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芥菜型油菜BjuA09DFR基因及其启动子的克隆与转化和表达 预览
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作者 袁玉辉 朱守晶 +4 位作者 邹杰 曾贤军 肖强 徐新仁 刘显军 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期24-31,共8页
该研究利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测了BjuA09DFR基因的时空表达特异性,并通过克隆BjuA09DFR基因启动子片段,构建该基因的启动子GUS融合表达载体,利用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,最后对拟南芥转基因材料不同发育时期的不... 该研究利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测了BjuA09DFR基因的时空表达特异性,并通过克隆BjuA09DFR基因启动子片段,构建该基因的启动子GUS融合表达载体,利用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,最后对拟南芥转基因材料不同发育时期的不同组织部位进行GUS组织化学染色,分析BjuA09DFR基因启动子的表达模式,为BjuA09DFR基因启动子功能的进一步研究提供理论依据。结果表明:(1)BjuA09DFR基因在芥菜型油菜的多个组织部位都有表达,尤其是在叶、花、角果和授粉后15d种子中表达量较高。(2)成功构建了BjuA09DFR基因启动子和GUS基因融合表达载体(pBjuA09DFR∷GUS),采用农杆菌介导法将重组质粒转入野生型拟南芥,经卡那霉素筛选和PCR检测抗性苗,获得转基因拟南芥阳性苗。(3)GUS组织化学分析结果显示,转基因拟南芥材料的GUS活性具有明显的时空特异性,在叶、花、角果和种子中的染色较深,具有很强的GUS活性。 展开更多
关键词 芥菜型油菜 4-二氢黄酮醇还原酶基因(DFR) 启动子 拟南芥转化 GUS组织化学染色
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水稻谷蛋白基因GluC启动子的克隆及表达分析 预览
2
作者 李文静 孙艳香 《植物研究》 CSCD 北大核心 2018年第6期921-930,共10页
水稻谷蛋白仅在水稻种子胚乳中表达,其启动子是分离胚乳特异性表达启动子的理想材料。本研究克隆了GluC基因启动子pGluC,生物信息学分析表明pGluC内部含有胚乳特异性表达所需要的Skn-1 motif和ACGT-box元件。将pGluC启动子和7个5′端缺... 水稻谷蛋白仅在水稻种子胚乳中表达,其启动子是分离胚乳特异性表达启动子的理想材料。本研究克隆了GluC基因启动子pGluC,生物信息学分析表明pGluC内部含有胚乳特异性表达所需要的Skn-1 motif和ACGT-box元件。将pGluC启动子和7个5′端缺失启动子片段构建到pGPTV-GUS载体上,转化水稻愈伤组织,进行组织化学染色和GUS酶活分析。结果表明:全长及截短的-1 911、-1 611、-1 311 bp启动子均能驱动GUS基因在水稻种子胚乳中高效稳定表达。-999、-451、-203、-102 bp启动子失去了胚乳表达特异性,在根、茎或者叶中也检测到GUS表达。该结果为实现外源目的基因在水稻胚乳中特异高效表达提供了理论依据。 展开更多
关键词 水稻 启动子 顺式作用元件 GUS组织化学染色 GUS酶活分析
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水稻GluB-4终止子的克隆与功能分析
3
作者 李文静 冯雪 孙艳香 《植物生理学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1546-1552,共7页
