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用体外表达的血小板膜蛋白GPⅢa偶联Luminex微球检测HPA-1a抗体
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作者 陶苏丹 刘瑛 +3 位作者 和艳敏 应燕玲 何吉 朱发明 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期40-44,共5页
目的拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA—1a抗原与LuminexxMAP微球相连,建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA—1a的效果。方法扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢癌细胞株。利用G418筛... 目的拟利用体外克隆表达的GPⅢa蛋白作为HPA—1a抗原与LuminexxMAP微球相连,建立和评估用Luminex微球技术检测血清中抗HPA—1a的效果。方法扩增并克隆GPⅢa蛋白的编码基因ITGB3至真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢癌细胞株。利用G418筛选稳定表达细胞株,体外获取并鉴定相应的特异性膜糖蛋白GPⅢa。将重组蛋白通过表面游离氨基和Luminex xMAP微球表面激活的羧基相偶联,再利用偶联后的微球与待测血清反应。利用PE-抗人IgG进行显色,在Luminex-100仪上读取数据并判断结果。结果ITGB3基因测序为HPA-1aa,将克隆后的GPⅢa重组蛋白偶联Luminex xMAP微球,Luminex微球法检测HPA-1a抗体的灵敏度为滴度1/32(抗体浓度3.125U/mL)。微球技术能特异性鉴别出待测样本的HPA—1a抗体,与MAIPA结果一致,而且与HLA抗体、ABO抗体以及其他HPA血小板系统抗体(HPA-3a、HPA_5b)均不发生交叉反应,说明建用立的Luminex微球技术来检测血小板抗体是可行的。结论成功获取了重组表达的血小板膜蛋白GPⅢ3,并初步建立了Luminex微球检测HPA-1a抗体方法。 展开更多
关键词 Luminex技术 GPⅢa体外重组表达 抗HPA—1a
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