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牛白血病病毒前病毒DNA荧光PCR检测方法的建立及应用
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作者 王建华 王玉玲 +5 位作者 张俊哲 赵丹 肖妍 王乃福 陈本龙 董志珍 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期598-603,共6页
为快速检测牛外周血淋巴细胞中的牛白血病病毒(bovine leukem ia vir,uBsLV)前病毒DNA,选取BLVenv基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立检测牛白血病前病毒DNA的荧光PCR方法,并对该方法进行敏感性、特异... 为快速检测牛外周血淋巴细胞中的牛白血病病毒(bovine leukem ia vir,uBsLV)前病毒DNA,选取BLVenv基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,通过优化反应条件建立检测牛白血病前病毒DNA的荧光PCR方法,并对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价及实际样本的验证检测。结果显示,该方法具有很高的特异性和重复性,最低检出限为每个反应可检出3个拷贝数的阳性标准质粒对照。在175头BLV抗体阳性牛中,用该方法共检出127头BLV感染牛。在262头BLV抗体阴性牛中,用该方法检出2头BLV感染牛,该方法与套式PCR之间检测结果的符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的方法可用于BLV感染牛的确证。 展开更多
关键词 牛白血病 牛白血病病毒前病毒DNA ENV基因 实时荧光PCR方法
一株猫免疫缺陷病毒的亚型鉴定
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作者 潘美乔 王久成 +1 位作者 徐秋实 王亚君 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第12期198-199,204共3页
为了解哈尔滨地区猫免疫缺陷病毒(FIV)流行的亚型情况,试验于2016年1—4月份在哈尔滨市香坊区采集流浪猫全血40份进行血清学检测和分子生物学检测,通过ELISA抗体检测鉴定出一株FIV,从阳性血液样品中提取基因组DNA,通过巢氏PCR扩增得... 为了解哈尔滨地区猫免疫缺陷病毒(FIV)流行的亚型情况,试验于2016年1—4月份在哈尔滨市香坊区采集流浪猫全血40份进行血清学检测和分子生物学检测,通过ELISA抗体检测鉴定出一株FIV,从阳性血液样品中提取基因组DNA,通过巢氏PCR扩增得到目的片段env V3-V5高变区,并对该样品进行了序列分析及亚型鉴定。结果表明:该阳性样本为FIV A亚型。 展开更多
关键词 FIV ENV基因 巢氏聚合酶链式反应 亚型鉴定 慢病毒
表达禽网状内皮组织增生病病毒env基因的重组马立克病毒的生物学特性 预览
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作者 周忠文 林桂芳 +3 位作者 王好好 苏帅 崔治中 孙淑红 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1482-1491,共10页
旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)env基因的重组马立克病毒(Marek′s disease virus,MDV),并对其生物学特性进行初步研究。以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pc... 旨在构建能够表达禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)env基因的重组马立克病毒(Marek′s disease virus,MDV),并对其生物学特性进行初步研究。以REV SNV株DNA为模板,PCR扩增其env基因,克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+);以其为模板,PCR扩增整个REVenv基因真核表达盒并与卡那霉素抗性基因分别克隆进pUC18载体;以其为模板,利用含有MDV SC9-1株meq基因位点两侧同源臂的引物经PCR扩增REVenv真核表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用Red E/T同源重组技术插入SC9-1的meq位点,最终利用阿拉伯糖诱导表达flp重组酶,敲除卡那霉素抗性基因,阳性重组质粒命名为SC9-env BAC。提取SC9-env BAC质粒转染CEF细胞,拯救重组MDV,利用MDV单抗H19以及REV单抗11B118经间接免疫荧光试验鉴定阳性病毒,命名为SC9-env。分析比较SC9-env在CEF细胞上的复制水平,利用动物试验初步评价SC9-env对SPF鸡的致病性以及SC9-env对SPF鸡感染MDV、REV的免疫保护效果。结果表明,利用同源重组技术构建的重组MDV SC9-env能够稳定表达REV env蛋白,且复制水平与亲本病毒SC9-1相似;该重组毒接种SPF鸡没有明显的致病性,且对rMd5的强毒攻击提供92%的免疫保护,与SC9-1差异不显著;SC9-env显著降低REV感染SPF鸡所引起的体重减轻以及灭活苗抗体下降。构建的表达REVenv的重组MDV对感染MDV、REV的SPF鸡具有良好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 ENV基因 同源重组 马立克病毒 生物学特性
