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巨龙竹木质素合成关键基因CCoAOMT的克隆及表达分析
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作者 陈凌娜 郭晓娟 杨汉奇 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期476-484,共9页
咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT,caffeoyl-CoA O-methyltransferase)是木质素合成过程中关键酶之一。研究通过逆转录PCR(RT-PCR)从巨龙竹(Dendrocalamus sinicus L.C.Chia&J.L.Sun)发育早期的竹笋中克隆了CCoAOMT基因(DsCCoAOMT)... 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT,caffeoyl-CoA O-methyltransferase)是木质素合成过程中关键酶之一。研究通过逆转录PCR(RT-PCR)从巨龙竹(Dendrocalamus sinicus L.C.Chia&J.L.Sun)发育早期的竹笋中克隆了CCoAOMT基因(DsCCoAOMT),基因全长cDNA序列为777 bp,编码258个氨基酸,理论分子量28.85 kD,等电点为5.35,蛋白质结构预测的结果显示该蛋白含有丰富的α-螺旋和无规则卷曲。系统进化分析表明,巨龙竹CCoAOMT基因与禾本科植物CCoAOMT基因同源性最高,亲缘关系最近;与非禾本科单子叶植物的亲缘关系次之,然后是裸子植物,与双子叶植物的亲缘关系最远,说明CCoAOMT基因在双子叶植物和单子叶植物之间的差异可能在被子植物进化之前就已经存在。DsCCoAOMT基因密码子偏好性分析的结果显示,该基因选择偏性较强且偏好以G/C结尾;密码子使用频率比较结果发现,DsCCoAOMT基因在微生物中异源表达分析时采用酵母表达系统更为合适,而模式植物拟南芥、烟草、番茄与巨龙竹CCoAOMT密码子使用频率差异较小,尤其烟草、番茄可能是该基因进行转基因功能验证时最为理想的受体。实时荧光定量PCR分析巨龙竹不同组织及竹笋发育过程中DsCCoAOMT基因表达水平的结果显示,该基因在巨龙竹不同组织中的表达具有明显差异,竹笋中表达量最高,茎秆中次之,叶片中最少;随着竹笋的发育,DsCCoAOMT基因的表达量上调并在竹笋发育中期维持较高水平,表明DsCCoAOMT基因可能在巨龙竹快速生长中发挥重要调节作用。本研究的结果为进一步阐明DsCCoAOMT基因的功能和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 巨龙竹 CCOAOMT 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
溆浦鹅ADSL基因的克隆及其结构与表达分析
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作者 刘耀文 柳序 +3 位作者 曲湘勇 郭松长 贺长青 蒋隽 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期289-296,共8页
腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase, ADSL)属于天冬氨酸酶/延胡索酸酶超级家族成员,在嘌呤核苷酸起始合成和嘌呤核苷酸循环中发挥重要作用,同时对改善肌肉风味具有重要意义。为研究溆浦鹅(Anser cygnoides)ADSL在不同组织中的表... 腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase, ADSL)属于天冬氨酸酶/延胡索酸酶超级家族成员,在嘌呤核苷酸起始合成和嘌呤核苷酸循环中发挥重要作用,同时对改善肌肉风味具有重要意义。为研究溆浦鹅(Anser cygnoides)ADSL在不同组织中的表达规律,本研究以溆浦鹅为实验对象,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技术对溆浦鹅ADSL基因序列进行克隆,并对其核酸序列及蛋白进行生物信息学分析,同时利用qRT-PCR技术检测ADSL基因在80日龄溆浦鹅不同组织中的表达量。结果显示,克隆获得的溆浦鹅ADSL基因序列(GenBank No. MK161097)全长为1 496 bp,其中5’UTR为202 bp,3’UTR为31 bp,ORF为1 263 bp,编码420个氨基酸,无信号肽位点,属于非分泌蛋白;亚细胞定位预测结果显示,该基因主要存在于细胞质中,为不稳定亲水性蛋白;同源性分析显示,溆浦鹅ADSL基因与浙东白鹅、绿头鸭(Anas platyrhynchos)、原鸡(Gallus gallus)、野鸽(Columba livia)的同源性分别为99.68%、88.33%、85.64%、82.24%,以该基因构建系统发育树,发现溆浦鹅与浙东白鹅的亲缘关系最近,其次是绿头鸭和原鸡,与哺乳动物的亲缘关系较远;ADSL基因在各组织中的表达结果显示,该基因在各组织中均有表达,表达量由高至低依次为胸肌、腿肌、肝脏、皮脂、腹脂,其中胸肌表达量显著高于皮脂、腹脂(P<0.05)。本研究结果为进一步研究溆浦鹅ADSL基因在鹅肉品质中的作用机制提供了参考资料。 展开更多
