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混合血小板裂解液对人骨髓间充质干细胞原代培养、增殖和成骨分化的影响 预览
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作者 徐杨 林飞跃 尹晓明 《中国当代医药》 2019年第18期13-18,共6页
目的研究混合血小板裂解液(pHPL)对体外培养的人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)原代培养、增殖和成骨分化的影响。方法使用临床过期的多份浓缩血小板混合,多次冻融激活后制备pHPL,分别使用胎牛血清(FBS)和pHPL加基础培养液原代培养hBMMSCs,... 目的研究混合血小板裂解液(pHPL)对体外培养的人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)原代培养、增殖和成骨分化的影响。方法使用临床过期的多份浓缩血小板混合,多次冻融激活后制备pHPL,分别使用胎牛血清(FBS)和pHPL加基础培养液原代培养hBMMSCs,比较两组中的细胞形态、表面标志物、细胞骨架、细胞周期和增殖率,并在加入经典成骨诱导液后检测两组中碱性磷酸酶含量、成骨相关基因含量和矿化结节形成,比较其成骨分化能力。结果FBS和pHPL培养组均能较好地支持hBMMSCs的原代培养,两组中细胞形态、表面标志物、细胞骨架、细胞周期均无明显差异,但pHPL组在5、7d时的细胞增殖率明显高于FBS组(P<0.05);在成骨诱导后,pHPL组中碱性磷酸酶含量、成骨相关基因含量也明显高于FBS组(P<0.05),两组中细胞均可以形成成熟的矿化结节。结论pHPL能够很好支持hBMMSCs的原代培养、增殖和成骨分化,且较FBS能更好地促进其增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 人血小板裂解液 骨髓间充质干细胞 原代培养 增殖 成骨分化
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单个细胞来源胎盘间充质干细胞培养方法的比较研究 预览
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作者 孙宝航行 鲁奕 +5 位作者 王怡沁 周嘉乐 林梦璐 宋玮 姜萌 卜军 《上海交通大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第9期1033-1038,共6页
目的·观察胚胎来源间充质干细胞(placental derive dmesenchymal stemcells,PMSCs)在人血小板裂解液(human platelet lysate,HPL)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及传统的胎牛血清(fetal bovine se... 目的·观察胚胎来源间充质干细胞(placental derive dmesenchymal stemcells,PMSCs)在人血小板裂解液(human platelet lysate,HPL)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及传统的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)不同组合的培养基中的倍增数目及细胞性状,着重探索更合适的PMSCs培养体系。方法·分离单个细胞来源PMSCs,扩增后分别用4种培养基孵育,分为FBS组、FBS+bFGF组、HPL组以及HPL+bFGF组。观察细胞形态及生长状态、细胞表型及多能分化。在P1、P2、P3、P4代进行计数。取P4代细胞接种,分析集落形成单位的个数。结果·经鉴定,PMSCs具有间充质干细胞的生物特性。数量上,FBS+bFGF组在P4代达到(1.12×10^7)个/cm2,HPL组达到(1.24×10^7)个/cm2(P>0.05),而FBS组和HPL+bFGF组则只有(5.58×10^6)个/cm2和(8.56×10^6)个/cm2。细胞形态上,FBS+bFGF组与HPL组P4代的PMSCs均保持贴壁生长,但HPL组细胞于P5代无法贴壁生长。细胞集落数量上,P4代时,FBS+bFGF组为51个/孔,HPL为52个/孔(P>0.05)。细胞生物学特性上,FBS+bFGF组和HPL组在P4代时均能基本保有间充质干细胞的特性和多能分化的能力。结论·从细胞数量上来看,HPL组中的P4代细胞数与目前常用的FBS+bFGF培养基没有显著差异,且已达到临床治疗剂量需求;从细胞生物学特性上来看,HPL培养基与FBS+bFGF培养基均能基本保持PMSCs细胞特性和多能分化的能力。但由于HPL培养基免疫原性低,因此更适合临床移植应用。然而,由于HPL培养基无法维持PMSCs生长至5代以后,故无法用于大规模细胞扩增。HPL+bFGF在目前实验条件下并不具备优势。 展开更多
