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H9N2亚型禽流感病毒NA和M2基因的克隆与表达
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作者 郝珊珊 郑阳 +4 位作者 余远楠 张则 蔡佳希 宗嫚嫚 冯秀丽 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第5期121-127,共7页
旨在分别构建NA蛋白和M2蛋白的重组质粒,并进行表达鉴定。采用PCR扩增了H9N2分离株A/chicken/Shandong/LY1/2017毒株的NA基因和M2基因。同源性分析证实,这2个基因序列与目前流行毒株的基因同源性很高。将NA基因克隆至pcold1原核表达载体... 旨在分别构建NA蛋白和M2蛋白的重组质粒,并进行表达鉴定。采用PCR扩增了H9N2分离株A/chicken/Shandong/LY1/2017毒株的NA基因和M2基因。同源性分析证实,这2个基因序列与目前流行毒株的基因同源性很高。将NA基因克隆至pcold1原核表达载体,将M2基因克隆至pET28a原核表达载体,成功构建了pcold1-NA和pET28a-M2重组质粒,并成功表达出相应的融合蛋白。然后对表达的融合蛋白进行纯化,并采用免疫印迹验证其免疫反应性。本试验为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒致病机制及检测技术奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2禽流感病毒 NA基因 M2基因 原核表达
大通牦牛TLR 2基因SNP位点筛选及生物信息学分析 预览
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作者 彭帅 陈朗 +3 位作者 郑天宇 陆会宁 张丽 刘丽霞 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第8期1280-1285,共6页
采用DNA混合池扩增后直接测序的方法,对大通牦牛TLR 2基因CDS区的SNP位点进行筛选,估算各SNP位点等位基因频率,并通过生物信息学软件预测突变对TLR 2 mRNA和蛋白质结构的影响。结果表明,大通牦牛TLR 2基因CDS区存在2个SNP位点,分别为G 6... 采用DNA混合池扩增后直接测序的方法,对大通牦牛TLR 2基因CDS区的SNP位点进行筛选,估算各SNP位点等位基因频率,并通过生物信息学软件预测突变对TLR 2 mRNA和蛋白质结构的影响。结果表明,大通牦牛TLR 2基因CDS区存在2个SNP位点,分别为G 677 A和G 1587 A,其中G 677 A为错义突变,导致半胱氨酸(Cys)转变为酪氨酸(Tyr)。生物信息学分析结果表明,G 677 A和G 1587 A位点均降低了mRNA二级结构的稳定性,且蛋白二、三级结构组成也发生了改变。 展开更多
关键词 大通牦牛 TLR 2基因 SNP位点 生物信息学
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鸭腺病毒3型PCR检测方法的建立
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作者 万春和 陈翠腾 +6 位作者 施少华 程龙飞 傅光华 刘荣昌 陈红梅 傅秋玲 黄瑜 《中国家禽》 北大核心 2019年第2期20-23,共4页
鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭... 鸭3型腺病毒(Duck adenovirus type 3,DAdV-3)为近年来新发的以引起鸭肝脏肿大出血、肾脏大面积出血点为特征的鸭群新发疫病。为建立特异性的检测DAdV-3的PCR方法,研究通过分析鸭群中鸭腺病毒A型(DAdV-A)、鸭源禽腺病毒4型(FAdV-4)、鸭2型腺病毒(DAdV-2)和DAdV-3的Fiber 2基因特征,建立特异性检测DAdV-3的PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为54℃,对DAdV-3扩增片段大小为548 bp;敏感性强,最低检测限为36.4 pg;特异性好,对DAdV-A、FAdV-4、鸭病毒性肠炎(DEV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鹅多瘤病毒(GHPV)均无特异性扩增。表明该方法可有效用于开展新发DAdV-3的流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭3型腺病毒 FIBER 2基因 PCR
