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合肥市1例输入性卵形疟病例分析
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作者 王林 李婷婷 +2 位作者 汪清 李中良 刘漪 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期226-228,共3页
目的对合肥市1例输入性卵形疟病例进行流行病学调查和实验室诊断分析,为今后预防控制输入性疟疾提供参考依据。方法对该例输入性卵形疟患者的流行病学史、诊疗经过等资料进行收集、整理和分析。结果患者从非洲莫桑比克务工返乡,回国数... 目的对合肥市1例输入性卵形疟病例进行流行病学调查和实验室诊断分析,为今后预防控制输入性疟疾提供参考依据。方法对该例输入性卵形疟患者的流行病学史、诊疗经过等资料进行收集、整理和分析。结果患者从非洲莫桑比克务工返乡,回国数月后因反复发热就医。快速诊断试纸条法(RDT)提示为非恶性疟原虫感染;镜检见被感染红细胞正常大小或略胀大、锯齿状不明显,大滋养体胞浆增多、形态不规则、基本无空泡。荧光定量PCR确诊该病例为卵形疟原虫感染。结论临床医务人员应加强对有境外流行区生活及工作史人员的疟疾诊断意识,及时早期合理用药,防止疟疾疫情扩散。 展开更多
关键词 卵型疟 输入性病例 镜检 快速诊断试纸条法 荧光定量PCR
基于转录组测序技术挖掘大豆蛋白质合成相关基因 预览 被引量:1
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作者 郭静文 史晓蕾 +8 位作者 刘茜 赵青松 邸锐 刘兵强 闫龙 王凤敏 张孟臣 赵宝华 杨春燕 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期61-73,共13页
通过转录组测序技术挖掘蛋白质合成相关基因,为解析蛋白质合成机制奠定基础。以遗传背景相近但蛋白含量差异较大的大豆高蛋白品系冀HJ117(蛋白质含量52. 99%)及其回交亲本冀豆12(蛋白质含量46. 48%)为研究材料,利用转录组测序技术和生... 通过转录组测序技术挖掘蛋白质合成相关基因,为解析蛋白质合成机制奠定基础。以遗传背景相近但蛋白含量差异较大的大豆高蛋白品系冀HJ117(蛋白质含量52. 99%)及其回交亲本冀豆12(蛋白质含量46. 48%)为研究材料,利用转录组测序技术和生物信息学分析,以期挖掘大豆籽粒蛋白质合成相关基因。通过对转录组数据中冀HJ117和冀豆12差异表达基因的分析筛选,共得到336个差异表达基因,其中冀HJ117较冀豆12有195个上调表达基因,141个下调表达基因。通过GO功能富集分析,发现在分子功能类型中注释的差异基因主要与催化和连接等功能相关;KEGG显著富集分析发现差异表达基因主要富集在蛋白质内质网合成途径中,该途径共筛选到34个差异表达基因,其中33个基因在冀HJ117中表达量较高。从该途径中筛选出9个候选基因,采用荧光定量PCR方法检测其表达量,表达趋势与RNA-Seq检测结果基本一致,证实了RNA-Seq数据的可靠性。RNA-Seq测序结果获得了与蛋白质合成相关基因的基本信息,蛋白质内质网合成途径可能是冀HJ117与冀豆12蛋白质含量产生差异的重要通路。 展开更多
关键词 大豆 蛋白质含量 转录组测序 差异表达基因 荧光定量PCR
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血清microRNA-224-3p在结直肠癌中的表达及临床研究 预览
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作者 朱莹 王亚南 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第13期1548-1552,共5页
