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美洲大蠊抗肝纤维化活性部位纯化工艺研究 预览
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作者 杨华蕊 何正春 +1 位作者 杨永寿 肖培云 《世界最新医学信息文摘(电子版)》 2019年第8期1-4,共4页
目的优选美洲大蠊抗肝纤维化活性部位(ML-HB)的最佳分离纯化工艺。方法以活性部位的得率和大鼠肝星状细胞抑制IC50值为评价指标,采用单因素实验和L9(34)正交实验考察影响大孔树脂分离纯化活性部位的各工艺参数:上样量、洗脱流速、洗脱... 目的优选美洲大蠊抗肝纤维化活性部位(ML-HB)的最佳分离纯化工艺。方法以活性部位的得率和大鼠肝星状细胞抑制IC50值为评价指标,采用单因素实验和L9(34)正交实验考察影响大孔树脂分离纯化活性部位的各工艺参数:上样量、洗脱流速、洗脱剂用量和吸附时间,并结合MTT法对提取物进行活性检测。结果确定活性部位的最佳纯化工艺:上样量为1/6BV,洗脱流速为每分钟1/40BV,杂质洗脱剂用量2BV,活性部位洗脱剂为2BV,吸附10h。工艺验证实验结果表明,活性部位的得率从0.58%提高到0.75%,24、48、72h对大鼠肝纤维化细胞HSC-T6抑制的IC50分别为110.87±4.17μg/mL,99.77±6.74μg/mL,88.73±1.52μg/mL。结论该研究优选出美洲大蠊中抗肝纤维化活性部位(ML-HB)的最佳纯化工艺,为美洲大蠊抗肝纤维化的深入研究提供依据。 展开更多
关键词 美洲大蠊 肝纤维化 活性部位 正交设计 肝星状细胞
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小鼠肝星状细胞(HSC)中ATF5促进TRAIL基因的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用 预览
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作者 黄文海 陈宗祐 +2 位作者 项建斌 李震洋 顾晓冬 《复旦学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第6期781-787,共7页
目的探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5 (activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同... 目的探讨小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中转录激活因子5 (activating transcription factor 5,ATF5)促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表达及其对同种异体胰岛移植物的保护作用。方法半定量RT-PCR检测HSCs中ATF5 mRNA、TRAIL mRNA的表达水平,流式细胞术检测HSCs表面TRAIL蛋白质水平。慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs,针对ATF-5基因进行RNA干扰,半定量RT-PCR检测慢病毒感染的HSCs中ATF5 mRNA及TRAIL mRNA水平。单向混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)观察HSCs和慢病毒感染的HSCs对T细胞的增殖反应。分别将单纯胰岛、胰岛联合HSCs、胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植到小鼠的肾包膜下,比较移植胰岛的存活时间。结果γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)上调HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平(P<0.01),IFN-γ亦可上调HSCs表面TRAIL蛋白质水平。慢病毒(LV-ATF5-RNAi)感染HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA水平明显下降(P<0.01),TRAIL mRNA水平亦下降(P<0.05)。IFN-γ作用于感染慢病毒的HSCs后,HSCs中ATF5 mRNA和TRAIL mRNA水平亦增加(P<0.01),但明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P<0.01)。HSCs可明显抑制T细胞增殖反应(P<0.01),慢病毒感染的HSCs亦能抑制T细胞增殖反应(P<0.05),但抑制作用明显低于未被慢病毒感染的HSCs(P<0.01)。单纯胰岛移植组(A组)移植胰岛中位存活时间为11天;胰岛联合HSCs移植组(B组)移植胰岛中位存活时间为88天,B组胰岛移植物存活时间明显长于A组(P<0.01);胰岛联合慢病毒感染的HSCs移植组(C组)移植胰岛中位存活时间为18天,C组胰岛移植物存活时间长于A组(P<0.01),但明显短于B组(P<0.01)。结论小鼠HSCs中ATF5可促进TRAIL基因表达,表达TRAIL的HSCs可以抑制T细胞的增殖反应,此HSCs与胰岛细胞联合移植,明显延长小鼠同种异体胰岛移植物存活时间。 展开更多
关键词 肝星状细胞(HSC) 转录激活因子5(ATF5) 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL) 胰岛移植 小鼠
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丹皮酚对肝星状细胞胶原合成的抑制作用 预览 被引量:1
