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研究两种干细胞体外矿化过程中LIM矿化蛋白1的表达 预览
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作者 费腾 孙艳艳 +4 位作者 周妍 袁梦桐 刘明月 史欣 胡伟平 《口腔医学》 CAS 2017年第1期19-23,共5页
目的 LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是一种胞内非分泌型蛋白,广泛存在于各种组织中,它不仅影响骨基质的矿化而且还是成骨细胞分化和骨形成过程中重要的调节因子。本实验通过检测LMP-1在牙髓干细胞和骨髓间充质干... 目的 LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是一种胞内非分泌型蛋白,广泛存在于各种组织中,它不仅影响骨基质的矿化而且还是成骨细胞分化和骨形成过程中重要的调节因子。本实验通过检测LMP-1在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程中的表达情况,来研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1对牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化的作用,为LMP-1作为成骨调节因子,影响骨基质矿化方面的研究提供参考。方法 酶消化法体外培养牙髓干细胞,用挑克隆细胞团的方法对牙髓干细胞进行纯化传代培养。密度梯度离心法体外培养骨髓间充质干细胞。两种细胞分别设置实验组和对照组。实验组培养液中加入矿化诱导液,对照组不加矿化诱导液。分别于培养3、5、7、14天检测碱性磷酸酶的活性。培养21天茜素红染色检测矿化结节形成。培养期间,采用荧光定量PCR方法检测LIM矿化蛋白1、骨形态发生蛋白BMP-2、牙本质涎磷蛋白DSPP和Ⅰ型胶原蛋白COL-1、核心结合因子RUNX-2等成骨标志基因的表达,用SPSS 17.0对结果进行统计学分析。结果 培养3、5、7、14天碱性磷酸酶的活性逐渐提高,且实验组碱性磷酸酶的活性显著高于对照组。培养21天实验组可见矿化结节形成。荧光定量PCR检测到实验组及对照组各个基因均表达,且实验组表达显著高于对照组。结论发现LIM矿化蛋白1与牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程相关,推测LIM矿化蛋白1可能作为检测牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞矿化的一个指标。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 骨髓间充质干细胞 LIM矿化蛋白1 骨形态发生蛋-2
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LIM矿化蛋白1在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞中的研究进展 预览 被引量:1
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作者 费腾 胡伟平 袁梦桐 《口腔医学》 CAS 2016年第3期285-288,共4页
LIM矿化蛋白1(LMP-1)是一种胞内信号转导分子,体内外研究表明它在成骨细胞分化过程中起到促进骨形成的重要作用。目前认为LMP-1是通过刺激某些诱导骨形成的因子如骨形态发生蛋白(BMP)的合成及分泌发挥作用,从而提高骨形态发生蛋白... LIM矿化蛋白1(LMP-1)是一种胞内信号转导分子,体内外研究表明它在成骨细胞分化过程中起到促进骨形成的重要作用。目前认为LMP-1是通过刺激某些诱导骨形成的因子如骨形态发生蛋白(BMP)的合成及分泌发挥作用,从而提高骨形态发生蛋白及其他成骨因子的成骨活性。该文围绕LMP-1的作用及在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞矿化方面的研究现状作一综述。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白1 骨形态发生蛋白 牙髓干细胞 骨髓间充质干细胞
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LIM矿化蛋白1在大鼠牙髓损伤修复中的时空表达 被引量:1
3
作者 方平娟 潘乙怀 +2 位作者 孙仁义 赵瑜 孙瑜 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2016年第2期157-161,共5页