目的探讨microRNA-224-3p(miR-224-3p)在结直肠癌患者血清中的表达及临床意义。方法采用荧光定量PCR(SYBRGreen法)检测miR-224-3p在50例结直肠癌患者和44例健康者(健康对照组)血清中的表达量。结果血清miR-224-3p在健康对照组中的相对... 目的探讨microRNA-224-3p(miR-224-3p)在结直肠癌患者血清中的表达及临床意义。方法采用荧光定量PCR(SYBRGreen法)检测miR-224-3p在50例结直肠癌患者和44例健康者(健康对照组)血清中的表达量。结果血清miR-224-3p在健康对照组中的相对表达量中位数(四分位数)为1.04(0.80~1.40),在结直肠癌组中相对表达量为2.01(0.92~3.05),差异有统计学意义(P<0.05)。对结直肠癌患者的病理参数进行进一步分析发现,血清miR-224-3p在癌胚抗原(CEA)<10ng/mL的分组中相对表达量中位数(四分位数)为1.47(0.84~2.56),在CEA>10ng/mL的分组中相对表达量为2.96(2.22~3.39),差异有统计学意义(P<0.05),miR-224-3p和CEA联合检测,可以提高诊断的准确性。血清miR-224-3p在不同预后情况以及CEA表达水平中差异有统计学意义(P<0.05),提示血清miR-224-3p可用于结直肠癌患者的预后判断。结论在结直肠癌患者的血清中,miR-224-3p的表达量高于健康者,与CEA联合检测,有望用于结直肠癌的辅助诊断,也可用于结直肠癌的预后判断。 展开更多
关键词 结直肠癌 microRNA-224-3p 荧光定量PCR
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荧光定量PCR方法与血清学方法在原料血浆及血液制品中B19污染诊断的比较评价
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作者 余燕 梁蔚阳 +1 位作者 邓锋 何昕 《中国药师》 CAS 2019年第5期976-978,共3页
目的:比较实时荧光定量PCR与血清学检测特异性抗体IgG和IgM在原料血浆及血液制品中人细小病毒B19的检测;评价两种方法在血液制品中检测人细小病毒B19的意义。方法:选取B19病毒3种基因型保守区设计引物,建立特异性和敏感性较强的荧光定量... 目的:比较实时荧光定量PCR与血清学检测特异性抗体IgG和IgM在原料血浆及血液制品中人细小病毒B19的检测;评价两种方法在血液制品中检测人细小病毒B19的意义。方法:选取B19病毒3种基因型保守区设计引物,建立特异性和敏感性较强的荧光定量PCR方法,用病毒核酸提取试剂盒对400批次原料血浆及血液制品进行病毒核酸提取,采用建立的实时荧光定量PCR对400批次样品中的核酸进行B19筛查;采用酶联免疫法检测原料血浆及血液制品中原液中进行IgG和IgM检测。结果:400批次原料血浆及血液制品中有5批次同时为B19DNA阳性及IgG、IgM抗体均为阳性;有2批次为B19DNA阳性及IgG抗体为阳性,但IgM为阴性;仅有1批次为B19DNA阳性及IgM抗体为阳性,但IgG为阴性;还有4批次B19DNA阴性,IgG抗体为阳性,IgM抗体为阴性。结论:两种方法均可用在检测血液制品的人细小病毒B19的检测,且荧光定量PCR方法与血清学诊断方法有互补作用。 展开更多
关键词 血液制品 荧光定量PCR IgG抗体 IgM抗体
建立检测疟疾的微滴数字PCR方法
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作者 赵明惠 吴健 +5 位作者 王宁 韩颖 刘伟 徐铁龙 张强 冉鑫 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第3期158-162,共5页
目的建立适合口岸疟疾检测的微滴数字PCR方法。方法根据文献中检测疟原虫的特异性引物和探针,建立检测疟疾的微滴数字PCR方法,与普通PCR及荧光定量PCR进行比较,评估微滴数字PCR的优越性。结果微滴数字PCR检测下限为0.721ng/μl,灵敏度... 目的建立适合口岸疟疾检测的微滴数字PCR方法。方法根据文献中检测疟原虫的特异性引物和探针,建立检测疟疾的微滴数字PCR方法,与普通PCR及荧光定量PCR进行比较,评估微滴数字PCR的优越性。结果微滴数字PCR检测下限为0.721ng/μl,灵敏度比普通PCR高10倍,与荧光定量PCR相当;微滴数字PCR的重复性高于普通PCR,但不如荧光定量PCR稳定。检测的准确性方面,普通PCR对37份已知样本的检测准确率为75.68%,微滴数字PCR和荧光定量PCR均能达到100.00%。结论建立了检测疟疾的微滴数字PCR方法,比普通PCR方法灵敏度、重复性及准确性均有很大优势。 展开更多
关键词 微滴数字PCR 疟疾 数字PCR 荧光定量PCR
杨树枯萎病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 预览
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作者 洒荣波 晁强 +2 位作者 王晓辉 隋君康 刘训理 《山东农业科学》 2019年第2期131-135,共5页
