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体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞的比较研究
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作者 夏飞 乔静 +7 位作者 曹慧 向明 廖亚玲 陈敏 许鑫 胡光煦 张明伟 杜鸣 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期66-72,共7页
目的利用粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、酪氨酸激酶受体3配体(Flt3L)以及不同浓度细胞因子组合在体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞,比较不同培养条件对细胞分化与成熟的影响。方法分离BALB/c小鼠骨... 目的利用粒细胞-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、酪氨酸激酶受体3配体(Flt3L)以及不同浓度细胞因子组合在体外诱导小鼠骨髓细胞分化为髓源树突状细胞,比较不同培养条件对细胞分化与成熟的影响。方法分离BALB/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF、IL-4、Flt3L以及不同浓度细胞因子组合的培养液,培养7d后荧光抗体标记行流式细胞术,检测DC表面CD11c、MHCⅡ、CD86分子的表达水平。平行组加入脂多糖(LPS)刺激后行流式细胞术检测。结果Flt3L/GM-CSF/IL-4组可诱导90%骨髓细胞高表达CD11c,此时各细胞因子浓度分别为20ng/ml、20ng/ml、10ng/ml;100ng/mlFlt3L诱导骨髓细胞表达CD11c达88%。Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组诱导髓源树突状细胞表达MHCⅡ分别为35.4%和36.1%,其中各组Flt3L与GM-CSF浓度均为20ng/ml。LPS刺激后Flt3L/GM-CSF/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组表达MHCⅡ分子水平分别为58.1%和59.6%,增幅为22.7%和23.5%。GM-CSF/Flt3L/IL-4组与Flt3L/GM-CSF组树突状细胞CD86表达为7.1%与5.5%。LPS刺激后20ng/mlFlt3L组与GM-CSF/IL-4组CD86表达增幅达7.1%与6.2%。结论Flt3L和GM-CSF对髓源树突状细胞的分化与成熟发挥主导作用,故20ng/mlFlt3L联合20ng/mlGM-CSF可成为DC基础研究的优选方案。 展开更多
关键词 树突状细胞 诱导 FLT3L GM-CSF IL-4
高压注射FLT3L-hIgGFc表达质粒诱导小鼠体内树突状细胞扩增的研究
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作者 卢信良 王盛典 任欢 《国际免疫学杂志》 CAS 2015年第2期99-104,共6页
目的构建重组真核表达质粒PTT3-FLT3L—hIgGFc,鉴定其诱导机体表达蛋白FLT3L—hIgGFc的水平以及诱导小鼠淋巴结脾脏树突状细胞(DCs)的功能,探索体内注射质粒代替注射蛋白诱导DCs方法的可行性。方法用PCR方法从小鼠肥大细胞1~815细... 目的构建重组真核表达质粒PTT3-FLT3L—hIgGFc,鉴定其诱导机体表达蛋白FLT3L—hIgGFc的水平以及诱导小鼠淋巴结脾脏树突状细胞(DCs)的功能,探索体内注射质粒代替注射蛋白诱导DCs方法的可行性。方法用PCR方法从小鼠肥大细胞1~815细胞系中扩增出FLT3L基因片段,连接到P'133-hIgGFc载体上,得到重组真核表达质粒PTF3-FLT3L,hIgGFc;通过酶切鉴定和测序检测目的基因核苷酸序列;尾静脉高压注射PTT3.FLT3L—hIgGFc质粒和PTT3-hIgGFc对照质粒,9d后取小鼠淋巴结和脾脏,流式细胞术检测CD3、CD19、DX5、CD11c、MHC-Ⅱ等的表达来鉴定DCs的比例和数量。结果酶切和测序结果显示PTT3-FLT3L—hIgGFc质粒构建成功。小鼠尾静脉高压注射PTr3-FLT3L—hIgGFc后,血清中持续含有高于生理水平的FL33L—hIgGFc蛋白,小鼠脾脏体积明显增大,淋巴结和脾脏中CD11^+MHC-Ⅱ^+DC明显增多。结论成功构建了PTT3-FLT3L—hIgGFc重组真核表达质粒,通过尾静脉高压注射方法证明该质粒确实有诱导小鼠体内DCs增多的功能,并且给小鼠注射质粒诱导DCs的效果与注射蛋白的效果接近。提示P333-FLT3L—hIgG质粒可代替FLT3L蛋白进行实验,为生产用于小鼠体内研究的FL33L蛋白提供了指导。 展开更多
关键词 FLT3L 树突状细胞 高压注射
Flt3L刺激体外培养小鼠骨髓源CD8α+树突状细胞及其成熟状态分析
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作者 张东辉 侯敏 +6 位作者 陈莹莹 王铖芸 张凡 高雅楠 陈琳 季旻珺 吴观陵 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第1期33-36,共4页