目前转基因常用的终止子大多为细菌或真菌来源,有可能引起转基因食品安全性问题。本研究以水稻(Oryzasativa)‘kitaake’为材料,克隆了谷蛋白B-4基因(GluB-4)的终止子GluB-4-T(GenBank登记号:X14393),分析了其在不同启动子驱动下替代根... 目前转基因常用的终止子大多为细菌或真菌来源,有可能引起转基因食品安全性问题。本研究以水稻(Oryzasativa)‘kitaake’为材料,克隆了谷蛋白B-4基因(GluB-4)的终止子GluB-4-T(GenBank登记号:X14393),分析了其在不同启动子驱动下替代根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)胭脂碱合酶终止子(nos-T)的可能性。β-d-葡糖醛酸酶(GUS)组织化学染色结果表明,GluB-4-T在GluB-3启动子驱动下,未改变GluB-3启动子的组织表达特异性,但GUS表达强度发生了改变;GUS活性分析显示GluB-4-TGUS活性是nos-T的2.4倍。为验证GluB-4-T增强外源基因表达的特性不依赖于上游启动子序列,将其克隆到强的胚乳特异性启动子GluC和组成型启动子OsActin下,GUS活性分别是nos-T的2.0和2.2倍,说明GluB-4-T增强外源基因表达的特性不依赖于上游启动子序列。以上结果表明GluB-4-T在水稻体内发挥正常的转录终止活性,且比nos-T表达活性强,可以作为有效终止子用于遗传转化,避免多基因转化系统中由于转基因同源性过高引起的转基因沉默现象。该结果为实现外源目的基因在水稻胚乳中特异表达提供理论依据。 展开更多
关键词 水稻 GluB-4终止子(GluB-4-T) 胭脂碱合酶终止子(nos-T) GUS组织化学染色 GUS活性分析
棉花半乳糖基转移酶基因GhGalT1启动子的克隆及表达分析 预览 被引量:1
4
作者 秦丽霞 李静 +4 位作者 张换样 李盛 竹梦婕 焦改丽 吴慎杰 《作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期218-226,共9页
糖基转移酶(glycosytransferase,GT)是催化活化的供体糖基转移到特异受体生成糖苷键的酶类,在应答多种生物和非生物胁迫中起重要作用。本研究利用PCR技术从陆地棉品种Coker 312基因组中分离克隆了GhGalT1基因的启动子,序列长度为539 bp... 糖基转移酶(glycosytransferase,GT)是催化活化的供体糖基转移到特异受体生成糖苷键的酶类,在应答多种生物和非生物胁迫中起重要作用。本研究利用PCR技术从陆地棉品种Coker 312基因组中分离克隆了GhGalT1基因的启动子,序列长度为539 bp,命名为pGhGalT1。启动子分析软件PlantCARE分析表明pGhGalT1含有CAAT-box、TATA-box核心元件,以及响应干旱、热、脱水、防御与胁迫应答的顺式作用元件MBS、HSE、MYCCONSE、TC-rich repeats和CGTCA-motif等。因此将pGhGalT1构建到启动子检测载体pBI101-GUS上,形成pBI101-pGhGalT1-GUS融合表达载体,以检测其启动子活性。通过农杆菌介导的浸花法转化拟南芥,经卡那霉素抗性筛选及PCR检测成功获得阳性转基因植株。对T3代转基因拟南芥进行组织化学染色分析显示该启动子主要在生长5~15 d的幼苗主根及侧根根尖表达,在子叶及莲座叶边缘也有微弱表达。非生物胁迫和激素处理后的组织化学染色、GUS酶活性及GUS基因定量分析结果显示GhGalT1基因的启动子受盐、渗透胁迫和激素(6-BA、MeJA、BL)的诱导,该结果为合理选用启动子改良作物提供理论依据。 展开更多
关键词 棉花 糖基转移酶 启动子 顺式作用元件 GUS组织化学染色 GUS定量分析
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白桦APETALA2基因启动子的克隆及其表达分析 预览
5
作者 赵桐 胡晓晴 +3 位作者 朱德财 田晶 辛琪琪 刘雪梅 《植物研究》 CSCD 北大核心 2018年第4期535-542,共8页
APETAIA2(AP2)转录因子亚家族普遍存在于植物中,参与植株的生长发育、胁迫应答和多种生理生化反应的信号传导。本研究从白桦( Betula platyphylla Suk. ) 基因组中克隆了AP2基因2308bp的启动子序列,生物信息学分析发现,该序列除... APETAIA2(AP2)转录因子亚家族普遍存在于植物中,参与植株的生长发育、胁迫应答和多种生理生化反应的信号传导。本研究从白桦( Betula platyphylla Suk. ) 基因组中克隆了AP2基因2308bp的启动子序列,生物信息学分析发现,该序列除具有TATA-box和CAATbox等高等植物普遍具有的保守元件外,还具有大量光响应元件和激素响应元件,如响应赤霉素、脱落酸、茉莉酸甲酯等的元件。将白桦4挖基因启动子克隆至pBI121-35S::GUS植物表达载体中,命名为pBI121+proAP2::GUS,用农杆菌介导法侵染白桦和拟南芥,并进行GUS染色分析,结果表明AP2基因启动子驱动下的GUS报告基因在整个拟南芥中都表达,在自桦的营养器官和雌花种翅及花柄中也有表达,说明其具有启动活性,可能参与该器官的发育。 展开更多
