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半滑舌鳎gata5基因的克隆及表达分析 预览
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作者 董忠典 张宁 +2 位作者 崔忠凯 徐文腾 陈松林 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第3期6-14,共9页
【目的】研究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)gata5基因(csgata5)的序列特征及该基因在半滑舌鳎性腺分化、成熟过程中的表达模式。【方法】通过克隆获得csgata5编码区序列,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测csgata5 mRNA在不同类型性... 【目的】研究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)gata5基因(csgata5)的序列特征及该基因在半滑舌鳎性腺分化、成熟过程中的表达模式。【方法】通过克隆获得csgata5编码区序列,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测csgata5 mRNA在不同类型性腺、胚胎和性腺发育中的表达模式,借助原位杂交技术定位csgata5 mRNA表达的细胞类型。【结果】克隆获得csgata5 cDNA序列1 777 bp,包含1 167 bp的编码区(Coding sequence,CDS),262 bp的5′UTR和348 bp的3′UTR区,预测csgata5编码388个氨基酸残基(aa),分子质量为41.9 ku,等电点为8.90,在C端含有两个典型的GATA锌指结构域;基因组分析显示csgata5位于半滑舌鳎10号染色体上,包含7个外显子和6个内含子区。RT-qPCR分析显示csgata5 mRNA在2龄雄鱼和伪雄鱼精巢中表达高于卵巢;csgata5m RNA主要定位在卵母细胞、精原细胞和精子中。胚胎发育过程中,csgata5m RNA表达在1细胞期至囊胚期呈下降趋势,之后上升,至原肠胚期达到峰值,随后降低并维持较低水平至孵化出膜。在精巢发育过程中,csgata5m RNA表达水平呈升高趋势,在1龄达到检测的峰值;在卵巢发育过程中,csgata5m RNA表达趋势类似精巢,表达水平低于同期精巢。【结论】csgata5参与半滑舌鳎原肠胚期的组织器官分化,具有促进原始生殖细胞向雄性生殖细胞分化及雄性生殖细胞发育的作用。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 gata5 RT-QPCR 原位杂交 性腺分化
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半滑舌鳎创伤弧菌分离鉴定及其荧光定量PCR方法的建立 预览
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作者 胡秀彩 王英杰 +5 位作者 吕爱军 孙敬锋 王庆奎 廉正义 刘小雪 宋亚娇 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1359-1368,共10页
为确定患病半滑舌鳎的病原,从其体内分离到3株革兰氏阴性菌,将其分别命名为ST-1、ST-3和ST-6,进行细菌理化特性、药敏试验、16S rDNA测序以及组织病理学观察等方面的研究,并建立了外膜蛋白(OMP)基因的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法... 为确定患病半滑舌鳎的病原,从其体内分离到3株革兰氏阴性菌,将其分别命名为ST-1、ST-3和ST-6,进行细菌理化特性、药敏试验、16S rDNA测序以及组织病理学观察等方面的研究,并建立了外膜蛋白(OMP)基因的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。结果显示,3株分离菌株的理化特性符合创伤弧菌特征,16S rDNA与创伤弧菌标准菌株ATCC29307序列相似性达99%以上,系统发育树分析显示,3株分离株与创伤弧菌自然聚为一支,最终鉴定为创伤弧菌;药敏试验显示,3株菌对头孢克肟、头孢哌酮、链霉素、亚胺培南和氟苯尼考等药物高度敏感。人工回归感染试验表明,分离株具有致病性,且半滑舌鳎、斑马鱼的临床症状与自然患病鱼症状相似;组织病理学观察显示,鳃丝上皮细胞增生,鳃小片肿胀黏连、颗粒细胞和黏液细胞增多,肝脏中央静脉淤血,肾脏出血、坏死,肠道黏膜固有层萎缩、黏液细胞增多等。进一步建立OMP基因的荧光定量PCR方法,结果显示,标准曲线的相关系数为0.995,检测下限为1.88×102 CFU/mL。以上结果可为半滑舌鳎弧菌病的致病机理、分子诊断和防治提供科学参考。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 创伤弧菌 组织病理 荧光定量PCR
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不同规格半滑舌鳎的生长比较 预览
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作者 李石磊 李云峰 +5 位作者 宋广军 高杉 李大成 滕炜鸣 刘项峰 木云雷 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期226-230,共5页