目的建立体外快速制备大量具有免疫活性的小鼠骨髓来源不成熟CD8α+DCs方法。方法实验分2组。Fh3L组:将小鼠骨髓前体细胞用含终浓度为100ng/mlFlt3L的BMDC培养基混悬后接种于细胞培养皿中,每平皿10ml,37C培养至第7d收集细胞;GM-CS... 目的建立体外快速制备大量具有免疫活性的小鼠骨髓来源不成熟CD8α+DCs方法。方法实验分2组。Fh3L组:将小鼠骨髓前体细胞用含终浓度为100ng/mlFlt3L的BMDC培养基混悬后接种于细胞培养皿中,每平皿10ml,37C培养至第7d收集细胞;GM-CSF+IL4组:将骨髓前体细胞用含终浓度为20ng/mlGM-CSF、5ng/mlIL-4的BMDC培养基混悬后接种于细胞培养皿中,每平皿10ml,分别于37℃培养第3d和第5d半量换液,培养第7d收集细胞,采用磁选法分离CD11c+ BMDCs,用流式细胞仪检测。结果Flt3L刺激组CD11c+ BMDCs得率为(95.07±0.09)%,GM-CSF+IL-4刺激组为(83.97±0.43)%,差异有统计学意义(P〈0.01)。Flt3L刺激组CD11c+ CD8α+BMDCs得率为(9.83±0.33)%,GM-CSF+IL-4刺激组刺激组为(4.06±0.17)%,差异有统计学意义(P〈0.01)。Flt3L刺激组CD11c+ CD8α+ BMDCs表面几乎不表达CD40、CD80、CD86,仅低表达MHCI、MHCII,处于未成熟阶段。结论采用Fh3L刺激小鼠骨髓前体细胞的方法可获得大量未成熟的CD11c+ CD8α+ BMDCs,方法简单,得率较高,为开展CD8α+DCs相关基础和临床研究奠定了基础。 展开更多
关键词 FLT3L CD8 α%PLUS% 树突状细胞 未成熟
肝树突状细胞在肝损伤和肝纤维化过程中的作用 预览 被引量:1
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作者 蔡晓波 陆伦根 《肝脏》 2014年第4期289-290,共2页
一、肝树突状细胞(LDC)群 树突状细胞(DCs)是主要的抗原递呈细胞(APC),LDCs在正常肝脏分布于门管区,肝实质内分布较少。LDCs具有异种性,鼠DC可分为三个亚群:CD103^+、CD103^+、pDCs。LDCs发育通过转录因子调节,其也介导... 一、肝树突状细胞(LDC)群 树突状细胞(DCs)是主要的抗原递呈细胞(APC),LDCs在正常肝脏分布于门管区,肝实质内分布较少。LDCs具有异种性,鼠DC可分为三个亚群:CD103^+、CD103^+、pDCs。LDCs发育通过转录因子调节,其也介导淋巴结和其他非淋巴结器官的DC发育。肝脏具有DC前体细胞,LDCs经由GM—CSF或FLT3L原位增殖。 展开更多
关键词 肝树突状细胞 肝纤维化过程 肝损伤 抗原递呈细胞 正常肝脏 FLT3L 转录因子 前体细胞
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Flt3L对小鼠胸腺树突状细胞在FTOC体系中分化发育的作用
5
作者 许云云 李毅平 +4 位作者 李芳 朱雪明 汪健 王泳 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期 450-455,共6页
为了借助FTOC体系探讨Flt3L对小鼠胸腺树突状细胞分化发育的影响。摘取15~16d龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胎鼠胸腺器官培养-FTOC),根据所使用培养基的不同实验分为两组:对照组(基础培养基)和Flt3L组(培养基中含有细胞因子Flt3L... 为了借助FTOC体系探讨Flt3L对小鼠胸腺树突状细胞分化发育的影响。摘取15~16d龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胎鼠胸腺器官培养-FTOC),根据所使用培养基的不同实验分为两组:对照组(基础培养基)和Flt3L组(培养基中含有细胞因子Flt3L),在体外进行FTOC常规培养,12d后分别收集两实验组的胸腺细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子CD4、CD8、CD11c、Ia等的表达,通过光学显微镜观察细胞形态。骨髓来源的c-kit+造血干细胞通过悬滴培养方法种植入2-脱氧鸟苷处理过的胸腺,随后将胸腺放置于组织器官培养皿中所使用的培养基为基础培养基或加入细胞因子Flt3L的培养基,进行为期12d的FTOC常规培养。12d后收集不同条件下FTOC培养的胸腺细胞,通过流式细胞仪对胸腺细胞的表型进行分析;将在不同条件下FTOC培养获得的胸腺细胞进行MACS分选,从而获得胸腺树突状细胞(CD11c+DC),再与异源的CD4+T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过MTT法检测T细胞的增殖情况。结果:在正常FTOC体系中,流式细胞仪检测结果和细胞形态学结果显示:Flt3L组胸腺DC有明显的增加,且FTOC联合悬滴培养体系中Flt3L组胸腺DC的生成率明显高于对照组;MTT检测结果也显示:没有CpG2006刺激时,胸腺DC刺激T细胞增殖的能力比较弱,但添加CpG2006刺激后,胸腺DC趋向于成熟表型,刺激T细胞增殖的能力有所增强。提示,Flt3L在小鼠胸腺DC的分化发育中发挥重要的调节作用,明显促进小鼠骨髓来源的c-kit+造血干细胞向胸腺DC的分化。 展开更多
关键词 FTOC FLT3L 胸腺树突状细胞 c-kit%PLUS%造血干细胞
Flt3配体对多器官功能障碍综合征小鼠脏器功能和结构的保护作用
