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华蟾素胶囊释放度测定方法的研究 预览
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作者 孟建升 吕斌 +1 位作者 蒋俊春 杨文文 《海峡药学》 2019年第2期21-23,共3页
目的建立测定华蟾素胶囊释放度的方法。方法采用高效液相色谱法,测定华蟾素胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的溶出量,色谱柱为UltimateAQ-C18,以乙腈-0.5%磷酸盐缓冲液(50∶50)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相,流速为0.5mL·min-1;检... 目的建立测定华蟾素胶囊释放度的方法。方法采用高效液相色谱法,测定华蟾素胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的溶出量,色谱柱为UltimateAQ-C18,以乙腈-0.5%磷酸盐缓冲液(50∶50)(用磷酸调节pH值为3.2)为流动相,流速为0.5mL·min-1;检测波长为296nm;进样量10μL;柱温为40℃;考察不同的溶出介质、转速下华蟾素胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的溶出情况。结果建立了以磷酸盐缓冲液(pH值为6.8)100mL为溶出介质,转速为100r·min-1的溶出方法。结论所建立的方法简便,准确,结果可靠,该方法可以用于该制剂的质量控制。 展开更多
关键词 华蟾素胶囊 华蟾酥毒基 酯蟾毒配基 释放度 高效液相色谱法
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高效液相色谱-串联质谱法测定干蟾皮中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基
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作者 焦安妮 于敏 +2 位作者 李蕾 焦连庆 刘忠英 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期3687-3690,共4页
目的建立快速、简便、灵敏、准确的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)测定干蟾皮中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量方法。方法采用HPLC-MS正离子多反应监测模式测定,Zorbax SB-C18液相色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为乙腈-0.1%甲... 目的建立快速、简便、灵敏、准确的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)测定干蟾皮中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量方法。方法采用HPLC-MS正离子多反应监测模式测定,Zorbax SB-C18液相色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(41∶59),体积流量200μL/min,柱温30℃。质谱条件:氮气温度350℃,氮气体积流量12 L/min,雾化器压力为101.316 kPa(35 psi)。华蟾酥毒基碎裂电压160 V,碰撞能15 eV,母离子、子离子分别为m/z 443.2、364.8;酯蟾毒配基碎裂电压130 V,碰撞能15 eV,母离子、子离子分别为m/z 385.2、366.9。结果华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在0.99~7.92μg/m L和1.04~8.32μg/m L内线性关系良好。检测限(S/N≥3)均为0.3 ng/g。华蟾酥毒基、酯蟾毒配基回收率分别为97.96%~103.7%、96.86%~102.4%。日内及日间精密度RSD均小于3%。结论所建方法灵敏、可靠,能满足干蟾皮有毒物质分析的需要。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串联质谱法 干蟾皮 华蟾酥毒基 酯蟾毒配基 质谱条件
HPLC法测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量
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作者 刘册家 王真 +3 位作者 刁瑞丽 岳苏 孙珊珊 史磊 《亚太传统医药》 2019年第4期51-54,共4页
目的:建立喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法进行测定,Thermo C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾(用磷酸调节pH=3.2)(40∶60),流速1.0mL·min-1,检测波长296nm,... 目的:建立喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法进行测定,Thermo C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾(用磷酸调节pH=3.2)(40∶60),流速1.0mL·min-1,检测波长296nm,柱温40℃,进样体积10μL。结果:该方法系统适应性良好,华蟾酥毒基、脂蟾毒配基分别在48.70~113.64μg·mL-1(r=0.999 8)和9.23~21.53μg·mL-1(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.1%(RSD=0.6%,n=6)、100.6%(RSD=0.1%,n=6),该方法精密度良好,流速和柱温耐用性考察均符合要求。结论:该方法简便准确、灵敏、重复性好,适用于喉症丸中蟾酥的质量控制。 展开更多