关键词 白桦 AP2 启动子 GUS组织化学染色
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水稻铵转运蛋白基因OsAMT1;2的启动子分析
6
作者 李素梅 施卫明 《土壤》 CSCD 北大核心 2018年第3期455-461,共7页
AMT是介导植物铵态氮高亲和吸收的跨膜蛋白,已报道编码AMT蛋白的大部分基因的表达依赖外界氮水平和环境的调控,但调控的机制目前尚不清楚。水稻的OsAMT1;2基因在氮缺乏条件下强烈诱导表达,因此,本研究从水稻基因组DNA中PCR克隆OsA... AMT是介导植物铵态氮高亲和吸收的跨膜蛋白,已报道编码AMT蛋白的大部分基因的表达依赖外界氮水平和环境的调控,但调控的机制目前尚不清楚。水稻的OsAMT1;2基因在氮缺乏条件下强烈诱导表达,因此,本研究从水稻基因组DNA中PCR克隆OsAMT1;2基因上游1940bp的启动子序列,采用软件和试验分析OsAMT1;2启动子存在的顺式调控元件与外界氮调控的相关性。软件预测结果表明,启动子区域内除含有TATA—box和CAAT-box外,同时含有多种非生物胁迫、生物胁迫、激素响应和光响应相关的顺式作用元件,如Box-w1、MBS、MeJA、TATC和ERE应答元件。将OsAMT1;2启动子的5'端顺序删除获得5个不同缺失片段分别与GUS报告基因融合构成表达载体,通过农杆菌介导转入水稻成熟胚诱导的愈伤组织中获得转基因水稻,T1代植株水平上的GUS活性分析表明,最短启动子片段(_211bp)能够启动GUS表达,但是GUS活性较低,对缺氮效应也不显著;中等长度启动子片段(-763bp)的GUS活性提高,受缺氮诱导显著,且缺氮诱导不再随启动子长度增加而显著增强,说明应答氮响应的顺式作用元件位于-211bp和-763bp之间,非生物胁迫和激素相关的顺式作用元件多在这个区域内,是否与氮的调控存在相关性有待后续进一步证明。 展开更多
关键词 铵转运蛋白AMT OsAMT1 2启动子 顺式作用元件 GUS组织化学染色
黄肿树JcFATA基因组织表达特性及其启动子克隆与表达分析 被引量:2
7
作者 刘颖 杨亚利 +4 位作者 殷学贵 李林峰 朱宏波 陆建农 施玉珍 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期214-221,共8页
植物脂酰一酰基载体蛋白硫酯酶A(fatty acyl acyl carrier thioesterase,FATA)在脂肪酸合成代谢过程中具有重要的调控作用。目前有关黄肿树(Jatropha curcas)脂酰-ACP硫酯酶A基因(JcFATA)和其启动子的表达模式均还未见报道。为... 植物脂酰一酰基载体蛋白硫酯酶A(fatty acyl acyl carrier thioesterase,FATA)在脂肪酸合成代谢过程中具有重要的调控作用。目前有关黄肿树(Jatropha curcas)脂酰-ACP硫酯酶A基因(JcFATA)和其启动子的表达模式均还未见报道。为了研究如硝掰基因的表达模式,本研究利用半定量RT-PCR和实时荧光定量(qRT-PCR)检测了JcFATA基因的时空表达特异性。结果表明,如FATA基因在黄肿树的多个组织部位都有表达,尤其是在根、花和叶中表达量较高。为了分析JcFATA附基因启动子的组织表达模式,本研究将克隆的JcFATA基因启动子片段(PJcFATA)插入到双元表达载体pCAMBIA1300G中,成功构建了JcFATA基因启动子驱动的β-葡糖醛酸酶(β—glucuronidase,Gvs)基因融合表达载体(p1300G—PJcFATA-GUS);通过农杆菌(Agrobacteriumtum efaciens)介导的转化方法将重组质粒转入野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana),经过潮霉素筛选,最后对抗性苗进行PCR检测和GUS组织化学分析。PCR检测结果表明,JcFATA基因启动子片段已经成功整合到拟南芥基因组中(JGD登录号:Jcr4S00539)。对不同发育时期的拟南芥植株进行GUS组织化学染色分析,结果显示GUS活性具有明显的时空特异性,在根、花和叶中的染色较深,有很强的GUS活性。本研究结果为进一步研究JcFATA基因及其启动子功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 黄肿树脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶A基因(JcFATA) 启动子 拟南芥转化 GUS组织化学染色