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作者 田光 陆江阳 +2 位作者 王宏伟 刘茜 杨毅 《中国体视学与图像分析》 2009年第4期380-385,共6页
目的观察Flt3配体(Flt3L)对酵母多糖致多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunc-tion syndrome,MODS)小鼠多脏器功能和结构损伤的防护作用。方法采用腹腔注射酵母多糖的方法复制小鼠MODS模型。雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(... 目的观察Flt3配体(Flt3L)对酵母多糖致多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunc-tion syndrome,MODS)小鼠多脏器功能和结构损伤的防护作用。方法采用腹腔注射酵母多糖的方法复制小鼠MODS模型。雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(n=10),MODS组(n=30)和Flt3L治疗组(n=30)。MODS组在致伤后腹腔注入生理盐水; Flt3L治疗组在致伤后第5 d起腹腔注射Flt3配体(5μg/kg),连续给药7 d。观察酵母多糖致伤12 d动物死亡率,检测各组血丙氨酸转氨酶活性(alanine aminotransforase activity,ALT)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(cre-atinine,Cr)水平,外周血T淋巴细胞亚群变化,镜下观察致伤后12 d动物肝、肺、肾、心等脏器的组织病理学改变。结果在酵母多糖致伤后12 d,MODS组小鼠死亡率达18%,Flt3L治疗组的小鼠死亡率为7%。MODS组小鼠血浆AIT、BUN和Cr在伤后12 d升高,而同时间点经Flt3L治疗的小鼠血浆AIT、BUN和Cr趋于正常,明显低于MODS组。MODS组小鼠肝脏、肺脏、肾脏和心脏发生明显的病理改变,主要表现为脏器实质细胞多呈变性与灶状坏死改变,而Flt3L治疗组小鼠上述病变明显减轻。MODS组小鼠CD4+T细胞数目减少,而CD8+T细胞数目呈明显增高,CD4/CD8比值显著下降; 而Flt3L治疗组CD4+T细胞数目增加恢复至正常水平,CD4/CD8比值较MODS组明显上调。结论给予Flt3L可以改善机体免疫状态,降低MODS期动物的死亡率,减轻脏器功能和结构的损伤,对MODS期的脏器损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 多器官功能障碍综合征 FLT3配体 树突状细胞 病理学
Flt3L对COPD大鼠铜绿假单胞菌肺炎的防治研究 预览 被引量:2
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作者 曹国强 姬军生 吴奎 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期 1466-1467,1470,共3页
目的建立铜绿假单胞菌(PA)肺部感染大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,研究Flt3L(Fms—like tyrosine kinase-3 ligand)对其炎症反应的防治作用。方法将50只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机分为对照组(NS组)、PA感染对照组(NPA组... 目的建立铜绿假单胞菌(PA)肺部感染大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,研究Flt3L(Fms—like tyrosine kinase-3 ligand)对其炎症反应的防治作用。方法将50只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机分为对照组(NS组)、PA感染对照组(NPA组)、COPD大鼠组(COPD组)、COPD大鼠PA感染组(CPA组)和COPD大鼠PA感染Flt3L处理组(Flt3L组),每组动物各10只。用烟雾暴露法复制大鼠COPD模型,气管内滴入PA溶液复制肺部PA感染模型。COPD组、CPA组、Flt3L组大鼠分别在第1~60天以烟雾暴露法复制COPD模型,Flt3L组于第61~65天连续给予Flt3L(20g/kg)腹腔注射,每天1次,连续5d,第66天同时建立NPA组、CPA组和Flt3L组模型。24h后计算大鼠死亡率,对支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织进行细菌学、细胞学、病理学等研究。无菌操作下取出大鼠脏器进行细菌培养、菌落计数及细菌鉴定。结果Flt3L组大鼠存活率(87.5%)显著高于CPA组(50.0%)(P〈0.01),Flt3L组大鼠支气管肺泡灌洗液中淋巴细胞数[(0.41~0.05)×10^9/L]与CPA组((0.24~0.04)×10^9/L]比较显著增加(P〈0.01),光镜下观察比较发现Flt3L组大鼠肺组织炎症反应较CPA组明显减轻,脏器细菌培养阳性率CPA组(37.5%)显著高于Flt3L组(12.5%)(P〈0.01)。结论Flt3L能够增强COPD大鼠对PA肺部感染的抗痛力。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 动物模型 铜绿假单胞菌 肺部感染