将330日龄的大规格[平均体长(24.4±2.1) cm、平均体质量(93±5.3) g]、小规格[平均体长(18.2±1.1) cm、平均体质量(34±2.5) g]半滑舌鳎分别饲养在2个4 m^3 水槽中;550日龄后,置于4个4 m^3 水槽内培育,密度为15~30 尾... 将330日龄的大规格[平均体长(24.4±2.1) cm、平均体质量(93±5.3) g]、小规格[平均体长(18.2±1.1) cm、平均体质量(34±2.5) g]半滑舌鳎分别饲养在2个4 m^3 水槽中;550日龄后,置于4个4 m^3 水槽内培育,密度为15~30 尾/m^2;900日龄后置于4个30 m^3 水泥池内培育,密度为3~8 尾/m^2 。每2~3个月测量1次体长和体质量,研究不同规格半滑舌鳎在工厂化养殖条件下的生长。3年的养殖试验表明,随着养殖时间的延长,两个群体的生长差异变大,大、小规格群体的平均体长比值由1.3增至1.6,平均体质量比值由2.7增至5.3,大规格群体(全长51.3~66.4 cm)中95%以上为雌性;半滑舌鳎的快速生长期为698~1081日龄阶段,适宜生长水温为14.6~26.9 ℃。本试验结果将为半滑舌鳎的工厂化养殖提供参考。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 工厂化养殖 生长 水温
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半滑舌鳎多聚免疫球蛋白受体(pIgR)基因的克隆和表达分析 预览
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作者 王双艳 王磊 +3 位作者 陈张帆 崔忠凯 周茜 陈松林 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2019年第2期51-57,共7页
本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339... 本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290 bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain,ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 多聚免疫球蛋白受体基因 病原感染 免疫应答
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一株溶藻弧菌H1B6的分离与鉴定 预览
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作者 李卓昱 鲍玉杰 +1 位作者 尚玉曼 袁增智 《安徽农业科学》 CAS 2019年第5期100-103,146共5页
从患病的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)溃疡体表处筛选到一株H1B6优势菌株,根据形态观察、16S rDNA检测、生理生化鉴定结果,H1B6菌株与溶藻弧菌最为接近,而在以16S rDNA序列构建的系统发育进化树模型中,H1B6菌株也与溶藻弧菌菌株聚... 从患病的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)溃疡体表处筛选到一株H1B6优势菌株,根据形态观察、16S rDNA检测、生理生化鉴定结果,H1B6菌株与溶藻弧菌最为接近,而在以16S rDNA序列构建的系统发育进化树模型中,H1B6菌株也与溶藻弧菌菌株聚为一支。Biolog微生物鉴定结果显示,H1B6菌株为溶藻弧菌的可能性为98.6%,确定H1B6菌株为溶藻弧菌。斑马鱼攻毒试验结果显示,H1B6菌株24 h的半数致死浓度(LD50 )为4.58×10^6 CFU/mL。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 溶藻弧菌 16S RDNA LD 50 BIOLOG
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半滑舌鳎源创伤弧菌分离鉴定与药敏试验
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作者 王洪彬 朱利霞 +5 位作者 吴同垒 任海 高桂生 张志强 史秋梅 靳晓敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期912-918,共7页
为查明引起河北省昌黎县某海水养殖场半滑舌鳎患病及死亡的病原菌,本研究从半滑舌鳎肝、脾、腮、肠道分离纯化得到1株优势菌株,对其进行了理化鉴定和16S rDNA序列分析、致病性试验、毒力基因检测和中西药的药敏试验。结果显示,分离菌为... 为查明引起河北省昌黎县某海水养殖场半滑舌鳎患病及死亡的病原菌,本研究从半滑舌鳎肝、脾、腮、肠道分离纯化得到1株优势菌株,对其进行了理化鉴定和16S rDNA序列分析、致病性试验、毒力基因检测和中西药的药敏试验。结果显示,分离菌为创伤弧菌(V.vulnificus),序列比对显示与创伤弧菌同源性为100%,菌株命名为V.vulnificus QHD-1。动物回归试验证明该菌是半滑舌鳎的病原菌。小鼠半数致死量(LD50)为2.4×106 CFU/mL,携带毒力基因溶细胞素(vvhA)、细胞毒素(rtxA)、铁载体(viuB)、荚膜多糖(wza)等。