关键词 喉症丸 高效液相色谱法 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 含量测定
中华大蟾蜍毒液中蟾毒配基类成分的相关性研究
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作者 曹月婷 崔可可 +4 位作者 吴纪恒 潘红烨 卢正玉 邵家峰 王龙虎 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1850-1856,共7页
众所周知,中药成分复杂,多指标质量评价是今后趋势之一。但是,指标成分的选择及其代表性研究,往往是个棘手的难题。该文探索蟾蜍毒液中多种蟾毒配基含量的内在联系,寻找更加合理的蟾酥质控指标。该研究随机选取全国17个产地的样本,建立... 众所周知,中药成分复杂,多指标质量评价是今后趋势之一。但是,指标成分的选择及其代表性研究,往往是个棘手的难题。该文探索蟾蜍毒液中多种蟾毒配基含量的内在联系,寻找更加合理的蟾酥质控指标。该研究随机选取全国17个产地的样本,建立7种蟾毒配基含量数据库;然后,采用Spearman分析和PCA方法研究成分间的相关性,再用逐步回归分析建立总含量预测模型。研究发现,华蟾酥毒基、蟾毒灵和远华蟾蜍精之和与所测蟾毒配基总含量存在着相关性。据此推测,以这3种成分作为蟾酥质控指标,与现有的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基质控指标相比,更能反映蟾毒配基的整体含量。这一发现有助于蟾酥质量标准的修改。 展开更多
关键词 蟾酥 蟾毒灵 远华蟾蜍精 华蟾酥毒基 蟾蜍二烯内酯 多指标质量评价
华蟾酥毒基通过FAK/PI3K/Akt通路抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭 预览 被引量:1
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作者 盛杰霞 邓旭 +3 位作者 包军 王志美 代二庆 邓全军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期139-145,共7页
目的探讨华蟾酥毒基抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭的相关机制。方法CCK-8法检测Kyse-520细胞经不同浓度华蟾酥毒基作用12、24、48 h后的增殖活性;划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭过程;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分... 目的探讨华蟾酥毒基抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭的相关机制。方法CCK-8法检测Kyse-520细胞经不同浓度华蟾酥毒基作用12、24、48 h后的增殖活性;划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭过程;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析Kyse-520细胞中FAK、Akt、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测FAK、p-FAK(Tyr397)、Akt、p-Akt(Ser473)、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。结果CCK-8结果显示,华蟾酥毒基可以抑制Kyse-520细胞增殖,呈现时间和浓度依赖性,划痕实验和Transwell小室实验结果表明,华蟾酥毒基可以抑制食管癌细胞迁移和侵袭;RT-qPCR和Western blot结果显示,华蟾酥毒基对FAK、Akt mRNA及总蛋白无明显影响,但可以下调p-FAK、p-Akt、VEGF-A、MMP-2、MMP-9表达,上调PTEN的表达。结论华蟾酥毒基通过诱导PTEN表达,下调FAK/PI3K/Akt信号通路,抑制食管癌Kyse-520细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 华蟾酥毒基 食管癌 Kyse-520细胞 细胞迁移 细胞侵袭 FAK PI3K/AKT MMPS
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蟾酥中蟾毒配基类成分的提取纯化工艺研究
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作者 孙爱萍 孙萍 李娜 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期611-617,共7页