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MIP-1α和Flt3l基因佐剂联合应用对HPV16E7 DNA疫苗的免疫增强作用 预览 被引量:2
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作者 蓝佳明 高志云 +7 位作者 耿媛 揣侠 赵娜 韩小艳 张永红 谢立新 金玉怀 王永祥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 305-309,314,共6页
目的:探讨巨噬细胞炎性蛋白1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和酪氨酸激酶受体3配体(Flt3ligand,Flt3l)基因佐剂联合应用增强人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus16,HPV16)E7DNA疫苗免疫效果的可能性。方法... 目的:探讨巨噬细胞炎性蛋白1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和酪氨酸激酶受体3配体(Flt3ligand,Flt3l)基因佐剂联合应用增强人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus16,HPV16)E7DNA疫苗免疫效果的可能性。方法:构建真核表达质粒pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7。C57BL/6小鼠随机分为8组,分别为pcDNA3组、pcDNA3/MIP-1α组、pcDNA3/Flt3l组、pcDNA3/MIP-1α和pcDNA3/Flt3l混合组、pcDNA3/HPV16E7组、pcDNA3/MIP-1α和pcDNA3/HPV16E7混合组、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组以及pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组。每组14只,肌肉注射质粒免疫小鼠,每3周免疫1次,共3次;末次免疫后2周每组随机抽取6只小鼠,取脾脏制备淋巴细胞悬液,用CCK-8试剂盒检测其对TC-1靶细胞的特异性杀伤能力。其余小鼠在腹股沟处皮下注射5×10^4个TC-1细胞,观察肿瘤生长情况。结果:成功构建了真核表达质粒pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7;pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组的CTL杀伤能力明显高于其它各组(P〈0.01);肿瘤细胞攻击后16天,pcDNA3组小鼠全部长出肿瘤,而pcDNA3/MIP-1α、pcDNA3/Flt3l和pcDNA3/HPV16E7混合组的成瘤率仅为12.5%,明显低于其他组,统计学分析示8组之间成瘤率差异有显著性(P=0.007)。60天后各组成瘤率之间的差异无统计学意义(P=0.229)。结论:联合应用MIP-1α和Flt3l基因佐剂增强了HPV16E7DNA疫苗的免疫效果,一定程度上延缓了肿瘤的发生。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16E7 酪氨酸激酶受体3配体 巨噬细胞炎性蛋白1Α 基因佐剂 质粒 DNA疫苗
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Flt3L免疫扩增恒河猴外周血树突状细胞前体(pDC1/pDC2)的研究
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作者 张临友 张学峰 +3 位作者 马北北 郭晓彤 王俊峰 夏求明 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期 1005-1006,共2页
目的探讨Flt3L对恒河猴外周血树突状细胞前体(pDC1和pDC2)的免疫扩增作用.方法健康猴艾滋病毒SIV阴性的恒河猴每日给予rhFlt3L 100 μg/kg体重皮下注射,于第11天在氯胺硐全麻下采集静脉血,用Ficoll-Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞... 目的探讨Flt3L对恒河猴外周血树突状细胞前体(pDC1和pDC2)的免疫扩增作用.方法健康猴艾滋病毒SIV阴性的恒河猴每日给予rhFlt3L 100 μg/kg体重皮下注射,于第11天在氯胺硐全麻下采集静脉血,用Ficoll-Hypaque梯度离心法提取外周血单核细胞,利用与恒河猴有交叉反应的人单克隆抗体以及三色流式细胞仪分离pDC1和pDC2,并与未经Flt3L作用的pDC1和pDC2在数量和细胞表现型上进行对比.结果经Flt3L扩增的恒河猴外周血pDC1和pDC2数量分别增加7倍和4倍,且细胞表现型和形态不发生改变.结论 Flt3L对恒河猴外周血pDC1和pDC2具有免疫扩增作用. 展开更多
关键词 FLT3L 免疫扩增 恒河猴 外周血 树突状细胞前体 pDC1 pDC2
Flt3L与Tpo、SCF组合对脐血干/祖细胞的体外短期调控作用 被引量:4
