒)的结构特性以及在起搏中的应用选择做一综述。 展开更多
关键词 生物起搏 基因治疗 慢病毒 腺病毒 腺相关病毒
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分别转染TBX18后乳鼠成纤维细胞对心肌细胞搏动频率的影响 预览
8
作者 权大君 曹政 +2 位作者 李奇 孔彬 王光记 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期5-9,共5页
目的用TBX18分别转染成纤维细胞(CFs)与心肌细胞(NRVMs),探究转染的成纤维细胞对整个共培养系统的影响。方法用TBX18分别转染乳鼠心脏CFs与NRVMs,并分成5组:NRVMs组,TBX18-NRVMs组,TBX18-NRVMs+CFs组,TBX18-NRVMs+GFP(绿色荧光... 目的用TBX18分别转染成纤维细胞(CFs)与心肌细胞(NRVMs),探究转染的成纤维细胞对整个共培养系统的影响。方法用TBX18分别转染乳鼠心脏CFs与NRVMs,并分成5组:NRVMs组,TBX18-NRVMs组,TBX18-NRVMs+CFs组,TBX18-NRVMs+GFP(绿色荧光蛋白)-CFs组与TBX18-NRVMs+TBX18-CFs组。培养7d后观察并比较各组细胞的搏动频率。结果共培养7d后发现TBX18可显著提高心肌细胞的自发搏动[(94.20±7.38)b/min vs.(62.10±11.67)b/min,P〈0.01],且相比TBX18-NRVMs组,GFP-CFs或CFs与TBX18-NRVMs共培养并没有明显改变搏动频率,但CFs具有减缓心肌自发搏动的趋势,经TBX18转染后的CFs与TBX18-NRVMs共培养可显著提高心肌细胞的搏动频率[(118.50±7.25)b/min vs.(82.80±15.82)b/min,P〈0.01]。结论在分别转染TBX18的成纤维细胞与心肌细胞共培养系统中,成纤维细胞可显著提高心肌细胞的搏动频率。 展开更多
关键词 TBX18 成纤维细胞 乳鼠心肌细胞 生物起搏
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重编程骨髓间充质干细胞治疗缓慢型心律失常的研究 预览 被引量:1
9
作者 胡雁南 李宁 +2 位作者 刘良 郎希龙 张浩 《国际心血管病杂志》 2017年第4期221-225,共5页
目的:利用Tbx18重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞,移植到猪窦房结损毁模型的右室心外膜下心肌,探索治疗缓慢型心律失常的新方法。方法:10只健康未成年猪随机分为实验组和对照组,每组各5只,通过电刀烧灼窦房结建立窦房结毁损模型,实验... 目的:利用Tbx18重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞,移植到猪窦房结损毁模型的右室心外膜下心肌,探索治疗缓慢型心律失常的新方法。方法:10只健康未成年猪随机分为实验组和对照组,每组各5只,通过电刀烧灼窦房结建立窦房结毁损模型,实验组移植携带Tbx18基因的骨髓间充质干细胞,对照组移植等量携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的骨髓间充质干细胞。观察两组猪的心率变化及对儿茶酚胺的反应性,免疫荧光法检测细胞移植部位心肌组织中Tbx18的表达。结果:窦房结毁损前,实验组与对照组猪心率无明显差异[(108.8±4.2)次/min对(106.6±6.8)次/min,P〉0.05];窦房结毁损后,实验组与对照组猪心率无明显差异[(42.0±7.3)次/min对(43.4±5.1)次/min,P〉0.05]。细胞移植后第2周实验组的心率明显高于对照组[(84.0±3.1)次/min对(53.6±2.5)次/min,P〈0.05];细胞移植后第3周起实验组心率开始出现下降趋势,但仍明显高于对照组(P均〈0.05);细胞移植后第5周两组猪心率无明显差异[(65.2±2.5)次/min对(50.3±2.0)次/min,P〉0.05]。细胞移植后第3周时,给予微泵异丙肾上腺素后,实验组心率由(78.0±2.5)次/min上升至(103.0±2.1)次/min,对照组心率由(54.0±3.3)次/min上升至(64.0±2.0)次/min,实验组心率上升幅度明显高于对照组(33.2%对18.5%,P〈0.05)。免疫荧光染色可见移植部位心肌细胞表达Tbx18蛋白。结论:将携带Tbx18的骨髓间充质干细胞移植入窦房结损毁猪模型的右室心外膜下,可以显著改善猪的心率,且对异丙肾上腺素具有良好的反应性。 展开更多
关键词 Tbx18基因 生物起搏器 基因治疗 缓慢型心律失常
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携带Tbx3基因慢病毒的构建 预览
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作者 杨帆 刘铮 +1 位作者 廖斌 于风旭 《四川医学》 CAS 2017年第2期136-139,共4页