关键词 溆浦鹅 腺苷琥珀酸裂解酶基因(ADSL) 克隆 基因表达
西农萨能奶山羊TRIB3基因克隆及RNA干扰分析
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作者 潘坛 吕明 +1 位作者 罗军 李聪 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1392-1400,共9页
TRIB3 (tribbles pseudokinase 3)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶样蛋白,常作为脂质代谢的负调控因子参与胰岛素信号转导途径,调控机体的脂质代谢。本研究旨在获得西农萨能奶山羊(Capra hircus)TRIB3基因序列并阐明其结构,通过RNAi技术干扰TR... TRIB3 (tribbles pseudokinase 3)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶样蛋白,常作为脂质代谢的负调控因子参与胰岛素信号转导途径,调控机体的脂质代谢。本研究旨在获得西农萨能奶山羊(Capra hircus)TRIB3基因序列并阐明其结构,通过RNAi技术干扰TRIB3基因表达,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响。以西农萨能奶山羊乳腺组织为实验材料,利用RT-PCR方法对TRIB3基因进行克隆,并进行生物信息学分析,研究结果表明,奶山羊TRIB3基因完整CDS区为1 074 bp (GenBank No.MK158243),编码357个氨基酸;蛋白分子量为39.6 ku,等电点为7.8,为不稳定蛋白;TRIB3存在36个磷酸化位点,无信号肽和跨膜螺旋结构;同源性分析显示,西农萨能奶山羊与绵羊(Ovis aries)、牛(Bos taurus)、小鼠(Mus musculus) TRIB3氨基酸序列同源性分别为99%、96%、71%,与绵羊亲缘关系最近。组织表达分析显示,TRIB3基因在奶山羊乳腺组织中显著高表达,其次是脂肪组织。将设计合成的siRNA转染乳腺上皮细胞,结果显示,干扰TRIB3基因表达可显著上调脂质代谢相关基因-过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptorγ, PPARG)和二酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase, DGAT1)的mRNA水平。上述结果提示TRIB3可能作为负调节因子参与乳腺上皮细胞的脂质代谢。本研究为后续开展TRIB3调控羊奶乳脂代谢的分子机理提供了基础资料。 展开更多
关键词 西农萨能奶山羊 TRIB3 (tribbles pseudokinase 3 gene) 基因克隆 生物信息学分析 RNA干扰
石榴果色合成相关基因CHS和CHI的表达特性分析
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作者 招雪晴 苑兆和 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2175-2182,共8页
花色苷是类黄酮家族中重要的一类次生代谢产物,对果实呈色起重要作用。CHS (查尔酮合成酶)和CHI (查尔酮异构酶)为花色苷合成提供了前体物质,是花色苷合成所不可或缺的。利用RT-PCR和RACE方法,本研究从石榴果皮中克隆了与花色苷合成相关... 花色苷是类黄酮家族中重要的一类次生代谢产物,对果实呈色起重要作用。CHS (查尔酮合成酶)和CHI (查尔酮异构酶)为花色苷合成提供了前体物质,是花色苷合成所不可或缺的。利用RT-PCR和RACE方法,本研究从石榴果皮中克隆了与花色苷合成相关的CHS基因和CHI基因的cDNA全长,同时采用qRT-PCR研究了这两个基因在三个不同色泽石榴品种‘红宝石’、‘水晶甜’、‘墨石榴’发育期内的表达模式,并分析了果皮花色苷含量变化与基因转录水平的关系。结果表明,石榴中CHS和CHI基因cDNA全长分别为1 197 bp和693 bp,分别编码398和230个氨基酸,命名为PgCHS和PgCHI,在GenBank中的登录号分别为KF841615和KF841616。在氨基酸水平上,Pg CHS与荔枝、葡萄、山竹等果树的同源性达到90%以上。Pg CHI与果树中龙眼、梨、美洲葡萄、桑树等同源性达到70%以上。qRT-PCR结果显示,CHS和CHI基因的表达模式随色泽发育期和品种不同而有差异。在‘红宝石’石榴中,该两个基因都有前期和后期两个表达高峰期;而‘水晶甜’石榴中这两个基因的表达高峰期均出现在中后期;‘墨石榴’发育初期时CHS和CHI的表达量最高,以后的表达量都较低。同一品种内,CHS和CHI的表达具有协同性,两者的协同性表达有利于花色苷及其他类黄酮相关产物的合成。3个品种中CHS和CHI基因的表达与花色苷的积累并不一致。 展开更多
关键词 石榴 CHS CHI 基因克隆 表达分析
刺葡萄愈伤组织UFGT基因克隆及表达分析 预览
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作者 赖呈纯 潘红 +4 位作者 黄贤贵 范丽华 赖钟雄 段长青 刘文慧 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1677-1685,共9页