西药药敏试验结果显示,分离菌株V.vulnificus QHD-1对氟苯尼考等7种药物敏感,对氧氟沙星等5种药物中敏;对头孢拉定、土霉素等6种药物耐药;中药药敏试验结果表明,苏木、诃子、乌梅、五倍子抑抑菌效果较好;最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均为1.9~7.8 g/L;中药联合抑菌试验结果表明,黄芩和黄柏组合、五倍子和黄芩组合、乌梅和五倍子组合、艾叶和荆芥组合、板蓝根和黄芩组合对创伤弧菌表现协同作用。研究结果证明V.vulnificus QHD-1对鱼和小鼠具有较强的致病性,具有一定的公共卫生危害性;同时药敏试验结果为该地区鱼病的防治提供了依据。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 创伤弧菌 分离鉴定 药敏试验
水生动物源嗜芳香环弧菌的鉴定及耐药性分析 预览
7
作者 赵姝 姜兰 +2 位作者 周俊芳 王元 房文红 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1369-1377,共9页
本研究从患病的半滑舌鳎分离得到5株弧菌,对其进行种属鉴定,并研究其耐药性及分子水平耐药机制。采用生化检测方法和分子生物学方法(基因16S rRNA、HSP60和mreB)进行鉴定,结果显示,5株弧菌均为嗜芳香环弧菌。通过肉汤稀释法检测菌株对... 本研究从患病的半滑舌鳎分离得到5株弧菌,对其进行种属鉴定,并研究其耐药性及分子水平耐药机制。采用生化检测方法和分子生物学方法(基因16S rRNA、HSP60和mreB)进行鉴定,结果显示,5株弧菌均为嗜芳香环弧菌。通过肉汤稀释法检测菌株对抗菌药物的耐药性,通过PCR扩增和测序技术检测菌株中耐药基因和4类整合子并对其携带基因盒进行分析。结果显示,5株嗜芳香环弧菌均对环丙沙星、链霉素、红霉素、氟苯尼考、氨苄西林、磺胺甲恶唑、复方新诺明和利福平耐药,且均携带qnr VC、blaCARB-17、strA、strB和sul耐药基因。此外,菌株JS291和JS295携带Ⅰ类整合子、qacEΔ1和sul1耐药基因;可变区携带基因盒分别为dfr16-aadA2和arr-3-dfrA27。5株嗜芳香环弧菌为多重耐药菌株,且多重耐药表型与耐药基因密切相关。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 嗜芳香环弧菌 耐药性 整合子
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生长轴对半滑舌鳎早期生长发育的调控作用 预览
8
作者 张雅星 王滨 +4 位作者 柳学周 徐永江 史宝 姜燕 崔爱君 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期287-295,共9页
为深入了解生长轴(GH/IGF axis)对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长发育的调控作用,采用定量PCR方法研究了GH/IGF轴5个关键生长因子(GH、GHR1、GHR2、IGF-I、IGF-II)在配子、胚胎发育和仔稚幼鱼生长过程中的差异表达调控特性。结... 为深入了解生长轴(GH/IGF axis)对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长发育的调控作用,采用定量PCR方法研究了GH/IGF轴5个关键生长因子(GH、GHR1、GHR2、IGF-I、IGF-II)在配子、胚胎发育和仔稚幼鱼生长过程中的差异表达调控特性。结果显示,这5个生长因子都具有亲本遗传的特性,除GH外,精子中其他4个生长因子转录表达水平均显著高于卵子。在胚胎发育阶段, GH mRNA在胚胎发育各时期均有表达,且在细胞分裂初期和孵化期表达水平较高。GHR1和GHR2mRNA在胚胎发育各时期呈现相似的表达水平变化趋势,除囊胚期和原肠胚期外, GHR1 mRNA的表达量均高于GHR2。IGF-I和IGF-II mRNA在胚胎发育各时期均表达, IGF-I在孵化期表达水平最高, IGF-II在胚体下包2/3期和孵化期表达水平最高。除64细胞期和128细胞期外, IGF-II mRNA的表达量均显著高于IGF-I (P<0.05)。在仔稚幼鱼生长阶段, GH mRNA表达水平从孵化后3 d开始显著升高,到6 d时达峰值。GHR1 mRNA表达水平自6 d开始显著升高(P<0.05),到30 d达峰值。GHR2 mRNA在3 d、20 d、25 d、30 d和60 d均处于显著高表达水平(P<0.05)。IGF-I mRNA在3 d表达水平最高, IGF-II mRNA从6 d开始显著上调表达,并保持较高表达水平至45 d, IGF-II mRNA表达量均显著高于IGF-I (P<0.05)。偏相关分析发现:这5个生长因子通过正向协同或负向拮抗作用在半滑舌鳎胚胎发育和仔稚幼鱼生长过程中共同起调控作用。研究结果为深入了解GH/IGF轴对鱼类生长调控机制积累了新的素材。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 GH/IGF轴 胚胎发育 仔稚幼鱼发育
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半滑舌鳎有效群体大小估计 预览
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作者 王伟峰 崔瑜 +3 位作者 蒋丽 王悦玲 王焕岭 李恒德 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期997-1004,共8页