为建立荧光定量PCR检测杨树枯萎病的方法和明确前期分离的拮抗菌N6-34对杨树枯萎病致病菌尖孢镰刀菌的作用,本试验采用常规PCR法扩增尖孢镰刀菌的特异性片段,将此片段与载体连接构建质粒,提取质粒DNA在实时荧光定量PCR仪上采用两步法进... 为建立荧光定量PCR检测杨树枯萎病的方法和明确前期分离的拮抗菌N6-34对杨树枯萎病致病菌尖孢镰刀菌的作用,本试验采用常规PCR法扩增尖孢镰刀菌的特异性片段,将此片段与载体连接构建质粒,提取质粒DNA在实时荧光定量PCR仪上采用两步法进行扩增并绘制实时荧光定量PCR标准曲线,同时对杨树进行不同灌根处理(T1:1×106cfu/mL的尖孢镰刀菌孢子悬液和未接N6-34菌株的发酵培养液各20mL;T2:1×106cfu/mL的尖孢镰刀菌孢子悬液和灭活的N6-34菌株发酵培养液各20mL;T3:1×106cfu/mL的尖孢镰刀菌孢子悬液和N6-34菌株的发酵培养液各20mL),并于10、20、30d取样检测杨树根际尖孢镰刀菌数量。结果表明:本研究建立的方法能应用于土传尖孢镰刀菌导致的杨树枯萎病的检测;T1处理的尖孢镰刀菌的数量随处理时间的延长呈先下降后上升的趋势,T2和T3中的尖孢镰刀菌数量则呈下降趋势,表明N6-34能够抑制尖孢镰刀菌。本研究对指导杨树种植和病害预报具有极为重要的应用价值,能够为杨树病害管理提供科学依据。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 杨树枯萎病 尖孢镰刀菌 定量检测
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基于实时荧光定量PCR和数字PCR的肉制品中牛源性成分检测 预览
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作者 刘艳 王鸣秋 +4 位作者 李诗瑶 朱必婷 杨硕 马弋 张莉 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2019年第7期254-260,共7页
为了能够快速有效的检测出肉制品中牛源性成分,采用实时荧光定量PCR和数字PCR检测方法,检测肉制品中牛源成分。先依据牛肉单复制基因组特异区域,通过多序列比对设计特异性引物与探针,再利用苯酚-氯仿法提取标准品基因组DNA,确立实时荧... 为了能够快速有效的检测出肉制品中牛源性成分,采用实时荧光定量PCR和数字PCR检测方法,检测肉制品中牛源成分。先依据牛肉单复制基因组特异区域,通过多序列比对设计特异性引物与探针,再利用苯酚-氯仿法提取标准品基因组DNA,确立实时荧光定量PCR和数字PCR两种方法的反应条件,测定DNA模版纯度及浓度可得实验提取的DNA溶液不含杂质,在此基础上构建牛源性成分荧光定量PCR标准曲线,检测两种方法的特异性、抗干扰性与肉制品中牛源性成分。分析实验结果可知,引物与探针在两种方法中均对牛肉有荧光信号显示,两种方法具有牛源性特异性,检测数值与实际样品数值基本一致,且两种方法抗干扰性较好,当存在其他肉类干扰时,仍可准确监测出牛源性,两种方法的最大误差分别为3.8%和4.0%;可定量检测不同肉制品中牛源性成分,两种方法均未检测出样品10牛肉丸中牛源性成分,验证了市面上确实存在假肉情况。说明所用方法能够准确、快速地检测出肉制品中的牛源性成分,适用于市场中肉制品的检测,对保障消费者的权益和健康具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 数字PCR 肉制品 牛源性成分 检测 特异性
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IL1RAP在健康奶牛与患子宫内膜炎奶牛子宫内膜组织间表达差异的研究 预览
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作者 陈秀竹 常迪 +9 位作者 黄启震 王瑞 王天坤 盛熙晖 齐晓龙 王相国 郭勇 刑凯 倪和民 谷传慧 《北京农学院学报》 2019年第2期77-81,共5页