为从细胞水平上揭示刺葡萄3-O-类黄酮葡萄糖基转移酶(UFGT)基因调控花青素合成的功能,以刺葡萄愈伤组织为试验材料,根据刺葡萄愈伤组织转录组UFGT序列片段,利用RT-PCR结合RACE技术克隆得到VdUFGT基因,并对其进行生物信息学和表达特性分... 为从细胞水平上揭示刺葡萄3-O-类黄酮葡萄糖基转移酶(UFGT)基因调控花青素合成的功能,以刺葡萄愈伤组织为试验材料,根据刺葡萄愈伤组织转录组UFGT序列片段,利用RT-PCR结合RACE技术克隆得到VdUFGT基因,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表明,VdUFGT基因cDNA和DNA开放阅读框(ORF)分别为1 371 bp和1 448 bp,包含2个外显子和1个内含子,编码456个氨基酸,为带负电荷的不稳定的亲水性蛋白,具有一个UDPGT结构域,是UDPGT超家族成员,包含UDP-黄酮糖基转移酶特征区域。由UFGT同源基因编码蛋白所构建的系统发育树,与植物进化的关系相一致,6个葡萄属植物聚为一支。RT-qPCR分析表明,刺葡萄红色愈伤组织VdUFGT转录水平极显著高于白色愈伤组织,培养25 d的2个细胞培养物差异可达79倍;在刺葡萄愈伤组织连续培养过程中,红色愈伤组织中Vd UFGT转录水平变化幅度较大,在愈伤组织快速生长中期和衰老初期分别出现峰值,而刺葡萄白色愈伤组织VdUFGT转录水平与红色愈伤组织相比变化幅度不大,且始终维持在一个较低的水平。说明VdUFGT对刺葡萄红色愈伤组织细胞培养物中的花青素生物合成有重要的调控作用,这种调控作用主要发生在刺葡萄愈伤组织细胞快速生长中期和细胞衰老初期。本研究结果为进一步阐明VdUFGT调控刺葡萄细胞花青素合成的机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 刺葡萄 愈伤组织 3-O-类黄酮葡萄糖基转移酶基因(UFGT) 基因克隆 基因表达
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水曲柳FmWRKY44基因克隆及表达分析 预览
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作者 李新宇 何利明 詹亚光 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期529-538,共10页
克隆水曲柳FmWRKY44基因,探究其在非生物胁迫和激素胁迫中的作用。利用水曲柳干旱转录组序列设计特异引物,克隆FmWRKY44基因的完整ORF序列,并对该序列及其编码产物进行生物信息学分析,采用qRT-PCR技术分析FmWRKY44表达模式。克隆了一个... 克隆水曲柳FmWRKY44基因,探究其在非生物胁迫和激素胁迫中的作用。利用水曲柳干旱转录组序列设计特异引物,克隆FmWRKY44基因的完整ORF序列,并对该序列及其编码产物进行生物信息学分析,采用qRT-PCR技术分析FmWRKY44表达模式。克隆了一个水曲柳WKRY基因,编码区长1383bp,编码460氨基酸。对其编码蛋白分析发现其为稳定亲水蛋白,亚细胞定位预测主要在细胞核,进行保守域及同源性分析分析,属于WRKYⅠ类家族,命名为FmWRKY44。qRT-PCR分析发现,FmWRKY44在种子中高度表达,并不同程度响应低温、高温、盐和干旱4种非生物胁迫。同时发现FmWRKY44与NAA、ABA、GA3、JA植物激素响应,水曲柳FmWRKY44基因积极响应低温、高温胁迫。 展开更多
关键词 水曲柳 WRKY基因 基因克隆 表达分析
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黄冠梨PbpNCED3基因的克隆与表达 预览
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作者 王华 潘祺 +4 位作者 鞠萌 汪紫萸 汪王微 王瑞生 朱立武 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期82-88,共7页
【目的】克隆黄冠梨Pyrus bretschneideri ‘Xuehuali’× P. pyrifolia ‘Shinsseiki’叶片中的9?顺式?环氧类胡萝卜素裂解双加氧酶(NCED)基因的全长cDNA 序列,研究不同程度干旱条件下该基因的表达及与叶片内源脱落酸(ABA)的动态... 【目的】克隆黄冠梨Pyrus bretschneideri ‘Xuehuali’× P. pyrifolia ‘Shinsseiki’叶片中的9?顺式?环氧类胡萝卜素裂解双加氧酶(NCED)基因的全长cDNA 序列,研究不同程度干旱条件下该基因的表达及与叶片内源脱落酸(ABA)的动态变化关系,为明晰该基因在梨树抗旱中的分子机理提供理论依据。【方法】根据转录组数据得到的PbpNCED3 序列进行同源序列扩增,通过生物信息学分析确定其属于NCED 家族基因。通过酶联免疫吸附法测定不同水分条件下梨叶片内源ABA 的含量,通过实时荧光定量测定PbpNCED3 基因的表达量。【结果】PbpNCED3cDNA 序列全长为1 831bp,编码603 个氨基酸(GeneBank 登录号为:MH749461)。该蛋白具有NCED 发挥功能所依赖的4 个保守的组氨酸,有NCED 家族特有保守结构域序列MIAHPKxDP 和HDFAITE 及RPE65 结构域,N?端含有靶向叶绿体的转运肽。蛋白结构预测发现,该蛋白与玉米vp14(NCED 家族蛋白)比对序列相似性为70%,且具有两亲性的α螺旋结构。PbpNCED3 基因的表达量与梨叶片ABA 的含量成正相关关系(相关系数为0.914),且二者都受到干旱的诱导。【结论】试验所得到的黄冠梨PbpNCED3 属于NCED 家族基因,该基因响应干旱胁迫,其表达量与内源ABA 的含量动态变化趋势一致。 展开更多