为了解半滑舌鳎当前的群体遗传结构,探究半滑舌鳎有效群体大小(Ne)发展趋势及现状,实验通过性别特异性分子标记随机鉴定了800尾半滑舌鳎的遗传性别,选取297个遗传雌性半滑舌鳎样本进行简化基因组测序(2b-RAD),获得了64 416个可用SNP标记... 为了解半滑舌鳎当前的群体遗传结构,探究半滑舌鳎有效群体大小(Ne)发展趋势及现状,实验通过性别特异性分子标记随机鉴定了800尾半滑舌鳎的遗传性别,选取297个遗传雌性半滑舌鳎样本进行简化基因组测序(2b-RAD),获得了64 416个可用SNP标记,利用这些标记进行全基因组范围的连锁不平衡分析得到各染色体上连锁不平衡分布;根据标记间不同物理间距进行半滑舌鳎有效群体大小的估计,初步了解各历史世代下有效群体规模;通过选择0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 Mb等7个不同染色体片段大小反映出半滑舌鳎群体遗传结构经过自然与人工共同选择的历史发展趋势。结果显示,半滑舌鳎有效群体大小随其连锁不平衡程度衰减而呈连续下降趋势,至2世代前其有效群体大小仅为29尾左右。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 简化基因组测序(2b-RAD) 连锁不平衡 有效群体大小
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半滑舌鳎黏蛋白MUC5AC基因的克隆与结构预测 预览
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作者 谭静 胡秀彩 +3 位作者 吕爱军 孙敬锋 刘小雪 廉正义 《天津农学院学报》 CAS 2019年第2期51-56,共6页
黏蛋白作为鱼类黏液的主要成分,在抵御病原感染过程中发挥重要作用。以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)黏蛋白为研究对象,采用RT-PCR方法对其皮肤黏蛋白MUC5AC(即Cs MUC5AC)进行基因克隆及结构预测分析。结果获得CsMUC5AC基因片段的... 黏蛋白作为鱼类黏液的主要成分,在抵御病原感染过程中发挥重要作用。以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)黏蛋白为研究对象,采用RT-PCR方法对其皮肤黏蛋白MUC5AC(即Cs MUC5AC)进行基因克隆及结构预测分析。结果获得CsMUC5AC基因片段的长度为2 771 bp,推测编码917个氨基酸,预测所含5个抗原表位分布在314-321、507-516、578-589、748-762和811-826aa,3个结构域主要为C8(164-238,624-698 aa)、VWD(1-128,430-588 aa)和VWC(303-365,768-836 aa)。二级结构预测C8区主要由α-螺旋构成、VWD区以β折叠为主,三级结构蛋白亚基主要由VWD-C8-VWC组成。构建系统发育树分析显示,其与大菱鲆、攀鲈、罗非鱼黏蛋白MUC5AC亲缘关系较近,与分泌型黏蛋白家族自然聚为一支。以上结果为研究半滑舌鳎黏蛋白MUC5AC基因功能提供科学参考。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 黏蛋白 基因克隆 结构预测
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半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病的遗传力和育种值分析
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作者 卢昇 李泽宇 +7 位作者 李仰真 刘洋 王杉 杨英明 赵玉柱 马腾 魏敏 陈松林 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1770-1777,共8页
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国沿海地区特有的海水经济养殖品种,在高密度工厂化养殖过程中该品种易受哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染患腹水病并大量死亡,严重影响了该品种养殖产业的健康发展,本研究以本实验室2016年建... 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是我国沿海地区特有的海水经济养殖品种,在高密度工厂化养殖过程中该品种易受哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染患腹水病并大量死亡,严重影响了该品种养殖产业的健康发展,本研究以本实验室2016年建立的半滑舌鳎家系为基础,从22个家系中分别选取1 999尾和1715尾295日龄左右的幼鱼进行哈维氏弧菌人工感染实验。实验一共进行288 h,于300 h终止,2次实验感染后存活率范围分别为:0-95.45%和0-87.30%,平均存活率分别为31.17%和26.88%。成对t检验结果表明,2次感染实验中各家系感染后存活率无显著性差异(P=0.21〉0.05)。本研究采用0/1(0表示死亡, 1表示存活)和每尾实验鱼在实验中的存活时间作为半滑舌鳎抗哈维氏弧菌的表型,并利用3种遗传评定模型对该性状进行分析。