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2017年克拉玛依市HIV感染新发病例亚型分析
4
作者 刘佳 郭秀梅 胡俊 《中国艾滋病性病》 CSCD 北大核心 2018年第10期1051-1052,共2页
艾滋病病毒I型(HIV-1)是目前全球HIV主要流行毒株,M组是其主要亚型组,包括A1、A2、A3、A4、B、C、D、F1、F2、G、H、J和K亚型[1]。随着对M组病毒研究的深入,又发现了不同亚型及同一亚型不同毒株之间的基因重组现象,称之为流行重组形式(C... 艾滋病病毒I型(HIV-1)是目前全球HIV主要流行毒株,M组是其主要亚型组,包括A1、A2、A3、A4、B、C、D、F1、F2、G、H、J和K亚型[1]。随着对M组病毒研究的深入,又发现了不同亚型及同一亚型不同毒株之间的基因重组现象,称之为流行重组形式(Circulating recombinant forms,CRFs),主要流行于我国的HIV-1毒株有B、C、01_AE、07_BC、08_BC[2]。新疆作为我国艾滋病流行和传播较广泛的地区,07_BC为主要流行亚型[3]。为了揭示克拉玛依市HIV流行和变异规律,对2017年克拉玛依市HIV感染新发病例毒株流行分布和进化趋势进行分析。 展开更多
关键词 艾滋病病毒1型 ENV基因 亚型
禽网状内皮组织增生病病毒env蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究 预览
5
作者 杨彦超 王静 +6 位作者 李凯 祁小乐 崔红玉 高玉龙 刘长军 高宏雷 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1147-1151,共5页
为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和BamHⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构... 为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和BamHⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构建重组酵母菌株pAO815-2env/GS115,经发酵培养得到的env蛋白(蛋白含量达到4.8 g/L)经亲和层析纯化后免疫SPF鸡,利用ELISA试剂盒和中和试验检测血清中的REV抗体。结果显示,重组酵母菌株表达的env蛋白,不仅能够诱导SPF鸡产生抗REV抗体,还能诱导其产生中和抗体,且产生的中和抗体效价较高,具有良好的免疫原性。本研究为开展禽网状内皮组织增生病亚单位疫苗的研制提供了实验依据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 ENV基因 毕赤酵母 发酵
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40周龄三黄种鸡爆发禽白血病的诊断与病原分析
6
作者 林璐璐 王培坤 +2 位作者 杨永立 李海娟 韦平 《黑龙江畜牧兽医:下半月》 北大核心 2017年第8期105-109,295,296共7页
为了解鸡群中禽白血病(Avian leukosis,AL)发生的原因以及感染的禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的亚群,研究对发病鸡进行临床诊断、病理剖检和病理组织学观察,并采集肿瘤样病变组织处理后接种DF-1细胞,培养后分别进行禽白... 为了解鸡群中禽白血病(Avian leukosis,AL)发生的原因以及感染的禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的亚群,研究对发病鸡进行临床诊断、病理剖检和病理组织学观察,并采集肿瘤样病变组织处理后接种DF-1细胞,培养后分别进行禽白血病病毒p27群特异性抗原ELISA检测、亚群特异性PCR检测以及亚群特异性间接免疫荧光法(IFA)鉴定,确定了40周龄三黄种鸡群感染了J亚群禽白血病病毒(ALV-J,分离株命名为GX16YL02);进一步对分离株env基因进行PCR扩增、克隆和序列测定与比较分析。结果表明:分离株GX16YL02的env基因与ALV-J英国原型株HPRS-103的核苷酸及氨基酸的相似性分别为93.9%和91.9%,与其他8株国内外参考株的核苷酸及氨基酸的相似性分别为90.7%~95.5%和89.4%~95.2%,其中gp85基因与其他参考株的核苷酸和氨基酸相似性相对较低,分别为86.9%~94.9%和85.1%~95.4%,整个env基因有义突变和沉默突变的比例分析显示,与gp37基因相比,gp85基因变异较大,尤其是免疫选择压在高变区hr1区域有一定的作用。 展开更多