【目的】为了探明IL1RAP与奶牛子宫内膜炎的关系。【方法】分别采集3头健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛的子宫组织,利用荧光定量PCR和western blot检测IL1RAP在两者间的表达差异。【结果】健康奶牛子宫组织中IL1RAP mRNA的相对表达量显著高... 【目的】为了探明IL1RAP与奶牛子宫内膜炎的关系。【方法】分别采集3头健康奶牛和患子宫内膜炎奶牛的子宫组织,利用荧光定量PCR和western blot检测IL1RAP在两者间的表达差异。【结果】健康奶牛子宫组织中IL1RAP mRNA的相对表达量显著高于患子宫内膜炎奶牛子宫组织中IL1RAP的相对表达量(P<0.05)。健康奶牛子宫组织中IL1RAP蛋白的相对表达量极显著高于患子宫内膜炎奶牛子宫组织中IL1RAP蛋白的相对表达量。【结论】IL1RAP基因在患子宫内膜炎子宫组织中的相对表达量显著低于健康奶牛,结果为初步证实IL1RAP为奶牛子宫内膜炎的抗性基因提供试验数据。 展开更多
关键词 奶牛子宫内膜炎 IL1RAP 荧光定量PCR western BLOT
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大黄素对急性肾损伤大鼠肠道菌群的调节作用
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作者 孙蒋 罗静雯 +3 位作者 姚文杰 骆晓婷 苏辰霖 魏颖慧 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期758-764,共7页
该文研究大黄素对急性肾损伤(AKI)大鼠肠道菌群的调节作用。36只健康雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(盐酸贝那普利5 mg·kg^-1)和大黄素低(10 mg·kg^-1)、中(25 mg·kg^-1)、高(50 mg·kg^-1)剂量组。除... 该文研究大黄素对急性肾损伤(AKI)大鼠肠道菌群的调节作用。36只健康雄性大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(盐酸贝那普利5 mg·kg^-1)和大黄素低(10 mg·kg^-1)、中(25 mg·kg^-1)、高(50 mg·kg^-1)剂量组。除正常组外,其余各组采用腹腔注射硫酸庆大霉素损伤肾组织构建急性肾损伤模型,连续注射7 d,1次/d,腹腔注射2 h后,除模型组和正常组用生理盐水灌胃,其余各组分别用相应剂量药物灌胃给药,持续给药15 d。收集各组大鼠尿液和粪便分别测定尿蛋白总量和4种菌属含量;采集各组大鼠血液进行血液生化指标测定;HE染色观察各组大鼠肾脏组织形态学改变。结果显示,与正常组相比,模型组体质量、尿蛋白总量(UTP)、血浆细菌内毒素、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、血清D-乳酸水平以及4种细菌含量均有显著变化(P<0. 05);与模型组相比,阳性对照组和大黄素各剂量组尿蛋白总量、尿素氮、血清D-乳酸水平、肌酐和血浆细菌内毒素均有所下降,以大黄素高剂量组下降最为显著(P<0. 01),肾脏病理修复情况最好;除大黄素低剂量组外,各给药组大肠杆菌及肠球菌数量显著下降(P<0. 05),乳酸菌及双歧杆菌明显升高(P<0. 05),以大黄素高剂量组变化最为明显(P<0. 01)。研究发现急性肾损伤大鼠(AKI)存在较明显的肠道菌群失调,大黄素对AKI大鼠肠道菌群失衡有一定的调节作用,这可能是其治疗急性肾损伤的作用机制之一。 展开更多
关键词 大黄素 急性肾损伤 肠道菌群 荧光定量PCR
长效重组人生长激素纯化液中CHO-K1细胞残留DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证
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作者 刘莹 刘玉林 +5 位作者 俞露 刘涵 刘云南 王莹 刘琳琳 王宇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期688-693,共6页
目的建立检测CHO-K1细胞表达长效重组人生长激素(Fc-recombinant human growth hormone,Fc-rhGH)纯化液中残留DNA的实时荧光定量PCR方法,并进行验证。方法提取CHO-K1细胞基因组DNA,特异性PCR扩增后,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒,以... 目的建立检测CHO-K1细胞表达长效重组人生长激素(Fc-recombinant human growth hormone,Fc-rhGH)纯化液中残留DNA的实时荧光定量PCR方法,并进行验证。