目的 :探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达。方法 :建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图... 目的 :探讨LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)在大鼠磨牙牙髓损伤修复中的表达。方法 :建立大鼠磨牙牙髓损伤修复动物模型,用免疫组织化学染色方法观察LMP-1在大鼠牙髓损伤修复中的表达,并用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件及单因素方差分析比较各组间的差异。结果 :在正常大鼠牙髓组织中LMP-1表达阴性;在大鼠牙髓损伤后1 d,LMP-1表达于成牙本质细胞及部分牙髓成纤维细胞;术后3 d,LMP-1表达于坏死牙髓下方的细胞增殖层;术后7 d,LMP-1显著表达于增殖活跃的牙髓细胞及部分成牙本质细胞中。结论:LMP-1在牙髓损伤修复过程中呈时空特异性表达,可能参与成牙本质细胞及牙髓细胞的增殖、分化及修复性牙本质的形成。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白1 牙髓损伤修复 时空表达
LIM矿化蛋白1/低氧诱导因子1α慢病毒载体转染脂肪源性干细胞的成骨分化 预览 被引量:3
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作者 潘玮敏 刘民 +2 位作者 杨建昌 段春光 黄悦 《中国组织工程研究》 北大核心 2015年第32期5140-5147,共8页
背景:LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α作为胞内蛋白,可分别从诱导成骨分化及促进血管再生两个方面促进成骨,联合二者高效诱导脂肪源性干细胞成骨分化具有重要的意义。目的:探讨慢病毒载体介导的LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因... 背景:LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α作为胞内蛋白,可分别从诱导成骨分化及促进血管再生两个方面促进成骨,联合二者高效诱导脂肪源性干细胞成骨分化具有重要的意义。目的:探讨慢病毒载体介导的LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染的脂肪源性干细胞成骨分化的情况。方法:应用反转录PCR技术克隆目的基因LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α片段,并分别克隆于慢病毒骨架质粒 pLVX-EF1α-DsRed-Hyg 和 pLVX-EF1α-IRES2-AcGFP1中,构建慢病毒载体主体质粒pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和 pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α,随即与辅助质粒和包装质粒共转染Lenti-X 293T细胞,包装慢病毒载体;采用组织块加酶消化法分离培养大鼠脂肪源性干细胞,使用流式细胞仪对其进行鉴定。分别在慢病毒转染脂肪源性干细胞3,7,14 d后,应用反转录PCR方法检测脂肪源性干细胞中成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白表达水平的同时检测血管内皮生长因子的表达水平。结果与结论:pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α可有效地转染入大鼠脂肪源性干细胞;反转录 PCR结果显示成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白在 LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染后第7天都开始明显过表达,并且可持续到14 d。说明LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染脂肪源性干细胞可提高其成骨活性。 展开更多
关键词 转染 细胞分化 病毒 干细胞 脂肪干细胞 低氧诱导因子1Α 脂肪源性干细胞 基因疗法 LIM矿化蛋白1 慢病毒载体 成骨分化 国家自然科学基金
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LIM矿化蛋白1慢病毒载体转染后大鼠骨髓基质干细胞的分化 预览
5
作者 张姝江 谭丽 +1 位作者 陈艺 白波 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS 2015年第5期623-626,共4页