关键词 黄冠梨 NCED基因 基因克隆 脱落酸 基因表达 干旱
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山羊CPT1B基因的克隆、表达及其与肌内脂肪含量的相关性分析
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作者 俞雨阳 林亚秋 +2 位作者 梁计峻 王永 朱江江 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期692-702,共11页
肌内脂肪含量是动物育种的关键指标,利用分子生物学手段研究脂代谢调控机制是一项重要工作。本研究旨在克隆山羊(Capra hircus)肉碱脂酰转移酶Ⅰ肌肉亚型基因(carnitine palmityl transferase 1B, CPT1B)序列,并利用qRT-PCR技术检测山... 肌内脂肪含量是动物育种的关键指标,利用分子生物学手段研究脂代谢调控机制是一项重要工作。本研究旨在克隆山羊(Capra hircus)肉碱脂酰转移酶Ⅰ肌肉亚型基因(carnitine palmityl transferase 1B, CPT1B)序列,并利用qRT-PCR技术检测山羊不同组织和肌内前体脂肪细胞中CPT1B基因的表达模式,为深入探讨CPT1B基因在山羊脂肪酸代谢调控中的功能提供实验数据。首先选取1周岁的健康简州大耳羊(Jianzhou Big-eared goat) 7只,采集心、肝、脾、肺、肾、背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪和腹间脂肪并保存于液氮中,以索氏提取法检测背最长肌、股二头肌、臂三头肌的肌内脂肪含量;利用Trizol试剂提取上述保存的组织样品总RNA,利用反转录PCR方法克隆CPT1B序列并进行生物信息学分析;利用qRT-PCR方法检测CPT1B基因在山羊各组织的表达,分析其表达水平与肌内脂肪含量的相关性。结果显示,克隆得到山羊CPT1B基因序列2 619 bp (GenBank No. MH340532),包含完整的CDS区2 313 bp、5’UTR序列52 bp、3’UTR序列254 bp,编码771个氨基酸。各组织qRT-PCR结果显示,CPT1B在简州大耳羊心脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌有较高水平的基因表达,在肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮下脂肪和腹间脂肪的表达水平较低;肌内前体脂肪细胞的检测结果显示,前体脂肪细胞分化期间的CPT1B表达量均极显著高于分化前和分化后(P<0.01);相关性分析显示,CPT1B基因表达量与各肌肉组织肌内脂肪含量均显著正相关(P<0.05)。综上所述,CPT1B可能在山羊肌内脂肪沉积过程中具有调控作用,上述结果为CPT1B基因在肉用山羊育种中的应用提供了基础资料。 展开更多
关键词 山羊 肉碱脂酰转移酶Ⅰ肌肉亚型基因(CPT1B) 基因克隆 肌内脂肪(IMF) 基因表达
甘薯IbTPS1基因的克隆与活性鉴定 预览
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作者 王文斌 于欢 +1 位作者 杨燕新 邱相坡 《山西农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第4期17-23,共7页
[目的]发掘植物海藻糖合成途径关键酶基因,探究其编码蛋白TPS活性,为作物遗传改良抗多种胁迫提供优良的候选基因。[方法]本研究基于干旱条件下从甘薯转录组数据库中得到一条与拟南芥AtTPS1基因高度同源的Unigene序列,通过RT-PCR技术克... [目的]发掘植物海藻糖合成途径关键酶基因,探究其编码蛋白TPS活性,为作物遗传改良抗多种胁迫提供优良的候选基因。[方法]本研究基于干旱条件下从甘薯转录组数据库中得到一条与拟南芥AtTPS1基因高度同源的Unigene序列,通过RT-PCR技术克隆了甘薯TPS基因。利用生物信息学软件分析序列特征,酵母互补试验鉴定编码蛋白TPS活性。[结果]IbTPS1基因cDNA序列全长2811bp,编码936个氨基酸,且具有典型的GT1-TPS和HAD-TPP结构域;生物信息学预测表明IbTPS1编码的蛋白是一个不稳定亲水性蛋白,无信号肽,定位于细胞质中;二级结构元件多以无规则卷曲和α-螺旋为主;酵母互补实验证明表达IbTPS1基因的TPS突变酵母菌株(tps1Δ)和TPS,TPP双突变酵母菌株(tps1Δtps2Δ),以葡萄糖为唯一碳源的尿嘧啶缺失培养基上可恢复生长。[结论]证实甘薯IbTPS1基因的编码蛋白具有生物活性。 展开更多
关键词 甘薯 海藻糖-6-磷酸合成酶基因(TPS1) 基因克隆
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大蒜谷胱甘肽硫转移酶基因AsGST的克隆及其对盐胁迫的响应 预览