方法提取CHO-K1细胞基因组DNA,特异性PCR扩增后,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒,以其为标准品,建立实时荧光定量PCR检测方法;并对方法进行灵敏度、线性、准确度、精密度、特异性及耐用性验证。结果建立的方法灵敏度可达2. 6×10~1 copies/μL。标准曲线的回归方程为y=-3. 487 x+30. 201,R~2=0. 999;检测样品中DNA回收率在73. 56%~101. 87%范围内,RSD均小于10%;该方法可特异性扩增CHO-K1细胞的基因组DNA,而Vero细胞、MDCK细胞、Wish细胞及大肠埃希菌等基因组DNA均未见明显的扩增;样品精密度测定Ct的RSD在0. 4%~2. 95%之间;于两种不同PCR仪器上检测标准品,扩增效率分别为98%、99%,相关系数R~2均为0. 999。结论成功建立了一种检测CHO-K1细胞表达Fc-rhGH纯化液的残留DNA的实时荧光定量PCR方法,该方法具有较好的灵敏度、线性、准确度、精密度、特异性和耐用性。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 重组人生长激素 CHO-K1细胞 残留DNA
辣椒胞质雄性不育系CaCOX3的克隆与表达分析 预览
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作者 王姣 张水 +2 位作者 张婧柔 邵贵芳 邓明华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1-6,共6页
探究线粒体呼吸链第4个复合体亚基细胞色素氧化酶第三亚基(COX3)与辣椒胞质雄性不育之间的关系,为研究辣椒CMS与能量代谢的关系提供参考。以辣椒胞质雄性不育系9704A和保持系9704B为材料,根据GenBank报道的辣椒线粒体基因组序列,设计特... 探究线粒体呼吸链第4个复合体亚基细胞色素氧化酶第三亚基(COX3)与辣椒胞质雄性不育之间的关系,为研究辣椒CMS与能量代谢的关系提供参考。以辣椒胞质雄性不育系9704A和保持系9704B为材料,根据GenBank报道的辣椒线粒体基因组序列,设计特异引物扩增CaCOX3,进行生物信息学分析,并研究其时空表达特性,比较两系间的差异。在辣椒胞质雄性不育系9704A和保持系9704B中克隆获得的目的基因CaCOX3,全长均为798bp,编码265个氨基酸残基;辣椒保持系9704B不同组织中,CaCOX3表达存在差异,果皮中表达最高,叶中表达最低。在不同的花蕾发育时期,两系CaCOX3表达存在差异。胞质雄性不育系9704A的造孢细胞增殖期和花粉母细胞减数分裂期,CaCOX3的表达量明显低于保持系9704B;在小孢子单核期,两系CaCOX3的表达量持平;在小孢子成熟期,胞质雄性不育系明显高于保持系。CaCOX3在辣椒胞质雄性不育9704A和保持系9704B的时空表达存在差异,可能引起能量代谢异常,造成不育。 展开更多
关键词 辣椒 胞质雄性不育 CaCOX3 荧光定量PCR
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荧光定量PCR在预测微生物学中的应用 预览
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作者 牛犇 洪斌 +3 位作者 穆丽丽 刘海泉 潘迎捷 赵勇 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第5期275-282,共8页
食品微生物是影响食品安全的重要因素之一,快速准确预测食品加工和贮存过程中的微生物变化对食品风险评估具有重要意义。本文首先介绍了荧光定量PCR技术的历史及其发展,着重介绍了荧光染料法和水解探针法的基本原理,讨论了其优缺点并对... 食品微生物是影响食品安全的重要因素之一,快速准确预测食品加工和贮存过程中的微生物变化对食品风险评估具有重要意义。本文首先介绍了荧光定量PCR技术的历史及其发展,着重介绍了荧光染料法和水解探针法的基本原理,讨论了其优缺点并对其应用进行总结和展望。然后介绍了预测微生物学的历史及其发展,同时对一二三级模型进行了归纳和分类,并讨论预测模型的意义及在食品领域研究所需要注意的问题。最后介绍了荧光定量PCR技术在预测微生物学中的应用,归纳了当前国内外研究的现状,并指出发展缓慢的可能原因,提出荧光定量PCR技术只停留在检测层面并没有很好用于预测微生物学模型的构建。通过本综述以期推动荧光定量PCR技术在预测微生物学领域的全面应用,进而推动预测微生物学的进一步发展。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 分子预测模型 预测微生物学