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作者 马艳萍 邹萍 +2 位作者 肖娟 向建萍 黄士昂 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期 262-263,共2页
我们对不同细胞因子组合在无血清无基质条件下对脐血干/祖细胞的调控作用进行了研究,旨在探讨一种体外培养方法,使脐血干/祖细胞在短时间内有效扩增,避免长期体外暴露引起的污染,避免异源血清带来的免疫反应和血源传播性疾病[1]... 我们对不同细胞因子组合在无血清无基质条件下对脐血干/祖细胞的调控作用进行了研究,旨在探讨一种体外培养方法,使脐血干/祖细胞在短时间内有效扩增,避免长期体外暴露引起的污染,避免异源血清带来的免疫反应和血源传播性疾病[1],经济、省时,更适合临床应用。 展开更多
关键词 FLT3L TPO SCF 细胞因子组合 脐血 干细胞 祖细胞 调控作用
Flt3L与CCL5细胞因子佐剂对HBc抗原DNA疫苗特异性免疫应答的促进作用 被引量:2
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作者 刘春燕 张艳 +4 位作者 郑龙 尤红煜 王俊霞 刘须 宋淑霞 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期367-371,共5页
观察真核重组表达质粒pFlt3L及pCCL5对携带HBc抗原的DNA疫苗诱导的抗原特异性免疫应答的促进作用.将pFlt3L及pCCL5分别用脂质体的方法转染Hep G2细胞,然后采用骨髓细胞增殖及趋化小室实验检测细胞上清Flt3L及CCL5两种细胞因子的生物学活... 观察真核重组表达质粒pFlt3L及pCCL5对携带HBc抗原的DNA疫苗诱导的抗原特异性免疫应答的促进作用.将pFlt3L及pCCL5分别用脂质体的方法转染Hep G2细胞,然后采用骨髓细胞增殖及趋化小室实验检测细胞上清Flt3L及CCL5两种细胞因子的生物学活性.将pFlt3L和pCCL5两种重组质粒单独或联合使用与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法免疫小鼠,采用MTT法检测脾淋巴细胞增殖、流式细胞仪检测脾CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性.结果:骨髓细胞增殖及趋化实验证实了Flt3L及CCL5均有生物学活性.pFlt3L和pCCL5单独或联合使用均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P<0.05),提高小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达量(P<0.05或P<0.01),IL-4表达水平在各组无显著区别(P>0.05),Flt3L+CCL5组小鼠脾细胞特异性CTL活性显著高于其他各组(P<0.05).pFlt3L和pCCL5表达质粒联用可显著促进小鼠Th1型细胞因子的表达,并对带HBc抗原的DNA疫苗的免疫应答具有促进作用. 展开更多
关键词 DNA疫苗 佐剂 Flt3L/CCL5 小鼠 抗原特异性免疫应答
Flt3L及CCL5对prime/boost免疫策略中抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用
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作者 刘春燕 郑龙 +3 位作者 尤红煜 张艳 王俊霞 宋淑霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期 982-985,共4页
目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用。方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠,免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBcDNA疫苗加... 目的:研究Flt3L与CCL5作为联合佐剂在prime/boost免疫策略中对HBc抗原特异性免疫应答的增强及抗肿瘤作用。方法:将两种细胞因子质粒与携带HBc抗原的DNA疫苗经肌内注射法共免疫小鼠,免疫3次后再用原核表达的HBc颗粒蛋白或HBcDNA疫苗加强,观察对稳定表达HBcAg的小鼠黑色素瘤细胞(B16-HBc)的生长抑制作用;并分别采用MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖、流式细胞术检测脾CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清IL-2、IL-4含量及乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL杀伤活性。结果:与对照组相比,佐剂联合DNA疫苗免疫经蛋白加强组(DDP/Adj)显著抑制肿瘤生长;佐剂联合DNA疫苗免疫组(DDD/Adj)及DDP/Adj组均可促进特异性淋巴细胞增殖反应(P〈0.05),且DDP/Adj高于DDD/Adj组(P〈0.05);DDD/Adj及DDP/Adj组小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞中IFN-γ表达、IL-2表达水平及CTL杀靶活性均高于对照组(P〈0.01或P〈0.05),IL-4表达水平在各组无显著区别(P〉0.05)。结论:在prime/boost免疫策略中,采用Flt3L与CCL5两种细胞因子联合应用可显著促进荷瘤小鼠产生抗原特异性免疫应答及抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 DNA疫苗 Flt3L/CCL5/佐剂 小鼠 抗原特异性免疫应答 prime/boost策略