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作者 梁志乐 尚珂含 +3 位作者 王立辉 周瑾 王广龙 熊爱生 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1088-1095,共8页
为了解大蒜GST基因及其编码的蛋白质的结构特征,分析GST基因在不同组织及盐胁迫条件下的表达特性,采用RT-PCR方法克隆得到大蒜苍山四六瓣GST基因,采用BLAST、DNAMAN、ProtParam、MEGA5、Swiss-Model等生物信息工具分析其序列特征,利用... 为了解大蒜GST基因及其编码的蛋白质的结构特征,分析GST基因在不同组织及盐胁迫条件下的表达特性,采用RT-PCR方法克隆得到大蒜苍山四六瓣GST基因,采用BLAST、DNAMAN、ProtParam、MEGA5、Swiss-Model等生物信息工具分析其序列特征,利用实时荧光定量PCR方法,分析AsGST基因在大蒜根、鳞茎和叶片中的表达差异及其对盐胁迫的响应情况。结果表明,大蒜AsGST基因全长663 bp,编码220个氨基酸,推测蛋白质分子质量为25.58 kDa,理论等电点为6.55,属于tau类GST家族。植物GST的序列相似性较低,但在结构上相对保守。在蛋白的N端含有谷胱甘肽特异结合位点(G位点),C端含有可变性较大的疏水底物结合位点(H位点),在进化关系上AsGST与茄科作物较近。空间结构分析表明,大蒜GST的三级结构由3个β-折叠和11个α-螺旋构成。实时荧光定量PCR显示,苍山四六瓣中GST基因在根中的表达量最高,其次是叶,在鳞茎中的表达量较低,具有明显的组织特异性。盐胁迫处理4 h后,各组织内AsGST基因的表达量均升至最高,说明该基因可响应盐胁迫逆境信号。本研究结果为进一步研究大蒜GST基因的功能奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 大蒜 盐胁迫 AsGST基因 基因克隆 表达分析
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Clock基因在不同繁殖时期雌性马岗鹅中的组织表达 预览
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作者 劳永聪 石逸夫 +4 位作者 陈永浩 张舰 孙敬帅 黄运茂 欧阳宏佳 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2019年第2期11-16,共6页
为研究Clock基因对鹅繁殖周期的影响,选取产蛋高峰期、休产期和就巢期的2.5年龄雌性马岗鹅各6只,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,克隆鹅的Clock基因,并采用实时荧光定量PCR的方法检测其在不同繁殖周期的表达水平.通过克隆获得马岗鹅Cl... 为研究Clock基因对鹅繁殖周期的影响,选取产蛋高峰期、休产期和就巢期的2.5年龄雌性马岗鹅各6只,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,克隆鹅的Clock基因,并采用实时荧光定量PCR的方法检测其在不同繁殖周期的表达水平.通过克隆获得马岗鹅Clock基因cDNA序列2905bp,基因组序列全长41039bp,含22个外显子,21个内含子.比对分析发现该序列包含了Clock基因的全部编码序列,共2574bp,编码857个氨基酸.氨基酸序同源性比对发现,鹅Clock基因与其他禽类的同源性均超过96%,在物种间的保守性高.产蛋高峰期时Clock基因表达水平在下丘脑、垂体和卵巢组织中均高于休产期和就巢期,其中在下丘脑(P<0.01)和卵巢组织(P<0.05)中差异均显著,而休产期和就巢期的表达水平差异无统计学意义(P>0.05).研究发现Clock基因在产蛋高峰期的下丘脑和卵巢中高表达,说明该基因可能参与鹅繁殖节律的调控. 展开更多
关键词 CLOCK 基因克隆 基因表达 繁殖
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沙葱萤叶甲表皮蛋白基因GdAbd的克隆及对温度胁迫的响应
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作者 单艳敏 张卓然 +2 位作者 周晓榕 乌英嘎 庞保平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期514-521,共8页