目的构建发育调控相关转录因子基因(Tbx3)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台。方法应用聚合酶链反应PCR方法,扩增Tbx3基因,利用Gateway技术构建出Tbx3慢病毒表达载体... 目的构建发育调控相关转录因子基因(Tbx3)的慢病毒载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究Tbx3对细胞起搏功能的影响提供高效的慢病毒转基因平台。方法应用聚合酶链反应PCR方法,扩增Tbx3基因,利用Gateway技术构建出Tbx3慢病毒表达载体。经PCR及基因测序鉴定后,转染293T包装细胞,产生相应慢病毒,测定其滴度。结果 PCR和测序证实,构建出携带有Tbx3基因的慢病毒表达载体。病毒滴度测定结果为2.09×10~8TU/mL。结论成功构建Tbx3基因慢病毒载体并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为通过Tbx3基因长期稳定的表达来构建窦房结细胞的实验研究提供高效稳定的转基因技术平台。 展开更多
关键词 心脏干细胞 Tbx3 慢病毒 生物起搏器
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生物心脏起搏器治疗缓慢型心律失常的研究进展 被引量:4
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作者 胡雁南 张浩 郎希龙 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期905-909,共5页
电子心脏起搏器治疗已成为心律失常特别是严重缓慢型心律失常的首选治疗方法。虽然电子心脏起搏器的技术逐渐完善,但仍存在一定的缺陷。近十多年来,研究证实可以通过基因治疗和细胞治疗构建生物起搏器;随着分子生物学和细胞生物学的发展... 电子心脏起搏器治疗已成为心律失常特别是严重缓慢型心律失常的首选治疗方法。虽然电子心脏起搏器的技术逐渐完善,但仍存在一定的缺陷。近十多年来,研究证实可以通过基因治疗和细胞治疗构建生物起搏器;随着分子生物学和细胞生物学的发展,生物心脏起搏技术不断取得突破。目前构建生物心脏起搏器的方法有两种,一种是将起搏相关基因导入间充质干细胞,另一种是将多能干细胞诱导分化为窦房结样起搏细胞。本文针对生物心脏起搏器的最新研究进展进行综述,并归纳分析生物心脏起搏过程中存在的问题以及未来的重点研究方向。 展开更多
关键词 心动过缓 基因治疗 细胞治疗 生物起搏器
重编程心肌细胞治疗大鼠心动过缓 预览 被引量:1
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作者 胡雁南 薛祥 +1 位作者 张浩 郞希龙 《中国体外循环杂志》 2017年第1期47-50,共4页
目的将Tbx18基因导入窦房结损毁模型的大鼠左室心尖部,探索治疗缓慢型心律失常疾病的新方法。方法取24只成年的Sprague Dawley雄性大鼠,随机分为实验组(n=12)和对照组(n=12),实验组注入Tbx18起搏基因,对照组植入等量绿色萤光蛋白(... 目的将Tbx18基因导入窦房结损毁模型的大鼠左室心尖部,探索治疗缓慢型心律失常疾病的新方法。方法取24只成年的Sprague Dawley雄性大鼠,随机分为实验组(n=12)和对照组(n=12),实验组注入Tbx18起搏基因,对照组植入等量绿色萤光蛋白(GFP),观察其心率变化及对儿茶酚胺的反应性。对移植部位的心肌行Western blot及免疫荧光检测。结果实验组的自主心律明显高于对照组(P〈0.05)。且移植组的自主心律起源于基因注入部位。注射异丙肾上腺素后,移植组心律明显高于对照组(P〈0.05),移植部位心肌组织行Western blot及免疫荧光检测提示:实验组Tbx18蛋白的表达明显高于对照组。结论将Tbx18基因植入窦房结损毁模型的大鼠左室心尖部,可以显著提高大鼠的心率,且对异丙肾上腺素具有良好的反应性。 展开更多
关键词 Tbx18基因 生物起搏器 基因治疗 心动过缓
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Tbx18在生物起搏中的研究进展 预览 被引量:2
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作者 邹强 黄从新 《疑难病杂志》 CAS 2017年第1期95-98,共4页
电子起搏器自应用于临床拯救了无数生命,尽管其不断改进,但仍存在许多弊端,极大地促进了生物起搏器的发展。在过去10年,生物起搏器取得了显著的改善,窦房结发育的关键调控因子Tbx18能直接将心肌细胞转化为起搏样细胞发挥作用,取... 电子起搏器自应用于临床拯救了无数生命,尽管其不断改进,但仍存在许多弊端,极大地促进了生物起搏器的发展。在过去10年,生物起搏器取得了显著的改善,窦房结发育的关键调控因子Tbx18能直接将心肌细胞转化为起搏样细胞发挥作用,取得了瞩目的成就,但仍遗留有与长期预后和安全相关的问题。文章对Tbx18在生物起博中研究进展进行综述。 展开更多
关键词 窦房结 基因编程 生物起搏器 Tbx18
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间充质干细胞向起搏样细胞的诱导分化