目的优化蟾酥中脂溶性成分华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的提取及纯化工艺。方法以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量为考察指标,以乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间为考察因素,采用正交试验确定最佳提取工艺参数;通过单因素考察并结合Box-Behnken响应... 目的优化蟾酥中脂溶性成分华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的提取及纯化工艺。方法以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基总量为考察指标,以乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间为考察因素,采用正交试验确定最佳提取工艺参数;通过单因素考察并结合Box-Behnken响应面法,以展开剂比例、柱高与直径比、吸附剂与上样量的比值为考察因素,筛选并确定最佳纯化工艺。结果确定最佳提取工艺为加入10倍量85%的乙醇提取90min;最佳纯化工艺为展开剂环己烷-氯仿-丙酮(4∶3∶3),柱高与直径比为7∶1,吸附剂-上样量为5.5∶1,2种蟾毒配基纯化后的总量可达66.51%。通过3批放大工艺验证,表明模型拟合度良好,采用硅胶柱色谱分离纯化蟾毒配基,具有操作简便、分离速度快、分离效果好等优点。结论所选工艺合理、可行,为以后该产品的产业化应用提供技术参考和依据。 展开更多
关键词 蟾酥 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 正交试验 Box-Behnken响应面法
华蟾酥毒基通过调控基质金属蛋白酶抑制食管癌细胞侵袭转移的作用
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作者 邓旭 盛杰霞 +2 位作者 王佳宝 代二庆 邓全军 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期133-136,共4页
目的研究华蟾酥毒基对食管癌细胞侵袭转移的影响。方法分别将食管癌EC-109和Kyse-150细胞分为4组:对照组和3个浓度实验组。对照组加入含有溶媒(0.1%DMSO)的培养基,低、中、高3个浓度实验组给予25,50,100 nmol·L^-1华蟾酥毒基,处理... 目的研究华蟾酥毒基对食管癌细胞侵袭转移的影响。方法分别将食管癌EC-109和Kyse-150细胞分为4组:对照组和3个浓度实验组。对照组加入含有溶媒(0.1%DMSO)的培养基,低、中、高3个浓度实验组给予25,50,100 nmol·L^-1华蟾酥毒基,处理1 d。用划痕实验和Transwell小室法检测各组细胞迁移水平和侵袭能力,用免疫印迹实验检测细胞中磷酸化黏着斑激酶Tyr397[p-FAK(Tyr397)]、P53、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达情况,用实时荧光定量PCR检测各组细胞中上述指标mRNA的相对表达水平。结果EC-109细胞:以25~100 nmol·L^-1的华蟾酥毒基处理1 d后,实验组划痕愈合面积约为(9.96±1.17)%~(5.02±0.92)%,侵袭细胞数约为(162.33±12.01)~(42.33±12.50)个;与对照组的(23.80±1.32)%和(254.33±14.01)个相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。低、中、高3个浓度实验组的MMP-2蛋白表达水平分别为0.74±0.04,0.54±0.06和0.44±0.05。中、高2个浓度实验组的MMP-9蛋白表达分别为0.69±0.08,0.52±0.04;这2组的p-FAK(Tyr397)的表达水平分别为0.90±0.08,0.62±0.06;这2组的P53蛋白表达水平分别为1.20±0.06,2.86±0.05;这2组的PTEN蛋白表达水平分别为1.31±0.06,1.53±0.05,与对照组的(1.00±0.00)比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);在同样的处理条件下,实验组上述指标的mRNA的表达变化与蛋白表达趋势相同。Kyse-150细胞:迁移和侵袭能力的改变以及各指标的表达变化与EC-109细胞趋势相同。结论华蟾酥毒基可能通过上调P53和PTEN表达,下调FAK的磷酸化及其下游分子MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制食管癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 华蟾酥毒基 食管癌 侵袭 迁移 基质金属蛋白酶 黏着斑激酶
温度、光照及pH对蟾酥提取液中指标成分稳定性的影响 被引量:1
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作者 李国雁 陈灵 +2 位作者 肖丹 彭衡阳 王森 《中国实验方剂学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期31-35,共5页