此外,对各家系育种值(家系中所有个体育种值均值)进行相关性分析和成对t检验以比较3种模型对该性状的估算能力。结果表明,半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传力为0.17±0.05-0.36±0.20,属中低遗传力。相关性分析结果显示,3种模型估算出的各家系育种值之间的Pearson相关系数范围为0.94-0.97,呈高度正相关关系。3组家系育种值有相似的排名,成对t检验结果表明3组排名之间没有显著性差异(P〉0.05)。上述结果表明,半滑舌鳎抗哈维氏弧菌属于中低遗传力性状,存在较为丰富的遗传变异,适合采用家系选育的方式对该性状进行选育。此外,3种模型对半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传参数的估算能力相似。本研究在人工感染实验的基础上,利用3种遗传评定模型分析了半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传参数,得到了该性状的遗传力和各家系育种值,补充了半滑舌鳎抗哈维氏弧菌遗传参数估计相关内容,为选育抗哈维氏弧菌的半滑舌鳎苗种提供了参考。 展开更多
关键词 遗传力 半滑舌鳎 哈维氏弧菌 抗病力
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)2种视黄酸受体RARα和RARγ克隆及组织表达特性 预览
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作者 宋雪松 徐永江 +4 位作者 柳学周 史宝 王滨 刘永山 张雅星 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期52-64,共13页
利用RT-PCR和RACE方法获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)2种视黄酸受体RARα和RARγ的cDNA全长序列,并采用定量PCR技术分析了其组织表达特性。半滑舌鳎RARα cDNA序列全长为1823bp,编码443个氨基酸;RARγ cDNA序列全长为1959bp,编... 利用RT-PCR和RACE方法获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)2种视黄酸受体RARα和RARγ的cDNA全长序列,并采用定量PCR技术分析了其组织表达特性。半滑舌鳎RARα cDNA序列全长为1823bp,编码443个氨基酸;RARγ cDNA序列全长为1959bp,编码489个氨基酸。同源性分析显示,半滑舌鳎RARα和RARγ同源性高达60.8%,与牙鲆(Paralichthys olivaceus)同源性高达97.0%,具有较强的进化保守性。系统进化分析显示,半滑舌鳎RARα和RARγ分别归属于单独的分支,且与其他鱼类聚合成簇。组织表达分析显示,RARα mRNA在肾中表达量最高,而RARγ mRNA在脾中表达量最高,RARα和RARγ mRNA在其他组织中均有表达,表明半滑舌鳎2种RAR都可能参与多种生理过程调控。半滑舌鳎2种RAR mRNA在有眼侧皮肤、无眼侧黑化皮肤和无眼侧正常皮肤中的表达量依次升高,且发现RARα在正常有眼侧皮肤的表达高于RARγ,而RARγ在无眼侧正常皮肤中的表达显著高于RARα,无眼侧黑化皮肤中RARα表达高于RARγ。RAR基因在有眼侧和无眼侧皮肤组织中的差异表达可能和RA/RAR系统调节体色有关。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 视黄酸受体 基因克隆 表达模式 无眼侧黑化
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半滑舌鳎繁育群体的遗传组成及家系配组策略 预览
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作者 李超 鲁翠云 +5 位作者 曹顶臣 郑先虎 程磊 李庆华 薛志勇 孙效文 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期1-6,共6页
用只读式电子芯片标识了291尾性腺发育较好的3龄半滑舌鳎Cyuoglossus semilaevis繁育群体,其中雌性98尾,体质量(2060±350)g;雄性193尾,体质量(500±140)g。利用20个微卫星标记分析繁育群体的遗传组成。结果表明,雌性... 用只读式电子芯片标识了291尾性腺发育较好的3龄半滑舌鳎Cyuoglossus semilaevis繁育群体,其中雌性98尾,体质量(2060±350)g;雄性193尾,体质量(500±140)g。利用20个微卫星标记分析繁育群体的遗传组成。结果表明,雌性群体(H0=0.606)的观测杂合度显著高于雄性群体(Ho=0.548)(P〈0.05),有效等位基因数(Nc)、期望杂合度(Hc)和多态信息含量(PIC)差异不显著(P〉0.05),群体平均多态信息含量分别为0.654和0.616,雌、雄群体均处于高度多态水平(P〉0.5),表明半滑舌鳎群体遗传多样性较好,具备进一步繁殖、筛选优良品系的遗传潜力。用“基于亲本遗传背景的分子育种软件1.0”计算半滑舌鳎雌、雄个体间遗传距离在0.254~1.959之间,不同遗传距离范围的频率呈正态分布,其中个体间遗传距离在0.7-1.0之间的占51.82%,考虑到生产操作的便捷,设定亲本间最佳遗传距离阈值为0.7~1.0之内。根据统计结果,建立半滑舌鳎家系配组的策略为选择位于不同聚类分支、遗传距离在0.7—1.0之间、表型性状在均值以上的一对或多对亲本生产单家系或混合家系。根据此策略获得混合家系选育组,并以常规生产的苗种作为对照,经10个月养殖,选育组的平均体质量、体长与对照组差异显著,其中平均体质量高于对照组24.56%,平均体长高于对照组6.98%。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 繁殖群体 遗传组成 家系配组 分子育种