为揭示沙葱萤叶甲Galeruca daurica表皮蛋白基因GdAbd在其应对温度胁迫中的作用,采用RACE技术克隆表皮蛋白基因GdAbd的cDNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量(qPCR)技术比较GdAbd经不同温度处理1 h及25℃恢复30 min后在... 为揭示沙葱萤叶甲Galeruca daurica表皮蛋白基因GdAbd在其应对温度胁迫中的作用,采用RACE技术克隆表皮蛋白基因GdAbd的cDNA全长序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量(qPCR)技术比较GdAbd经不同温度处理1 h及25℃恢复30 min后在沙葱萤叶甲2龄幼虫体内的表达水平。结果表明,GdAbd基因全长708 bp(GenBank登录号:MG874710),开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸;蛋白预测分子量为16.98 kD,等电点为4.26;编码蛋白具有典型的表皮蛋白R&R保守结构域,属于RR-2亚族;具有1个跨膜结构和1个信号肽。同源序列比对和系统发育分析表明,GdAbd与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata SgAbd-4的同源性最高,氨基酸序列一致性达50.63%。qPCR检测结果表明,与25℃对照相比,GdAbd基因表达水平在-10~5℃低温胁迫时未发生显著变化,而在35℃高温胁迫时发生显著上调;-10、-5和0℃低温胁迫后25℃恢复30 min可诱导GdAbd显著上调表达,但5℃低温和35℃高温胁迫处理与对照差异不显著。说明短时低温胁迫不能显著影响GdAbd表达,但胁迫后回温可诱导其上调表达。 展开更多
关键词 沙葱萤叶甲 表皮蛋白 基因克隆 基因表达 温度胁迫
抗稻瘟病基因的克隆及其分子育种研究进展
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作者 王丹 沙岩 +2 位作者 胡俊峰 马凯 朴雪 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4661-4666,共6页
水稻是世界上种植最广的农作物之一,而稻瘟病又是危害最严重的水稻病害之一,利用现有种质资源通过分子育种手段培育水稻抗性品种是防御稻瘟病菌最经济有效的方式。随着分子生物学尤其是基因工程技术的发展,通过对基因的直接操作使得水... 水稻是世界上种植最广的农作物之一,而稻瘟病又是危害最严重的水稻病害之一,利用现有种质资源通过分子育种手段培育水稻抗性品种是防御稻瘟病菌最经济有效的方式。随着分子生物学尤其是基因工程技术的发展,通过对基因的直接操作使得水稻具有抗病性成为可能。NBS-LRR类基因是水稻中最为重要的抗病基因,且具有很高的规律性,在水稻抗稻瘟病方面发挥着重要的作用。本综述主要综述了国内外分子育种与基因克隆相关研究进展与技术方法,描述了水稻已经克隆的稻瘟病抗性基因在染色体上的分布情况。并对通过分子育种培育水稻抗稻瘟病品种的研究方向和前景做了简要预测。 展开更多
关键词 抗病基因 水稻 稻瘟病 NBS-LRR 基因克隆
根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解代谢中agnH基因的克隆表达与纯化 预览
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作者 姚家成 夏珍珍 +6 位作者 黄粤 皮婷 梅枫 何冬兰 程国军 刘涛 李晓华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期81-87,共7页
对从湖北省襄阳市烟草种植土壤中分离筛选得到的尼古丁降解菌根癌土壤杆菌SCUEC1菌株中agnH基因进行克隆表达,并对AgnH蛋白的表达和纯化条件进行优化,为解析agnH基因的功能和揭示根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解的分子机制提供理论依... 对从湖北省襄阳市烟草种植土壤中分离筛选得到的尼古丁降解菌根癌土壤杆菌SCUEC1菌株中agnH基因进行克隆表达,并对AgnH蛋白的表达和纯化条件进行优化,为解析agnH基因的功能和揭示根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解的分子机制提供理论依据。通过PCR扩增获得agnH全长基因(585bp),构建重组质粒pET28a(+)-agnH,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行异源表达,研究不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对重组质粒pET28a(+)-agnH诱导表达的影响,用不同浓度的咪唑洗脱液洗脱重组蛋白,采用SDS-PAGE检测重组蛋白。结果表明:在IPTG浓度为0.4mmol/L、诱导温度为25℃且诱导时间为25h条件下,AgnH蛋白表达量较高;在250mmol/L的咪唑洗脱液洗脱下,得到浓度较高的AgnH蛋白。 展开更多
关键词 根癌土壤杆菌SCUEC1菌株 尼古丁降解代谢 agnH基因 基因克隆 蛋白表达与纯化
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水稻OsPPDK基因的克隆及生物信息学分析 预览 被引量:1
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作者 杨艳玲 何雅婷 +3 位作者 李亚男 居超明 徐国成 陈建国 《湖北大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第1期32-38,共7页