目的:考察温度、光照及pH对蟾酥提取液中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺稳定性的影响。方法:采用HPLC测定蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量,检测波长296 nm,流动相乙腈-水(58∶42);利用UV测定蟾酥提取液中总蟾毒色胺... 目的:考察温度、光照及pH对蟾酥提取液中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺稳定性的影响。方法:采用HPLC测定蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量,检测波长296 nm,流动相乙腈-水(58∶42);利用UV测定蟾酥提取液中总蟾毒色胺的含量,检测波长559 nm。分别考察高温(60,40℃),强光照射[(4 500±500)Lx]及不同pH(40℃,pH分别为4.32,4.99,5.73,6.47,6.97,7.75)条件下蟾酥提取液放置0,5,10 d后华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺的含量变化。结果:60℃条件下放置10 d后3种指标成分降解率均〉5%;40℃及(4 500±500)Lx条件下华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的降解率均〈5%;总蟾毒色胺在上述条件下的降解率均〉5%。华蟾酥毒基、脂蟾毒配基、总蟾毒色胺分别在pH 5.73,6.47,6.47时降解最慢。结论:蟾酥提取液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基受高温及强光照射的影响较小,总蟾毒色胺受高温及强光照射的影响较大;pH是影响蟾酥提取液中3种指标成分稳定性的主要因素,不同pH条件对3种指标成分的稳定性有不同程度的影响。 展开更多
关键词 蟾酥 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 总蟾毒色胺 高温 光照 PH 稳定性
健脾理气方综合治疗原发性肝癌患者的生存分析
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作者 陈晓乐 徐立涛 +2 位作者 王鹏 孟志强 苏式兵 《中华中医药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期2018-2022,共5页
目的:探讨健脾理气方综合治疗原发性肝癌患者生存的影响因素,评价联合华蟾素治疗的生存效益。方法:收集2010年10月至2012年10月在复旦大学附属肿瘤医院接受健脾理气方综合治疗的150例肝癌病例和随访资料,计算生存率并分析其影响因素... 目的:探讨健脾理气方综合治疗原发性肝癌患者生存的影响因素,评价联合华蟾素治疗的生存效益。方法:收集2010年10月至2012年10月在复旦大学附属肿瘤医院接受健脾理气方综合治疗的150例肝癌病例和随访资料,计算生存率并分析其影响因素。结果:门脉癌栓和谷氨酰转肽酶(GGT)为影响肝癌总生存期预后的危险因素,而中药使用时间长于1年为预后保护因素;联合使用华蟾素较未使用者,中位无进展生存时间及总生存时间显著延长(P〈0.05)。结论:本研究结果得出配合健脾理气方长期使用,能使肝癌患者生存获益;联合使用华蟾素不仅能延缓肝癌的进展时间,而且能够提高生存率延长生存期。 展开更多
关键词 健脾理气方 华蟾素 原发性肝癌 预后因素
如意金黄散配合水胶体敷料预防输注华蟾素所致静脉炎的效果观察 预览
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作者 苏亚蓉 王翔燕 殷敏慧 《中西医结合护理(中英文)》 2018年第12期77-79,共3页
目的观察如意金黄散配合水胶体敷料预防华蟾素静脉输注所致静脉炎的效果。方法选取采取静脉输注华蟾素的患者30例,随机分成试验组和对照组,各15例。对照组单独使用水胶体外敷,试验组采用如意金黄散配合水胶体敷料外敷,比较2组静脉炎发... 目的观察如意金黄散配合水胶体敷料预防华蟾素静脉输注所致静脉炎的效果。方法选取采取静脉输注华蟾素的患者30例,随机分成试验组和对照组,各15例。对照组单独使用水胶体外敷,试验组采用如意金黄散配合水胶体敷料外敷,比较2组静脉炎发生情况及视觉模拟疼痛评分(VAS)。结果试验组静脉炎发生率低于对照组(13.33%vs.40.00%,P<0.05),试验组VAS评分低于对照组(P<0.05)。结论如意金黄散配合水胶体敷料外敷能有效预防静脉输注华蟾素所致静脉炎的发生,减轻患者疼痛。 展开更多
关键词 如意金黄散 水胶体敷料 华蟾素 静脉炎 中西医结合护理
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蟾酥干燥炮制前后化学成分和药效学变化考察 被引量:3
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作者 陈瀛澜 郭夫江 +3 位作者 卞雪莲 董志颖 吴迎春 李医明 《中草药》 CSCD 北大核心 2018年第8期1816-1822,共7页
目的考察蟾酥Bufonis venenum鲜浆干燥炮制加工(日晒干燥、50℃真空干燥、50℃鼓风干燥、80℃鼓风干燥、冷冻干燥)前后化学成分及药效变化。方法 HPLC法和TLC法研究蟾酥不同干燥方式炮制前后化学成分的变化,MTT法测试不同炮制干燥品抑... 目的考察蟾酥Bufonis venenum鲜浆干燥炮制加工(日晒干燥、50℃真空干燥、50℃鼓风干燥、80℃鼓风干燥、冷冻干燥)前后化学成分及药效变化。方法 HPLC法和TLC法研究蟾酥不同干燥方式炮制前后化学成分的变化,MTT法测试不同炮制干燥品抑制5种不同肿瘤细胞株增殖的效果。结果 5种不同加工炮制方法所得蟾酥,性状有较大差异;化学成分的种类及含量没有明显差异;华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量之和都符合《中国药典》2015年版标准,大于6%;50℃和80℃鼓风干燥所得蟾酥具有比其他干燥方法更强的肿瘤细胞抑制效果。结论日晒及50℃鼓风干燥法所得蟾酥符合《中国药典》要求的外观性状。真空干燥和冷冻干燥虽然颜色不符合《中国药典》的规定,但主要有效成分并未发生较大变化。 展开更多