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Molecular Characterization and Expression and DNA Methylation Analyses of a Galectin-Related Protein Gene from Cynoglossus semilaevis 预览
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作者 XIU Yunji GAN Tian +2 位作者 XU Wenteng SHAO Changwei CHEN Songlin 《中国海洋大学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期1189-1196,共8页
关键词 编码基因 cDNA 蛋白质 分子 动物基因 免疫力 约束力 GRP
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半滑舌鳎外周血T淋巴细胞的分离、鉴定及TCRβ基因免疫应答分析 预览 被引量:1
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作者 汪林庆 王航 +4 位作者 陈亚东 杨光 白莉 孙璐明 沙珍霞 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期542-549,共8页
为开展半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)免疫学研究提供细胞平台,利用密度梯度离心法分离半滑舌鳎外周血淋巴细胞,采用短期细胞培养法分离悬浮淋巴细胞,悬浮淋巴细胞在含有0.3μg/m L的PHA的DMEM完全培养基,于24℃条件下可连续培养3... 为开展半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)免疫学研究提供细胞平台,利用密度梯度离心法分离半滑舌鳎外周血淋巴细胞,采用短期细胞培养法分离悬浮淋巴细胞,悬浮淋巴细胞在含有0.3μg/m L的PHA的DMEM完全培养基,于24℃条件下可连续培养3—4d左右,采用自制的尼龙毛柱可将悬浮淋巴细胞中的非黏附淋巴细胞和黏附淋巴细胞成功分离;利用流式细胞仪结合特异抗体检测对非黏附淋巴细胞和黏附淋巴细胞进行鉴定,结果表明,非黏附细胞与鼠抗人FTIC-CD3单克隆抗体特异结合,为T样淋巴细胞;黏附细胞和鼠抗人FTICCD19单抗特异结合,为B样淋巴细胞。T细胞表面抗原受体TCRβ基因可特异性的在非黏膜细胞中表达,而在黏附细胞中不表达,证明分离获得的非黏膜细胞为T淋巴细胞,采用q RT-PCR(Quantitative Real-Time PCR)方法检测TCRβ基因表达,结果表明,TCRβ基因在半滑舌鳎肝、脾、头肾、后肾、小肠、胃、血液、鳃、皮肤、肌肉、心脏、脑、卵巢组织中均有表达,其中在肠、胃、脾、头肾中表达量较高;鳗弧菌感染后TCRβ基因在肝、脾、鳃中呈现明显的上调表达,且表达峰值出现在感染后72—96h,表明TCRβ基因在获得性免疫应答中起重要作用。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 T淋巴细胞 B淋巴细胞 外周血 TCRβ基因 免疫应答
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Effects of Starving and Re-feeding Strategies on the Growth Performance and Physiological Characteristics of the Juvenile Tongue Sole(Cynoglossus semilaevis) 预览
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作者 FANG Ziheng TIAN Xiangli DONG Shuanglin 《中国海洋大学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第3期517-524,共8页
饥饿并且重新喂的试用被进行评估饥饿持续时间和恢复的效果乘在生长上性能和生理的特征少年舌头唯一的 Cynoglossus semilaevis,包括的生长,身体作文,肠的形态学和消化的酶活动。鱼饥饿因为一( D1 ),二( D2 )并且四( D4 )分别地,... 饥饿并且重新喂的试用被进行评估饥饿持续时间和恢复的效果乘在生长上性能和生理的特征少年舌头唯一的 Cynoglossus semilaevis,包括的生长,身体作文,肠的形态学和消化的酶活动。鱼饥饿因为一( D1 ),二( D2 )并且四( D4 )分别地,天被恢复为三( R3 , R6 , R12 ),七( R7 , R14 , R28 )并且十一( R11 , R22 , R44 )当控制鱼常常被喂时,饥饿天合拢。实验被进行 96 天。在 D1R11, D2R14 和 D2R22 的鱼个人追上来在里面有控制的重量,显示那完全的补偿生长在这些鱼个人存在。