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肝龙胶囊联合用药抗肝纤维化的体外筛选实验 预览
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作者 陈丽平 杨强丽 +4 位作者 李辉 杜一民 焦素月 邵明园 赖泳 《大理大学学报》 CAS 2019年第4期12-17,共6页
目的:研究肝龙胶囊联合多种常用抗肝纤维化药对LX-2细胞的增殖抑制作用和对L-02细胞的保护作用,评价肝龙胶囊对缬沙坦、小柴胡、甲泼尼龙、灯盏花素、秋水仙碱、多烯磷脂酰胆碱、水飞蓟宾和复方甘草酸苷等体外抗肝纤维化作用的影响。方... 目的:研究肝龙胶囊联合多种常用抗肝纤维化药对LX-2细胞的增殖抑制作用和对L-02细胞的保护作用,评价肝龙胶囊对缬沙坦、小柴胡、甲泼尼龙、灯盏花素、秋水仙碱、多烯磷脂酰胆碱、水飞蓟宾和复方甘草酸苷等体外抗肝纤维化作用的影响。方法:采用二因素五水平完全实验单独或联合使用不同剂量上述抗肝纤维化药物与肝龙胶囊在不同时间作用于L-02细胞和LX-2细胞,并用MTT法测定对其影响。结果:肝龙胶囊与水飞蓟宾、复方甘草酸苷合用在fa<0.8,CI<1,对LX-2增殖抑制呈协同效应。0.469 mg/mL肝龙胶囊分别联合1.563 mg/mL复方甘草酸苷、0.438 mg/mL水飞蓟宾配方对LX-2的增殖抑制最明显,同时L-02的活动率最佳。结论:肝龙胶囊联合水飞蓟宾以及肝龙胶囊联合复方甘草酸苷在体外抗肝纤维化作用最明显。 展开更多
关键词 LX-2细胞 L-02细胞 水飞蓟宾 肝龙胶囊 复方甘草酸苷
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IRF3抑制LPS诱导肝星状细胞LX-2的炎症因子的分泌 预览
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作者 刘云洁 程玮 +2 位作者 李丽 顾萌 徐涛 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期178-182,共5页
目的研究干扰素调节因子3(IRF3)对LPS诱导的肝星状细胞中LX-2中炎症因子IL-6及TNF-α分泌的影响。方法利用脂质体将质粒pc DNA3-IRF3瞬时转染到人肝星状细胞LX-2中过量表达IRF3,qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,并检测炎症因子IL-6... 目的研究干扰素调节因子3(IRF3)对LPS诱导的肝星状细胞中LX-2中炎症因子IL-6及TNF-α分泌的影响。方法利用脂质体将质粒pc DNA3-IRF3瞬时转染到人肝星状细胞LX-2中过量表达IRF3,qRT-PCR和Western blot法检测转染效率,并检测炎症因子IL-6及TNF-α的表达。结果qRT-PCR和Western blot结果显示用2μg/ml的LPS刺激LX-2细胞12 h后,与正常组比较,IRF3的表达量明显降低,而诱导产生的炎症因子TNF-α及IL-6的表达量则明显上升。而pc DNA3转入LX-2细胞12 h后,与pc DNA3空载体对照组比较,pc DNA3转染组中炎症因子IL-6及TNF-α表达量在LX-2细胞中被显著抑制。结论在肝星状细胞中,IRF3能够抑制LPS诱导的肝星状细胞LX-2中炎症因子IL-6及TNF-α的表达。 展开更多
关键词 IRF3 TNF-Α 肝星状细胞 LX-2细胞 炎症因子
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甲基莲心碱对人肝星状细胞共培养条件下的人肝癌细胞中的转化生长因子(TGF-β1)的影响 被引量:1
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作者 李娜 宋金春 《中国医院药学杂志》 北大核心 2018年第2期157-160,共4页
目的:研究甲基莲心碱对人肝星状细胞LX-2细胞株共培养条件下的人肝癌细胞HepG2细胞株中的转化生长因子(TGF-β1)的影响。方法:Transwell建立HepG2细胞和LX-2细胞共培养系统,同时设置阴性对照组和单独的HepG2细胞培养组;倒置显微镜... 目的:研究甲基莲心碱对人肝星状细胞LX-2细胞株共培养条件下的人肝癌细胞HepG2细胞株中的转化生长因子(TGF-β1)的影响。方法:Transwell建立HepG2细胞和LX-2细胞共培养系统,同时设置阴性对照组和单独的HepG2细胞培养组;倒置显微镜下观察甲基莲心碱诱导肝星状细胞共培养条件下的肝癌细胞的凋亡形态变化;酶联免疫(ELISA)检测上清液中分泌的转化生长因子(TGF-β1)的浓度;Western Blot和实时定量PCR分别从蛋白水平和mRNA水平测定TGF-β1的表达情况。结果:甲基莲心碱作用共培养条件的HepG2细胞48 h,给药组相较于对照组细胞数目减少,形态皱缩,但没有单独的HepG2细胞组凋亡形态明显;TGF-β1经ELISA、Western Blot和实时定量PCR检测,其表达水平均随着药物剂量的增大而下调,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05),但没有单独的HepG2细胞组TGF-β1水平下调明显。结论:甲基莲心碱能够下调肝星状细胞LX-2细胞株共培养条件下的肝癌细胞HepG2细胞株的TGF-β1的表达来诱导细胞凋亡,并呈现出剂量依赖性,但肝星状LX-2细胞对甲基莲心碱诱导共培养下的HepG2细胞的凋亡有一定地抑制作用。 展开更多