目的探讨慢病毒转染大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)过表达LIM矿化蛋白1(LMP-1)对BMSCs分化能力的影响。方法构建LMP-1基因慢病毒载体,转染原代培养的大鼠MSCs,荧光显微镜下观察转染效果,MTT法检测转染后细胞增殖,常规方法诱导过表达LMP-1的B... 目的探讨慢病毒转染大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)过表达LIM矿化蛋白1(LMP-1)对BMSCs分化能力的影响。方法构建LMP-1基因慢病毒载体,转染原代培养的大鼠MSCs,荧光显微镜下观察转染效果,MTT法检测转染后细胞增殖,常规方法诱导过表达LMP-1的BMSCs成骨和成软骨分化,以免疫组织化学染色观察成骨诱导后细胞分泌骨钙素的情况以及用阿利新蓝染色鉴定成软骨诱导后细胞分泌氨基多糖的情况。结果感染复数(MOI)值为12时即可获得良好的转染效果,细胞转染后增殖正常,成骨诱导后,骨钙素染色阳性;成软骨诱导后,阿利新蓝染色阳性。结论lv-lmp-1可以有效转染大鼠BMSCs,转染后细胞的多向分化能力没有受到影响。 展开更多
关键词 慢病毒属 转染 LIM矿化蛋白1 细胞分化 骨髓 间充质干细胞
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LIM矿化蛋白1过表达对骨肉瘤细胞系OS-9901细胞增殖的影响
6
作者 严广斌 余楠生 +2 位作者 卢伟杰 卢永辉 钱东阳 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第3期314-317,共4页
目的探讨骨肉瘤细胞系OS-9901细胞中LIM矿化蛋白1(LMP-1)过表达对该细胞增殖的影响。方法构建LMP-1过表达慢病毒载体,通过脂质体转染进骨肉瘤细胞系OS-9901细胞。通过荧光定量PCR和Western blot检测LMP-1过表达情况,并通过BrdU掺入... 目的探讨骨肉瘤细胞系OS-9901细胞中LIM矿化蛋白1(LMP-1)过表达对该细胞增殖的影响。方法构建LMP-1过表达慢病毒载体,通过脂质体转染进骨肉瘤细胞系OS-9901细胞。通过荧光定量PCR和Western blot检测LMP-1过表达情况,并通过BrdU掺入实验比较LMP-1过表达前后细胞增殖情况。结果转染了LMP-1过表达慢病毒载体6h后细胞内LMP-1 mRNA和蛋白表达均无显著变化(P〉0.05),且DNA合成量无显著变化。而当LMP-1过表达慢病毒载体转染细胞12、24和48h后细胞内LMP-1 mRNA和蛋白表达量均显著提高的同时,DNA合成量显著降低(P〈0.05)。结论LMP-1过表达可抑制骨肉瘤细胞系OS-9901细胞增殖。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白1 骨肉瘤细胞 慢病毒载体
LIM矿化蛋白1在人牙髓及根尖牙乳头中的表达 被引量:1
7
作者 陈旭 张珍丽 +1 位作者 孙鲁雁 郭艳 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期330-333,共4页
目的比较人年轻恒牙牙髓、根尖牙乳头及成熟恒牙牙髓组织中LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)的表达,探寻LMP-1在牙髓牙本质复合体发育和成熟中的作用。方法收集48颗因正畸拔除的健康前磨牙,其中年轻和成熟恒牙各2... 目的比较人年轻恒牙牙髓、根尖牙乳头及成熟恒牙牙髓组织中LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)的表达,探寻LMP-1在牙髓牙本质复合体发育和成熟中的作用。方法收集48颗因正畸拔除的健康前磨牙,其中年轻和成熟恒牙各24颗,样本来源对象的年龄分别为11~14岁和18~30岁。拔除后即刻分离获得年轻恒牙的牙髓和根尖牙乳头组织(各24个样本)以及成熟恒牙的牙髓组织(24个样本)。实验分组如下:第1组为牙根形成2/3的年轻恒牙的根尖牙乳头组织;第2组为牙根形成2/3的年轻恒牙的牙髓组织;第3组为成熟恒牙的牙髓组织。每组12个样本用于反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT—PCR)检测,另12个样本用于蛋白质印迹法检测,以β-肌动蛋白做内参。图像分析软件(Meta Morph6.2.6)对阳性条带进行灰度值测定,目的条带与内参的灰度值比值为LMP-1的表达强度。应用SPSS13.0对数据进行统计学分析,LMP-1在年轻恒牙根尖牙乳头与牙髓组织之间的表达强度的两两比较采用两配对样本的t检验,年轻恒牙牙髓与成熟恒牙牙髓组织之间的表达强度的两两比较采用两独立样本的t检验,以双侧P〈0.05为差异有统计学意义。结果LMP-1 mRNA在年轻恒牙的根尖牙乳头、牙髓和成熟恒牙的牙髓组织中的表达强度分别为0.25±0.09、0.46±0.24和0.31±0.10,经两样本t检验分析,LMP-1的基因表达在第2组年轻恒牙牙髓组织明显高于其在第1组年轻恒牙根尖牙乳头组织(t=2.92)以及第3组成熟恒牙牙髓组织的表达强度(t=2.31,P〈0.05)。LMP-1蛋白在3组中的表达强度分别为0.33±0.08、0.82±0.10和0.52±0.19,LMP-1的蛋白表达在第2组显著高于第1组(t=3.33)及第3组中的表达强度(t=3.11,P〈0.05)。结论无论是在mRNA水平还是在蛋白水平,LMP-1在人年轻恒牙牙� 展开更多