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作者 黄超 杨向群 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第2期378-381,387共5页
生物起搏器是治疗严重缓慢性心律失常的一个新策略,而寻找合适的起搏细胞是其首要问题。本文综述了通过转染基因、化学诱导、共培养以及特定培养基培养的方法将骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞诱导为起搏样细胞的研究进展,分析了它们作为... 生物起搏器是治疗严重缓慢性心律失常的一个新策略,而寻找合适的起搏细胞是其首要问题。本文综述了通过转染基因、化学诱导、共培养以及特定培养基培养的方法将骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞诱导为起搏样细胞的研究进展,分析了它们作为生物心脏起搏器种子细胞尚需解决的问题。 展开更多
关键词 生物起搏器 骨髓间充质干细胞 脂肪干细胞 起搏细胞 分化
转录因子Tbx18、Tbx3、Shox2在生物起搏方面的研究进展 预览 被引量:4
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作者 张格格 黄从新 《疑难病杂志》 CAS 2016年第4期428-431,共4页
近年来,一些转录因子在生物起搏方面的作用受到了极大关注,无论是离体的细胞实验还是在体直接注射,都产生了令人瞩目的成果。文章就转录因子Tbx18、Tbx3、Shox2在生物起搏方面的研究进展做一综述,希望为其今后在临床上的应用提供依据。
关键词 转录因子 生物起搏 Tbx18 Tbx3 Shox2
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TBX18腺病毒载体体外诱导乳鼠心肌细胞向起搏样细胞分化 被引量:1
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作者 李艳君 杨媚 +2 位作者 张格格 李乐 唐艳红 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2016年第6期531-535,共5页
目的观察TBX18腺病毒载体在体外转染乳鼠心肌细胞,能否诱导其向起搏样细胞分化。方法胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法分离培养乳鼠心肌细胞,光学显微镜下观察细胞形态,48h后用免疫荧光技术检测心肌细胞纯度。将心肌细胞随机分为实验组(TBX1... 目的观察TBX18腺病毒载体在体外转染乳鼠心肌细胞,能否诱导其向起搏样细胞分化。方法胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法分离培养乳鼠心肌细胞,光学显微镜下观察细胞形态,48h后用免疫荧光技术检测心肌细胞纯度。将心肌细胞随机分为实验组(TBX18组)、空病毒对照组(GFP组),转染时分别加入带TBX18转录因子和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒,带GFP的腺病毒,采用实时荧光定量聚合酶链式反应,蛋白质免疫印迹和免疫荧光技术检测各组心肌细胞HCN4mRNA和HCN4蛋白的表达。结果培养24h后,心肌细胞几乎完全贴壁,可见梭形、菱形或多边形;48h后形成网状或放射状细胞簇。α-actin检测心肌细胞纯度高达96%。TBX18组心肌细胞中HCN4mRNA和HCN4蛋白的表达水平明显高于GFP组(28 943.997±5 019.682vs 1.000±0.000,n=9,P〈0.05;0.631±0.025vs 0.192±0.003,n=9,P〈0.05);倒置荧光显微镜下观察TBX18组因表达HCN4蛋白而发出红色荧光,GFP组几乎看不到HCN4蛋白的表达。结论 TBX18腺病毒载体体外转染乳鼠心肌细胞,能使乳鼠心肌细胞向起搏样细胞分化。 展开更多
关键词 心血管病学 TBX18转录因子 腺病毒载体 乳鼠心肌细胞 生物起搏
HCN4和Cx45基因导入间充质干细胞构建起搏细胞的实验研究 预览 被引量:1
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作者 王帅飞 王军 张浩 《国际心血管病杂志》 2015年第3期175-178,共4页