关键词 甲基莲心碱 HEPG2细胞 LX-2细胞 共培养 TGF-Β1
FAK抑制剂对人肝星状细胞Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响 被引量:1
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作者 白瑞丹 张洪 +1 位作者 黄萃园 高洁芳 《中国医院药学杂志》 北大核心 2018年第1期59-63,共5页
目的:探讨FAK抑制剂(PF562,271)对人肝星状细胞(LX-2)Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响,为抗肝纤维化寻找新的作用靶点。方法:CCK-8法检测不同浓度范围(0~7μmol·L~(-1))FAK抑制剂(PF562,271)在12、24、48 h和72 ... 目的:探讨FAK抑制剂(PF562,271)对人肝星状细胞(LX-2)Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响,为抗肝纤维化寻找新的作用靶点。方法:CCK-8法检测不同浓度范围(0~7μmol·L~(-1))FAK抑制剂(PF562,271)在12、24、48 h和72 h时对LX-2细胞增殖的影响,Real-time PCR分析PF562,271对LX-2细胞中α-SMA、CollagenⅠmRNA表达水平的影响,Western-blot检测不同浓度PF562,271对LX-2细胞中Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达的影响,评价PF562,271对LX-2细胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响。结果:PF562,271能够抑制LX-2细胞增殖,且该作用呈剂量和时间相关性;qRT-PCR检测到PF562,271能够抑制LX-2细胞中α-SMA、collagenⅠmRNA表达,与对照组相比,表达量显著降低(P〈0.05);Western-blot结果显示PF562,271对Akt/GSK-3β的磷酸化表达水平显著降低(P〈0.05)。结论:FAK抑制剂能够抑制LX-2细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路从而缓解肝纤维化进程。 展开更多
关键词 FAK抑制剂 LX-2细胞 Akt/GSK-3β/β-catenin 肝纤维化
日本血吸虫成虫抗原通过ROS诱导人LX-2肝星状细胞NLRP3炎症小体活化和胶原表达 预览
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作者 朱燕楠 缪婷婷 +3 位作者 王伟 陆忠奎 刘劲峰 王勇 《寄生虫与医学昆虫学报》 2018年第2期71-79,共9页
为了探讨日本血吸虫成虫抗原(SWA)对LX-2细胞NLRP3炎症小体活化和纤维化相关基因表达的影响,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同浓度(0、25、50、100μg/mL)的SWA刺激LX-2细胞,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和... 为了探讨日本血吸虫成虫抗原(SWA)对LX-2细胞NLRP3炎症小体活化和纤维化相关基因表达的影响,以及活性氧(ROS)在其中的作用,本文首先采用不同浓度(0、25、50、100μg/mL)的SWA刺激LX-2细胞,通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的基因和蛋白表达,ELISA检测细胞IL-1β 的分泌水平;同时使用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测细胞LDH的释放;流式细胞术检测SWA刺激对LX-2细胞中ROS产生的影响;之后使用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)处理细胞,检测NLRP3、IL-1β、Caspase-1、 α-SMA、ColⅠ基因和蛋白的表达水平.结果显示,当SWA的浓度达100μg/mL时,LX-2细胞内NLRP3、Caspase-1、IL-1β、 α-SMA和ColⅠ的mRNA的表达与对照组相比均明显升高,同时相关蛋白的表达和IL-1β的分泌也显著升高.流式检测结果显示,SWA刺激LX-2细胞后能显著增加细胞内ROS的生成,并在NAC处理后,可见明显抑制细胞内ColⅠ和炎症小体活化相关的基因和蛋白的表达.结果提示,SWA可以诱导LX-2细胞内炎症小体活化和胶原表达,并且ROS反应可能在介导NLRP3活化中发挥重要的作用. 展开更多
关键词 LX-2细胞 SWA NLRP3炎症小体 ROS 肝纤维化
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IL-32γ活化Akt通路诱导肝星状细胞LX-2表达MMP 预览
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作者 梁美莲 陈小燕 +1 位作者 张凡 潘兴飞 《中华肝脏外科手术学电子杂志》 CAS 2017年第4期328-331,共4页