利用比较基因组学方法,通过小麦TaNAM基因序列来设计引物,在早衰水稻品系金23B中寻找TaNAM的同源基因.对获得的cDNA片段进行序列比对分析,发现其与丙酮酸磷酸双激酶(Pyruvate phosphate dikinase,PPDK)基因高度同源,因此将其命名为OsPPD... 利用比较基因组学方法,通过小麦TaNAM基因序列来设计引物,在早衰水稻品系金23B中寻找TaNAM的同源基因.对获得的cDNA片段进行序列比对分析,发现其与丙酮酸磷酸双激酶(Pyruvate phosphate dikinase,PPDK)基因高度同源,因此将其命名为OsPPDK(Oryza sativa PPDK).为进一步探索OsPPDK基因的功能及其与叶片衰老的关系,根据水稻预测OsPPDK基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆出OsPPDK基因的编码区,并进行生物信息学分析.结果表明:该基因全长为3 515 bp,包含一个完整的ORF,编码区长2 844 bp,编码947个氨基酸,分子量为102.79 kD,所编码的氨基酸序列与其他已知的植物来源的PPDK基因相比,相似性大多在80%以上.在PPDK基因所编码的氨基酸序列中,发现了一个PEP利用酶位点信号,3个N-糖基化位点和15个酪蛋白激酶II磷酸化位点,12个蛋白激酶C磷酸化位点,2个酪氨酸激酶磷酸化位点和一个PEP利用酶位点.同时推测出多肽链中有规则重复的构象,并同源建模PPDK蛋白整条肽链的三维空间结构. 展开更多
关键词 水稻 OsPPDK基因 基因克隆 生物信息学分析
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牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析 预览
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作者 夏忆 王琴 +3 位作者 何向东 陈莹 吉格莫体 字向东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1881-1889,共9页
试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因... 试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因,并采用生物信息学软件进行序列分析;利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异。结果表明,牦牛Bcl-2编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高,为99.86%,其次是山羊、绵羊,同源性分别为98.41%、97.97%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。牦牛Bax基因编码区全长579 bp,编码192个氨基酸,与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高,分别为99.83%、99.48%和99.48%,其次是绵羊、马、人,同源性分别为99.14%、95.34%、94.30%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽,均为酸性不稳定的疏水蛋白。Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛(P<0.05;P<0.01);牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛(P<0.05),牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛(P<0.01),子宫和垂体中显著高于黄牛(P<0.05)。表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用,牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关。 展开更多
关键词 牦牛 黄牛 BCL-2基因 BAX基因 克隆 组织表达
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绵羊Oct4基因的克隆及序列分析 预览
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作者 田丽 时邵辉 +3 位作者 胡虹宇 陈胜男 李松美 王春生 《草食家畜》 2019年第3期19-24,共6页
为了克隆出绵羊的Oct4基因的编码区序列,研究利用RT-PCR技术,根据GenBank中小鼠、人,猪、牛等的Oct4基因编码区序列设计出特异性引物,从绵羊囊胚中扩增绵羊Oct4编码区序列并进行测序,分析。结果表明,绵羊Oct4基因的编码区长度为1083bp,... 为了克隆出绵羊的Oct4基因的编码区序列,研究利用RT-PCR技术,根据GenBank中小鼠、人,猪、牛等的Oct4基因编码区序列设计出特异性引物,从绵羊囊胚中扩增绵羊Oct4编码区序列并进行测序,分析。结果表明,绵羊Oct4基因的编码区长度为1083bp,其中包括终止密码子,可以编码360个氨基酸。绵羊Oct4基因CDS区的核苷酸序列与牛、猫、人、恒河猴、小鼠、兔、大鼠和猪等物种相似,比较相应序列,同源性分别为97.8%、91.1%、89.1%、89.0%、82.3%、85.7%、83.2%和94.7%;比较其氨基酸序列,同源性分别为98.3%、93.1%、91.4%、91.1%、83.8%、85.7%和97.2%;使用生物信息学软件分析结果表明,绵羊Oct4基因含有两个POU特异结构域和1个HOMEOBOX-1结构域。本研究为进一步探索Oct4基因的功能及探讨其在绵羊体细胞重编程的过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊 Oct4基因 基因克隆 序列分析