关键词 蟾酥 炮制 干燥 沙蟾毒精 远华蟾毒精 蟾毒它灵 华蟾毒它灵 蟾毒灵 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基
华蟾素对老年非小细胞肺癌患者血清相关细胞因子及肿瘤标志物的影响 预览
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作者 郝建坤 《宁夏医科大学学报》 2018年第6期676-680,共5页
目的探讨华蟾素对老年非小细胞怖癌(NSCLC)患者血清相关细胞因子及肿瘤标志物的影响。方法选取2016年7月-2017年6月河北省冀中能源峰峰集团总医院收治的NSCLC患者74例为研究对象,随机分为观察组和对照组各37例,对照组采用NP化疗方... 目的探讨华蟾素对老年非小细胞怖癌(NSCLC)患者血清相关细胞因子及肿瘤标志物的影响。方法选取2016年7月-2017年6月河北省冀中能源峰峰集团总医院收治的NSCLC患者74例为研究对象,随机分为观察组和对照组各37例,对照组采用NP化疗方案,观察组在对照组基础上联合华蟾素。治疗2个周期,采集治疗前、后患者晨起空腹外周静脉血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-α(INF-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10),肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21—1)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原-125(CA125),血清指标P53抗体(P53)、缺氧诱导因子-1α(HIF—1α)、第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)。结果治疗后IL-2较同组治疗前升高,INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-10较同组治疗前降低(P〈0.05),观察组治疗后IL-2高于对照组,INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-10低于对照组(P均〈0.01);治疗后CEA、CYFRA21—1、NSE、CA125较同组治疗前降低(P〈0.05),观察组治疗后CEA、CYFRA21—1、NSE、CA125低于对照组(P〈0.01);治疗后P53、HIF—1α较同组治疗前降低,PTEN较同组治疗前升高(P〉0.05),观察组治疗后P53、HIF—1α低于对照组,PTEN高于对照组(P〈0.01)。结论华蟾素对老年NSCLC患者具有明显抗癌及免疫调节作用,可有效抑制癌细胞的增殖与分化,减弱肿瘤细胞免疫抑制效应,降低肿瘤标志物水平。 展开更多
关键词 华蟾素 非小细胞肺癌 细胞因子 肿瘤标志物
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心宝丸中蟾酥低温粉碎工艺研究
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作者 吴丽琼 蔡荣钦 +1 位作者 江秀山 胡杰雄 《今日药学》 CAS 2018年第10期674-677,共4页
目的优选心宝丸中蟾酥低温粉碎工艺。方法采用单因素和正交试验法,以粉碎温度、粉碎时间、震动频率为考察因素,以华蟾酥毒基、脂蟾毒配基总含量为指标,对影响低温粉碎的因素进行考察,采用高效液相色谱(HPLC)法测定粉碎后华蟾酥毒基及... 目的优选心宝丸中蟾酥低温粉碎工艺。方法采用单因素和正交试验法,以粉碎温度、粉碎时间、震动频率为考察因素,以华蟾酥毒基、脂蟾毒配基总含量为指标,对影响低温粉碎的因素进行考察,采用高效液相色谱(HPLC)法测定粉碎后华蟾酥毒基及脂蟾毒配基总含量。结果蟾酥最佳低温粉碎工艺条件为:-35℃--25℃时,粉碎10 min,震动频率30 Hz。结论试验设计合理,可作为蟾酥低温粉碎生产工艺的参考。 展开更多
关键词 心宝丸 蟾酥 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 低温粉碎
华蟾酥毒基抑制人前列腺癌PC3细胞体外增殖研究
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作者 牛天力 秦国政 《北京中医药大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1019-1024,共6页