目的 探讨IL-32γ诱导肝星状细胞LX-2表达基质金属蛋白酶2(MMP2)及其机制。方法 不同浓度(0、10、20μg/L)的IL-32γ蛋白与LX-2细胞共培养,RT-PCR检测细胞MMP2m RNA水平;ELISA检测MMP2蛋白水平,Human Phospho-Akt Immunoassay试剂... 目的 探讨IL-32γ诱导肝星状细胞LX-2表达基质金属蛋白酶2(MMP2)及其机制。方法 不同浓度(0、10、20μg/L)的IL-32γ蛋白与LX-2细胞共培养,RT-PCR检测细胞MMP2m RNA水平;ELISA检测MMP2蛋白水平,Human Phospho-Akt Immunoassay试剂盒检测活化的Akt水平。不同浓度(0、25、50μg/L)的重组人活化Akt蛋白与LX-2细胞共培养后,ELISA检测MMP2蛋白;不同浓度(0、10、20μmol/L)的Akt抑制剂Perifosine与IL-32γ和LX-2细胞共培养后,ELISA检测MMP2蛋白。3组Akt、MMP2 m RNA及蛋白比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果 不同浓度的IL-32γ蛋白与LX-2细胞共培养后,MMP2 m RNA和蛋白水平分别为(0.9±0.4)、(5.5±1.4)、(12.2±2.6)和(53±13)、(234±38)、(523±101)μg/L,呈剂量依赖性升高(LSD-t=5.517,3.952和7.855,4.634;P〈0.05)。IL-32γ可诱导LX-2细胞Akt表达,依浓度分别为(86±9)、(287±60)、(650±170)RFUs,呈剂量依赖性升高(LSD-t=5.700,3.489;P〈0.05)。重组人活化的Akt蛋白可诱导LX-2细胞MMP2表达,依浓度分别为(54±14)、(277±45)、(550±132)μg/L,呈剂量依赖性升高(LSD-t=8.155,3.387;P〈0.05)。不同浓度的Perifosine可抑制IL-32γ诱导LX-2细胞的MMP2表达,MMP2蛋白依浓度分别为(553±86)、(233±28)、(89±12)μg/L,呈剂量依赖性降低(LSD-t=6.130,8.083;P〈0.05)。结论 IL-32γ可能通过活化Akt通路诱导肝星状LX-2细胞表达MMP2而参与肝纤维化和肝癌的发生、转移。 展开更多
关键词 细胞介素类 基质金属蛋白酶2 LX-2细胞
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LX-2与HK-2细胞共培养模型的建立及对其细胞转分化的影响 预览
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作者 王耀光 曽又佳 周慧杰 《天津中医药大学学报》 CAS 2016年第5期318-321,共4页
【目的】建立人肝星状细胞(LX-2)与人肾小管上皮细胞(HK-2)共培养体系的理论模型,研究LX-2对HK-2转分化的影响。【方法】以Transwell小室建立体外LX-2细胞和HK-2细胞间接共培养体系。应用细胞免疫组织化学法检测HK-2细胞平滑肌肌... 【目的】建立人肝星状细胞(LX-2)与人肾小管上皮细胞(HK-2)共培养体系的理论模型,研究LX-2对HK-2转分化的影响。【方法】以Transwell小室建立体外LX-2细胞和HK-2细胞间接共培养体系。应用细胞免疫组织化学法检测HK-2细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组细胞培养液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测HK-2细胞TβR I mRNA、TβR Ⅱ mR-NA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表达。【结果】除了空白组,形态学上其他两组均可看到HK-2细胞胞浆染棕黄色,不同数量细胞由立方铺路石样转变为梭形长条状,细胞肥大;HK-2细胞高表达α-SMA(P〈0.01);HK-2细胞上清液中TGF-βl含量明显高于空白组(P〈0.01);HK-2细胞TβRI、Smad2、Smad3基因表达明昆上调,而TpRⅡ、Smad7基因表达明屁下调。【结论】Transwell共培养法可诱导HK-2细胞转分化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路有关。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞转分化 Transwell小室 LX-2细胞 HK-2细胞 细胞共培养
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IL-32γ对LX-2细胞表达Ⅰ型胶原的影响 预览
8
作者 潘兴飞 张绍全 +2 位作者 杨小安 邹小芳 魏立平 《广东医学》 CAS 北大核心 2016年第15期2221-2223,共3页