表达禽流感病毒NP和M2融合基因重组乳酸菌的构建及鉴定 预览
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作者 李琼燕 杨桂连 +4 位作者 张成赛 赵金辉 晋玉北 杨文涛 王春凤 《中国兽药杂志》 2018年第12期9-15,共7页
为了在乳酸菌中表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NP和M2基因并检测其反应原性,先以pMD19-T-M2质粒作为模板,采用PCR方法克隆M2全长基因,然后将M2基因亚克隆入pSIP409-pgsA′-NP质粒中,构建重组质粒pSIP409-pgsA′-NP-M2,再将重组质粒pSIP409... 为了在乳酸菌中表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NP和M2基因并检测其反应原性,先以pMD19-T-M2质粒作为模板,采用PCR方法克隆M2全长基因,然后将M2基因亚克隆入pSIP409-pgsA′-NP质粒中,构建重组质粒pSIP409-pgsA′-NP-M2,再将重组质粒pSIP409-pgsA′-NP-M2通过电转化的方法转入植物乳杆菌Lb.plantarumNC8中,制备重组菌NC8-pSIP409-pgsA′-NP-M2并诱导表达,最后通过流式细胞术、免疫荧光和免疫印迹技术验证。结果表明,重组菌NC8-pSIP409-pgsA′-NP-M2能够经诱导表达NP-M2融合蛋白,并且与兔源NP单克隆抗体和抗M2的小鼠血清具有反应原性。试验为后续研究禽流感广谱口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 NP基因 M2基因 原核表达 重组乳酸菌
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弓形虫MORN 2基因敲除株的构建及其表型鉴定 预览
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作者 陈凯 王金磊 +2 位作者 白梦捷 杨文彬 黄思扬 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第9期2386-2393,共8页
本研究旨在构建弓形虫(Toxoplasma gondii)Ⅰ型RH虫株的膜占位与识别联结蛋白2(membrane occupation and recognition nexus protein,MORN2)基因敲除株,探究MORN 2基因的表型功能。利用CRISPR/Cas9技术在sgRNA设计网站筛选出以MORN 2基... 本研究旨在构建弓形虫(Toxoplasma gondii)Ⅰ型RH虫株的膜占位与识别联结蛋白2(membrane occupation and recognition nexus protein,MORN2)基因敲除株,探究MORN 2基因的表型功能。利用CRISPR/Cas9技术在sgRNA设计网站筛选出以MORN 2基因为靶标的sgRNA并设计引物,以pSAG1∷CAS9-U6∷sgUPRT质粒为模板,在Q5酶作用下构建出MORN2靶向CRISPR的质粒;在MORN2靶点两翼约500 bp设计同源臂引物,以pUPRT∷DHFR-D质粒为模板构建含有乙胺嘧啶药物抗性基因(DHFR)的同源片段;将CRISPR质粒与同源片段电转染到弓形虫速殖子中,进行乙胺嘧啶药物筛选、96孔板单克隆筛选及PCR鉴定。结果显示,试验成功获得MORN 2基因敲除株,在体外噬斑试验中,该敲除株的生长速度与野生型RH虫株基本一致;在体内感染试验中,分别以100和1 000个敲除株的速殖子腹腔注射小鼠,小鼠的死亡时间与对照组基本一致,说明MORN 2基因的缺失几乎不影响RH虫株在体外培养时的生长速度和感染小鼠的毒力。本研究证明了MORN 2基因在RH虫株中无表型功能,为进一步探究弓形虫的功能基因奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 CRISPR/Cas9 MORN 2基因 基因敲除
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三穗麻鸭JAK2基因克隆与序列分析研究 预览
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作者 张美兰 张宇 +7 位作者 邹作成 田芳 张飘 龙立书 华敏 程振涛 周碧君 文明 《贵州畜牧兽医》 2018年第2期6-9,共4页