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稻-稻-油菜轮作对土壤枯草芽孢杆菌数量的影响研究 预览
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作者 王璟 杨敬林 +3 位作者 廖健程 丁鑫 陈哲 张立成 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期43-49,162共8页
为检测长期进行稻-稻-油菜轮作土壤中枯草芽孢杆菌的数量变化,以长期稻-稻连作土壤为对照比较。在连续30年轮作和连作的大田(湖南安仁试验基地)进行试验,应用荧光定量PCR技术,对两类土壤中的枯草芽孢杆菌的数量进行检测。试验于2015年7... 为检测长期进行稻-稻-油菜轮作土壤中枯草芽孢杆菌的数量变化,以长期稻-稻连作土壤为对照比较。在连续30年轮作和连作的大田(湖南安仁试验基地)进行试验,应用荧光定量PCR技术,对两类土壤中的枯草芽孢杆菌的数量进行检测。试验于2015年7月、10月和2016年4月3个时期对定点试验土壤进行取样。通过枯草芽孢杆菌特异性引物进行荧光定量PCR扩增。3个时期采样土壤的检测结果:轮作土壤中枯草芽孢杆菌数量比连作土壤分别增加37.50%,27.06%和20.20%;轮作和连作2015年7月采样土壤中枯草芽孢杆菌数量大于2016年4月采样土壤测定值,大于2015年10月采样土壤测定值。研究结果表明稻-稻-油菜轮作提高了土壤枯草芽孢杆菌的数量,使土壤中对作物生长有益的特定功能微生物数量增加,有利于改善土壤生态环境。 展开更多
关键词 稻-稻-油菜轮作 枯草芽孢杆菌 荧光定量PCR 土壤环境
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猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞的克隆和鉴别 预览
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作者 商晓桂 韩志玲 +5 位作者 毕力格 高永伟 闫聪 郝鹏 张贵刚 刘国英 《现代畜牧兽医》 2019年第1期1-6,共6页
本研究采用有限稀释法将ST细胞进行克隆,将获取的单克隆细胞放大培养后接种猪瘟兔化弱毒株(C株),通过实时荧光定量RT-PCR技术定量检测毒液中病毒含量,筛选对猪瘟兔化弱毒株敏感的细胞株。试验结果获得D3株、C4株、C8株、D5株、E10株、E1... 本研究采用有限稀释法将ST细胞进行克隆,将获取的单克隆细胞放大培养后接种猪瘟兔化弱毒株(C株),通过实时荧光定量RT-PCR技术定量检测毒液中病毒含量,筛选对猪瘟兔化弱毒株敏感的细胞株。试验结果获得D3株、C4株、C8株、D5株、E10株、E11株、F9株和H9株共8株ST单克隆细胞。其中,C4株和E11株细胞对C株高度易感,收获毒液RNA拷贝数能够维持在106 copies/mL,并且高峰期毒液拷贝数可达107 copies/mL。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒株(C株) ST細胞 克隆 实时荧光定量RT-PCR
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荧光定量PCR对痰涂片阴性肺结核的临床诊断价值 预览 被引量:2
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作者 李苏梅 包紫薇 +1 位作者 唐佩军 王霞芳 《临床肺科杂志》 2018年第6期977-979,共3页
目的探讨荧光定量PCR检测对痰涂片阴性的肺结核的诊断价值。方法采集180例痰涂片阴性的肺结核病患者及100例非结核性肺部疾病患者(肺炎、肺癌及矽肺患者)的支气管灌洗液(BALF),应用荧光定量PCR检测BALF中的TB-DNA,同时进行BALF结核... 目的探讨荧光定量PCR检测对痰涂片阴性的肺结核的诊断价值。方法采集180例痰涂片阴性的肺结核病患者及100例非结核性肺部疾病患者(肺炎、肺癌及矽肺患者)的支气管灌洗液(BALF),应用荧光定量PCR检测BALF中的TB-DNA,同时进行BALF结核杆菌培养及抗酸染色法检查结核杆菌,比较不同方法对肺结核的临床诊断效率。结果肺结核组中BALF中TB-DNA阳性检出率为62.77%,显著高于BALF抗酸染色法的阳性检出率33.89%(P〈0.05),与BALF结核杆菌培养法无明显统计学差异(P〉0.05),治疗1个月后TB-DNA的阳性检出率也高于抗酸染色法(P〈0.05)。结论荧光PCR定量检测TB-DNA能提高结核杆菌的检出率,可作为诊断及判断疗效的方法。 展开更多