目的研究IL-32γ可否诱导肝星状细胞LX-2表达Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)。方法不同浓度的IL-32γ与LX-2共培养,分别收集培养上清液、提取细胞总RNA,real-time PCR检测CollagenⅠmRNA表达水平,ELISA法检测CollagenⅠ蛋白质表达水平。用不同... 目的研究IL-32γ可否诱导肝星状细胞LX-2表达Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)。方法不同浓度的IL-32γ与LX-2共培养,分别收集培养上清液、提取细胞总RNA,real-time PCR检测CollagenⅠmRNA表达水平,ELISA法检测CollagenⅠ蛋白质表达水平。用不同浓度的人重组磷酸化p38α蛋白(recombinant human active p38α蛋白)与LX-2细胞共培养,48 h后收集细胞培养上清液,ELISA法检测CollagenⅠ蛋白质表达水平。再用不同浓度的p38MAPK抑制剂SB203580加入LX-2细胞与IL-32γ共培养的培养液中,分别收集培养上清液,采用ELISA检测CollagenⅠ蛋白质表达水平,同时提取细胞总RNA采用real-time PCR检测CollagenⅠmRNA表达水平。结果 IL-32γ诱导人LX-2细胞表达CollagenⅠ,且其表达水平随IL-32γ浓度的增加而增强;人重组磷酸化p38α蛋白可诱导LX-2细胞表达CollagenⅠ增高,阻断p38MAPK可降低IL-32γ诱导的CollagenⅠ表达。结论 IL-32γ通过活化p38MAPK通路诱导LX-2细胞表达CollagenⅠ,IL-32γ可能通过诱导肝星状细胞表达CollagenⅠ而参与肝纤维化的形成。 展开更多
关键词 细胞介素-32 P38MAPK LX-2细胞 Ⅰ型胶原
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白细胞介素32γ通过活化核转录因子κB通路诱导LX-2细胞表达基质金属蛋白酶9 被引量:8
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作者 潘兴飞 张绍全 +1 位作者 黄小萍 朱慧芬 《医学分子生物学杂志》 CAS 2016年第3期149-152,共4页
目的:研究白细胞介素-32(Interleukin-32, IL-32)可否诱导肝星状细胞LX-2表达基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)。方法用不同浓度的IL-32γ与LX-2细胞共培养,收集细胞培养上清,用TRizol试剂提取细胞总RNA,... 目的:研究白细胞介素-32(Interleukin-32, IL-32)可否诱导肝星状细胞LX-2表达基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP-9)。方法用不同浓度的IL-32γ与LX-2细胞共培养,收集细胞培养上清,用TRizol试剂提取细胞总RNA,用定量 PCR检测MMP-9 RNA表达水平, MMP-9蛋白质表达水平用酶联免疫吸附试验( enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒检测。接下来将Nuclear factor kappa B ( NF-κB)亚基p50、 p65真核表达载体pCMV-p50、 pCMV-p65单独或联合转染LX-2细胞,48 h后收集细胞培养上清,酶联免疫吸附测定( enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测MMP-9蛋白质表达水平。将不同浓度的NF-κB抑制剂SN50加入IL-32γ与LX-2细胞共培养的培养液中,48 h后收集细胞培养上清,用ELISA检测MMP-9蛋白质表达水平。结果 IL-32γ可以诱导人LX-2细胞表达MMP-9,且其表达水平随IL-32γ浓度增加而增强; NF-κB亚基p50、 p65可以诱导LX-2细胞MMP-9表达增高; NF-κB抑制剂SN50阻断NF-κB通路可降低IL-32γ诱导的MMP-9表达。结论 IL-32γ通过活化NF-κB通路诱导LX-2细胞表达MMP-9, IL-32可能通过诱导肝星状细胞表达MMP-9参与肝纤维化形成。 展开更多
关键词 细胞介素-32 LX-2细胞 基质金属蛋白酶9 IL-32 matrix METALLOPROTEINASE 9
过表达Raf激酶抑制蛋白(RKIP)抑制人肝星状细胞增殖
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作者 聂金兰 黄权芳 +1 位作者 谭实美 林兴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1491-1494,共4页
目的研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对LX-2人肝星状细胞增殖的影响。方法用重组质粒pc DNA3.1-RKIP转染LX-2细胞,G418筛选并培养稳定转染的细胞。MTT法和集落形成试验检测过表达RKIP对LX-2细胞增殖、集落生成的影响;Western blot法检测RKI... 目的研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对LX-2人肝星状细胞增殖的影响。方法用重组质粒pc DNA3.1-RKIP转染LX-2细胞,G418筛选并培养稳定转染的细胞。MTT法和集落形成试验检测过表达RKIP对LX-2细胞增殖、集落生成的影响;Western blot法检测RKIP、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2及胞外信号调节激酶/丝裂原激活蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与对照细胞相比,过表达RKIP明显抑制LX-2细胞增殖和集落形成,下调Col1、α-SMA、MMP-1和MMP-2蛋白表达,降低ERK/MAPK磷酸化水平。结论过表达RKIP抑制LX-2细胞的增殖,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 Raf激酶抑制蛋白(RKIP) 肝星状细胞 LX-2细胞 增殖 胞外信号调节激酶/丝裂原激活蛋白激酶(ERK/MAPK)