关键词 牙髓 牙乳头 LIM矿化蛋白1 年轻恒牙
六白菖砂粒剂对颈椎病动物模型骨形态发生蛋白2及LIM矿化蛋白1的影响 预览
8
作者 史栋梁 杨豪 +1 位作者 贺自克 王子华 《中国组织工程研究》 CSCD 2012年第50期9419-9424,共6页
背景:骨形态发生蛋白2与LIM矿化蛋白1在成骨细胞分化、成熟中有重要作用,与颈椎病的发生有很大联系。目的:观察六白菖砂粒剂对家兔颈椎病模型外周血清中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1的影响。方法:将50只成年健康雄性大耳白兔随机分... 背景:骨形态发生蛋白2与LIM矿化蛋白1在成骨细胞分化、成熟中有重要作用,与颈椎病的发生有很大联系。目的:观察六白菖砂粒剂对家兔颈椎病模型外周血清中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1的影响。方法:将50只成年健康雄性大耳白兔随机分为5组。除正常对照组外采用蹲坐低头位制作颈椎病动物模型。颈复康对照组每天以颈复康0.25g灌胃,六白菖砂粒剂高剂量组和低剂量组每天分别以0.5g、0.25g灌胃,正常对照组和模型对照组予同等容量的蒸馏水灌胃。与4周、12周测量动物颈椎骨密度,12周时取椎体检测离体骨密度,并检测外周血清中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1因子水平。结果与结论:六白菖砂粒剂高剂量组中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1水平显著高于空白对照组、颈椎病模型对照组和六白菖砂粒剂低剂量组(P〈0.05);颈椎病模型对照组中骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1水平明显低于正常对照组、颈复康颗粒对照组和六白菖砂粒剂高剂量组(P〈0.05),而与六白菖砂粒剂低剂量组相比差异无显著性意义(P〉0.05)。提示六白菖砂粒剂是通过提高家兔血清骨形态发生蛋白2、LIM矿化蛋白1水平对颈椎病产生疗效。 展开更多
关键词 六白菖砂粒剂 颈椎病 骨质疏松症 骨形态发生蛋白2 LIM矿化蛋白1
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新型人工生物活性接骨板治疗犬股骨骨折 预览 被引量:2
9
作者 徐小平 倪卫东 +2 位作者 高仕长 蒲超 黄伟弘 《中国组织工程研究》 CSCD 2012年第21期3838-3842,共5页
背景:研究表明纳米羟基磷灰石/聚酰胺66是一种具有良好的生物相容性、生物安全性、生物活性和骨传导能力的高强度高韧性复合材料.目的:分析转染LIM矿化蛋白1基因的骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66接骨板治疗犬股骨骨折... 背景:研究表明纳米羟基磷灰石/聚酰胺66是一种具有良好的生物相容性、生物安全性、生物活性和骨传导能力的高强度高韧性复合材料.目的:分析转染LIM矿化蛋白1基因的骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66接骨板治疗犬股骨骨折的可行性和效果.方法:收集犬骨髓间充质干细胞,经LIM矿化蛋白1转染后与纳米羟基磷灰石/聚酰胺66接骨板复合制备新型生物活性接骨板.48只杂交犬建立右侧股骨中段横形骨折模型,分别用转染/未转染LIM矿化蛋白1基因的骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺66接骨板、单纯纳米羟基磷灰石/聚酰胺66接骨板和钢板螺钉进行修复.结果与结论:修复后8周及修复后12周转染组内固定失败率均低于未转染组和单纯接骨板组(P 〈 0.05),与钢板螺钉修复比较差异无显著性意义(P 〉 0.05).转染组骨折愈合时间明显短于其他组.修复后12周转染组接骨板与犬股骨外侧皮质完全融合,骨干间有明显新骨生成.未转染组和单纯接骨板组未见或少量骨组织生成.说明新型生物活性接骨板能促进骨折愈合并与自体骨融合,不需要二次手术取出,但该新型接骨板的强度有一定的局限性,用于犬股骨骨折的治疗时必须辅加外固定. 展开更多
关键词 纳米羟基磷灰石/聚酰胺66 腺病毒 骨折 LIM矿化蛋白1
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LIM矿化蛋白1对牙周膜细胞生物学特性的影响 预览
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作者 俞少杰 付云 +2 位作者 赵川江 李颖 邓雨泉 《广东牙病防治》 2011年第11期 585-589,共5页