最高,身体重量获得和全部的特定的生长率在 D2R22 被观察。食物吸入除了 D1R7 和 D2R22 与控制的比较在大多数处理显著地增加了(P < 0.05 ) 。在 D2R22 的食物变换效率和明显的文摘系数显著地被支持,比控制的高(P < 0.05 ) 。胰岛素和脂肪分解酵素的活动被发现是仔细与生长表演有关。肝和 hindgut 胰岛素的活动,另外在 D2R22 的 midgut 和 hindgut 脂肪分解酵素比控制的那些显著地高(P < 0.05 ) 。在 D2R22 显著地增加的前肠和 midgut 的褶层高度(HF ) ,和 HF 在 D1R3, D2R6 和 D4R12 显著地减少了(P < 0.05 ) 。在我们的调查结果上,我们可以断定饥饿的最佳和重新喂的策略正在饥饿 2 天并且为 22 重新喂天。并且在这饥饿并且重新喂的策略,补偿生长能主要被归因于食物的提升变换效率和消化的好坏 coefficiency。 展开更多
关键词 饥饿 重新喂 生长性能 消化的酶 肠的形态学 Cynoglossus semilaevis
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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)真、伪雄鱼群体表型和遗传性状分析 预览
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作者 李洪 田永胜 +3 位作者 李祥孔 陈张帆 宋莉妮 段会敏 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第3期62-69,共8页
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)养殖群体中存在真雄鱼(ZZ)和伪雄鱼(ZW)现象,进行表型和遗传特征研究对其育种及优良苗种培育具有重要的意义。本研究以半滑舌鳎真、伪雄鱼群体及母系半同胞家系为研究对象,首先测定了性成熟半滑... 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)养殖群体中存在真雄鱼(ZZ)和伪雄鱼(ZW)现象,进行表型和遗传特征研究对其育种及优良苗种培育具有重要的意义。本研究以半滑舌鳎真、伪雄鱼群体及母系半同胞家系为研究对象,首先测定了性成熟半滑舌鳎的真、伪雄鱼群体的表型性状,对其性状进行了比较分析。结果显示,性成熟半滑舌鳎真、伪雄鱼的体重、全长、体长、体宽、头长、眼间距和眼径7个表型性状都存在极显著差异(P〈0.01),伪雄鱼的生长速度比真雄鱼快。利用半滑舌鳎22对多态性微卫星标记,对2组半滑舌鳎真、伪雄鱼半同胞家系群体进行了遗传多样性分析。筛选出的22对引物扩增产物均具有多态性,4个半同胞家系群体中共检测到232个等位基因,群体平均等位基因数(N_a)均大于平均有效等位基因数(N_e);平均观测杂合度(H_o)均小于平均期望杂合度(H_e);平均多态信息含量(PIC)分别为0.4566、0.4254、0.5069、0.4795。22个多态性位点在4个半同胞家系群体中分别有3、3、4和5个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡。4个半同胞家系群体间的Nei¢s遗传距离为0.2101–0.5840,遗传相似性系数为0.5577–0.8105。本研究表明,半滑舌鳎真、伪雄鱼在生长性状上存在明显差异,同母系的真、伪雄鱼半同胞家系群体间的遗传相似系数较高,遗传距离较小,遗传多样性指标相近。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 真雄鱼 伪雄鱼 表型性状 微卫星标记 遗传多样性
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半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病相关微卫星标记筛选及QTL定位 预览 被引量:3
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作者 戴欢 刘洋 +6 位作者 王文文 位战飞 高进 高峰涛 李祥孔 刘洋 陈松林 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期22-30,共9页
为了筛选出与抗哈维氏弧菌病相关的微卫星标记并进行QTL定位,以2014年感染实验中存活率为52.22%的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)家系F1412(Family+年份+家系号)为材料,采用混合分离子分析法(bulked segregant analysis,BSA)... 为了筛选出与抗哈维氏弧菌病相关的微卫星标记并进行QTL定位,以2014年感染实验中存活率为52.22%的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)家系F1412(Family+年份+家系号)为材料,采用混合分离子分析法(bulked segregant analysis,BSA)对169个微卫星标记(SSR)进行筛选,得到1个可能与哈维氏弧菌病相关的微卫星标记scaffold479_23523。用scaffold479_23523所在的连锁群LG18上的37个SSR对94尾抗病、感病个体进行基因分型,得到3个图谱:整合图谱(LG18)、雌性图谱(LG18F)和雄性图谱(LG18M),并用两种不同的模式进行单标记分析和QTL定位。模式一得到3个显著性相关标记(P〈0.05)和1个极显著性相关标记(P〈0.01),图谱LG18F定位出一个区间qE-F1;模式二得到4个显著相关标记(P〈0.05)和1个极显著相关标记(P〈0.01),图谱LG18M定位出两个区间qE-M1、qE-M2。在全基因组序列的分布范围上,区间qE-F1包含了qE-M1及qE-M2,因此qE-F1更可能与抗病性状相关。本研究开发出了抗哈维氏弧菌病性状相关微卫星标记及QTL区间,为抗病新品种的培育奠定了基础。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 哈维氏弧菌 微卫星标记SSR 混合分离子分析法BSA 数量性状基因座QTL