小麦蛋白磷酸酶2A基因TaPP2AbB″-α启动子的克隆及表达分析 预览 被引量:3
8
作者 扆珩 李昂 +1 位作者 刘惠民 景蕊莲 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1282-1290,共9页
植物蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)由结构亚基A、调节亚基B和催化亚基C组成,在应答逆境胁迫途径中发挥着重要作用。小麦基因Ta PP2Ab B″-α是调节亚基亚家族B″的成员,过量表达该基因可以促进拟南芥的根系生长及侧根发... 植物蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)由结构亚基A、调节亚基B和催化亚基C组成,在应答逆境胁迫途径中发挥着重要作用。小麦基因Ta PP2Ab B″-α是调节亚基亚家族B″的成员,过量表达该基因可以促进拟南芥的根系生长及侧根发育,在盐胁迫和渗透胁迫条件下的作用更显著。本研究从小麦(Triticum aestivum L.)抗旱品种"旱选10号"基因组中克隆了Ta PP2Ab B″-α基因的启动子PB″α,序列长度为1899 bp,含有TATA-box和CAAT-box,以及响应干旱和渗透胁迫的顺式作用元件EECCRCAH1(-1058 bp至-1052 bp)、GCCCORE(-1073 bp至-1068 bp)和MYCCONSE(-1179 bp至-1174 bp)。将启动子PB″α和5种5′端缺失启动子片段与报告基因GUS(β-glucuronidase)连接后转化拟南芥,组织化学染色结果显示PB″α在植株的叶片和根中均有表达。5′端缺失分析表明缺失片段PB″α-1545和PB″α-1389具有启动子活性,活性区域位于-1389 bp和-946 bp之间。GUS定量分析结果显示,在盐和渗透胁迫条件下,PB″α、PB″α-1545和PB″α-1389的活性显著上升。本研究表明PB″α具有较强的启动子基本活性,并且在盐胁迫及渗透胁迫条件下活性显著上升,该结果为合理选用启动子改良作物提供了依据。 展开更多
关键词 小麦 蛋白磷酸酶2A 启动子 顺式作用元件 GUS组织化学染色 GUS定量分析
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大麦与油菜种皮特异启动子表达模式的比较 预览 被引量:1
9
作者 兰欣欣 徐栋生 +1 位作者 贺转转 兰海燕 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期853-862,共10页
启动子位于转录起始位点上游并能特异性地结合RNA聚合酶,其作为调控序列驱动外源基因在异源植物中表达,从而实现转基因的高效性,具有时空表达特异性的启动子对获得有效转基因植物及产物具有重要意义。为了解种皮特异启动子的表达模式,... 启动子位于转录起始位点上游并能特异性地结合RNA聚合酶,其作为调控序列驱动外源基因在异源植物中表达,从而实现转基因的高效性,具有时空表达特异性的启动子对获得有效转基因植物及产物具有重要意义。为了解种皮特异启动子的表达模式,该研究基于前期报道的序列,通过同源克隆的方法分别从大麦和油菜中克隆获得Gerb和Bntt两个种皮特异性启动子,并对其进行生物信息学分析,构建了Gerb::GUS和Bntt::GUS植物表达载体并转化拟南芥,通过组织化学染色观察了GUS的表达情况。结果表明:两种启动子序列中都含有多拷贝种皮特异表达启动子元件以及多种胁迫诱导响应元件;转基因拟南芥幼苗期,大麦Gerb种皮特异启动子驱动GUS全株表达且子叶和下胚轴较真叶和根中表达量高;油菜Bntt种皮特异启动子表达较弱;成株期,Gerb在不同组织(叶片、茎、花序和角果)中均有表达,未显示组织特异性;Bntt仅在叶片及角果维管束中有微弱表达。在各种非生物胁迫下,Gerb表达模式未发生显著变化,而Bntt仅在盐胁迫下显示很强的角果和种子特异性表达,其他胁迫未见明显表达。以上结果显示,大麦种皮特异性启动子Gerb和油菜种皮特异性启动子Bntt在时间和空间表达模式上存在差异,这对今后选择种皮特异启动子具有参考作用,但其具体机制仍需进一步研究验证。 展开更多