关键词 40周龄三黄鸡 J亚群禽白血病病毒 ENV基因 序列分析 变异
A亚群禽白血病病毒env基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 预览
7
作者 梅梅 胡晓田 +4 位作者 秦爱建 陆吉虎 张雪花 侯继波 唐应华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1316-1320,共5页
为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体pFastBac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒rBacmid-envA,rBacmid-envA转染昆虫细胞Sf9... 为获得A亚群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表达产物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA为模板,通过反转录PCR扩增得到env基因,将其克隆到转移载体pFastBac1中,转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒rBacmid-envA,rBacmid-envA转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒。间接免疫荧光试验(IFA)和免疫印迹试验(Western-blot)结果显示,重组蛋白可与抗ALV-A抗体发生特异性反应,重组蛋白分子大小约为90 000,与预期大小相符,表明env基因在Sf9细胞中获得了良好表达。 展开更多
关键词 A亚群禽白血病病毒 ENV基因 表达
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珠海市无偿献血人群HIV-1 env基因序列分析 预览
8
作者 巫贡晓 曹敏华 +1 位作者 黄琴 曲宏晶 《检验医学与临床》 CAS 2017年第A02期14-17,共4页
目的 了解珠海市无偿献血人群中人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)基因亚型的流行情况和传播规律,为珠海市艾滋病防治工作和保证安全输血提供科学依据.方法 从9例经珠海市疾病预防控中心艾滋病确证实验室用蛋白印迹法确证为HIV-1抗体阳性... 目的 了解珠海市无偿献血人群中人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)基因亚型的流行情况和传播规律,为珠海市艾滋病防治工作和保证安全输血提供科学依据.方法 从9例经珠海市疾病预防控中心艾滋病确证实验室用蛋白印迹法确证为HIV-1抗体阳性的无偿献血者的血浆中提取RNA,逆转录后采用RT-PCR方法进行env基因扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定,经比对分析确定病毒基因亚型.结果 9例标本中有3种 HIV-1基因亚型,其中CRF01-AE重组亚型6例(66.67% ),与国际标准株01AE.CN.1997.AY008714最接近,平均基因距离为0.141 ± 0.009;CRF07-BC重组亚型2例(22.22% ),与国际标准株07BC.CN.2003.HQ669903最接近,平均基因距离为(0.063 ± 0.008);B 亚型1例(11.11% ),与国际标准株 B.CN.-. EU184946最接近,平均基因距离为0.069.结论 珠海市无偿献血人群中 HIV-1基因亚型至少有三种,以CRF01-AE重组亚型和CRF07-BC重组亚型为主,B亚型仅见单个病例. 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒-1 亚型 ENV基因 序列分析 无偿献血者
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咖啡因和解热镇痛抗炎类药物阿司匹林对HERV-Wenv基因表达的影响 预览
9
作者 方阅 朱蓓琳 张天振 《临床和实验医学杂志》 2017年第23期2318-2323,共6页