为了解三穗鸭JAK 2基因特征,采用分段PCR方法获取三穗麻鸭JAK 2基因并进行克隆与测序,应用生物信息学相关软件进行基因分子特征分析。结果:三穗麻鸭JAK 2基因全长3 393 bp,可编码1 131个氨基酸;与原鸡的核苷酸序列同源性达94.5%,氨基酸... 为了解三穗鸭JAK 2基因特征,采用分段PCR方法获取三穗麻鸭JAK 2基因并进行克隆与测序,应用生物信息学相关软件进行基因分子特征分析。结果:三穗麻鸭JAK 2基因全长3 393 bp,可编码1 131个氨基酸;与原鸡的核苷酸序列同源性达94.5%,氨基酸同源性达97.6%;进化树分析显示,该基因与鸡属动物亲缘关系最近。 展开更多
关键词 三穗麻鸭 JAK 2基因 序列分析
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摩拉水牛二酰甘油酰基转移酶2基因的多态性检测 预览 被引量:1
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作者 鄢胜飞 尚江华 +8 位作者 黄丽华 杨春艳 郑海英 李孟琪 于农淇 Mahmoud Moussa 覃广胜 黄加祥 张秀芳 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第10期2787-2796,共10页
本研究旨在检测水牛二酰甘油酰基转移酶2(diacylglycerolacylt-ransferase,DGAT2)基因的单核苷酸多态性(SNP),探究摩拉水牛多态性位点的群体遗传特征。以广西水牛研究所的57头摩拉水牛为材料,PCR扩增DGAT 2基因的部分序列(外显子2及内含... 本研究旨在检测水牛二酰甘油酰基转移酶2(diacylglycerolacylt-ransferase,DGAT2)基因的单核苷酸多态性(SNP),探究摩拉水牛多态性位点的群体遗传特征。以广西水牛研究所的57头摩拉水牛为材料,PCR扩增DGAT 2基因的部分序列(外显子2及内含子2、3),通过常规测序法检测其SNP,并运用遗传多样性分析软件(POPGENE)和SPSS软件对群体的多态性位点进行基因频率、基因型频率、多态信息含量(PIC)、有效等位基因数(Ne)及遗传杂合度(He)的检测。结果表明,在摩拉水牛DGAT 2基因外显子2和内含子2、3上共发现了9个SNPs位点(IVS2.54 G>A、IVS2.158 A>G、EVS2.191 A>G、EVS2.228 A>G、IVS3.311 C>T、IVS3.444 A>G、IVS3.451 A>C、IVS3.466 C>T、IVS3.521 C>T),其中EVS2.191 A>G位点的突变导致氨基酸由异亮氨酸突变为缬氨酸,突变位点间存在一定程度的连锁遗传但接近连锁平衡状态。从基因频率上看,IVS2.158 A>G、EVS2.191 A>G、IVS3.311 C>T、IVS3.451 A>C、IVS3.466 C>T和IVS3.521 C>T 6个SNPs位点的两个等位基因频率有较大差异,提示等位基因频率较大的基因个体可能更适合生存。9个SNPs位点在摩拉水牛品种上多处于高度多态,杂合度在0.1744~0.4975之间,说明摩拉水牛群体中DGAT 2基因遗传多态性丰富,具有较大的育种价值和性状改良潜力. 展开更多
关键词 摩拉水牛 DGAT 2基因 多态性
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云南江城蓝舌病病毒16型毒株分离鉴定及其L2基因序列分析 预览 被引量:1
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作者 寇美玲 苗海生 +3 位作者 李乐 李楠 廖德芳 李华春 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第11期3192-3202,共11页