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作者 黄慧 陈洪 +1 位作者 黄桂琼 袁维蔚 《海南医学》 CAS 2018年第14期2005-2008,共4页
目的探究丹皮酚对肝星状细胞(HSC)Ⅰ和Ⅲ型胶原(Col-Ⅰ和Col-Ⅲ)合成的影响。方法分别采用Western-blot法和实时荧光定量PCR法检测丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白的表达、m RNA表达,比较阳性对照组、不同剂量(即低、中、高剂... 目的探究丹皮酚对肝星状细胞(HSC)Ⅰ和Ⅲ型胶原(Col-Ⅰ和Col-Ⅲ)合成的影响。方法分别采用Western-blot法和实时荧光定量PCR法检测丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白的表达、m RNA表达,比较阳性对照组、不同剂量(即低、中、高剂量)丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白表达,以及阳性对照组、不同剂量丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA表达,同时比较不同剂量的丹皮酚与Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA相对表达量的相关性。结果低、中、高剂量的丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白表达分别为(119.35±11.35)和(116.35±11.35)、(131.22±10.89)和(128.22±10.89)、(153.36±11.88)和(150.36±11.88),明显弱于阳性对照组的(112.56±10.56)和(109.56±10.53),差异均有统计学意义(P〈0.05);低、中、高剂量的丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA表达分别为(1.66±0.10)和(1.73±0.11)、(1.17±0.17)和(1.25±0.12)、(0.62±0.14)和(0.68±0.18),明显弱于阳性对照组的(0.86±0.12)和(1.13±0.14),差异均有统计学意义(P〈0.05),但只有高剂量组的抑制效果强于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05);不同剂量组的丹皮酚与Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA相对表达量均呈负相关(P〈0.05)。结论丹皮酚对TGF-β激活的HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白及其m RNA表达具有抑制作用,一定剂量内,剂量越大抑制作用越强。 展开更多
关键词 丹皮酚 肝星状细胞 Ⅰ型胶原 抑制作用
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TIMP-1和肝星状细胞对肝纤维化的影响 预览 被引量:2
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作者 唐美英 刘坤 王正根 《微生物学免疫学进展》 2015年第1期69-72,共4页
肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的必经之路,是细胞外基(Extracellular matrix,ECM)在肝内过多沉积所致.ECM主要由激活的肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)合成,同时它的降解受到基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(Tissue inhibitor... 肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的必经之路,是细胞外基(Extracellular matrix,ECM)在肝内过多沉积所致.ECM主要由激活的肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)合成,同时它的降解受到基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(Tissue inhibitor of metal protease-1,TIMP-1)的调控,因此HSC及TIMP-1对肝纤维化形成至关重要.近年来针对HSC及TIMP-1抗肝纤维化的研究已成为热点,就HSC及TIMP-1的生物学特性及其对肝纤维化的作用作一综述. 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 肝星状细胞 肝纤维化
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PI3K抑制剂PI103对四氯化碳刺激的肝星状细胞凋亡和细胞内钙离子浓度的影响
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作者 李娜 祝聪聪 肖永红 《工业卫生与职业病》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期272-275,共4页