目的探讨华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能存在的作用机制。方法细胞分为不加药对照组,5、50、100、500 nmol/L华蟾酥毒基组,共5组。各组作用于PC3细胞24、48h后,四甲基偶氮唑蓝(Mrr)法检测华蟾酥毒基对人前... 目的探讨华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能存在的作用机制。方法细胞分为不加药对照组,5、50、100、500 nmol/L华蟾酥毒基组,共5组。各组作用于PC3细胞24、48h后,四甲基偶氮唑蓝(Mrr)法检测华蟾酥毒基对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响。不同浓度华蟾酥毒基作用于PC3细胞48h 后,光学显微镜观察PC3细胞形态变化;克隆形成实验检测华蟾酥毒基对前列腺癌PC3细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测华蟾酥毒基作用48h后各组PC3细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白表达的影响。结果24h 后华蟾酥毒基可在体外抑制PC3细胞增殖(P<0.01),48h后华蟾酥毒基对PC3细胞增殖抑制作用更为明显(P<0.05),华蟾酥毒基对PC3细胞增殖能力有较好的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。细胞克隆形成实验发现,0.5 nmol/L华蟾酥毒基即可抑制细胞克隆形成(P<0.05),并且此种抑制作用与药物浓度呈正相关(P<0.05)。流式细胞术结果显示,0.5nmol/L以上华蟾酥毒基均可诱导PC3细胞凋亡,随浓度增加凋亡率显著增加(P<0.01),50 nmol/L华蟾酥毒基干预48h后,PC3细胞凋亡率为39.667%;同时光学显微镜下细胞增殖抑制明显,并呈凋亡形态改变。蛋白质印迹法结果显示,不同浓度华蟾酥毒基均可下调抗凋亡蛋白MCL-1蛋白表达(P<0.01),以50 nmol/L华蟾酥毒基作用于PC3细胞48h下调MCL-1蛋白表达更为显著(P<0.01)。结论华蟾酥毒基可抑制前列腺癌PC3细胞的体外增殖,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与抗凋亡蛋白MCL-1表达下调有关。 展开更多
关键词 前列腺癌 细胞增殖 细胞凋亡 华蟾酥毒基
华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响
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作者 侯晓洁 徐忠伟 +5 位作者 王佳宝 王志美 包军 赵蕾 代二庆 徐瑞成 《中草药》 CSCD 北大核心 2018年第17期4106-4112,共7页
目的研究华蟾毒配基联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法 MTT法检测Huh7细胞增殖;Hoechst33342/PI荧光双染法检测Huh7细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法检测Ki67蛋白表达;Western blott... 目的研究华蟾毒配基联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法 MTT法检测Huh7细胞增殖;Hoechst33342/PI荧光双染法检测Huh7细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法检测Ki67蛋白表达;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、极光激酶A(AURKA)、Ras、Raf、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白的表达变化。结果华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药对Huh7细胞的增殖均有抑制作用,联合用药组的增殖抑制作用更明显,具有协同效应;荧光染色可见细胞凋亡形态变化;索拉非尼引起Huh7细胞周期S期阻滞,华蟾毒配基和联合用药引起Huh7细胞周期G2/M期阻滞,联合用药组G2/M期阻滞较单药组更明显;华蟾毒配基和索拉非尼均能减弱Ki67表达,联合用药组的作用更为显著;华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药上调Bax和Caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比例,对ERK蛋白表达无明显影响,显著下调AURKA、Ras、Raf和p-ERK蛋白表达,联合用药组的作用更为显著(P〈0.05)。结论华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路抑制肝癌Huh7细胞增殖,诱导其凋亡。 展开更多
关键词 华蟾毒配基 索拉非尼 HUH7细胞 极光激酶A RAS 肝癌
华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡效果观察及机制探讨 预览
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作者 史磊 张耀勇 田爱霞 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2018年第4期178-181,共4页