为了解近年来云南江城县蓝舌病病毒16型(Bluetongue virus type 16,BTV-16)毒株的流行情况及其L 2基因与国外流行株的遗传进化关系,本研究将江城县送检的300份牛肝素钠抗凝血提取红细胞后静脉接种10日龄鸡胚,将收集的鸡胚肝脏捣碎离心,... 为了解近年来云南江城县蓝舌病病毒16型(Bluetongue virus type 16,BTV-16)毒株的流行情况及其L 2基因与国外流行株的遗传进化关系,本研究将江城县送检的300份牛肝素钠抗凝血提取红细胞后静脉接种10日龄鸡胚,将收集的鸡胚肝脏捣碎离心,上清液接种于C6/36和BHK21细胞传代。针对出现细胞病变的样品,应用群特异性VP7片段引物进行RT-PCR检测,应用BTV-16 L 2基因特异性引物对检测出的BTV核酸阳性样品进行RT-PCR扩增和测序,采用DNAStar和Mega 6.0软件对获得的L 2基因编码区序列进行核苷酸、氨基酸同源性比对及遗传进化分析,同时利用BTV-16标准阳性血清对分离到的病毒进行中和试验鉴定。结果显示,江城县发现30个可致细胞病变的样品,其中17个样品经RT-PCR初步确认为BTV;经L 2基因序列分析和中和试验鉴定,确定其中6株为BTV-16型毒株;核苷酸、氨基酸同源性比对分析结果显示,6个毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在93.4%~98.0%和94.2%~99.1%之间;遗传进化分析发现,其中5株与2001—2008年日本及1982—2011年印度分离的BTV-16毒株亲缘关系较近;1株与1985—1990年日本分离的BTV-16毒株亲缘关系较近。本研究发现,云南江城县BTV-16毒株呈现新旧毒株交叉持续流行态势,但在自然进化中遗传变异不大,有一定的稳定性,本研究在分子水平阐明了云南江城县地方流行BTV-16 L 2基因间的遗传和差异,为进一步开展BTV分子流行病学及检测研究提供科学依据。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒(BTV) 病毒分离 L 2基因 序列分析
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PNPLA2基因新发纯合移码突变导致中性脂肪沉积症伴肌病1例报告 预览
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作者 卢晓庆 胡波琳 +2 位作者 陈燕红 丁卫江 漆学良 《中风与神经疾病杂志》 2018年第10期935-936,共2页
中性脂肪沉积症(neutral lipid storage disease,NLSD)为一种常染色体隐性遗传的脂质沉积性肌病,包括中性脂肪沉积症伴鱼鳞病(neutral lipid storage disease with iehthyosis,NLSDI)和中性脂肪沉积症伴肌病(neutral lipid storage dise... 中性脂肪沉积症(neutral lipid storage disease,NLSD)为一种常染色体隐性遗传的脂质沉积性肌病,包括中性脂肪沉积症伴鱼鳞病(neutral lipid storage disease with iehthyosis,NLSDI)和中性脂肪沉积症伴肌病(neutral lipid storage disease with myopathy,NLSDM)。前者在我国尚未见报道。后者是由PNPLA2(patatin-like phospholipase domain-containing protein 2,PNPLA2)基因突变致脂肪甘油三酯水解酶(adipose tridyceride lipase,ATGL)功能缺陷而导致的代谢性肌病,该病于2007年由法国的Fischer等[1]首次报道。截至2016年,国内外累计报道经基因检测证实的NLSDM病例不超过50例,其中中国患者仅数例[2]。 展开更多
关键词 脂质沉积性肌病 中性脂肪 沉积症 移码突变 A2基因 常染色体隐性遗传 MYOPATHY protein
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ATP13A2基因与帕金森病的研究进展 预览 被引量:1
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作者 王丹 李沛珊 +2 位作者 李艳霞 高华 杨新玲 《新疆医学》 2018年第5期478-483,共6页
帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是当今仅次于阿尔茨海默病的第二大神经系统退行性疾病。由于英国医生James Parkinson在1987年首先对该疾病的临床表现进行了系统的描述因而得名。该病在60-65岁人群中发病率约为0.5%-1%,而在80岁... 帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是当今仅次于阿尔茨海默病的第二大神经系统退行性疾病。由于英国医生James Parkinson在1987年首先对该疾病的临床表现进行了系统的描述因而得名。该病在60-65岁人群中发病率约为0.5%-1%,而在80岁以上人群中其发病率上升至1%-3%。帕金森病的主要病理学特征是黑质致密区多巴胺能神经元的变性脱失和嗜酸性包涵体即Lewy小体的形成。 展开更多