益气活血方对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响 预览 被引量:1
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作者 马力天 李洁 +7 位作者 张毅 任秦有 丁井永 赵参军 杜江河 李佩 毛立挺 郑瑾 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第6期528-531,共4页
目的 探讨中药“复方益气活血方”(Yiqihuoxue prescription)对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响.方法 体外培养肝星状细胞LX-2,浓度分别为1.125,2.228,3.31,4.37,5.41 mg/ml益气活血方作用于LX-2细胞24h,48h,然后用MTT比色法检测细胞... 目的 探讨中药“复方益气活血方”(Yiqihuoxue prescription)对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响.方法 体外培养肝星状细胞LX-2,浓度分别为1.125,2.228,3.31,4.37,5.41 mg/ml益气活血方作用于LX-2细胞24h,48h,然后用MTT比色法检测细胞的增殖情况,选取合适的益气活血药物浓度(1.125,2.228,6.432 mg/ml)用流式细胞术检测益气活血药作用24 h后对LX-2细胞凋亡的影响.结果 ①MTT检测结果显示,不同浓度的益气活血方用于LX-2细胞24h和48h后,能够抑制LX-2细胞增殖(P<0.05),24h抑制率随药物浓度的增加而提高.48 h时,当药物浓度达到3.31 mg/ml后,其抑制作用不随药物浓度的增加而增强(P>0.05).②流式细胞术检测显示,益气活血方(浓度分别为1.125,2.228,6.432 mg/ml),可明显促进LX-2细胞凋亡.结论 益气活血方能抑制LX-2细胞的增殖,促进LX-2细胞凋亡,其抑制作用呈时间-剂量依赖性. 展开更多
关键词 益气活血方 LX-2细胞 增殖 凋亡
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凉血活血方对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 李录 马力天 +7 位作者 杨明会 周刚 张毅 刘卓锋 周咏春 吴德喜 白杨 郑瑾 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第33期6401-6403,6459共4页
目的:探讨凉血活血方(LiangXue Huo Xue Fang)对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响。方法:体外培养肝星状细胞LX-2,分别将凉血活血方(浓度为1.125,2.228,3.31,4.37,5.41 mg·mL^-1),作用于LX-2细胞后24 h,48 h用MTT比色法检测... 目的:探讨凉血活血方(LiangXue Huo Xue Fang)对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响。方法:体外培养肝星状细胞LX-2,分别将凉血活血方(浓度为1.125,2.228,3.31,4.37,5.41 mg·mL^-1),作用于LX-2细胞后24 h,48 h用MTT比色法检测细胞的增殖情况,选取合适的药物浓度(4,8,12,16 mg·mL^-1),用流式细胞术检测加药24 h后细胞的凋亡率。结果:①MTT法显示不同浓度凉血活血方作用LX-2细胞24 h,48 h后,除24 h,1.125 mg·mL^-1和2.228 mg·mL^-1外,其余组增殖抑制率均明显高于正常对照组(P〈0.05)。②流式细胞术检测显示,凉血活血方浓度为4,8,12,16 mg·mL^-1)时,可明显促进LX-2细胞凋亡。结论:一定剂量的凉血活血方能抑制LX-2细胞的增殖,可能与其促进细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 凉血活血方 LX-2细胞 增殖 凋亡
HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究
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作者 孙英梅 李文杰 陶剑平 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第10期869-873,877共6页