目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡效果,并探讨其作用机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实... 目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡效果,并探讨其作用机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率。培养48h后荧光定量PCR检测ART、roTOR、Caspase3、Bax和Bel-2mRNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显著高于对照组(P〈0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P〈0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显著高于对照组,实验组间两两比较差异均有统计学意义(P〈0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、roTOR、Bcl-2mRNA表达量与对照组相比均显著降低(P〈0.05),Bax和Caspase-3mRNA表达量均显著增加(P〈0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关。 展开更多
关键词 肝癌 华蟾毒精 增殖凋亡 BAX/BCL-2 Caspase-3 AKT/mTOR信号通路
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不同采收情况与干蟾皮中酯类成分含量对比研究 预览
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作者 周谧 傅兴圣 《海峡药学》 2018年第10期41-44,共4页
目的对不同采收情况与干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量对比研究,为其药材质量评价与资源合理利用提供参考.方法建立高效液相色谱(HPLC)法对不同采收情况的干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行测定.色谱柱:迪马C18(5μm,4.6×... 目的对不同采收情况与干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量对比研究,为其药材质量评价与资源合理利用提供参考.方法建立高效液相色谱(HPLC)法对不同采收情况的干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基进行测定.色谱柱:迪马C18(5μm,4.6×250mm);流动相:乙腈-0.5%磷酸二氢钾(50∶50)(用磷酸调节pH值3.2);流速:1.0mL·min-1,柱温:30℃,检测波长:296nm.结果测定的9批干蟾皮中,不同采收情况的干蟾皮含量的差异较大.测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的色谱分离良好,浓度和峰面积呈良好的线性关系,线性范围分别为1.02~50.88μg·mL-1,r=0.9999(n=6);0.97~48.54μg·mL-1,r=0.9999(n=6).平均加样回收率分别为99.97%(n=9,RSD=2.87%)、97.74%(n=9,RSD=2.03%).结论干蟾皮合理的采收方法是取耳后腺未刮去浆的中华大蟾蜍剥取外皮,除净肌肉纤维,立即贴于板上或撑开,晾干. 展开更多
关键词 干蟾皮 采收情况 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基
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华蟾素抗胶质瘤的作用及机制研究 被引量:1
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作者 孔冰 左明荣 刘艳辉 《四川大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第3期388-393,共6页
目的研究华蟾素对U87胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制。方法不同浓度的华蟾素(0.5-20μmol/L)处理U87细胞6h、12h、24h、48h后,用CCK-8试剂盒进行做细胞活性检测,观察华蟾素对U87胶质瘤细胞活性的影响。不同浓... 目的研究华蟾素对U87胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制。方法不同浓度的华蟾素(0.5-20μmol/L)处理U87细胞6h、12h、24h、48h后,用CCK-8试剂盒进行做细胞活性检测,观察华蟾素对U87胶质瘤细胞活性的影响。不同浓度的华蟾素(1-20μmol/L)分别处理12h、24h后,用Hochest33342试剂检测U87胶质瘤细胞的凋亡情况。免疫荧光染色观察华蟾素处理24h后与细胞增殖相关蛋白p-AKT(T308)的表达情况。Western blot检测不同浓度的华蟾素(1-20μmol/L)处理24h后与细胞增殖相关蛋白{磷酸化的磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、苏氨酸308位点磷酸化的蛋白激酶B[p-AKT(T308)]、丝氨酸473位点磷酸化的蛋白激酶B[p-AKT(S473)]、磷酸化核糖体S6蛋白激酶(PS6)、磷酸化的真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)}和凋亡相关蛋白(BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9)的表达情况。结果华蟾素可抑制U87胶质瘤细胞的活性、诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,呈浓度和时间依赖性反应。华蟾素作用后可使凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、BAX的表达水平增高,PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT(T308)的表达水平降低。结论华蟾素可抑制U87胶质瘤细胞的增殖、诱导U87胶质瘤细胞的凋亡,这可能经由影响PI3K-AKT-4EBP1与BAXcaspase的信号通路实现。 展开更多