关键词 种皮特异启动子 GUS组织化学染色 非生物胁迫 大麦 油菜
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柠条锦鸡儿CkNCED1基因启动子的克隆及表达分析 预览 被引量:7
10
作者 任爱琴 易津 +2 位作者 高洪文 李俊 王学敏 《草业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期165-170,共6页
利用染色体步移(Genome walking)技术,克隆柠条锦鸡儿CkNCED1基因上游启动子序列。经顺式元件预测分析,该序列除基本的启动元件之外,还含有2个脱落酸诱导响应元件ABRE、此外还含有多个逆境相关的元件。将CkNCED1基因启动子区连接到pGW... 利用染色体步移(Genome walking)技术,克隆柠条锦鸡儿CkNCED1基因上游启动子序列。经顺式元件预测分析,该序列除基本的启动元件之外,还含有2个脱落酸诱导响应元件ABRE、此外还含有多个逆境相关的元件。将CkNCED1基因启动子区连接到pGWB533植物表达载体上,构建Promoter::GUS载体,GUS组织化学染色结果表明,CkNCED1基因在植物的叶、根、茎、花和角果的维管组织中均有表达,且在叶片中表达强度最高。以上研究确定了柠条锦鸡儿CkNCED1基因的表达部位和强度。进一步说明CkNCED1基因在ABA合成调控中发挥重要作用,为深入研究基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 柠条锦鸡儿 CkNCED1基因启动子 GUS组织化学染色 ABA响应元件
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农杆菌子房注射法对金钗石斛的活体转化研究 预览 被引量:5
11
作者 刘其府 董会 +4 位作者 曾宋君 陈之林 吴坤林 张建霞 段俊 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期378-382,共5页
对金钗石斛Dendrobium nobile进行人工自花授粉,在授粉之后10、20、30、40、45、50和60d分别将工程化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciensEHA105(pCAMBIA1301)直接注射入子房内部.150d后,金钗石斛蒴果成熟,摘取果实,进行种子β-葡萄... 对金钗石斛Dendrobium nobile进行人工自花授粉,在授粉之后10、20、30、40、45、50和60d分别将工程化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciensEHA105(pCAMBIA1301)直接注射入子房内部.150d后,金钗石斛蒴果成熟,摘取果实,进行种子β-葡萄糖苷酸酶(GUS)染色、无菌播种、潮霉素筛选以及PCR检测试验.结果表明:子房注射对果实发育具有较大影响,在授粉后10~30d进行子房注射后,果实脱落;在授粉后45d进行子房注射,成熟果实注射部位的种子GUS染色率最高,可达18%;无菌播种之后,经潮霉素筛选,获得11株幼苗,每株植株均表现出GUS染色反应;随机挑选4株幼苗进行PCR检测,发现均能扩增出预期条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.农杆菌子房注射法在兰科植物转基因的成功应用,可以为兰科植物育种提供一种简单高效的方法. 展开更多
关键词 金钗石斛 农杆菌子房注射法 GUS组织化学染色 活体转化 PCR检测
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等鞭金藻的电转化体系 被引量:3
12
作者 李海东 仝颜丽 +3 位作者 郑立 王玲 刘峰 郑明刚 《海洋环境科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期677-681,共5页