目的舰察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响,为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ELISA检测HepG2一HCVC细胞株培养液中TGF-{31的表达。用HepG2-HCV-C和HepG2两株细胞培养5d的... 目的舰察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响,为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ELISA检测HepG2一HCVC细胞株培养液中TGF-{31的表达。用HepG2-HCV-C和HepG2两株细胞培养5d的上清液培养人肝星状细胞系LX2细胞,同时用DMEM培养LX一2细胞作对照,分别制备细胞爬片,采用免疫细胞化学染色(ICC)法检测I,X~2细胞中人a平滑肌肌动蛋白(a—SMA)、IV型胶原(ColIV)、结缔组织生长网子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用双抗体夹心EI.ISA检测LX-2细胞1~6d培养上清液中人ColIV、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层粘连蛋白(LN)的表达。所有数据采用SPSSll.0统计软件进行统计分析。结果双抗体夹心El。ISA检测HepG2-HCV-C细胞1~6d培养液中的TGFp1量为(110.00±111.45)pg/ml~(935.00±21.36)pg/ml,Helc)G2细胞为0~(124.16±11.81)pg/ml,差异有统计学意义(F一21984.81,P〈0.01)。1CC检测用HepG2-HCVC上清液培养的I.X~2细胞d—SMA、ColⅣ、CTGF和FN均为弥漫阳性,细胞染成深褐色;用HepG2培养的LX-2细胞呈局灶性棕黄色,DMEM培养的LX2细胞染色阴性。ELISA检测LX-2(HepG2-HCVC)组CollV、HA、LN和P11INP的值均显著高于LX2(HepG2)组和LX-2(DMEM)组(均P〈0.05或P〈0.01)。结论HCVC蛋白能上调TGF-β1的表达,表达C蛋白的细胞系能促进LX-2细胞多种细胞外基质(ECM)的合成。提示HCVC蛋白可能通过活化肝星状细胞,参与肝纤维化形成中多种ECM合成的调控。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 HEPG2细胞 LX-2细胞 活化
丹参联合β-榄香烯对肝星形细胞LX-2增殖和凋亡的影响 被引量:2
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作者 马力天 任秦有 +6 位作者 白杨 李成花 杨建栋 孙世友 周睿 杜乐 郑瑾 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第34期6626-6629,共4页
目的:探讨丹参联合B-榄香烯对肝星形细胞LX-2增殖和凋亡的影响。方法:体外培养肝星形细胞LX-2,分别将丹参(浓度为1、2、4、6、8mg/ml),β-榄香烯(浓度为25、50、100、150、200μg/ml),单独作用于LX-2细胞后24h、48h用CCK-8(... 目的:探讨丹参联合B-榄香烯对肝星形细胞LX-2增殖和凋亡的影响。方法:体外培养肝星形细胞LX-2,分别将丹参(浓度为1、2、4、6、8mg/ml),β-榄香烯(浓度为25、50、100、150、200μg/ml),单独作用于LX-2细胞后24h、48h用CCK-8(CellCountKit-8)法检测细胞的增殖情况,并选取合适的药物浓度(丹参3.6mg/ml,β-榄香烯125μg/ml),然后进行联合用药,加药24h、48h后用CCK-8(Cell CountKit-8)法检测细胞的增殖情况,用流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:OCCK-8法显示丹参(浓度为1、2、4、6、8mg/ml),8-榄香烯(浓度为25、50、100、150、200μg/ml)作用LX-2细胞24h、48h后,其增殖抑制率均明显高于正常对照组(P〈0.05),并且呈浓度和时间依赖性。②联合用药(丹参3.6mg/ml,β-榄香烯125μg/ml)时,LX-2细胞的增殖抑制率和凋亡率均显著高于单独用药(P〈0.01)。结论:丹参、β-榄香烯单独或二者联合作用均能抑制LX-2细胞的增殖,且联合应用的作用显著高于单独用药,可协同促进LX-2细胞的凋亡。 展开更多
关键词 榄香烯 丹参 LX-2细胞 增殖 凋亡
黄芪多糖和黄芪总甙调控LX-2细胞因子分泌 预览 被引量:16
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作者 李淑萍 许晓燕 +5 位作者 孙箴 周林福 羊正纲 陈峰 朱海红 陈智 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 2007年第6期 543-548,共6页