Flt3配体对培养的树突状细胞免疫表型影响的研究 预览 被引量:1
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作者 王良华 熊文 邹红岩 《现代检验医学杂志》 CAS 2004年第4期 7-8,共2页
目的研究早期造血生长因子Flt3配体(Flt3L)对培养的树突状细胞(Dendritic Cell,DC)免疫分子表达的影响.方法分离正常人外周血中单核细胞,以加入细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4的培养体系为基础,体外培养树突状细胞.观察加入Flt3L因子后培养... 目的研究早期造血生长因子Flt3配体(Flt3L)对培养的树突状细胞(Dendritic Cell,DC)免疫分子表达的影响.方法分离正常人外周血中单核细胞,以加入细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4的培养体系为基础,体外培养树突状细胞.观察加入Flt3L因子后培养的DC的形态变化,并应用流式细胞仪分析DC表面的免疫分子的表达.结果 Flt3L能协同GM-CSF、IL-4作用扩增DC.结论 Flt3L能使树突状细胞定向分化成为抗原提呈细胞. 展开更多
关键词 FLT3配体 树突状细胞 免疫表型
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60Coγ射线全身照射后大鼠血浆中GDF-15、Flt-3L和SAA表达的剂量相关性研究 预览
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作者 孙佳丽 李爽 +1 位作者 田梅 刘青杰 《中国医学装备》 2019年第3期151-155,共5页
目的:探讨钴60(60Co)γ射线照射对SD大鼠血浆中Fms样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)、血清淀粉样蛋白A(SAA)和生长分化因子-15(GDF-15)蛋白表达情况的影响。方法:将72只SD大鼠按照不同照射剂量分为0 Gy组、1 Gy组、3 Gy组和5 Gy组,每组18只,采... 目的:探讨钴60(60Co)γ射线照射对SD大鼠血浆中Fms样酪氨酸激酶3配体(Flt-3L)、血清淀粉样蛋白A(SAA)和生长分化因子-15(GDF-15)蛋白表达情况的影响。方法:将72只SD大鼠按照不同照射剂量分为0 Gy组、1 Gy组、3 Gy组和5 Gy组,每组18只,采用60Coγ射线照射大鼠,剂量率为1 Gy/min。照射后1 d、3 d和5 d采集4组大鼠外周血,通过酶链免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中的Flt-3L、SAA和GDF-15蛋白表达水平。结果:SD大鼠血浆中的Flt-3L和GDF-15蛋白在照射后表达升高,升高的水平与辐射剂量相关。3 Gy组和5 Gy组血浆中的GDF-15蛋白在照射后1 d、3 d和5 d与0 Gy组相比表达均增高,差异有统计学意义(t=3.09,t=6.32,t=8.91,t=10.71,t=2.73,t=6.64;P<0.05);5 Gy组血浆中的Flt-3L蛋白在照后1 d、3 d和5 d与0Gy组相比表达均增高,差异有统计学意义(t=4.22,t=8.48,t=5.51;P<0.05);3 Gy组Flt-3L蛋白只在照后1 d和5 d表达增高,差异有统计学意义(t=5.79,t=3.69;P<0.05);GDF-15蛋白水平在照射后1 d的剂量-效应关系(R2=0.936,P<0.05)优于照射后3 d和5 d(R2=0.913,R2=0.887;P<0.05);Flt-3L蛋白正相反,其在照射后5 d的剂量-效应关系最好(R2=0.965,P<0.05);SAA只有在照射后1 d有随剂量升高表达增加的趋势。结论:血浆中的Flt-3L和GDF-15蛋白在全身照射的大鼠血浆中特定时间点呈现出比较良好的剂量-效应关系。 展开更多
关键词 电离辐射 FMS样酪氨酸激酶3配体 血清淀粉样蛋白A 生长分化因子-15蛋白
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干燥综合征相关性细胞因子 被引量:12
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作者 许满秀 钱先 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期206-208,共3页
干燥综合征(SS)是一种慢性全身性炎症性自身免疫病,主要侵犯泪腺、唾液腺等外分泌腺。近年来,细胞因子在干燥综合征的发生发展中所起的作用引起了关注。Th1/Th2失衡抑制免疫细胞的凋亡,使细胞内累积大量免疫原性核小体,刺激T细... 干燥综合征(SS)是一种慢性全身性炎症性自身免疫病,主要侵犯泪腺、唾液腺等外分泌腺。近年来,细胞因子在干燥综合征的发生发展中所起的作用引起了关注。Th1/Th2失衡抑制免疫细胞的凋亡,使细胞内累积大量免疫原性核小体,刺激T细胞产生自身抗体,加重自身免疫反应。Th17/Treg失衡可能诱发或加剧SS的发生发展。B细胞反应性增生产生大量细胞因子、免疫球蛋白及多种自身抗体,导致局部组织炎症损伤。SS患者唾液腺及血清中B细胞活化因子(BAFF)水平均较高,并与炎症活动及损害程度相关。趋化因子及其受体在SS炎性细胞迁移至病灶腺体及促进异位生发中心形成的过程中起重要作用。 展开更多