关键词 帕金森病 神经系统退行性疾病 A2基因 PARKINSON 多巴胺能神经元 阿尔茨海默病 LEWY小体 嗜酸性包涵体
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shRNA沉默AnnxinA2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响
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作者 何火聪 苏颖 +2 位作者 林可焴 邹长棪 陈超 《中国癌症防治杂志》 CAS 2017年第4期295-301,共7页
目的探讨sh RNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用Fu GENE HD将Annexin A2 sh RNA转染放射抗拒的鼻咽癌CNE2(R743)细胞,q RT-PCR验证转染细胞中Annxin A2基因的表达,细胞划痕实验和Transwell实验观察... 目的探讨sh RNA沉默Annxin A2基因对放射抗拒鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用Fu GENE HD将Annexin A2 sh RNA转染放射抗拒的鼻咽癌CNE2(R743)细胞,q RT-PCR验证转染细胞中Annxin A2基因的表达,细胞划痕实验和Transwell实验观察下调Annxin A2基因表达及联合照射对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达。结果转染组细胞Annexin A2基因的m RNA相对表达量为(0.25±0.17),较对照组的(1±0.00)和转染对照组的(0.96±0.06)明显下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。细胞划痕实验显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2(R743)细胞的迁移能力(P〈0.05)。Transwell实验结果显示,下调Annxin A2基因表达可抑制照射诱导的CNE2(R743)细胞的迁移和侵袭能力(P〈0.05)。Western blot结果表明,下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导的MMP2蛋白的表达上调(P〈0.05)。结论下调Annxin A2基因表达能抑制照射诱导放射抗拒的鼻咽癌CNE2(R743)细胞的迁移和侵袭能力,可能与MMP2蛋白表达下调相关。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 Annxin A2基因 放射抗拒 鼻咽癌CNE2(R743)细胞 迁移 侵袭
六倍体小麦TaHKT2;2基因的克隆与多样性分析 预览
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作者 李孟军 李亚青 +2 位作者 张士昌 张楠 史占良 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第12期1-7,共7页
为深入研究小麦HKT基因家族其他成员的作用,利用同源序列克隆技术和六倍体小麦基因组BAC文库克隆了小麦TaHKT2;2基因。TaHKT2;2定位于小麦第7同源群,分别命名为TaHKT2;2-7A、TaHKT2;2-7B、TaHKT2;2-7D。TaHKT2;2与TaHKT2;1基因结构相同... 为深入研究小麦HKT基因家族其他成员的作用,利用同源序列克隆技术和六倍体小麦基因组BAC文库克隆了小麦TaHKT2;2基因。TaHKT2;2定位于小麦第7同源群,分别命名为TaHKT2;2-7A、TaHKT2;2-7B、TaHKT2;2-7D。TaHKT2;2与TaHKT2;1基因结构相同,均由3个外显子和2个内含子组成。在系统进化树上TaHKT2;2与TaHKT2;1聚类形成1个分支。TaHKT2;2-7A、TaHKT2;2-7B、TaHKT2;2-7D的基因编码区分别为1 602 bp、1 602 bp、1 596 bp,但利用RTPCR技术未能在8个六倍体小麦中克隆TaHKT2;2-7D c DNA。采用克隆测序技术分析了12个六倍体小麦中TaHKT2;2的自然多样性,结果表明,TaHKT2;2-7A的序列多样性高于TaHKT2;2-7B和TaHKT2;2-7D。TaHKT2;2仅见少数碱基发生改变,在TaHKT2;2 P-loop区无氨基酸变异。TaHKT2;2 5'侧翼序列保守性低于其编码区。TaHKT2;2在小麦驯化过程可能受到选择,属于驯化基因。 展开更多