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杉木涩籽形成过程的花青素还原酶基因表达 预览
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作者 王培 理挪 +3 位作者 张家君 马志慧 陈宇 林思祖 《森林与环境学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期1-8,共8页
为探究杉木涩籽形成过程中,花青素还原酶(ANR)基因在类黄酮生物合成途径中的分子调控机制,以种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法对杉木ANR基因进行全长克隆,运用qPCR技术分析不同涩籽率的杉木家系中ANR基因在种子不同发育时期的... 为探究杉木涩籽形成过程中,花青素还原酶(ANR)基因在类黄酮生物合成途径中的分子调控机制,以种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法对杉木ANR基因进行全长克隆,运用qPCR技术分析不同涩籽率的杉木家系中ANR基因在种子不同发育时期的表达模式。结果显示,克隆到的ANR基因全长cDNA序列为1357bp,具有一个1056bp的开放阅读框,编码351个氨基酸。保守域预测显示ANR蛋白属于SDR超家族,具有一个FR_SDR_e特异性结构域。qPCR结果发现,在高涩籽率杉木中,90、100d的表达量一直显著高于中、低涩籽率杉木;而在中、低涩籽率杉木中,ANR基因的表达模式仅仅是种子发育80d时较高,之后明显下调。表明杉木涩籽率可能与其ANR基因表达相关。 展开更多
关键词 杉木 ANR基因 基因克隆 序列分析 表达模式
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桃转录因子PpWRKY11的克隆及表达分析
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作者 王庆杰 张泽杰 +6 位作者 高彦刚 陈修德 肖伟 付喜玲 李玲 李冬梅 高东升 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期503-510,共8页
WRKY转录因子能够响应生物及非生物胁迫。本研究基于前期实验室桃花芽休眠解除前后表达量明显下调的Prupe.1G071400基因进行研究,通过定量PCR表明此结果与前期实验结果相符合,证明该基因可能与桃花芽休眠解除密切相关。从桃‘中油四号... WRKY转录因子能够响应生物及非生物胁迫。本研究基于前期实验室桃花芽休眠解除前后表达量明显下调的Prupe.1G071400基因进行研究,通过定量PCR表明此结果与前期实验结果相符合,证明该基因可能与桃花芽休眠解除密切相关。从桃‘中油四号’叶片克隆了Prupe.1G071400基因,通过生物信息学分析,命名此基因为PpWRKY11;PpWRKY11蛋白编码282个氨基酸,包含特有WRKY结构域。进化树分析发现PpWRKY11与蔷薇科苹果和梨等亲缘关系最为相近;亚细胞定位显示PpWRKY11定位于细胞核中;酵母双杂显示PpWRKY11蛋白没有自主激活活性,进一步对PpWRKY11进行筛库,筛选出互作的蛋白;构建PGEX-PpWRKY11原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导出符合大小的蛋白,发现PpWRKY11蛋白主要在沉淀中。 展开更多
关键词 PpWRKY11 芽休眠 基因克隆 亚细胞定位 基因表达
小麦TaSPLs的载体构建和遗传转化 预览
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作者 魏云韬 《生物化工》 2019年第4期104-106,110共4页
小麦是世界三大作物之一,对于小麦的研究一直是生命科学研究的热点。普通小麦是异源六倍体,对其基因组序列的研究较为困难,目前仍没有得到足够精细的基因组序列,对于功能基因组学的研究也进展缓慢。因此,研究异源六倍体小麦的功能基因... 小麦是世界三大作物之一,对于小麦的研究一直是生命科学研究的热点。普通小麦是异源六倍体,对其基因组序列的研究较为困难,目前仍没有得到足够精细的基因组序列,对于功能基因组学的研究也进展缓慢。因此,研究异源六倍体小麦的功能基因家族对于小麦的功能基因组学研究和分子设计有重要意义。通过提取中国春小麦总RNA,反转录为cDNA,采用RT-PCR克隆得到两个SPL家族基因,命名为TaSPL11和TaSPL16,构建TaSPL11和TaSPL16真核表达载体,将上述两个质粒进行水稻转化。经过诱导、侵染、继代培养、筛选、分化和生根培养之后得到转基因再生苗,得到T0代植株,对T0代水稻植株进行检测,确定转基因阳性材料。 展开更多
关键词 小麦 SPL基因家族 基因克隆 遗传转化 阳性鉴定
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