目的以LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)基因构建真核表达载体PET43.1a-LMP-1,转染人牙周膜细胞,观察对其生物学特性的影响。方法采用基因工程技术构建真核表达载体pET43.1a-LMP-1,脂质体法转染人牙周膜细胞,四唑盐... 目的以LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein 1,LMP-1)基因构建真核表达载体PET43.1a-LMP-1,转染人牙周膜细胞,观察对其生物学特性的影响。方法采用基因工程技术构建真核表达载体pET43.1a-LMP-1,脂质体法转染人牙周膜细胞,四唑盐比色法和酶联免疫吸附测定法测定真核表达载体pET43.1a-LMP-1转染对牙周膜细胞活性以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的影响。结果与空质粒转染组和空白对照组相比,pET43.1a-LMP-1真核表达载体转染后牙周膜细胞中LMP-1 mRNA和蛋白表达显著增强(P〈0.05);细胞增殖明显增加;ALP表达明显增强,并随时间延长逐渐上升。结论外源性LMP-1转染进入牙周膜细胞能够促进细胞的增殖和矿化能力。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白1 基因转染 人牙周膜细胞
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LIM矿化蛋白1促进成骨的研究现状 预览 被引量:4
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作者 刘会文(综述) 罗嘉全(综述) +1 位作者 韩智敏(审校) 曹凯(审校) 《中国骨与关节外科》 2011年第4期 334-337,共4页
目的 LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是一种细胞内非分泌蛋白,通过调节BMPs信号通路而促进成骨分化。近年来,研究表明LMP-1作为成骨信号途径的上游信号分子级联放大下游成骨信号,增加成骨细胞对BMPs的敏感性,招募... 目的 LIM矿化蛋白1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是一种细胞内非分泌蛋白,通过调节BMPs信号通路而促进成骨分化。近年来,研究表明LMP-1作为成骨信号途径的上游信号分子级联放大下游成骨信号,增加成骨细胞对BMPs的敏感性,招募众多的成骨因子共同参与成骨,最终促进细胞成骨分化和诱导骨形成。本文就LMP-1的结构特点、诱导成骨机制、LMP-1用于基因治疗的种子细胞及载体的选择等研究现状作一综述。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白1 种子细胞 载体 基因治疗
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重组腺病毒Ad-LMP-1感染大鼠骨髓间充质干细胞 预览 被引量:2
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作者 赵忠海 朱悦 +2 位作者 林乐 阿良 李洪秋 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期 3451-3457,共7页
背景:LIM矿化蛋白1(LIM Mineralization protein,LMP-1)是一种细胞内非分泌蛋白,可以通过招募众多的成骨因子共同参与成骨细胞的分化。LMP-1在成骨上游水平发挥的强大作用提示了其在骨骼重建方面具有巨大的应用潜力。目的:观察重组... 背景:LIM矿化蛋白1(LIM Mineralization protein,LMP-1)是一种细胞内非分泌蛋白,可以通过招募众多的成骨因子共同参与成骨细胞的分化。LMP-1在成骨上游水平发挥的强大作用提示了其在骨骼重建方面具有巨大的应用潜力。目的:观察重组腺病毒Ad-LMP-1感染骨髓间充质干细胞的效果,及对其分化的影响。方法:大鼠骨髓间充质干细胞分离培养,传代后,检测特异性标记物CD44的表达情况,矿化液诱导细胞成骨分化后用茜素红染色鉴定。感染重组腺病毒Ad-LMP-1后通过观察绿色荧光蛋白表达情况计算转染效率,RT-PCR及Westernblot验证感染效果,观察感染Ad-LMP-12,7,14d后骨髓间充质干细胞的形态变化和对细胞增殖活力的影响。结果与结论:传代细胞形态一致,排列紧密。矿化液诱导后,细胞形态明显改变。茜素红染色结果表明,诱导后出现钙化结节。观察绿色荧光蛋白信号表明重组病毒Ad-LMP-1感染骨髓间充质干细胞效率在85%左右。感染重组腺病毒Ad-LMP-1后第7天出现了细胞形态改变,14d出现类钙化结节,但不伴有细胞增殖活力改变。结果提示重组腺病毒Ad-LMP-1可以有效地感染原代培养的骨髓间充质干细胞,并诱导其向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 腺病毒 骨髓间充质干细胞 细胞分化 LIM矿化蛋白1 干细胞
