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利用CRISPR-Cas9系统构建新型异戊酰螺旋霉素Ⅰ产生菌
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作者 张晓婷 张妍 +2 位作者 戴剑漉 王以光 赫卫清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期472-481,共10页
异戊酰螺旋霉素(Isovalerylspiramycin,ISP)Ⅰ是必特螺旋霉素(Bitespiramycin,BT)的一种主组分,其抗菌活性与BT相似,而且作为单一组分在质控和剂型上更具优势,目前正在进行临床前研究。原有的 ISPⅠ工程菌株经过3次基因改造,已经具有2... 异戊酰螺旋霉素(Isovalerylspiramycin,ISP)Ⅰ是必特螺旋霉素(Bitespiramycin,BT)的一种主组分,其抗菌活性与BT相似,而且作为单一组分在质控和剂型上更具优势,目前正在进行临床前研究。原有的 ISPⅠ工程菌株经过3次基因改造,已经具有2种抗性基因,很难再进行遗传操作。前期研究利用经典同源重组的方法无法构建无抗性的ISPⅠ产生菌,文中利用CRISPR-Cas9基因编辑系统在螺旋霉素(Spiramycin,SP)产生菌中成功将3位酰基化酶的基因bsm4替换为组成型强启动子ermEp~*控制下的异戊酰基转移酶基因(Isovaleryltansferase gene,ist)。删除bsm4后突变株只能产生SPⅠ组分,外源基因ist的表达产物催化SPⅠ在其4″位进行异戊酰化修饰形成ISPⅠ。经过HPLC和质谱鉴定,阳性菌株ΔEI的发酵产物中只有ISPⅠ一种ISP组分,证实新的ISPⅠ工程菌株构建成功。ΔEI菌株不带有抗性基因,可重复利用CRISPR-Cas9系统进行基因操作来获得新的改良菌株。 展开更多
关键词 异戊酰螺旋霉素 酰基转移酶基因 CRISPR-Cas9系统
生技霉素E(4″—异戊酰螺旋霉素Ⅰ)的分离和结构鉴定 预览 被引量:1
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作者 孙承航 姜威 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期 1-4,71,共5页
为获得高产的4″-异戊酰螺旋霉素,将4″-异戊酰基转移基因整合入螺旋霉素产生菌Sspiramycelicus F21染色体,构建成功卫株稳定的生物工程菌WSJ-1,继从该菌株代谢产物中分离获得生技霉素A1(4″-异戊... 为获得高产的4″-异戊酰螺旋霉素,将4″-异戊酰基转移基因整合入螺旋霉素产生菌Sspiramycelicus F21染色体,构建成功卫株稳定的生物工程菌WSJ-1,继从该菌株代谢产物中分离获得生技霉素A1(4″-异戊酰螺旋霉素Ⅲ),生技霉素B1(4″-异戊酰螺旋霉素Ⅱ),又分离获得一主要组分生技霉素E。 展开更多
关键词 生技霉素E 生物工程菌 分离 结构鉴定
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埃莎霉素Ⅰ组分高含量、高产量基因工程菌WSJ-IA及其原株的鉴定 被引量:1
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作者 戴剑漉 林灵 +1 位作者 武临专 王以光 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期 503-514,共12页
【目的】利用调节基因acyB2激活异戊酰基转移酶(ist)基因表达的特点,将ist与调节基因acyB2在异戊酰螺旋霉素(埃莎霉素)Ⅰ产生菌菌株中共表达,获得埃莎霉素Ⅰ单组分的高含量及高产量菌株WSJ-IA。对其及原始螺旋霉素产生菌菌株Strepto... 【目的】利用调节基因acyB2激活异戊酰基转移酶(ist)基因表达的特点,将ist与调节基因acyB2在异戊酰螺旋霉素(埃莎霉素)Ⅰ产生菌菌株中共表达,获得埃莎霉素Ⅰ单组分的高含量及高产量菌株WSJ-IA。对其及原始螺旋霉素产生菌菌株Streptomyces spiramyceticus F21进行了初步鉴定。【方法】从形态学、培养和生理生化特征、细胞壁化学组成、16S rRNA基因序列、5个看家基因(atpD、gyrB、rpoB、recA和trpB)蛋白分析和系统发育树构建等方面对该菌株及其原株进行了鉴定。【结果】两株菌在形态培养特征、生理生化特征、细胞壁化学组成、16S rRNA基因序列和5个看家基因蛋白水平基本一致,在系统发育树分析中同处在一个分支中。而在16S rRNA基因序列和5个看家基因蛋白水平在系统发育上它们均与已知相近菌株处于不同的分支上,并且与不同基因的相近菌株各有不同,其中无一报道产生螺旋霉素。【结论】Streptomyces spira-myceticus F21可能是一个产生螺旋霉素的链霉菌新种,16S rRNA基因序列和5个看家基因蛋白序列分析可以作为埃莎霉素Ⅰ基因工程菌生产过程中进行鉴别的分子标志。 展开更多
关键词 埃莎霉素(异戊酰螺旋霉素) STREPTOMYCES spiramyceticus F21 16S RRNA基因 多相分类
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