关键词 胎盘来源间充质干细胞 细胞扩增 碱性成纤维生长因子 人血小板裂解液
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免疫缺陷小鼠体内人源化骨髓微环境的重建 预览 被引量:1
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作者 陈欢 田征 +5 位作者 李彬 邢海燕 李欢 唐克晶 王敏 饶青 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1856-1862,共7页
目的:通过在免疫缺陷小鼠体内重建人源的骨髓微环境,为进一步研究人异常的骨髓微环境在人白血病发生发展中的作用提供模型。方法:通过反复冻融浓缩后血小板获得人血小板裂解液(HPL),以α-MEM作为基础培养液分别添加10%HPL和10%胎牛... 目的:通过在免疫缺陷小鼠体内重建人源的骨髓微环境,为进一步研究人异常的骨髓微环境在人白血病发生发展中的作用提供模型。方法:通过反复冻融浓缩后血小板获得人血小板裂解液(HPL),以α-MEM作为基础培养液分别添加10%HPL和10%胎牛血清(FBS)培养骨髓来源的间充质干细胞。比较两种添加成分对MSC形态、免疫表型、多向分化能力以及增殖能力的影响;将HPL培养的MSC接种于β-TCP支架材料并移植到免疫缺陷小鼠背部皮下,8-12周后取出移植体做HE染色,观察MSC在体内形成骨以及骨髓结构的能力。结果:用HPL和FBS培养的M SC均呈现长梭形纤维样细胞结构,均具有多向分化能力;两种体系培养的M SC免疫表型无明显区别,但用人血小板裂解液培养的MSC具有更强的增殖能力和向成骨分化能力;用人血小板裂解液培养的MSC具有在体内形成骨组织样结构的能力。结论:HPL培养的MSC具有更强的增殖能力以及成骨分化潜能,它能在NOD/SCID鼠上重建人源化骨髓微环境。 展开更多
关键词 人源骨髓微环境 骨髓间充质干细胞 人血小板裂解液 增殖能力 成骨分化 体内成骨
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人血小板裂解液促进人羊膜来源间充质干细胞的成骨分化 预览
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作者 董晶 聂李平 周宇 《微循环学杂志》 2015年第2期22-26,F0003共6页
目的:研究人血小板裂解液(HPL)对羊膜来源间充质干细胞(AMMSCs)成骨分化的作用。方法:分别以含7%HPL(HPL组)和10%胎牛血清(FBS,FBS组)的LG-DMEM培养介质扩增AMMSCs,比较两组扩增AMMSCs效率及其免疫表型SSEA-3和SSEA-4的表达... 目的:研究人血小板裂解液(HPL)对羊膜来源间充质干细胞(AMMSCs)成骨分化的作用。方法:分别以含7%HPL(HPL组)和10%胎牛血清(FBS,FBS组)的LG-DMEM培养介质扩增AMMSCs,比较两组扩增AMMSCs效率及其免疫表型SSEA-3和SSEA-4的表达差异。使用MSCs成骨分化培养液诱导AMMSCs成骨,对比观察两组钙盐沉积量、钙化结节、碱性磷酸酶(ALP)活性;提取两组成骨诱导后AMMSCs总RNA,采用RTPCR检测成骨分化调节因子RUNX-2和ALP mRNA相对表达量。结果:HPL组扩增速度快于FBS组;AMMSCs的SSEA-3和SSEA-4表达较FBS组明显下调(P〈0.05)。HPL组钙盐沉积量、钙化结节数量、ALP活性以及RUNX-2和ALP mRNA表达量均明显高于FBS组(P均〈0.05)。结论:含HPL培养介质可促进AMMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 人血小板裂解液 间充质干细胞 羊膜来源 成骨分化
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血小板裂解液快速扩增人羊膜来源间充质干细胞 预览 被引量:4