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胞内信号分子LIM矿化蛋白1的研究进展 预览 被引量:2
13
作者 王效英 张旗 陈智 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2008年第6期 705-707,共3页
LIM矿化蛋白I(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是LIM结构域蛋白家族成员,由Boden首先发现[1]。相关体内外研究表明,LMP-1是一种胞内非分泌蛋白,不仅影响骨基质的矿化,而且还是胚胎骨的发育和成骨细胞分化过程中重要的正调... LIM矿化蛋白I(LIM mineralization protein-1,LMP-1)是LIM结构域蛋白家族成员,由Boden首先发现[1]。相关体内外研究表明,LMP-1是一种胞内非分泌蛋白,不仅影响骨基质的矿化,而且还是胚胎骨的发育和成骨细胞分化过程中重要的正调节因子[1-4]。近期研究表明[5-7],LMP-1在人牙髓牙本质复合体及牙周膜细胞也有表达并发挥了重要作用。本文就LMP-1的结构特点、分布、作用及应用前景作一综述。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白1 信号分子 胞内 牙髓牙本质复合体 LMP-1 体内外研究 牙周膜细胞 家族成员
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胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中表达的实验研究 预览 被引量:11
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作者 王效英 张旗 +2 位作者 王强 陈卓 陈智 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2006年第3期 228-231,共4页
目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von koss... 目的:研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1在人牙髓细胞体外矿化过程中的表达。方法:利用组织块法体外培养人牙髓细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养14d后,免疫细胞化学检测牙本质涎蛋白的表达;von kossa染色检测矿化结节的形成。培养期间,采用半定量RT—PCR技术监测LIM矿化蛋白1及碱性磷酸酶的表达,SPSS11.0软件分析结果。结果:培养14d,实验组牙本质涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达,von kossa染色阳性,矿化结节形成;对照组牙本质涎蛋白表达阴性,yon kossa染色阴性。RT—PCR结果显示碱性磷酸酶及LIM矿化蛋白1在实验组和对照组各时段均表达。培养期间,实验组LIM矿化蛋白1的表达显著性高于对照组,其中培养第2天及9天时表达分别达到两个高峰,约为对照组的1.8倍及3.0倍。培养期间,碱性磷酸酶的表达显著性增高,其中培养14d时约为对照组的2.0倍。结论:首次发现LIM矿化蛋白1与人牙髓细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白1可能在牙髓细胞的分化及矿化中发挥一定作用。 展开更多
关键词 牙髓细胞 分化 矿化 LIM矿化蛋白1
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高浓度地塞米松通过下调LMP—1表达抑制大鼠成骨细胞的分化 预览 被引量:4
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作者 刘素彩 张志勇 李恩 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期 33-37,共5页
为探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)抑制成骨细胞分化的机制,观察了不同浓度DEX对体外培养大鼠成骨细胞的碱性磷酸酶活性、骨钙素(osteocalcin,OC)合成、Ⅰ型胶原蛋白表达的影响,并用RT-PCR方法检测了成骨细胞中LIM矿化蛋白1 mRNA的表达... 为探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)抑制成骨细胞分化的机制,观察了不同浓度DEX对体外培养大鼠成骨细胞的碱性磷酸酶活性、骨钙素(osteocalcin,OC)合成、Ⅰ型胶原蛋白表达的影响,并用RT-PCR方法检测了成骨细胞中LIM矿化蛋白1 mRNA的表达量.结果显示:低浓度(10-9 mol/L)的DEX能增强碱性磷酸酶的活性、 OC的分泌和Ⅰ型胶原蛋白的表达;而高浓度(10-7 mol/L)的DEX对它们则起抑制作用,并下调成骨细胞正调节因子LMP-1 mRNA的表达.上述结果表明,低浓度的DEX促进成骨细胞的分化;高浓度的DEX则抑制成骨细胞的分化,其抑制作用可能是通过下调LMP-1 mRNA的表达而实现的. 展开更多