目的探讨P13K抑制剂P1103对四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)凋亡率和细胞内游离钙离子([Ca^2+]i)浓度的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础。方法将HSC株于37℃、5%COz孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:空... 目的探讨P13K抑制剂P1103对四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)凋亡率和细胞内游离钙离子([Ca^2+]i)浓度的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础。方法将HSC株于37℃、5%COz孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:空白对照组、CCl4组、CCl4+P13K抑制剂组。用锚定蛋白V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V FITC/PI)双标记染色,通过流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况;以钙离子荧光探针(Fluo-3AM)为[Ca^2+]i荧光指示剂负载细胞,用激光扫描共聚焦显微镜观察[Ca^2+]i变化情况。结果CCl4作用后,HSC凋亡率的变化不明显(P〉0.05),但[Ca^2+]i荧光强度明显增强(P〈0.05)。P13K抑制剂作用于经CCl4刺激的HSC后,细胞凋亡率增加(P〈0.05),[Ca^2+]i荧光强度减弱(P〈0.05)。结论P13K抑制剂P1103可增加HSC的凋亡率,降低[Ca^2+]i浓度。 展开更多
关键词 PI3K抑制剂 肝星状细胞(HSC) 凋亡 钙离子
姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 赵珍东 段启 +2 位作者 姚丽梅 张雷红 庒义修 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 957-961,共5页
目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋... 目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。 展开更多
关键词 姜黄素 肝星状细胞 转化生长因子Β1 肝纤维化 SMAD3 SMAD7
以瘦素为靶点中药单体成分防治肝纤维化研究策略及进展 被引量:13
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作者 倪春艳 郑仕中 +3 位作者 陆茵 张雪娇 马进 王爱云 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1837-1841,共5页
近年来大量研究表明瘦素在肝纤维化发生发展中发挥着重要作用。瘦素能够通过血小板衍化生长因子(PDGF)、血管生成因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)等相关细胞因子和JAK/STAT3、MAPK/ERK1/2、PI3K/AKT等信号通路激活肝星状细... 近年来大量研究表明瘦素在肝纤维化发生发展中发挥着重要作用。瘦素能够通过血小板衍化生长因子(PDGF)、血管生成因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)等相关细胞因子和JAK/STAT3、MAPK/ERK1/2、PI3K/AKT等信号通路激活肝星状细胞。中药单体成分通过抑制细胞因子的释放和阻断信号通路来防治肝纤维化的机制研究已越来越深入。通过对与瘦素相关的肝星状细胞激活通路和细胞因子进行概括总结,并对中药单体成分通过瘦素靶点抗肝纤维化作用进行展望。 展开更多
关键词 瘦素 肝星状细胞 肝纤维化 姜黄素 丹酚酸B 白藜芦醇 川芎嗪
抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞核仁非组蛋白B23和C23的影响 预览 被引量:2
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作者 程良斌 李志伟 《中西医结合肝病杂志》 2010年第5期 291-293,共3页
目的:研究抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)核仁非组蛋白B23、C23的影响。方法:采用活化的肝星状细胞系(HSC-T6)培养传代,分别加入不同剂量的KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其大鼠含药血清(5%、10%、20%)进... 目的:研究抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)核仁非组蛋白B23、C23的影响。方法:采用活化的肝星状细胞系(HSC-T6)培养传代,分别加入不同剂量的KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其大鼠含药血清(5%、10%、20%)进行培养,并设空白血清对照组。提取细胞核蛋白,采用免疫蛋白印迹法(West-ern-Blot)观察用药后HSC核仁非组蛋白B23、C23活性水平的变化。结果:KXRG可降低HSC核仁中B23、C23蛋白活性的表达,且2.5mg/ml药物组和10%含药血清组降低最明显。结论:KXRG可降低HSC核仁中B23、C23蛋白活性的表达,这可能是其抗肝纤维化的机制之一。 展开更多
关键词 抗纤软肝颗粒/药理作用 肝星状细胞 核仁非组蛋白
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和络舒肝胶囊对大鼠肝星状细胞丝裂原活化蛋白激酶的影响 预览 被引量:2