关键词 干燥综合征 细胞因子 TH1 Th2漂移 THL7 Treg失衡 BAFF FLT3-L
Flt-3L、SCF在食管癌患者外周血细胞的诱导及树突细胞的培养 预览
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作者 王雷 单保恩 +2 位作者 刘亮 孟宪利 王士杰 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 7-9,共3页
目的探讨从食管癌患者外周血分离、诱导与扩增树突细胞(DC)的有效方法。方法采用密度梯度离心法从食管癌患者外周血分离单个核细胞,分别加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)(作为对照组);GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/m... 目的探讨从食管癌患者外周血分离、诱导与扩增树突细胞(DC)的有效方法。方法采用密度梯度离心法从食管癌患者外周血分离单个核细胞,分别加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)(作为对照组);GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)(作为实验1组);加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)+SCF(100 ng/ml)(作为实验2组)。于37℃、5%CO2环境下进行培养,动态观察细胞生长情况,流式细胞仪检测培养第6天时DC表面分子CD1a、CD83、CD80、CD86的表达水平。结果上述不同刺激物均能从外周血单个核细胞成功诱导出DC,与对照组相比,实验组诱导出更多数量的DC,其中以实验2组最多;培养至第6天时,两实验组DC细胞表型CD1a表达率与对照组无明显差别(P〉0.05),CD83、CD80、CD86表达水平明显高于对照组(P〈0.01),其中以实验2组表达水平最高(P〈0.01)。结论联合应用GM-CSF、IL-4、flt-3L和SCF能有效地从食管癌患者外周血诱导培养出大量具有活性的DC,为进一步的临床研究奠定基础。 展开更多
关键词 食管肿瘤 树突细胞 干细胞因子 F3配体
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Fms样酪氨酸激酶3配体联合CpG和肿瘤抗原治疗肿瘤的研究 预览
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作者 胡建霞 吴松洁 +6 位作者 刘培方 李苗苗 张学峰 张美荣 王丽 高宏 周倩 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 771-776,共6页
背景与目的:Fms样酪氨酸激酶3配体(fms-1ike tyrosine kinase 3 ligand,FLT3-L)、CpG虽可作为免疫调节剂发挥抗肿瘤作用,但单独用于治疗肿瘤效果不佳。本研究旨在探讨FLT3-L+肿瘤抗原+CpG联合应用对肝癌小鼠的治疗效果及机制,并探... 背景与目的:Fms样酪氨酸激酶3配体(fms-1ike tyrosine kinase 3 ligand,FLT3-L)、CpG虽可作为免疫调节剂发挥抗肿瘤作用,但单独用于治疗肿瘤效果不佳。本研究旨在探讨FLT3-L+肿瘤抗原+CpG联合应用对肝癌小鼠的治疗效果及机制,并探讨FLT3-L与GM-CSF在肿瘤治疗效果方面的差异。方法:选择小鼠H22肝癌模型为研究对象,分为FLT3-L+CpG组、GM-CSF+CpG组和PBS组。皮下注射给药后,用流式细胞术检测各组小鼠体内免疫细胞激活情况,免疫组化法检测肿瘤组织及局部细胞浸润情况,ELISA法检测小鼠体液免疫激活情况,同时观察各组小鼠生存期的差异,评价各组药物的抗肿瘤效果及可能的作用机制。结果:(1)FLT3-L+CpG组小鼠肿瘤生长明显被抑制,小鼠生存期显著延长,同GM-CSF+CpG组和PBS组相比差异具有统计学意义(P〈0.05)。(2)脾脏淋巴细胞亚群分析显示,FLT3-L+CpG组CD3~+T细胞比例显著上升,CD4~+、CD8~+亚群比例较PBS组与GM-CSF+CpG组均明显上升,CD4~+CD25~+Treg细胞比例明显下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。(3)肿瘤组织形态学分析显示,FLT3-L+CpG组可见大片的组织坏死和显著的淋巴细胞浸润。(4)肿瘤局部浸润淋巴细胞表型分析显示,FLT3-L+CpG组肿瘤局部NK细胞、DC细胞、CD8~+T细胞明显增加,较各治疗组均有明显变化,与PBS相比差异有统计学意义(P〈0.05)。(5)FLT3-L+CDG组与GM-CSF+CpG组小鼠体内细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12均明显升高(P〈0.05)。结论:FLT3-L+肿瘤抗原+CpG联合应用可发挥明显的抗肿瘤作用。此方案可能通过打破肿瘤免疫耐受,激活和增加循环中T细胞,并趋化NK细胞、DC细胞、CD8~+T细胞到肿瘤局部,发挥杀伤肿瘤细胞的作用:同时可活化免疫因子网络,通过细胞免疫和体液免疫共同发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 肝癌 fms样酪氨酸激酶3配体 肿瘤抗原 CPG GM-CSF 免疫耐受