目的:用黄芪多糖和黄芪总甙对LX-2细胞分泌的与纤维化相关的主要细胞因子进行研究,以探讨黄芪抗纤维化的确切分子机制。方法:不同浓度的黄芪多糖和黄芪甙作用于LX-2细胞,以Real Time Cell Electronics Sensing技术实时检测细胞增殖... 目的:用黄芪多糖和黄芪总甙对LX-2细胞分泌的与纤维化相关的主要细胞因子进行研究,以探讨黄芪抗纤维化的确切分子机制。方法:不同浓度的黄芪多糖和黄芪甙作用于LX-2细胞,以Real Time Cell Electronics Sensing技术实时检测细胞增殖状态;分别再以25μg/ml和300μg/ml的黄芪多糖和黄芪总甙作用LX-2细胞24h,提取细胞mRNA,以荧光定量PCR测定转化生长因子1(TGF—β1)、肝细胞生长因子(HGF)、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA的变化。结果:300μg/ml的黄芪多糖可抑制LX-2的增殖(P〈0.05,94.7h),但不同浓度的黄芪总甙对LX-2细胞均有促进增殖的作用(P〈0.05);25μg/ml的黄芪多糖和黄芪总甙在TGF-β1促进分泌的同时,也上调其它抗纤维化因子,其中黄芪多糖对MMP2的上调(104.9倍)、黄芪总甙对IL-10的上调(550.65倍)最为显著;300μg/ml的黄芪多糖可抑制TGF-β1及HGF、MMP9、IL-10的表达,但仍然上调MMP2的表达,300μg/ml的黄芪总甙也可抑制TGF-β1的表达,但对抗纤维化因子MMP2、MMP9及IL-10仍有明显的上调作用。结论:低浓度(25μg/ml)和高浓度(300μg/ml)的黄芪多糖和黄芪总甙可通过不同的分子机制调控肝星状细胞因子的分泌而发挥抗纤维化作用;黄芪多糖主要以促进MMP2分泌为主,而黄芪总甙则主要通过上调MMP2、MMP9及IL-10的分泌而发挥作用。高剂量的黄芪多糖和总甙抗纤维化效果优于低剂量组。 展开更多
关键词 黄芪多糖/投药和剂量 黄芪甙/投药和剂量 细胞因子类 LX-2细胞 细胞因子 肝纤维化
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稳定表达HBx的人肝星形细胞系的建立及其生物学特性初探
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作者 许华宇 李璐蓉 +2 位作者 周东辉 李军 李爽 《国际流行病学传染病学杂志》 2013年第6期370-373,F0003共5页
目的建立稳定表达HBVX蛋白(HBx)的LX-2细胞系,并初步研究HBx对于肝星形细胞(HSC)的增殖及其I型胶原蛋白表达的影响。方法构建包含HBx基因的重组慢病毒载体LV5-X,并转染LX-2细胞,同时用对照质粒转染LX-2细胞,经嘌呤霉素筛选后获... 目的建立稳定表达HBVX蛋白(HBx)的LX-2细胞系,并初步研究HBx对于肝星形细胞(HSC)的增殖及其I型胶原蛋白表达的影响。方法构建包含HBx基因的重组慢病毒载体LV5-X,并转染LX-2细胞,同时用对照质粒转染LX-2细胞,经嘌呤霉素筛选后获得HBx稳定表达的LX-2-X和对照LX-2-C细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,Western印迹检测细胞株中HBx的表达。在LX-2细胞系的生物学特性探索方面,应用CCK_8法检测细胞的增殖;Real—timePCR检测细胞中I型胶原蛋白mRNA的表达;ELISA法愉测细胞培养上清中I型胶原蛋白的表达。结果成功构建重组慢病载体LV5-X,感染LX-2细胞后建立细胞系LX-2-X和LX-2-C,嘌呤霉素筛选3d后,荧光显微镜显示近100%细胞发出绿色荧光,Western印迹证实LX-2-X细胞稳定表达HBx。培养72h和96h后LX-2-C细胞增殖明显高于LX-2和LX-2-C细胞组(P〈0.05);PCR证实LX-2X细胞I型胶原蛋白mRNA合成高于LX-2和LX-2-C细胞组(P〈0.05);ELISA结果显示LX一2一X细胞I型胶原蛋白表达高于LX-2和LX-2-C细胞组(P〈0.05)。结论成功构建了稳定表达HBx的LX-2细胞系;HBx能够促进HSC的增殖,并增加I型胶原蛋白的表达。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 HBX蛋白 重组慢病毒 LX-2细胞 肝纤维化
白花丹醌对人肝星状细胞Nox4/ROS及α-SMA生成的影响 预览 被引量:1
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作者 杨成芳 李丽 +3 位作者 李勇文 钟毓娟 熊美丽 方舒萍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2249-2253,共5页
目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)NADPH氧化酶4(Nox4)的mRNA和蛋白表达、活性氧簇(ROS)水平及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-L... 目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)NADPH氧化酶4(Nox4)的mRNA和蛋白表达、活性氧簇(ROS)水平及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组、TGF-β1刺激的模型组、TGF-β1+plumbagin(2μmol/L、1.5μmol/L及1μmol/L)组;细胞与各药物共同孵育72 h后,采用RT-PCR检测细胞Nox4 mRNA的表达;原位装载探针法测定细胞内ROS的水平;Western blot检测细胞内Nox4和α-SMA的蛋白含量。结果:与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,2μmol/L和1.5μmol/L plumbagin能明显降低HSC-LX2细胞Nox4 mRNA和蛋白的表达(P〈0.01),下调ROS水平,降低α-SMA的蛋白表达(P〈0.01)。结论:Plumbagin可能是通过下调Nox4的表达进而降低ROS生成从而发挥其抑制HSC-LX2细胞活化的作用。 展开更多