目的探讨精神活性类药物咖啡因和解热镇痛抗炎类药物阿司匹林对人内源性逆转录病毒W(HERV-W)env基因表达的影响。方法MTT法检测不同浓度的药物作用人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y后,产生的毒性作用和对其增殖能力的影响。应用半定量RT-PC... 目的探讨精神活性类药物咖啡因和解热镇痛抗炎类药物阿司匹林对人内源性逆转录病毒W(HERV-W)env基因表达的影响。方法MTT法检测不同浓度的药物作用人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y后,产生的毒性作用和对其增殖能力的影响。应用半定量RT-PCR检测不同浓度的药物作用SH-SY5Y后,对HERV-Wenv基因表达的影响。应用荧光定量PCR进一步检测不同浓度的药物作用SH-SY5Y后,对HERV-Wenv基因表达的影响。不同浓度的药物作用SH-SY5Y后,扩增并克隆HERV-Wenv基因,并进行测序和序列分析。将pGL3-envpromoter重组质粒转染SH-SY5Y后,通过检测萤光素酶活性的变化,分析咖啡因和阿司匹林对env基因启动子活性的影响。结果咖啡因和阿司匹林对SH-SY5Y细胞系都有明显的增殖抑制作用以及毒性作用,并且这种增殖抑制作用和毒性作用呈时间和剂量依赖性。咖啡因和阿司匹林对env基因的表达都有上调作用,并且这种上调作用呈剂量依赖性。与未加药组相比,用低浓度的咖啡因(0.05mM/L)和高浓度的咖啡因(5mM/L)作用SH-SY5Y后,扩增获得的env基因序列中都检测到了有突变的序列;同样,用低浓度的阿司匹林(0.5mM/L)和高浓度的阿司匹林(5mM/L)作用SH-SY5Y后,扩增获得的env基因序列中也检测到了有突变的序列。咖啡因能增强env基因启动子的活性,而阿司匹林对env基因启动子的活性没有显著的影响。结论环境因素能调节HERV-W家族env基因的表达,env基因的表达调控机制是一个非常复杂的体系。 展开更多
关键词 人内源性逆转录病毒 ENV基因 咖啡因 阿司匹林 SH-SY5Y 人神经母细胞瘤细胞系
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广西凭祥斗鸡禽白血病病毒检测及分离株env基因分析 预览
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作者 何成伟 王培坤 +5 位作者 秦丽莉 毕玉彧 邹广珍 杨永立 彭昊 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期23-26,共4页
为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.1... 为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.13%,血清样品病毒分离阳性率为12.97%,ALV-J和ALV-A/B抗体阳性率分别为22.39%和7.46%;对从2只斗鸡获得的病毒分离株DJ-3-18和DJ-45进行病毒囊膜蛋白基因env的扩增、序列测定及比较分析,结果显示2株病毒的gp85基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为88.2%~96.5%,gp37基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为91.4%~98.0%,其中与台湾A亚群蛋鸡源分离株TW-3577的亲缘关系最近,而与ALV其他亚群毒株的同源性则较低。结果表明,首次获得的2株斗鸡源ALV分离株属A亚群。 展开更多
关键词 斗鸡 禽白血病 流行病学调查 ENV基因 ALV-A亚群
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J亚群禽白血病病毒env基因主要功能区和EGFP基因在SSff9细胞中的融合表达 被引量:2
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作者 李拓凡 多婷 +2 位作者 梁雄燕 顾玉芳 杨玉莹 《中国家禽》 北大核心 2015年第11期23-26,共4页
为获得具备良好抗原性和生物活性的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)env基因主要功能区的表达产物,采用特异性引物分别从保存的p MD18T-envHB2010质粒、PIRES2-EGFP中扩增ALV-J env基因主要功能区和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,酶切、连... 为获得具备良好抗原性和生物活性的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)env基因主要功能区的表达产物,采用特异性引物分别从保存的p MD18T-envHB2010质粒、PIRES2-EGFP中扩增ALV-J env基因主要功能区和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,酶切、连接后插入p Fast Bac Daul载体,构建杆状病毒转移载体p Fast Bac Daul-env-EGFP,将其转化DH10Bac感受态细胞制备重组杆粒Bacmid-env-EGFP,转染Sf9细胞进行真核表达。结果显示,转染了重组杆粒的Sf9细胞在倒置荧光显微镜下呈现亮绿荧光;以ALV-J单克隆抗体JE9进行Western blot检测,转染重组杆粒的Sf9细胞检测出约85 ku的条带。结果表明,目的基因在Sf9细胞中得到了良好的表达,为进一步研究ALV-J提供基础试验材料。 展开更多