关键词 地塞米松 LIM矿化蛋白1 表达 成骨细胞分化 调节
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LMP-1基因转染骨髓间充质干细胞的LIM矿化蛋白表达 预览 被引量:1
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作者 金夏生 王子江 向川 《中国组织工程研究》 CSCD 2014年第23期3633-3638,共6页
背景:体外实验提示LMP-1基因可提高骨质疏松性骨髓间充质干细胞LMP-1蛋白的表达。目的:用含有LIM矿化蛋白1基因的反转录病毒载体(RV-LMP-1-GFP)转染骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞,检测其对骨质疏松性骨髓间充质干细胞LIM矿化蛋... 背景:体外实验提示LMP-1基因可提高骨质疏松性骨髓间充质干细胞LMP-1蛋白的表达。目的:用含有LIM矿化蛋白1基因的反转录病毒载体(RV-LMP-1-GFP)转染骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞,检测其对骨质疏松性骨髓间充质干细胞LIM矿化蛋白表达的影响。方法:随机取雌性SD大鼠12只,采用双侧卵巢切除法建立骨质疏松性大鼠模型,另取6只大鼠仅切除卵巢周围等量脂肪组织,保留卵巢为假手术组。喂养2个月后取双侧股骨、胫骨、肱骨分离培养其骨髓间充质干细胞。均取3代培养细胞随机分为去势组、LMP-1转染组(转染LMP-1基因)和假手术组。分别行RT-PCR及Western-Blot检测各组细胞LIM矿化蛋白1 mRNA和蛋白的表达。结果与结论:培养出骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞,转染后倒置荧光显微镜下可见绿色荧光表达;3组细胞均可在基因及蛋白水平表达LIM矿化蛋白1。与假手术组及去势组比较,LMP-1基因转染组的LIM-1mRNA和蛋白的表达均升高显著(P〈0.05),假手术组与去势组之间差异无显著性意义(P〉0.05)。成功实现重组RV-LMP-1-GFP基因在骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞中mRNA和蛋白水平的表达,且LMP-1的表达水平显著提高。结果表明重组LMP-1基因成功导入骨质疏松性大鼠骨髓间充质干细胞基因组中,并使得LMP-1 mRNA和蛋白的表达明显提高。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 去势大鼠 LIM矿化蛋白1基因 反转录病毒 转染 骨质疏松
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LIM矿化蛋白-1发挥成骨效应的机制探讨 预览
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作者 纪志华 钟贞浩 孟志斌 《海南医学》 CAS 2016年第15期2507-2510,共4页
近来大量研究证实,LIM矿化蛋白-1(LMP-1)是一种细胞内骨架蛋白,属于PDZ-LIM蛋白家族,参与细胞成骨分化的早期阶段;其不同结构域各有其独特的作用,它们可通过招募多种成骨因子、促进细胞增殖、上调成骨相关基因表达、减少炎性骨丢失等多... 近来大量研究证实,LIM矿化蛋白-1(LMP-1)是一种细胞内骨架蛋白,属于PDZ-LIM蛋白家族,参与细胞成骨分化的早期阶段;其不同结构域各有其独特的作用,它们可通过招募多种成骨因子、促进细胞增殖、上调成骨相关基因表达、减少炎性骨丢失等多种途径发挥其促成骨效应。LMP-1可通过其不同结构域的协同作用发挥强大的促成骨效应。本文对LMP-1发挥成骨效应的机制探讨作一综述。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白-1 结构域 成骨分化 机制
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LIM矿化蛋白-1与颈椎后纵韧带骨化相关性的实验研究
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作者 蔡国栋 孔德谦 +2 位作者 王俊勤 朱庄臣 张业锋 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期649-653,共5页