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不同细胞因子诱导的小鼠骨髓树突状细胞亚群与小鼠脾脏树突状细胞亚群的比较 被引量:2
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作者 徐琦 丁剑冰 +1 位作者 马秀敏 薛志琴 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期661-664,共4页
目的对粒-单集落刺激因子(GM-CSF)/白介素4(IL-4)或脱氧氟胸腺嘧啶配体(Flt3-L)体外诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)亚群和正常小鼠脾脏DC亚群进行比较,探索诱生DC的特性。方法分离Balb/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF/IL-... 目的对粒-单集落刺激因子(GM-CSF)/白介素4(IL-4)或脱氧氟胸腺嘧啶配体(Flt3-L)体外诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)亚群和正常小鼠脾脏DC亚群进行比较,探索诱生DC的特性。方法分离Balb/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF/IL-4或Flt3-L的培养液,体外培养7d,倒置显微镜观察细胞形态,并用流式细胞术检测CD11c、MHCⅡ、CD4、CD8α、CD45RA及Sirp-α分子;利用免疫磁珠从小鼠脾脏细胞中分离DC。结果两组细胞因子均可在体外诱导小鼠骨髓细胞分化发育为未成熟的DC;倒置显微镜下观察可见BMDCs表面有树突状突起,具有典型的DC形态学特点,与Flt3-L诱导的BMDC相比GM-CSF/IL-4诱导的DC体积大,树突长;但是,流式细胞术检测发现Flt3-L体外诱导的BMDCs与小鼠脾脏DC亚群更为相似。结论 GM-CSF/IL-4及Flt3-L均可在体外诱导小鼠骨髓细胞分化发育为DC,且Flt3-LDC亚群与脾脏DC亚群相似,有可能成为体外研究脾脏来源DC的一种方法。 展开更多
关键词 树突状细胞 细胞亚群 小鼠脾脏 Flt3-L
联合输注Flt3-L和GM-CSF表达质粒体内诱导小鼠DC的研究 被引量:3
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作者 苏舒 薛萌 +1 位作者 曹萌 王立新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期 515-517,521,共4页
目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等... 目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表面标志以鉴定DC的比例及亚型;将体内诱导DC与HBsAg共孵育,然后刺激HBsAg预免疫小鼠的脾细胞并检测其分泌IFN-的水平。结果:联合输注Flt3-L和GM-CSF质粒小鼠的脾细胞达到4×108个细胞/脾脏、其中CD11c+细胞占20%以上,CD11c+细胞中CD11b+、CD11b-、B220+、CD8+、NK1.1+细胞的比例分别达17%、10%、26%、16%、7%左右;体内诱导DC负载HB-sAg后刺激HBsAg特异性淋巴细胞分泌IFN-γ的水平明显高于HBsAg单独刺激组。结论:采用小鼠尾静脉注射技术输注Flt3-L及GM-CSF质粒能够诱导CD11c+ DC的产生并包含多种亚型,体内诱导DC具备有效的抗原提呈功能。 展开更多
关键词 Flt3-L GM-CSF 真核表达质粒 树突状细胞 体内诱导 小鼠
小鼠Flt-3L基因的分子克隆及其真核表达载体的构建 预览
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作者 周翠珍 王微 +1 位作者 刘丽 武杰 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第3期 60-61,共2页
本试验通过RT-PCR的方法,从小鼠脾脏细胞总RNA中扩增出目的基因Flt-3L,并通过酶切-连接的方法将其连接到真核生物表达载体pcDNA3.1A上,构建了重组的质粒表达载体。为了证明重组质粒上含有目的基因,用Kpn I和Apa I酶切重组后的质粒... 本试验通过RT-PCR的方法,从小鼠脾脏细胞总RNA中扩增出目的基因Flt-3L,并通过酶切-连接的方法将其连接到真核生物表达载体pcDNA3.1A上,构建了重组的质粒表达载体。为了证明重组质粒上含有目的基因,用Kpn I和Apa I酶切重组后的质粒,结果显示酶切后的片段大小与目的基因片段大小一致。经测序分析,所扩增的目的基因片段与GenBank中的基因序列完全一致,表明本试验成功地扩增了此目的基因并构建了该基因的真核表达载体。 展开更多
关键词 小鼠Flt-3L 表达载体 基因 克隆
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