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作者 董晶 聂李平 +2 位作者 周宇 谢闻悦 李建新 《微循环学杂志》 2012年第4期13-16,F0004,I0001共6页
间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是来源于发育早期中胚层的一种多能干细胞,具有多向分化潜能、低免疫原性、免疫抑制作用和修复作用。这些特点使其成为再生医学和免疫抑制治疗研究的热点。
关键词 间充质干细胞 血小板裂解液 人羊膜 扩增 多向分化潜能 免疫抑制作用 免疫抑制治疗 Cells
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人血小板裂解液对骨髓间质干细胞成骨成脂分化的影响 被引量:2
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作者 王贞 夏文杰 +3 位作者 叶欣 罗广平 戎霞 付涌水 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 853-857,共5页
目的探讨人血小板裂解液(HPL)体外培养人骨髓间质干细胞(MSCs)及其对MSCs成骨和成脂分化能力的影响。方法采用贴壁法分离培养3株人骨髓来源MSCs,每株细胞在培养时平行分为2个实验组,分别用含10%胎牛血清的低糖培养基和含7.5%HPL的... 目的探讨人血小板裂解液(HPL)体外培养人骨髓间质干细胞(MSCs)及其对MSCs成骨和成脂分化能力的影响。方法采用贴壁法分离培养3株人骨髓来源MSCs,每株细胞在培养时平行分为2个实验组,分别用含10%胎牛血清的低糖培养基和含7.5%HPL的低糖培养基培养,均培养MSCs至第5代,分别用成骨及成脂诱导液对每组MSCs做成骨、成脂分化诱导,诱导成功后分别用茜素红、油红O对成骨和成脂分化结果染色鉴定,并进一步对成骨、成脂诱导结果做定量分析:成骨分化染色后洗脱茜素红在562nm波长下测定OD值并对每个培养孔细胞做蛋白定量,以茜素红OD值与蛋白定量值的比值作为成骨分化的定量值;成脂分化染色后用异丙醇洗脱油红O,在510nm波长下测定OD值,以之作为成脂分化的定量值。对所得的结果做统计学分析。结果对第5代的MSCs做成骨诱导12d后,光镜下可见致密结节形成,茜素红染色及定量鉴定结果显示2种培养液培养的MSCs均能成功向成骨细胞分化,而7.5%HPL培养的MSCs成骨能力比10%FBS培养的MSCs强,定量鉴定结果分别为16.548±4.397、4.151±5.631(P〈0.05)。成脂诱导12d后,细胞内有明显脂滴形成,油红O染色及定量分析结果显示MSCs成功向脂肪细胞分化,但7.5%HPL培养的MSCs成脂能力与10%FBS培养的MSCs相比较弱,定量鉴定结果分别为0.239±0.030、0.497±0.105(P〈0.05)。结论 HPL可以促进MSCs成骨分化,抑制其成脂分化。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 血小板裂解液 成骨分化 成脂分化
血小板裂解液替代胎牛血清培养间充质干细胞 被引量:1
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作者 华杰 龚健 +3 位作者 何志刚 徐斌 杨庭松 宋振顺 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期744-746,共3页
目的观察人血小板裂解液(HPL)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的形态、增殖、表面标志、诱导分化能力的影响。方法取正常足月妊娠产妇脐带血,离心后收集血沉棕黄层及血清按4:1混合后-20℃冻存,反复冻融2次后制成HPL,按10%比例加... 目的观察人血小板裂解液(HPL)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的形态、增殖、表面标志、诱导分化能力的影响。方法取正常足月妊娠产妇脐带血,离心后收集血沉棕黄层及血清按4:1混合后-20℃冻存,反复冻融2次后制成HPL,按10%比例加入培养基。