以等鞭金藻(Isochrysis sp.CCMM5001)为材料,探索了影响其电转化的主要因素,建立了等鞭金藻电转化体系。结果表明,真空抽滤法收集藻体获得的细胞存活率明显高于离心收集法;藻体收集的最适缓冲液为1.0 mmol/L HEPES(pH7.5)(含0.5 mo... 以等鞭金藻(Isochrysis sp.CCMM5001)为材料,探索了影响其电转化的主要因素,建立了等鞭金藻电转化体系。结果表明,真空抽滤法收集藻体获得的细胞存活率明显高于离心收集法;藻体收集的最适缓冲液为1.0 mmol/L HEPES(pH7.5)(含0.5 mol/L蔗糖);相同电场强度下,对数早期的藻细胞存活率最高,早、中、晚期的半致死电场强度分别为0.82~1.63 kV/cm、0.79~1.34 kV/cm、0.54~1.18 kV/cm;最佳脉冲时间为5 ms;冰浴时间为10 min。通过电击转化法向球等鞭金藻中导入质粒pCAMBIA2301,并对转基因球等鞭金藻进行GUS组织化学染色和GUS荧光定量分析,检测pCaMV 35S启动下的GUS报告基因的表达。得到转基因球等鞭金藻的GUS活性为0.52 nmolMU/(min.mg)。通过PCR方法检测固体平板上的单藻落,结果显示转化藻株能够检测到nptII基因。本研究建立了等鞭金藻的电转化体系,为外源基因的导入及其功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 等鞭金藻 电转化 半致死电场强度 存活率 GUS报告基因 GUS组织化学染色 GUS荧光定量分析
獐茅HAK基因表达调控区的分离及其在水稻中的功能分析 预览 被引量:2
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作者 张高华 王鹤 +3 位作者 王旭达 丰明 李怀梅 李树英 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 742-748,共7页
獐茅高亲和性K+转运蛋白基因(AlHAK1)是从单子叶禾本科盐生植物獐茅(Aeluropus littoralis(Gouan)Parl)中克隆,对于细胞营养和离子渗透调节起关键作用。为了进一步了解AlHAK1基因的表达调控机制,文章采用基因组步移法分离了AlHAK... 獐茅高亲和性K+转运蛋白基因(AlHAK1)是从单子叶禾本科盐生植物獐茅(Aeluropus littoralis(Gouan)Parl)中克隆,对于细胞营养和离子渗透调节起关键作用。为了进一步了解AlHAK1基因的表达调控机制,文章采用基因组步移法分离了AlHAK1基因转录起始位点上游长度约1.3 kb的启动子区域。启动子顺式元件分析显示该序列具有典型的TATA和CAAT盒,以及一些与植物生长发育和环境响应相关的顺式元件。为了明确AlHAK1启动子的功能,将其与GUS基因融合构建到植物表达载体pCAMBIA1301上,通过农杆菌介导转化法导入水稻中。对转基因植株进行GUS组织化学染色,结果显示在转化AlHAK1启动子水稻的根、茎、叶、花药和内外稃部位均检测到GUS活性。GUS荧光定量分析显示AlHAK1启动子调节GUS表达活性低于组成型启动子CaMV35S和Ubiquitin,但其根部和茎部的GUS活性相对较高。对转化植株进行不同胁迫处理后检测GUS活性,结果表明受到ABA、干旱、高温的诱导后其茎部和根部GUS活性有所提高,推测位于该启动子-682 bp的HSE元件和-1 268 bp的MybBS元件可能在高温、ABA和干旱诱导的表达调控中起作用。 展开更多
关键词 獐茅 高亲和性K+转运蛋白基因(HAK1) 启动子克隆 顺式元件分析 GUS组织化学染色
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水稻HTD1基因启动子在转基因拟南芥中的表达特征 预览
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作者 江海湃 张淑英 +4 位作者 王术 邹军煌 李刚 谢旗 王伯伦 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期447-449,470共4页
通过分析β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,GUS)基因产物,对水稻HIGH-TILLERING DWARF1(HTD1)基因启动子在转基因拟南芥中的表达特性进行初步研究。用已构建的含HTD1基因启动子和GUS报告基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化... 通过分析β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,GUS)基因产物,对水稻HIGH-TILLERING DWARF1(HTD1)基因启动子在转基因拟南芥中的表达特性进行初步研究。用已构建的含HTD1基因启动子和GUS报告基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色,观察该启动子的表达特性。结果表明,在HTD1基因启动子的驱动下,GUS报告基因主要在转基因拟南芥幼苗期的叶片、叶柄、下胚轴以及主根基部的维管组织中表达。 展开更多