关键词 白花丹醌 转化生长因子β1 HSC-LX2细胞 NADPH氧化酶4 活性氧簇 Α-平滑肌肌动蛋白
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六味五灵片抗肝纤维化作用的谱效关系 预览 被引量:6
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作者 程玲 郑娟 +7 位作者 徐平华 沈刚 李娟娟 邱玲 张利红 武娜 韩晋 袁海龙 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期820-825,共6页
目的研究六味五灵片(南五味子、女贞子、连翘等)抗肝纤维化作用的谱效关系,探索其药效物质基础。方法拉丁超立方法将六味五灵片中6味药材随机抽样成20个不同比例的组合,HPLC法获取其提取物的指纹图谱。以LX-2肝星状细胞为药效模型,MT... 目的研究六味五灵片(南五味子、女贞子、连翘等)抗肝纤维化作用的谱效关系,探索其药效物质基础。方法拉丁超立方法将六味五灵片中6味药材随机抽样成20个不同比例的组合,HPLC法获取其提取物的指纹图谱。以LX-2肝星状细胞为药效模型,MTT法测定各组的抗肝纤维化作用。利用主成分分析及相关分析法,对药效数据和指纹图谱信息进行处理。结果 20个不同比例组合提取物对LX-2细胞均有抑制作用,HPLC指纹图谱有23个共有峰,其中14(五味子醇甲)、20(五味子甲素)、17、19、21号峰与药效关系密切。结论六味五灵片的抗肝纤维化作用可能是多成分相互影响的结果。 展开更多
关键词 六味五灵片 抗肝纤维化 LX-2肝星状细胞 谱效关系 HPLC MTT
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鳖甲药材指纹图谱与其抗肝纤维化作用的谱效关系研究 被引量:9
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作者 肖云芝 于超 +4 位作者 刘朝勇 万露 徐平华 韩晋 袁海龙 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期2506-2510,共5页
目的研究不同产地鳖甲药材的HPLC指纹图谱与其抗纤维化作用的谱效关系,揭示鳖甲药材抗肝纤维化作用的"药效成分组"。方法 HPLC-DAD法测定了12个产地鳖甲药材样品,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A进行评价,建立了共有模式,... 目的研究不同产地鳖甲药材的HPLC指纹图谱与其抗纤维化作用的谱效关系,揭示鳖甲药材抗肝纤维化作用的"药效成分组"。方法 HPLC-DAD法测定了12个产地鳖甲药材样品,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A进行评价,建立了共有模式,并进行主成分分析(PCA)。以LX-2肝星状细胞为模型研究其对肝细胞的抑制效果,采用SPSS软件对数据进行相关分析,研究谱效相关性。结果 12个产地鳖甲药材HPLC指纹图谱中共有7个特征共有峰,其中峰2、5与LX-2肝星状细胞抑制效果(A值)的相关性呈现中等程度相关,峰4的相关性最强。由PCA可知,峰4的量对鳖甲质量有着重要的影响。结论 12个产地鳖甲药材对LX-2肝星状细胞均有抑制作用,HPLC指纹图谱与其抗纤维化作用之间有一定的相关性,为进一步控制鳖甲药材内在质量提供参考。 展开更多
关键词 鳖甲 指纹图谱 抗肝纤维化作用 主成分分析 谱效关系 LX-2肝星状细胞
基于肝星状细胞增殖的复方鳖甲软肝片的溶出度初步研究 被引量:1
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作者 戴领 白金霞 +2 位作者 尹蓉莉 韩晋 袁海龙 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期2018-2021,共4页
目的采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法从细胞增殖角度、结合高效液相色谱法(HPLC),探讨生物方法评价中药固体制剂体外溶出度的可行性,旨在弥补单纯化学方法难以客观反映中药固体制剂溶出度检测的不足。方法以复方鳖甲软肝片为模型... 目的采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法从细胞增殖角度、结合高效液相色谱法(HPLC),探讨生物方法评价中药固体制剂体外溶出度的可行性,旨在弥补单纯化学方法难以客观反映中药固体制剂溶出度检测的不足。方法以复方鳖甲软肝片为模型药,考察在pH7.4PBS溶出介质中,不同溶出时间的复方鳖甲软肝片溶出液对Lx-2肝星状细胞的抑制作用,提出基于细胞抑制率所得复方鳖甲软肝片的累积溶出度,结合HPLC测定芍药苷指标成分所得溶出度,运用_厂2相似因子法进行相关性评价。结果f2相似因子小于50,表明单纯化学方法所测的指标成分溶出度不能等同于全方的生物效价。结论生物方法有望成为评价中药固体制剂体外溶出度的手段之一。 展开更多
关键词 MTT比色法 LX-2肝星状细胞溶出度 复方鳖甲软肝片
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