关键词 华蟾素 胶质瘤 生长抑制 凋亡
冻干蟾皮凝胶剂质量标准及初步药效学研究 预览
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作者 闾红燕 黄绳武 《中国医药导报》 CAS 2018年第10期29-33,共5页
目的建立冻干蟾皮凝胶剂质量标准和初步药效学研究。方法采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行定性鉴别,高效液相色谱(HPLC)法测定华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量,色谱柱kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm);... 目的建立冻干蟾皮凝胶剂质量标准和初步药效学研究。方法采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行定性鉴别,高效液相色谱(HPLC)法测定华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量,色谱柱kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B)(48︰52);流速:1mL/min;检测波长:296nm;柱温:30℃;进样量:10μL。采用S180腹水型实体瘤小鼠进行初步抑瘤药效学研究。结果硅胶G薄层板上,在与对照品色谱对应的位置上,显示相同颜色的荧光斑点,且斑点大小适中,分离度良好。华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在0.056~4.48μg/mL,0.256~10.24μg/mL范围内,峰面积与浓度存在良好的线性关系(r=0.9987、0.9996)。加样回收率(n=6)为100.27%、101.68%,相对标准偏差为1.56%、1.67%。初步药效学结果显示冻干蟾皮凝胶剂不同剂量组均有显著抗肿瘤作用,且高剂量组效果最佳,抑瘤率为48.03%。结论建立了冻干蟾皮凝胶剂质量标准,初步药效学表明冻干蟾皮凝胶剂具有显著抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 冻干蟾皮凝胶剂 质量标准 抗肿瘤 华蟾酥毒基 酯蟾毒配基
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华蟾毒配基抑制组蛋白乙酰化诱导肝癌细胞死亡的机制 预览
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作者 毕成 徐瑞成 +3 位作者 邹爽 王聪聪 张妍 徐忠伟 《中国医药导报》 CAS 2018年第23期4-8,共5页
目的探讨华蟾毒配基通过改变表观遗传修饰调控肝癌细胞死亡的机制。方法通过CCK-8法检测不同浓度(0、0.75、1.5、2.5、5、10μmol/L)华蟾毒配基作用于肝癌HepG2细胞24 h细胞增殖能力的变化;5μmol/L华蟾毒配基作用HepG2细胞12、24 h后... 目的探讨华蟾毒配基通过改变表观遗传修饰调控肝癌细胞死亡的机制。方法通过CCK-8法检测不同浓度(0、0.75、1.5、2.5、5、10μmol/L)华蟾毒配基作用于肝癌HepG2细胞24 h细胞增殖能力的变化;5μmol/L华蟾毒配基作用HepG2细胞12、24 h后,流式细胞术检测细胞周期,蛋白印迹检测钙/钙调素依赖蛋白激酶2β(CaMK2B)、甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)、磷酸化MeCP2(p-MeCP2)、乙酰化组蛋白H3.1(Ac-Histone3.1)和甲基化组蛋白(Met-Histone3.1)的表达变化;5μmol/L华蟾毒配基作用HepG2细胞24 h后,细胞免疫荧光结合扫描共聚焦检测CaMK2B和MeCP2相互作用。结果华蟾毒配基能显著抑制肝癌HepG2细胞生长,抑制效果呈现浓度依赖性,差异有统计学意义(P〈0.05),药物作用细胞后,细胞周期发生G_2/M期阻滞,差异有统计学意义(P〈0.05)。5μmol/L华蟾毒配基可促进CaMK2B和MeCP2在细胞核内结合,Western blot结果显示华蟾毒配基作用HepG2细胞后上调CaMK2B和p-MeCP2表达(P〈0.05),抑制Ac-Histone3.1表达,促进Met-Histone3.1(P〈0.05)。结论华蟾毒配基通过激活CaMK2B-MeCP2信号通路抑制组蛋白乙酰化、促进甲基化继而诱导肝癌细胞死亡。 展开更多
关键词 华蟾毒配基 肝细胞癌 钙调蛋白激酶 表观遗传
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