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半滑舌鳎弧菌病病原的分离鉴定 预览 被引量:1
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作者 徐晓丽 叶红梅 +3 位作者 侯纯强 蔡琰 钟文慧 李贺密 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第8期86-90,共5页
从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,... 从患病半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)内脏中分离到2株优势菌株,人工感染试验证实菌株150803对半滑舌鳎具有致病性;采用形态学观察、生理生化特性分析、16S r RNA等方法对所分离菌株进行鉴定,结果显示,菌株150803为革兰阴性杆菌,生化特性与溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)较为接近,以hsp60基因为遗传标记构建的系统发育树将菌株150803与溶藻弧菌聚为一支,置信度为99%,采用特异性引物扩增溶藻弧菌dnaJ基因得到预期144 bp的基因片段。综合以上结果判定引起此次半滑舌鳎发病的病原为溶藻弧菌。对22种抗菌药物的敏感性试验表明,菌株150803对恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、菌必治敏感,对氟苯尼考、呋喃唑酮、苯唑青霉素等具有抗性。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 溶藻弧菌 HSP60 DNAJ
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半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)新型膜孕激素受体基因(mPRL)在卵母细胞成熟过程中的表达特征 预览 被引量:1
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作者 史宝 柳学周 +3 位作者 徐涛 李晓妮 徐永江 张金勇 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第1期10-17,共8页
为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)人工育苗技术的水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like,mPRL)基因的表达特征和作用机制进行了研究。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现半滑舌鳎mP... 为进一步提高半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)人工育苗技术的水平,对半滑舌鳎新型膜孕激素受体(mPR-like,mPRL)基因的表达特征和作用机制进行了研究。应用实时定量PCR方法分析mPRL mRNA在卵子形成过程中的时序表达,发现半滑舌鳎mPRL mRNA相对表达量的最高值出现在性成熟阶段卵巢的Ⅴ时相卵母细胞。原位杂交分析m PRL mRNA在繁殖相关组织的细胞学定位,发现mPRL mRNA分布在半滑舌鳎性成熟阶段卵巢的卵母细胞膜上;在脑的神经元和垂体内分散的细胞中,mPRL mRNA阳性信号较强。制备半滑舌鳎mPRL的多克隆抗体,采用Western blotting方法检测半滑舌鳎mPRL蛋白在不同组织的表达特征,发现mPRL蛋白的表达量在卵巢、脑、垂体中相对较高,在肝脏、头肾、肾脏中表达量相对较少。免疫组化结果显示,半滑舌鳎mPRL蛋白在卵巢、脑和垂体的细胞学定位与mPRL mRNA定位一致。应用实时定量PCR和Western blotting方法检测促性腺激素调控下半滑舌鳎不同时相卵母细胞mPRL基因mRNA和蛋白的表达变化,结果显示,促性腺激素对半滑舌鳎卵母细胞中mPRL基因mRNA和蛋白表达都有一定的上调作用,特别是对Ⅴ时相卵母细胞中mPRL mRNA和蛋白的表达量提升明显;发现表达量与促性腺激素调控作用具有剂量依存关系。半滑舌鳎mPRL在繁殖相关组织的表达特征表明其通过脑–垂体–卵巢轴参与繁殖调控,同时也揭示了mPRL介导卵母细胞成熟机制。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 新型膜孕激素受体 卵母细胞成熟 MRNA表达 蛋白表达
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