关键词 ALV-J ENV基因 EGFP 融合表达
基于慢病毒载体系统构建重组JSRV-NM假病毒 预览 被引量:1
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作者 龚淑敏 李光明 +4 位作者 吴志敏 董莉真 程彬 张斌 朱泽 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第8期749-751,共3页
目的:采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-N... 目的:采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-NM替代VSV-G病毒的包膜质粒pMD.G,转染293T细胞,复制、包装并产出重组的JSRV-NM假病毒。用real-time PCR检测WPRE表达来测定假病毒的滴度,用接种24孔板的293T细胞检测假病毒感染力。结果成功重组了基于慢病毒质粒结构的JSRV-NM假病毒,可超速离心浓缩成高滴度(1×108 TU/mL)的病毒,Lv-JSRV-NM包膜与Lv-VSV-G包膜按感染复数(MOI)=3的比例感染Hela细胞具有相同的感染能力。结论基于慢病毒质粒构建的JSRV-NM假病毒,能够在293T细胞中复制和扩增,产出的假病毒具有稳定性、感染力和安全性,符合二级生物实验室安全的要求。 展开更多
关键词 JSRV-NM病毒 假病毒 慢病毒载体 ENV基因 病毒包装
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龙胜凤鸡禽白血病病毒的分离与鉴定 预览 被引量:1
13
作者 冷毕丹 唐名艳 《畜牧与饲料科学》 2014年第10期86-89,共4页
在前期流行病学调查的基础上,无菌采集ELISA检测中p27抗原阳性鸡的抗凝血,分离血浆,接种DF-1细胞,盲传两代后,检测细胞培养上清液中的p27抗原。对阳性样本进行病毒的分离,并对毒株进行初步亚群鉴别,然后采用PCR法扩增其env基因... 在前期流行病学调查的基础上,无菌采集ELISA检测中p27抗原阳性鸡的抗凝血,分离血浆,接种DF-1细胞,盲传两代后,检测细胞培养上清液中的p27抗原。对阳性样本进行病毒的分离,并对毒株进行初步亚群鉴别,然后采用PCR法扩增其env基因并测序,对分离到的毒株进行同源性分析并绘制系统进化树。结果显示,凤鸡分离株GX-F3与2株ALV-B参考株的gp85基因编码的氨基酸序列同源性最高,分别为92.2%和92.8%,且它们处在系统进化树的同一分支上,因此,该研究分离到的GX-F3属于ALV-B亚群。 展开更多
关键词 龙胜凤鸡 分离 ENV基因 氨基酸 同源性分析
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哈尔滨市男男同性恋HIV-1感染者env基因V3环序列分析 预览 被引量:4
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作者 刘婷 邵冰 +6 位作者 李文静 崔文秀 李航 杜鑫 王永革 王滨有 王福祥 《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》 CAS 2013年第4期80-82,共3页
目的:了解哈尔滨市感染HIV的男男同性恋者(MSM)HIV-1亚型分布状况,以及env基因V3环序列变异情况。方法采用巢氏PCR扩增HIV-1 env基因V3~V4区并对扩增产物进行测序,利用MEGA、BioEdit软件进行基因序列整理和分析。结果哈尔滨市28例... 目的:了解哈尔滨市感染HIV的男男同性恋者(MSM)HIV-1亚型分布状况,以及env基因V3环序列变异情况。方法采用巢氏PCR扩增HIV-1 env基因V3~V4区并对扩增产物进行测序,利用MEGA、BioEdit软件进行基因序列整理和分析。结果哈尔滨市28例MSM人群HIV-1感染者基因型分布为CRF01-AE 18例(64.29%),CRF07-BC 3例(10.71%),B亚型5例(17.86%)和B’(Thailand B)2例(7.14%),V3环顶端4肽以GPGQ为主14例(50.00%),GPGR 5例(17.86%),GWGR 3例(10.71%)。27例被预测为使用CCR5作为辅助受体,1例不可预测使用何种受体,没有被预测为使用CXCR4作为辅助受体的感染者。结论哈尔滨市MSM感染HIV-1以CRF01-AE为主,V3环顶端的4肽呈现多态性但以GPGQ为主。HIV-1主要为以CCR5作为辅助受体的巨细胞嗜性毒株。 展开更多
关键词 男男同性恋 ENV基因 V3环
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env基因对J亚群禽白血病病毒体外感染和复制能力的影响 预览