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作者 童巧霞 周柏华 喻佛定 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2010年第2期 98-99,112,共3页
目的:研究激活的肝星状细胞(HSC)丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路中ERK、JNK的活化情况,并探讨和络舒肝胶囊抗肝纤维化的作用机制。方法:用SD大鼠制备肝纤维化模型。造模成功后,药物组大鼠以每天1g/kg的和络舒肝胶囊,分两次灌胃;... 目的:研究激活的肝星状细胞(HSC)丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路中ERK、JNK的活化情况,并探讨和络舒肝胶囊抗肝纤维化的作用机制。方法:用SD大鼠制备肝纤维化模型。造模成功后,药物组大鼠以每天1g/kg的和络舒肝胶囊,分两次灌胃;对照组大鼠灌以等体积生理盐水。连续灌胃30天后,下腔静脉取血离心并分离血清。采用盲法,用上述10%药物血清培养活化的HSCs24小时后,用Western blot方法检测各组HSCs磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)蛋白表达水平。结果:肝纤维化大鼠经和络舒肝胶囊药物血清干预后(D组),P-ERK、P-JNK蛋白表达水平较肝纤维化模型组(C组)显著降低(P〈0.05);正常大鼠经和络舒肝胶囊药物血清干预后(B组)P-ERK、J-JNK蛋白表达水平与正常大鼠对照组(A组)相比也显著减少(P〈0.05)。结论:和络舒肝胶囊通过对活化的HSCsP-ERK和P-JNK表达的影响,阻断MAPK信号通路,抑制HSC分裂和增殖,可能是其抗肝纤维化的重要途径之一。 展开更多
关键词 和络舒肝胶囊/药理作用 肝星状细胞 丝裂原活化蛋白激酶 大鼠
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中药双甲五灵冲剂对免疫性肝纤维化大鼠抗肝纤维化的分子机制研究 预览 被引量:3
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作者 谢玉梅 聂青和 +6 位作者 康文臻 张岩 郝春秋 王九平 张颖 王临旭 周永兴 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第2期154-158,共5页
目的探讨中药双甲五灵冲剂对免疫诱导型肝纤维化大鼠的治疗作用及机制。方法90只雌性Wistar大鼠。10只大鼠为正常对照组,80只大鼠予尾静脉注射人血白蛋白,建立免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为5组:预防组、治疗1组、治疗2组、秋水... 目的探讨中药双甲五灵冲剂对免疫诱导型肝纤维化大鼠的治疗作用及机制。方法90只雌性Wistar大鼠。10只大鼠为正常对照组,80只大鼠予尾静脉注射人血白蛋白,建立免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为5组:预防组、治疗1组、治疗2组、秋水仙碱组、观察组。用光镜观察肝脏HE染色、VanGieson(VG)胶原染色,采用原位杂交及免疫组织化学染色技术检测大鼠肝脏组织中TIMP-1、TIMP-2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达强度;用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果免疫诱导型肝纤维化大鼠在造模结束后肝组织学改变呈进行性加重,以造模结束后3个月为著;TIMP-1、TIMP-2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白呈强阳性表达,电镜见观察组有较多激活的HSC及大量胶原纤维沉积在肝窦间隙及肝细胞间,经双甲五灵冲剂治疗后的大鼠与观察组大鼠相比,肝组织结构明显好转,纤维组织减少,未见到激活的HSC、TIMP-1和TIMP-2mRNA及蛋白表达与观察组相比均明显降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因表达明显降低(P〈0.05),并且其效果为预防组效果最好,治疗1组较治疗2组效果好,三组均明显优于秋水仙碱组。结论双甲五灵冲剂可以逆转肝纤维化,抗肝纤维化机制可能是:①抑制肝星状细胞活化,减少ECM的生成及TIMP分泌;②直接抑制TIMP—1、TIMP-2mRNA及蛋白的表达;二者共同作用使得TIMP分泌减少,从而降低对MMPs的抑制,有利于MMPs对ECM的降解;③具有加速Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,抑制其生成及沉积的作用。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶及其抑制因子 双甲五灵冲剂 肝星状细胞
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大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 预览 被引量:3
