期刊文献+
共找到3篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
内皮抑素变体蛋白的表达及复性与纯化工艺的优化
1
作者 王博楠 徐根兴 华子春 《药物生物技术》 CAS 2019年第3期199-203,共5页
目前抗血管新生已经成为一种有效的癌症治疗手段。内皮抑素(Endostatin)可以抑制血管新生和形成,已经作为抑癌药物上市并作为辅助用药已起到较好的治疗效果。课题组构建了将内皮抑素与穿膜肽九聚精氨酸融合的内皮抑素变体,拟促进内皮抑... 目前抗血管新生已经成为一种有效的癌症治疗手段。内皮抑素(Endostatin)可以抑制血管新生和形成,已经作为抑癌药物上市并作为辅助用药已起到较好的治疗效果。课题组构建了将内皮抑素与穿膜肽九聚精氨酸融合的内皮抑素变体,拟促进内皮抑素进入细胞膜以期达到更好的治疗效果。该研究以原核表达质粒p BV222为载体,构建了带有His标签的内皮抑素变体(9R-Endo-9R),内皮抑素变体蛋白的相对分子质量约21 k。在1 L的发酵体系下,蛋白以包涵体形式表达,为了深入探究该内皮抑素变体的生物学性能,该研究探索以变复性的方法获得可溶性内皮抑素变体,并对纯化方法进行优化以获得较高回收率。CCK-8实验结果表明该内皮抑素变体对血管内皮细胞具有增殖抑制作用,显示优化后的复性和纯化的内皮抑素变体具有较好的生物学活性。该研究为内皮抑素变体的进一步药学性质的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 内皮抑素 变体 包涵体 变复性 表达纯化 方法优化
定点突变内皮抑素Zn^2+的结合位点及突变基因的克隆表达 预览 被引量:1
2
作者 王群 马军 +1 位作者 何巍 王晖 《吉林大学学报:理学版》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 106-111,共6页
从人胚肝组织中提取总RNA,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法获得人内皮抑素编码序列,采用定点突变技术将his2和His4双突变为Leu2和Val4.将突变基因cDNA插入含有T7启动子的质粒pET-28b中构建表达质粒pMendo,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选... 从人胚肝组织中提取总RNA,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法获得人内皮抑素编码序列,采用定点突变技术将his2和His4双突变为Leu2和Val4.将突变基因cDNA插入含有T7启动子的质粒pET-28b中构建表达质粒pMendo,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选表达菌株BL21-Mute,表达菌株经IPTG诱导后以包涵体方式产生大量内皮抑素突变蛋白.SDS-PAGE分析表明,表达的重组蛋白占菌株可溶性蛋白质的30%.复性、纯化的内皮抑素突变蛋白纯度达到98%,失去抑制人脐静脉内皮细胞增殖的活性. 展开更多
关键词 内皮抑素 克隆 突变 大肠杆菌
在线阅读 下载PDF
含有对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素的表达及纯化 预览
3
作者 刘静娴 田浤 +3 位作者 姚文兵 陈海 尹骏 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 275-280,共6页
优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统,使用优化后的正交系统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰tRNA合成酶启动子-15区的TATAA序列... 优化定点引入对叠氮苯丙氨酸的詹氏甲烷球菌属正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统,使用优化后的正交系统在大肠杆菌内表达并纯化在特定氨基酸位点引入对叠氮苯丙氨酸的人内皮抑素突变体。首先将正交酪氨酰tRNA合成酶启动子-15区的TATAA序列突变为TTAA序列,同时将正交酪氨酰tRNA合成酶的第286位天冬氨酸突变为精氨酸以提高对抑制型tRNA反密码子CUA的识别力。然后将质粒pST和pET32a-mhEn转化到大肠杆菌DH10BDE3中得到重组工程菌。该重组菌在含有对叠氮苯丙氨酸的培养基中培养,并经IPTG诱导表达人内皮抑素突变体。利用镍亲和色谱纯化获得人内皮抑素突变体,纯度大于90%。通过对正交酪氨酰tRNA合成酶/tRNA系统的优化,有效提高了系统引入对叠氮苯丙氨酸的效率,人内皮抑素突变体的表达量有了显著提高。 展开更多
关键词 正交系统优化 人内皮抑素突变体 对叠氮苯丙氨酸
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