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应用TaqMan探针荧光定量PCR技术鉴定Leprdb/+小鼠子代基因型 预览 被引量:1
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作者 赵英政 彭强 +5 位作者 闫婷婷 张旭旭 翟晓楠 吴卫东 易宪文 徐光翠 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期207-210,共4页
目的 建立一种高效的应用TaqMan探针荧光定量PCR技术对Leprdb/+小鼠子代基因分型的方法。方法 提取228例Leprdb/+小鼠子代鼠尾DNA,针对Lepr基因的突变位点(rs1801133)设计1对PCR引物和2条TaqMan探针。设定条件进行实时荧光PCR扩增,用SD... 目的 建立一种高效的应用TaqMan探针荧光定量PCR技术对Leprdb/+小鼠子代基因分型的方法。方法 提取228例Leprdb/+小鼠子代鼠尾DNA,针对Lepr基因的突变位点(rs1801133)设计1对PCR引物和2条TaqMan探针。设定条件进行实时荧光PCR扩增,用SDS软件对SNP位点进行分型。通过2月龄动物的肥胖表现型验证并进行Hardy-Weinberg平衡检验。结果 用建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法对228份样本进行检测,其中GG基因型64份,基因型频率为0.1929;GT基因型123份,基因型频率为0.5395;TT基因型41份基因型频率为0.2807。TaqMan探针荧光定量PCR方法分型结果与通过肥胖表现型分型结果比较,灵敏度为97.56%,特异度为99.47%。结论 应用TaqMan探针荧光定量PCR技术可实现对Leprdb/+小鼠子代基因位点的早期分型检测,方法简便,高效。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 Leprdb/+小鼠 基因分型
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硫辛酸合成酶在Leprdb/db小鼠肝肾中的表达 预览
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作者 彭强 赵英政 +5 位作者 闫婷婷 翟晓楠 张旭旭 易宪文 张合喜 徐光翠 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期145-149,共5页
检测瘦素受体缺陷的Leprdb/db小鼠体内肝、肾中硫辛酸合成酶(LIAS)的表达。方法 分别选取10周龄Leprdb/+与Leprdb/db雄性小鼠各8只,禁食8h后,测量两组小鼠体重及空腹血糖(FPG);用乙醚麻醉动物,经腹主动脉采血,处死动物,取肝、肾并称重... 检测瘦素受体缺陷的Leprdb/db小鼠体内肝、肾中硫辛酸合成酶(LIAS)的表达。方法 分别选取10周龄Leprdb/+与Leprdb/db雄性小鼠各8只,禁食8h后,测量两组小鼠体重及空腹血糖(FPG);用乙醚麻醉动物,经腹主动脉采血,处死动物,取肝、肾并称重。取肝右叶和左肾经4%多聚甲醛固定,进行肝、肾组织病理学检查。分离血清,用试剂盒检测血清中CHO、TG、HDL、LDL含量。应用线粒体分离试剂盒分离肝、肾组织线粒体,提取总蛋白,采用westernblot方法检测LIAS蛋白的表达。结果 组织病理观察,发现Leprdb/+小鼠肝肾结构完整,而Leprdb/db小鼠肝细胞出现脂肪变性,肾小球肥大,基底膜增厚,系膜区增宽;与Leprdb/+小鼠比较,Leprdb/db小鼠体重、GLU、CHO、TG、LDL及AST明显增高,差异有显著性(P<0.05);与Leprdb/+小鼠比较,Leprdb/db小鼠肝肾线粒体内LIAS蛋白表达量均增高,差异有显著性(P<0.05)。结论 瘦素受体缺陷的Leprdb/db小鼠存在糖脂代谢紊乱、肝肾细胞损伤、肝肾组织线粒体LIAS蛋白的表达增高。 展开更多
关键词 Lepr DB/DB小鼠 硫辛酸 瘦素
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穿心莲内酯对糖尿病肾病小鼠的治疗作用及机制 预览
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作者 李梦诗 吴腾 +3 位作者 曹静桦 何亚军 亓翠玲 王丽京 《中国药科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期97-101,共5页
利用自发2型糖尿病基因工程Leprdb/db小鼠糖尿病小鼠模型,探讨穿心莲内酯(andrographolide,Andro)对糖尿病肾病的作用及机制。利用试剂盒检测Andro治疗Leprdb/db小鼠24h后的尿蛋白、血肌酐和血尿素氮水平;利用HE染色和PAS染色分别检测An... 利用自发2型糖尿病基因工程Leprdb/db小鼠糖尿病小鼠模型,探讨穿心莲内酯(andrographolide,Andro)对糖尿病肾病的作用及机制。利用试剂盒检测Andro治疗Leprdb/db小鼠24h后的尿蛋白、血肌酐和血尿素氮水平;利用HE染色和PAS染色分别检测Andro对糖尿病小鼠肾脏组织的病理改变和还原糖水平的影响;采用免疫组织化学染色法检测Andro对Leprdb/db小鼠肾脏的纤维粘连蛋白(FN)和NOX-4的影响。结果显示,Andro治疗组(1mg/kg,ip)的24h后Leprdb/db小鼠的尿蛋白、血肌酐和血尿素氮等生化指标水平明显低于对照组,Andro能抑制Leprdb/db小鼠肾脏的病理改变和FN、NOX-4的表达,表明Andro可以显著改善自发2型糖尿病基因工程小鼠Leprdb/db小鼠的糖尿病肾病。 展开更多
关键词 穿心莲内酯 糖尿病肾病 Leprdb/db转基因小鼠 系膜细胞
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