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作者 张永晶 谢来峰 +2 位作者 王磊 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第6期 670-674,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(pafital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,vIM)的免疫组织化学定性、... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(pafital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,vIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RD、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞,用RT—PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM.初步证实,分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离和鉴定 肝星形细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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醛固酮及螺内酯对肝星状细胞中TIMP-1和MMP-2mRNA表达的影响 预览 被引量:2
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作者 任莉 苌新明 +2 位作者 王云 焦明丽 常远鸿 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 164-167,175,共5页
目的观察醛固酮及螺内酯对活化的肝星状细胞(HSC-T6)作用后不同时间段MMP-2和TIMP-1mRNA的表达情况。方法采用RT—PCR的方法测定HSC-T6中MMP-2、TIMP-1mRNA的表达。结果活化的HSC可表达MMP-2及TIMP-1的mRNA。醛固酮组MMP-2、TIMP-1的m... 目的观察醛固酮及螺内酯对活化的肝星状细胞(HSC-T6)作用后不同时间段MMP-2和TIMP-1mRNA的表达情况。方法采用RT—PCR的方法测定HSC-T6中MMP-2、TIMP-1mRNA的表达。结果活化的HSC可表达MMP-2及TIMP-1的mRNA。醛固酮组MMP-2、TIMP-1的mRNA在48、72h表达均高于对照组,在作用24、48、72h时MMP-2、TIMP-1的mRNA的表达随时间递增。而螺内酯组则相反。醛固酮加螺内酯组与单加醛固酮组相比MMP-2、TIMP-1的mRNA表达下降。结论醛固酮可能通过促使MMP-2及TIMP-1mRNA的表达促纤维化,螺内酯可抑制这一作用。 展开更多
关键词 肝星状细胞 金属蛋白酶(MMPs) 金属蛋白酶抑制剂(TIMPs) 醛固酮(ALD) 螺内酯
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过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响 被引量:10
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作者 郭晏同 冷希圣 +3 位作者 李涛 宋盛晗 秦致中 熊亮发 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 150-153,共4页
目的研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ表达以及对HSC生物学特性的影响. 方法设立空白对照组、3 μmol/L罗格列酮组、10 μmol/L罗格列酮组;分别用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化... 目的研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ表达以及对HSC生物学特性的影响. 方法设立空白对照组、3 μmol/L罗格列酮组、10 μmol/L罗格列酮组;分别用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞凋亡. 结果10 μmol/L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P<0.01),PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P<0.01);10μmol/L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t≥5.542,P<0.01),其α-SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P<0.01),其凋亡发生率显著高于对照组(x2=16.682,P<0.01). 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α-SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡. 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物 罗格列酮 细胞生物学特性 配体 特异 Western印迹 受体 活化 免疫细胞化学方法 星状细胞(HSC) α-平滑肌肌动蛋白 PPARγ mol/L 四甲基偶氮唑盐 流式细胞仪分析 α-SMA RT-PCR mRNA表达 对照组
大黄蔗虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响 预览