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作者 吴晓婵 李娇 +1 位作者 曹伟胜 廖明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期143-146,共4页
为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成... 为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功构建了重组质粒pNX-HNenv。重组毒株能在DF-1细胞上稳定增殖,并能被JE9特异性单抗识别,证明获得了具有感染性的重组病毒NX-HNenv株。结果显示,同一亚群内env基因的替换对病毒的体外感染和复制能力无明显影响。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 ENV基因 反向遗传技术 复制能力
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绵羊肺腺瘤内、外源性env基因比较分析 预览 被引量:1
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作者 孔汉金 张克山 +3 位作者 刘永杰 尚佑军 吴斌 刘湘涛 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期18-26,共9页
绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着J... 绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着JSRV的内源性基因片段。为比较分析JSRV内、外源性env的特征,本文扩增并测定了正常绵羊肺组织的内源性env基因(Enenv),运用生物信息学技术,比较分析了其与外源性绵羊肺腺瘤病毒JSRV21(AF105220)env基因(Exenv)的遗传进化关系,二、三级蛋白结构和抗原表位。结果表明Enenv和Exenv核苷酸同源性为88.1%,推导的氨基酸同源性为92.0%,两者的主要差异位于TM区和YXXM基序。本结果为进一步研究JSRVenv基因功能提供了新线索。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤 ENV基因 序列分析 结构预测
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靶向env及LTR基因的siRNA抑制ALV-J复制的研究 预览
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作者 李娇 冯少珍 +4 位作者 黄武 吴晓婵 李育豪 曹伟胜 廖明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期16-19,共4页
试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4~5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检... 试验针对J亚群禽白血病病毒的env及LTR基因,根据它们的保守序列,分别设计合成了4~5对siRNA,并将其克隆至pSilencer 4.1,构建siRNA重组表达质粒。将该质粒转染DF-1细胞6 h后以103TCID50接种ALV-J,利用Real-time RT-PCR在mRNA表达水平检测各重组质粒对病毒复制的影响。结果表明,与阴性对照相比,pSi4.1-env各重组质粒对env基因的抑制效果达到18.15%~63.43%,pSi4.1-LTR各重组质粒的抑制效果则达到19.37%~45.41%。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 ENV基因 LTR基因 SIRNA
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J亚群禽白血病病毒四川株SCMS1的分离及其囊膜基因序列分析 预览 被引量:3
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作者 石敏 田明星 +6 位作者 王远萍 邹年莉 林艳 余冲 赵芳芳 李敏 黄勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期 62-65,共4页
为研究四川首例分离株SCMS1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜(env)基因是否产生新的变异,本实验通过将病毒接种鸡胚成纤维细胞、RT-PCR及PCR检测技术,对包括env基因和部分3'UTR在内的片段进行PCR扩增、克隆和序列测定。结果发现该病... 为研究四川首例分离株SCMS1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜(env)基因是否产生新的变异,本实验通过将病毒接种鸡胚成纤维细胞、RT-PCR及PCR检测技术,对包括env基因和部分3'UTR在内的片段进行PCR扩增、克隆和序列测定。结果发现该病毒gp85基因出现6个碱基的缺失,与HPRS-103原型株6995位~7242位对应的核酸序列也发生248个碱基的缺失,包括整个rTM区域。这些碱基的缺失在病毒致病性变化中可能具有潜在的意义。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 分离鉴定 ENV基因 序列分析