目的:将小鼠超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(mHCN4)基因和小鼠连接子蛋白45(mCx45)基因导入大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),构建生物起搏细胞。方法:构建携带mHCN4基因的重组慢病毒转染rMSC,用电压钳记录起搏电流(If);构建携... 目的:将小鼠超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(mHCN4)基因和小鼠连接子蛋白45(mCx45)基因导入大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),构建生物起搏细胞。方法:构建携带mHCN4基因的重组慢病毒转染rMSC,用电压钳记录起搏电流(If);构建携带mCX45基因的重组慢病毒,转染mHCN4-rMSC,与新生大鼠心室肌细胞(NRVM)共培养,记录NRVM的搏动频率。结果:电压钳记录到mHCN4-rMSC存在电压-时间依从的超极化激活的内向性If;共培养NRVM的搏动频率对照null-rMSC组为(60±5)次/min、mHCN4-rMSC组为(70±7)次/min、mHCN4-Cx45-rMSC组为(79±8)次/min,组间比较均具有显著性差异(P〈0.05)。结论:mHCN4基因导入rMSC可以成功构建生物起搏细胞,mCx45和mHCN4基因共表达可以提高起搏功能。 展开更多
关键词 超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4 连接子蛋白45 骨髓间充质干细胞 生物起搏 慢病毒载体
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构建生物心脏起搏器的种子细胞的研究进展 预览
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作者 姬瑞娟 杨向群 《组织工程与重建外科》 2015年第6期381-385,共5页
随着基因工程、干细胞、组织工程、再生医学等领域的深入研究,使用细胞移植、组织工程方法构建生物心脏起搏器有望成为今后的发展方向。这些方法的基础和关键是找到理想的种子细胞。目前,用于构建生物心脏起搏器的种子细胞有成体细胞和... 随着基因工程、干细胞、组织工程、再生医学等领域的深入研究,使用细胞移植、组织工程方法构建生物心脏起搏器有望成为今后的发展方向。这些方法的基础和关键是找到理想的种子细胞。目前,用于构建生物心脏起搏器的种子细胞有成体细胞和干细胞。本文就构建生物心脏起搏器的种子细胞的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 生物心脏起搏器 成体细胞 干细胞
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Tbx3在生物起搏中的研究进展 被引量:1
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作者 李勇 李宾公 《生物医学工程学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期923-926,共4页
早期生物起搏的研究大都围绕HCN通道展开,通过增强If电流来构建生物起搏器,近年来人们发现Tbx3基因在心脏传导系统尤其是窦房结的分化成熟及功能维持中发挥着重要作用,能够进一步优化生物起搏器,有可能成为生物起搏及心脏传导系统疾病... 早期生物起搏的研究大都围绕HCN通道展开,通过增强If电流来构建生物起搏器,近年来人们发现Tbx3基因在心脏传导系统尤其是窦房结的分化成熟及功能维持中发挥着重要作用,能够进一步优化生物起搏器,有可能成为生物起搏及心脏传导系统疾病新的治疗靶点。本文总结近年来Tbx3在生物起搏中的一些最新研究进展,希望为今后Tbx3的临床应用提供理论依据。 展开更多
关键词 Tbx3 生物起搏 心脏传导系统
携带hHCN4基因重组腺病毒载体体外转染大鼠BMSCs的实验研究 预览 被引量:3
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作者 佟玉娜 王高频 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第4期382-385,共4页
目的构建重组腺病毒载体Ad-hHCN4-IRES/eGFP在体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs),检测目的基因在BMSCs中mRNA和蛋白水平是否有表达。方法采用贴壁培养法分离纯化大鼠BMSCs;将携带hHCN4基因的重... 目的构建重组腺病毒载体Ad-hHCN4-IRES/eGFP在体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs),检测目的基因在BMSCs中mRNA和蛋白水平是否有表达。方法采用贴壁培养法分离纯化大鼠BMSCs;将携带hHCN4基因的重组腺病毒转染大鼠BMSCs,用荧光显微镜观察转染后BMSCs绿色荧光蛋白的表达,用RT-PCR和Western Blot法检测转染后hHCN4基因mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 BMSCs成功贴壁分离传代。转染目的基因24 h后荧光显微镜下即观察到绿色荧光蛋白的表达;RT-PCR法检测到有hHCN4 mRNA的表达,Western blot法检测到有其蛋白水平的表达。结论重组腺病毒载体转染的BMSCs能够表达hHCN4基因。 展开更多
关键词 hHCN4基因 重组腺病毒 骨髓间充质干细胞 生物起搏
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