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作者 潘志恒 谢瑶 +4 位作者 何宏文 武敬 王拥泽 关卫兵 扬跃武 《现代消化及介入诊疗》 2005年第2期 61-64,共4页
目的观察大黄蔗虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响.方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌注消化正常大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞(HSC),在制备大黄蔗虫丸大鼠药物血清的基础上,温育HSC.MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞... 目的观察大黄蔗虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响.方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌注消化正常大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞(HSC),在制备大黄蔗虫丸大鼠药物血清的基础上,温育HSC.MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及增殖周期情况.结果药物血清对体外培养的HSC有抑制作用,且存在浓度剂量依赖关系,但作用较弱,需在20%以上方见到显著性差异(P<0.05),对HSC凋亡及细胞增殖周期则无显著影响(P>0.05).结论大黄蔗虫丸对HSC增殖有一定抑制作用,但可能不是其抗肝纤维化作用的主要途径,其抗肝纤维化作用与诱导细胞凋亡无关. 展开更多
关键词 大黄蔗虫丸 大鼠 肝星状细胞 细胞活化 细胞增殖 增殖周期
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阿魏酸钠对乙醛诱导的肝星状细胞增殖、活化和胶原合成的影响
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作者 张志毕 蔡婷 +2 位作者 缪紫娥 徐晢 冯国华 《中国实验方剂学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期123-128,共6页
目的:研究阿魏酸钠(SF)对体外乙醛诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、活化、胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养HSC-T6细胞,建立乙醛诱导的HSC-T6增殖模型,设空白组、乙醛组、秋水仙碱组(2.5μmol·L^-1)及SF组(1... 目的:研究阿魏酸钠(SF)对体外乙醛诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、活化、胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养HSC-T6细胞,建立乙醛诱导的HSC-T6增殖模型,设空白组、乙醛组、秋水仙碱组(2.5μmol·L^-1)及SF组(1,10,25,50,100,200,400μmol·L^-1),通过细胞增殖和毒性检测(MTS)比色法检测细胞增殖,筛选合适的SF浓度。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SF(400,200,100μmol·L^-1)对乙醛诱导的HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Ⅰ型,Ⅲ型胶原浓度,酸水解法检测羟脯氨酸(Hyp)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测转化生长因子-β1(TGF-β1),信号转导蛋白Smad2,Smad3,Smad4,Smad7,基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因mRNA表达变化。结果:与空白组比较,200μmol·L^-1的乙醛能显著诱导HSC-T6体外增殖(P〈0.01);与空白组比较,模型组HSC-T6增殖显著增加(P〈0.01),α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量显著增加(P〈0.01),TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA的表达显著上调(P〈0.01),MMP-1和TIMP-1 mRNA表达显著上调(P〈0.01)。与模型组比较,400,200,100μmol·L^-1浓度的SF能明显抑制乙醛诱导的HSC-T6增殖(P〈0.05,P〈0.01),显著降低α-SMA和Ⅰ型,Ⅲ型胶原和Hyp含量(P〈0.01),下调TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4基因mRNA的表达(P〈0.05,P〈0.01),上调Smad7基因mRNA表达(P〈0.01),并明显上调MMP-1 mRNA表达(P〈0.05,P〈0.01)和下调TIMP-1 mRNA表达(P〈0.01)。结论:SF能通过调控TGF-β1/Smad和MMP-1/TIMP-1信号通路,抑制乙醛诱导的体外HSC-T6细胞的增殖,活化和胶原分泌。 展开更多
关键词 阿魏酸钠 肝星状细胞(HSC-T6) 乙醛 细胞增殖 活化 胶原
狗蚁草化学成分鉴别及总生物碱对HSC-T6细胞增殖的影响