关键词 拟南芥 HTD1基因 启动子 GUS组织化学染色
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根癌农杆菌介导Barnase基因转化‘美人指’葡萄的研究 预览 被引量:8
15
作者 杨丽娜 刘捷 +3 位作者 庄智敏 章镇 周蓓蓓 陶建敏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期 31-35,共5页
以‘美人指’葡萄离体叶片及叶柄为农杆菌介导转化Barnase基因的受体,对农杆菌侵染时间、共培养时间、预培养时间、卡那霉素选择压以及头孢霉素浓度等因素进行了研究。结果表明:最佳的农杆菌介导‘美人指’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵... 以‘美人指’葡萄离体叶片及叶柄为农杆菌介导转化Barnase基因的受体,对农杆菌侵染时间、共培养时间、预培养时间、卡那霉素选择压以及头孢霉素浓度等因素进行了研究。结果表明:最佳的农杆菌介导‘美人指’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4min,共培养3d,预培养3d,卡那霉素选择压3.0mg·L^-1,头孢霉素质量浓度250mg·L^-1。采用此体系对‘美人指’葡萄进行转化,共获得了12株抗性苗,农杆菌感染后的不定芽再生率为1.78%。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法进行检测,结果表明,其中只有2株GUS染色呈阳性,阳性率为16.67%;有3株通过了PCR检测,初步证实Barnase基因已经整合进入‘美人指’葡萄基因组中。 展开更多
关键词 '美人指’葡萄 Barnase基因 GUS组织化学染色 PCR检测
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油菜质膜水孔蛋白BnPIP1基因启动子区的克隆及初步的功能分析 被引量:6
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作者 于秋菊 杜丽 《中国科学:C辑》 CSCD 北大核心 2002年第6期519-526,T001共9页
利用双链接头介导PCR的染色体步行技术,克隆了油菜质膜水孔蛋白BnPIP1基因上游1.6kb的调控区域(GenBank登录号为AF472487)。序列分析表明,该片段中含有种子萌发特异性序列及维管束特异性序列。将其全长片段及5'端不同长度的缺... 利用双链接头介导PCR的染色体步行技术,克隆了油菜质膜水孔蛋白BnPIP1基因上游1.6kb的调控区域(GenBank登录号为AF472487)。序列分析表明,该片段中含有种子萌发特异性序列及维管束特异性序列。将其全长片段及5'端不同长度的缺失片段与ugs(uidA)基因连接构建植物表达载体,转化烟草。GUS组织化学染色表明,全长1.6kb片段具有较强的启动子活性。GUS染色主要分布在细胞迅速增生的部位及维管束组织中。启动子缺失试验的GUS染色结果表明,-1610-1030bp区段的缺失使gus基因的表达明显变弱,推测该区段含有启动子的正调控元件;-1030-902bp可能存在强烈抑制基因表达的负调控元件;-902-19bp的片段亦可驱动gus基因的高水平表达。 展开更多
关键词 油菜 质膜 BnPIP1基因 水孔蛋白 启动子 功能分析 基因克隆 GUS组织化学染色
CUS组织化学染色法——一种快速筛选抗二化暝转Bt cry1Ab基因水稻的方法 预览 被引量:9
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作者 吴刚 叶恭银 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期 141-143,共3页
关键词 转基因水稻 杭药性 二化螟 GUS组织化学染色
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