关键词 结核病 支气管肺泡灌洗液 荧光定量PCR TB-DNA
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乌金猪、青峪猪和成华猪免疫器官多种免疫调节基因表达的比较
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作者 张敬梅 顾亦韧 +4 位作者 李江淩 陈晓晖 曾凯 吕学斌 高荣 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第10期43-48,共6页
为了阐明乌金猪、青峪猪和成华猪这些地方猪种繁殖力高、抗病耐逆性强等分子免疫特征,采用实时荧光定量PCR方法,研究乌金猪、青峪猪、成华猪与约克夏猪的胸腺、脾脏、扁桃体、肠系膜淋巴结和肺门淋巴结中的选择素-L(CD62L)、转化生长... 为了阐明乌金猪、青峪猪和成华猪这些地方猪种繁殖力高、抗病耐逆性强等分子免疫特征,采用实时荧光定量PCR方法,研究乌金猪、青峪猪、成华猪与约克夏猪的胸腺、脾脏、扁桃体、肠系膜淋巴结和肺门淋巴结中的选择素-L(CD62L)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和白细胞介素(IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15)mRNA的表达差异。结果显示:成华猪胸腺IL-2、IL-12、IL-6、IL-7、CD62L,脾脏IL-15,扁桃体CD62L,肠系膜淋巴结IL-2,肺门淋巴结TGF-β1 mRNA表达量均显著高于其他猪种(P〈0.05);乌金猪胸腺TGF-β1,脾脏CD62L,扁桃体IL-6、IL-7,肠系膜淋巴结IL-4 mRNA表达量显著高于其他猪种(P〈0.05);青峪猪肺门淋巴结IL-4、CD62L mRNA表达量显著高于其他猪种(P〈0.05)。研究结果为培育抗病力强的动物新品种和筛选抗病分子标记提供科学依据。 展开更多
关键词 细胞因子 荧光定量PCR 基因表达 免疫器官
果胶酶基因剂量效应与水解果胶的工艺研究
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作者 彭小波 杨江科 陈光军 《生物技术》 2018年第2期170-177,共8页
[目的]实现烟曲霉果胶酶AFPG基因在毕赤酵母表达并获得高产菌株;阐述果胶酶AFPG的基因剂量效应;探究果胶的水解工艺。[方法]采用PCR技术从烟曲霉扩增AFPG基因并克隆到p AO815载体;用同尾酶构建多拷贝串联表达盒,经线性化的质粒电转到毕... [目的]实现烟曲霉果胶酶AFPG基因在毕赤酵母表达并获得高产菌株;阐述果胶酶AFPG的基因剂量效应;探究果胶的水解工艺。[方法]采用PCR技术从烟曲霉扩增AFPG基因并克隆到p AO815载体;用同尾酶构建多拷贝串联表达盒,经线性化的质粒电转到毕赤酵母构建重组工程菌;采用实时荧光定量PCR检测AFPG基因拷贝数;用薄层层析(TLC)技术对果胶的酶解产物进行分析。[结果]SDS PAGE分析表明AFPG基因表达了一个约40 kDa的蛋白;拷贝数为2、3、5的重组子摇瓶发酵,蛋白含量分别为0.24 mg/mL、0.28 mg/mL、0.35 mg/mL;14 L高密度发酵比活为8783 U/mg;该酶最适温度和pH为70℃和5.0;在底物浓度0.7%(W/V),酶量20 U,水解果胶30 min,转化率达到12%。[结论]果胶酶AFPG的表达存在基因剂量效应,5拷贝是2拷贝表达量的1.5倍,可通过构建多拷贝获得高产菌株。果胶酶解效果明显,水解工艺研究为果胶酶的应用奠定基础。 展开更多
关键词 果胶酶 基因拷贝数 荧光定量PCR 分泌表达 水解工艺
361例疑似肺孢子菌肺炎患者核酸检测结果分析 预览
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作者 宋兴勃 彭武 +3 位作者 王旻晋 赵珍珍 唐思诗 应斌武 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第18期2242-2245,共4页