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作者 吴先昊 郑作文 +2 位作者 唐云丽 杨小良 张瑜 《亚太传统医药》 2016年第20期15-17,共3页
目的:考察狗蚁草乙醇提取物的化学成分并研究其总生物碱对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响。方法:对乙醇提取物的化学成分进行鉴别并采用系统溶剂法提取分离狗蚁草乙酸乙酯部位。采用MTT法对狗蚁草乙酸乙酯部位过硅胶柱后获得的... 目的:考察狗蚁草乙醇提取物的化学成分并研究其总生物碱对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响。方法:对乙醇提取物的化学成分进行鉴别并采用系统溶剂法提取分离狗蚁草乙酸乙酯部位。采用MTT法对狗蚁草乙酸乙酯部位过硅胶柱后获得的总生物碱对HSC-T6细胞增殖的影响进行检测。结果:检查项目中黄酮、酚类、香豆素、内酯类、三萜类、甾体、生物碱项出现正反应现象。总生物碱对HSCT6细胞增殖的半抑制浓度为68.3μg·mL-1。结论:狗蚁草中可能含有黄酮、酚类、香豆素、内酯类、三萜类、甾体、生物碱等化学成分,且狗蚁草总生物碱在体外对HSC-T6细胞增殖有显著抑制作用。 展开更多
关键词 狗蚁草 肝星状细胞 总生物碱
大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究 预览
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作者 张红梅 乐晓华 +4 位作者 徐六妹 李丽雄 王火生 周伯平 陈玉丙 《中国实验诊断学》 2008年第1期 38-41,共4页
目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://maidesigner.invitrogen.com/maiexpr... 目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://maidesigner.invitrogen.com/maiexpress/,针对大鼠TIMP1基因(GenBank:U06179)的598位点设计、合成Oligo DNA,退火形成双链DNA后,与载体pcDNA TM^6.2-GW/EmGFP-miR连接,转化Top10感受态细胞,构建TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体。经PCR扩增及测序鉴定正确后,以脂质体Lipofectimine TM^2000介导转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,24、48、72h后收集细胞,应用RT-PCR鉴定TIMP1的表达情况。结果经PCR及测序鉴定构建的TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体正确;将其转染经TGF-β1刺激的大鼠肝星状细胞株HSC-T6,48h即可见TIMP1 mRNA表达量下降,72h检测不到TIMP1 mRNA的表达,而未转染组及转染pLacZ-miR/GFP(阴性对照)组未见此改变。结论成功构建大鼠TIMP1 miR—NA慢病毒RNAi载体pTIMP1-miR/GFP;pTIMP1-miR/GFP使大鼠肝星状细胞株HSC-T6TIMP1基因沉默。提示了RNA干扰可使肝纤维化形成过程中的关键因子TIMP1基因沉默,为RNA干扰技术进一步应用治疗大鼠肝纤维化模型奠定了基础。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP1 大鼠肝星状细胞株HSC-T6 肝纤维化 RNA干扰 慢病毒RNAi载体
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葛根素对大鼠酒精性肝纤维化的干预作用以及对肝星状细胞增殖活化的影响 预览 被引量:5
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作者 郝原青 郭晓雪 +5 位作者 丁雅珊 王任远 苏剑清 常淼花 杜静 苏金玲 《天津中医药大学学报》 CAS 2016年第2期132-135,共4页
[目的]研究葛根素对大鼠酒精性肝纤维化的干预作用以及对肝星状细胞增殖活化的影响。[方法]Wistar雄性大鼠85只被随机分为正常对照、模型、葛根素低、中、高剂量和阳性药(易善复)对照6组。除正常对照组之外,其余给予大鼠灌胃白酒辅以... [目的]研究葛根素对大鼠酒精性肝纤维化的干预作用以及对肝星状细胞增殖活化的影响。[方法]Wistar雄性大鼠85只被随机分为正常对照、模型、葛根素低、中、高剂量和阳性药(易善复)对照6组。除正常对照组之外,其余给予大鼠灌胃白酒辅以玉米油、吡唑的混合食料制备酒精性肝纤维化模型,12周后采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色观察大鼠肝脏组织纤维化状况。采用免疫组化法检测大鼠肝组织内增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,根据PCNA的表达,计算肝细胞的增殖指数。[结果]模型组和各给药组肝纤维化程度显著高于正常对照组,各给药组肝纤维化程度要轻于模型组,但低剂量组肝纤维化程度重于其他各给药组。模型组肝细胞增殖指数明显高于其他各组,各给药组肝细胞增殖指数高于正常组。模型组α-SMA的表达高于其他各组,葛根素中、高剂量组和阳性药组α-SMA的表达低于模型组,葛根素低剂量组α-SMA的表达与模型组没有显著性差异,但从数据趋势上看低于模型组。[结论]葛根素能通过抑制肝星状细胞的增殖活化从而达到防治酒精性肝纤维化的功效,以中、高剂量效果更明显。 展开更多
关键词 葛根素 酒精性肝纤维化 肝星状细胞 增殖细胞核抗原 Α-平滑肌肌动蛋白