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猪内源性反转录病毒囊膜基因env真核表达质粒的构建及鉴定 预览
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作者 叶小丽 吕茂民 +5 位作者 颜奇坡 郭逸 吴健敏 田克恭 马玉媛 章金刚 《生物技术通讯》 CAS 2011年第5期 683-686,共4页
目的:构建猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因env的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法:用RT-PCR方法扩增五指山猪来源PERV的env基因,将其插入pGEM-T easy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env... 目的:构建猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因env的真核表达质粒pHCMV-env并加以鉴定,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定基础。方法:用RT-PCR方法扩增五指山猪来源PERV的env基因,将其插入pGEM-T easy载体中,构建重组质粒pGEM-T-env,酶切鉴定正确后,将pGEM-T-env与pHCMV-VSV-G表达质粒同时经EcoRⅠ酶切消化后连接,构建重组表达质粒pHCMV-env,并进行酶切、测序鉴定;将鉴定正确的质粒pHCMV-env转染HEK293T细胞,采用PCR、RT-PCR检测转染后env基因的整合和转录情况。结果:扩增得到五指山猪来源PERV的env基因,并构建了pHCMV-env真核表达质粒,转染HEK293T细胞系后,该细胞系中有目的基因的整合和转录。结论:构建了真核表达质粒pHCMV-env,并且在HEK293T细胞中能够整合并转录,为研究PERV的细胞嗜性和宿主范围奠定了基础。 展开更多
关键词 猪内源性反转录病毒 ENV基因 真核表达
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云南省禽流感、新城疫与3种免疫抑制性病原共感染的检测 预览
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作者 宋建领 石凤海 +12 位作者 田建国 叶丛华 张文东 赵焕云 吕粤 岳亮 李华春 邱薇 冯子良 张思东 范泉水 张应国 张富强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第8期 24-29,共6页
为调查云南省禽流感病毒、新城疫病毒与免疫抑制性病毒混合感染的情况,对云南省2007年1月~2009年10月期间145份禽流感阳性及30份新城疫阳性样品进行禽网状内皮增生病病毒(REV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及鸡传染性贫血病毒(CIAV... 为调查云南省禽流感病毒、新城疫病毒与免疫抑制性病毒混合感染的情况,对云南省2007年1月~2009年10月期间145份禽流感阳性及30份新城疫阳性样品进行禽网状内皮增生病病毒(REV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)及鸡传染性贫血病毒(CIAV)的检测。禽流感阳性样品中ALV-J的感染阳性率为15.9%,REV的感染阳性率为22.8%,CIAV的感染阳性率为26.9%;新城疫阳性样品中ALV-J的感染阳性率为13.3%,REV的感染阳性率为23.3%,CIAV的感染阳性率为26.7%;共有30份样品发生多重感染,多重感染率为17.1%。对不同区域的4份禽白血病病毒阳性样品、10份禽网状内皮增生病病毒阳性样品、10份禽传染性贫血病毒阳性样品进行了序列比对和系统发育分析。结果表明,云南ALV-J毒株gp85基因与国内外毒株核苷酸及氨基酸同源性分别介于80.4%~96.7%、85.2%~94.5%;REV毒株env基因核苷酸及氨基酸之间的同源性为98.8%~99.8%、97.7%~99.5%;CIAV毒株vp2基因核苷酸及氨基酸之间的同源性为92.4%~100.0%、93.7%~100.0%。 展开更多
关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 GP85基因 ENV基因 VP2基因
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