目的对四川大学华西医院361例疑似肺孢子菌肺炎(PCP)患者核酸检测结果进行统计分析,分析PCP发病率以及PCP患者年龄、科室和病种分布情况.方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对PCP疑似病例进行核酸检测和诊断,通过实验室信息系统(LI... 目的对四川大学华西医院361例疑似肺孢子菌肺炎(PCP)患者核酸检测结果进行统计分析,分析PCP发病率以及PCP患者年龄、科室和病种分布情况.方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对PCP疑似病例进行核酸检测和诊断,通过实验室信息系统(LIS)和医院信息系统(HIS)收集患者耶氏肺孢子菌(PJ)核酸检测结果和患者临床信息.使用SPSS22.0和EXCLE2007软件对数据进行统计分析.结果361例疑似PCP病例的总体患病率为31.02%(112/361),总体病死率为8.93%(10/112);年龄为31~40岁的疑似病例PCP发病率最高,达46.51%(20/43),41~50岁年龄段PJ核酸检测阳性病例32例(28.75%),占比最高;HIV患者和肾脏病患者的PCP发病率最高.结论PCP发病呈现年轻化趋势,肾脏疾病正成为PCP的高发基础病种. 展开更多
关键词 肺孢子菌肺炎 耶氏肺孢子菌 荧光定量PCR 肺孢子菌核酸检测 发病率
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牛蒡根提取物BP1对Ⅱ型糖尿病大鼠症状的改善作用
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作者 陈希瑞 宋歌 陈靠山 《现代食品科技》 北大核心 2018年第6期1-8,共8页
为了研究牛蒡根提取物BP1对糖尿病的治疗作用,本文分别对wistar糖尿病模型大鼠灌喂阿卡波糖200 mg/kg、生理盐水0.9%、牛蒡根提取物BP1 400 mg/kg、600 mg/kg及800 mg/kg处理,每周监测各组大鼠的死亡情况、体重及空腹血糖,9周后解剖大鼠... 为了研究牛蒡根提取物BP1对糖尿病的治疗作用,本文分别对wistar糖尿病模型大鼠灌喂阿卡波糖200 mg/kg、生理盐水0.9%、牛蒡根提取物BP1 400 mg/kg、600 mg/kg及800 mg/kg处理,每周监测各组大鼠的死亡情况、体重及空腹血糖,9周后解剖大鼠,测血液生化指标;肾脏胰腺部分组织进行石蜡包埋并HE染色,另外取肾脏部分组织于荧光定量PCR使用。结果表明,牛蒡根提取物BP1可在一定程度上恢复糖尿病大鼠的体重,调节大鼠血清血脂,降低糖尿病鼠空腹血糖;电镜观察牛蒡根提取物BP1可以显著增加胰岛β细胞中胰岛素分泌颗粒;另外,BP1可促进IL-18、TNF-α的表达水平明显下调,降低了糖尿病大鼠的肾脏细胞损伤情况;并通过提高SOD酶活性改善糖尿病鼠肾脏及胰腺的氧化损伤情况,对肾脏胰腺器官具有一定保护作用。 展开更多
关键词 牛蒡根提取物 糖尿病 血糖 荧光定量PCR
黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 施开创 尹彦文 +3 位作者 温丽霞 屈素洁 王海清 胡杰 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1447-1452,共6页
【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料... 【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】TaqMan-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:PremixExTaqTM10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL。扩增程序:95℃预变性20s;95℃10s,60℃20s,进行40个循环。该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37%~1.18%,均小于1.20%。采用建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株。【结论】针对mcr-1基因建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。 展开更多
关键词 黏菌素 mcr-1基因 TAQMAN-MGB探针 荧光定量PCR
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