分离获得UC-MSCs,在含10%HPL或10%胎牛血清(FBS)的培养基中培养,比较培养30d所获得的累积倍增级、最大传代代数所获得的细胞数及第3代细胞6孔板中培养6d所获得的细胞量;通过流式细胞仪检测HPL对培养细胞的表面标志的影响;观察HPL对培养细胞的成骨、成脂及成软骨诱导分化能力的影响。结果HPL或FBS培养的UC-MSCs形态相同,均为长梭形,传至第3代形态无明显改变。在HPL或FBS中培养30d所获得的累积倍增级比较差异无统计学意义(P〉0.05);HPL培养的细胞在第10代的细胞量[(7.5±0.4)X10^6个]明显多于10%FBS组[(4.34±0.2)×10^6个];第3代UC-MSCs在6孔板培养6d后,HPL组所得细胞数明显多于FBS组(P〈0.05)。流式结果显示,UC-MSCs表面高表达CD44、CD73、CD90、CD105,不表达或低表达CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45及人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR)。与10%FBS培养的UC—MSCs比较,10%HPL培养并未影响其表面标记的表达。HPL或FBS培养的UC-MSCs均能进行三系诱导分化,其分化能力无明显差异。结论HPL可以代替FBS来进行培养和扩增UC-MSCs。在保持其形态、表面标志、分化能力不变的情况下,UC-MSCs在HPL环境下增殖更快。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 人血小板裂解液 增殖 表面标记 分化
人血小板裂解液替代胎牛血清促进骨髓间质干细胞的增殖 预览 被引量:4
8
作者 许茹 夏文杰 +5 位作者 戎霞 叶欣 邵媛 王敏 罗广平 付涌水 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1396-1400,共5页
目的探讨人血小板裂解液(human platelet lysates,HPL)对骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖以及生物学特性的影响。方法通过对机采血小板反复冻融获得HPL,采用密度梯度离心法从骨髓中分离MSCs,分别用10%胎牛血清(fe... 目的探讨人血小板裂解液(human platelet lysates,HPL)对骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖以及生物学特性的影响。方法通过对机采血小板反复冻融获得HPL,采用密度梯度离心法从骨髓中分离MSCs,分别用10%胎牛血清(feotal calf serum,FCS)和LD-DMEM添加不同浓度的HPL进行培养,以确定最佳HPL浓度。分离6株人源MSCs,从原代开始分别用添加胎牛血清和最佳HPL浓度的LD-DMEM进行培养,对两种培养体系下6株不同来源的MSCs的增殖能力,表面标记表达量以及细胞周期进行研究,并利用t-test进行统计学分析,P〈0.05视为有统计学差异。结果研究发现HPL中含有MSCs生长所必需的4种生长因子,PDGF-AB(人血小板衍生生长因子AB),bFGF(成纤维细胞生长因子),IGF-1(胰岛素样生长因子1),TGF-β1(转化生长因子β1),浓度分别为:(0.53±0.06)ng/ml,(37.5±4.31)pg/ml,(0.15±0.06)mg/ml,(5150±463)pg/ml。适合MSCs增殖的最佳HPL浓度为7.5%。两种培养条件下的细胞形态无明显区别,均为长梭形。8代以前,细胞增殖能力没有显著性差异(P〉0.05),两种培养条件下的MSCs均表达CD105,CD106以及粘附分子CD29和CD44,不表达CD34,CD45,且其表达量没有显著性差异(P〉0.05)。两种培养体系下绝大多数细胞处于G0-G1期,FCS培养的MSCs其G0-G1期占(96.97±0.95)%,7.5%的HPL培养的MSCs其G0-G1期占(94.58±1.56)%,两种培养条件下不同周期没有显著性差异(P〉0.05)。结论本研究适合MSCs增殖的最佳HPL浓度为7.5%,HPL可以替代胎牛血清体外培养扩增人骨髓间质干细胞,并保持其生物学特性基本不变。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 血小板裂解液 增殖 表面标记 细胞周期
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