[目的]研究LIM矿化蛋白-1(LMP-1)与颈椎后纵韧带骨化(OPLL)形成的相关性,为OPLL的预防提供新的理论方法。[方法]选取2012年3月~2013年12月本院颈椎后纵韧带骨化患者手术切除的16例后纵韧带标本为OPLL组,非骨化的20例颈椎后纵韧带标... [目的]研究LIM矿化蛋白-1(LMP-1)与颈椎后纵韧带骨化(OPLL)形成的相关性,为OPLL的预防提供新的理论方法。[方法]选取2012年3月~2013年12月本院颈椎后纵韧带骨化患者手术切除的16例后纵韧带标本为OPLL组,非骨化的20例颈椎后纵韧带标本为非OPLL组,通过免疫组织化学染色及RT-PCR技术分别检测两组标本中LMP-1及其mRNA的表达情况。[结果]LMP-1在OPLL组及非OPLL组中均有表达;LMP-1在OPLL组中表达量高于非OPLL组,二者差异有统计学意义(P〈0.05)。[结论]LMP-1与OPLL的形成有一定的相关性,是OPLL形成的原因之一;通过调节LMP-1的表达可能对OPLL的防治提供一个新的理论基础。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白-1 颈椎后纵韧带骨化 逆转录聚合酶链反应 免疫组织化学染色
LIM矿化蛋白1在成骨分化前后人牙囊细胞中的表达 被引量:2
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作者 常秀梅 张克荣 +1 位作者 王书文 齐香微 《临床口腔医学杂志》 2014年第6期336-339,共4页
目的:研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法:组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免... 目的:研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法:组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免疫细胞化学检测骨涎蛋白的表达;Von Kossa染色检测矿化结节的形成。矿化诱导前后,采用RT-PCR技术检测LIM矿化蛋白-1。结果:培养4周,实验组矿化结节形成,骨涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达, Von Kossa染色阳性;对照组未形成矿化结节,骨涎蛋白表达弱阳性,Von Kossa染色阴性。 RT-PCR结果显示LIM矿化蛋白-1在实验组强阳性表达,对照组弱表达。结论:LIM矿化蛋白-1与胚胎期人牙囊细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白-1可能在胚胎期牙囊细胞的分化、矿化中发挥一定作用。 展开更多
关键词 牙囊细胞 分化 矿化 LIM矿化蛋白-1
人LMP-1基因腺病毒重组体的构建及其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达 预览
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作者 刘会文 黄路 +5 位作者 韩智敏 罗嘉全 杨东 詹平 戴闽 曹凯 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期589-594,共6页
目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达。方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增... 目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达。方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序。双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达。线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1。通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度。用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达。结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组。通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5×109pfu/ml。荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组。结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 LIM矿化蛋白-1 重组腺病毒载体 表达载体构建 骨肉瘤细胞
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