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肝细胞癌微环境肌成纤维细胞的分布、表型分析及其意义 预览 被引量:3
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作者 林扬元 陈智伟 +4 位作者 范奇超 林丽彬 杨学明 许莉妍 谢群 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期555-561,共7页
目的探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)微环境中肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)的分布、活化表型及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测9例正常肝组织、10例肝硬化组织、62例肝细胞癌及对应癌旁组织中各种(肌)成纤维细胞... 目的探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)微环境中肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)的分布、活化表型及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测9例正常肝组织、10例肝硬化组织、62例肝细胞癌及对应癌旁组织中各种(肌)成纤维细胞的CD34、细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白α-smooth muscle actin,α-SMA),细胞骨架系统的中间丝蛋白成分包括神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、结蛋白(desmin)、巢蛋白(nestin)和波形蛋白(vimentin)的表达,分析它们的分布、表型及其与临床病理学参数的关系。结果 HCC中至少分布有活化型肝星状细胞(activated hepatic stellate cell,a HSC)、间隔区肌成纤维细胞(septal myofibroblast septal,SMF)、肝门区肌成纤维细胞(portal myofibroblast,PMF)和间隔/实质交界区肌成纤维细胞(interface between parenchyma and septum myofibroblast,IMF)4种。与正常肝脏及癌旁组织相比,HCC组织中a HSC、PMF和IMF的α-SMA表达、a HSC和IMF的vimentin表达、IMF的nestin表达均明显升高,且均与Edmondson分级(IMF中vimentin的表达除外)及肿瘤转移正相关;而α-SMA在a HSC、IMF中及nestin在IMF中的高表达与癌组织的TNM分期正相关;此外,a HSC中α-SMA的高表达还与肝细胞癌肝硬化正相关。结论 HCC微环境中存在多种异质型肌成纤维细胞,其中a HSC、PMF和IMF的活化在一定程度上促进HCC发生发展及转移。 展开更多
关键词 肝细胞癌 成纤维细胞 肌成纤维细胞 肝星状细胞 微环境
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橙皮苷对肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响 被引量:7
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作者 吴芙蓉 姜玲 +2 位作者 何晓丽 朱鹏里 李俊 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第13期2639-2643,共5页
肝纤维化是不同致病因素引起的肝脏慢性损伤的共同病理过程,是向肝硬化发展的必然阶段。课题组前期研究发现,橙皮苷(HDN)对四氯化碳诱导的化学性肝纤维大鼠具有很好的保护作用。该实验在前期研究的基础上,通过建立体外血小板衍生生长... 肝纤维化是不同致病因素引起的肝脏慢性损伤的共同病理过程,是向肝硬化发展的必然阶段。课题组前期研究发现,橙皮苷(HDN)对四氯化碳诱导的化学性肝纤维大鼠具有很好的保护作用。该实验在前期研究的基础上,通过建立体外血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)-T6模型,观察HDN对HSC-T6增殖的抑制作用,ELISA法检测HSC-T6上清液中Ⅰ型胶原(Collagen)的含量,RT-PCR技术测定HSC-T6中转化生长因子(TGF)-β1,Smad2,Smad3,Smad7,结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达,Western blot技术检测HSC-T6中TGF-β1,CTGF蛋白的表达,探讨HDN对HSC中TGF-β1/Smad信号通路的影响及其可能的作用机制。结果显示,PDGF不仅可明显促进HSC-T6增殖与Collagen I的生成,还可显著增加TGF-β1,Smad2,Smad3,CTGF mRNA和TGF-β1,CTGF蛋白的表达;给予HDN干预后,可显著抑制HSC-T6增殖与Collagen I的生成,降低TGF-β1,Smad2,Smad3,CTGF mRNA和TGF-β1,CTGF蛋白的表达,升高Smad7 mRNA的表达。表明HDN抗肝纤维化作用可能与其调控TGF-β1/Smad信号通路,从而抑制HSC的活化、增殖有关。 展开更多
关键词 橙皮苷 肝星状细胞 TGF-Β1/SMAD信号通路
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