关键词 六倍体小麦 HKT基因家族 TaHKT2 2基因 BAC文库 多样性
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17β-雌二醇治疗围绝经期特发性室性心律失常疗效及对钙离子库受体IP3/Ryn2基因表达的影响 预览
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作者 童玲 危先江 林春香 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第1期145-146,150共3页
目的 观察17β-雌二醇治疗围绝经期特发性室性心律失常(idiopathic ventricular arrhythmia,IVA)临床疗效并研究其对钙离子库受体IP3/Ryn 2基因表达的影响,推断2者之间的关联性。方法 选择围绝经期特发性室性心律失常患者32例,同时选... 目的 观察17β-雌二醇治疗围绝经期特发性室性心律失常(idiopathic ventricular arrhythmia,IVA)临床疗效并研究其对钙离子库受体IP3/Ryn 2基因表达的影响,推断2者之间的关联性。方法 选择围绝经期特发性室性心律失常患者32例,同时选择32例同龄的围绝经期正常女性作为正常对照组。围绝经期IVA患者连续口服17β-雌二醇2个月。观察围绝经期IVA患者应用17β-雌二醇前后心律失常计数变化情况;检测围绝经期IVA患者治疗前、治疗后、正常对照者外周血钙离子库受体IP3和Ryn 2基因表达。结果 围绝经期特发性室性心律失常患者经17β-雌二醇治疗后室性心律失常计数较治疗前明显减少(P〈0.05)。与治疗前比较,经17β-雌二醇治疗后IP3基因表达明显下降(P〈0.05),且同正常对照组相比无统计学意义。17β-雌二醇对Ryn 2受体基因表达无明显影响。结论 17β-雌二醇抑制特发性室性心律失常可能与钙离子库受体IP3基因表达相关。 展开更多
关键词 17Β-雌二醇 围绝经期 特发性室性心律失常 IP3基因 Ryn 2基因
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上饶市2013-2014年新型甲型H1N1流感病毒耐药性分析
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作者 张艳燕 朱琳 +1 位作者 熊英 李健雄 《中国病毒病杂志》 CAS 2017年第4期283-286,共4页
目的分析上饶市2013-2014年甲型H1N1流感病毒M2基因以及NA基因的特点,掌握其耐药情况,为临床治疗和疾病控制提供参考。方法从上饶市流感监测网中随机选择12株甲型H1N1流感病毒,经核酸提取和one-step RT-PCR扩增M基因及NA基因片段,M基因... 目的分析上饶市2013-2014年甲型H1N1流感病毒M2基因以及NA基因的特点,掌握其耐药情况,为临床治疗和疾病控制提供参考。方法从上饶市流感监测网中随机选择12株甲型H1N1流感病毒,经核酸提取和one-step RT-PCR扩增M基因及NA基因片段,M基因经双向序列测定,采用DNAStar6.0和MEGA6.0序列分析软件分析M2基因特征以及耐药性位点;NA基因采用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法分析NA基因第275位是否发生酪氨酸(Y)替代组氨酸(H)的突变。结果 12株新型甲型H1N1流感病毒毒株M2基因31位氨基酸均由丝氨酸(S)突变为天冬酰胺(N);NA基因第275位氨基酸均为组氨酸,未发生变异。结论 12株新型甲型流感病毒毒株均对金刚烷胺类药物耐药,而对神经氨酸酶抑制剂奥司他韦敏感。 展开更多
关键词 新型甲型H1N1流感病毒 M2基因 NA基因 耐药性
循环型microRNA-92a在先天性巨结肠中的表达及上调2基因的研究 预览 被引量:3
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作者 邱胜华 刘健 +1 位作者 陈运平 郭洪娜 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第21期19-24,共6页
目的 探讨循环型micro RNA-92a(mi R-92a)在先天性巨结肠(HD)中的表达,以及通过上调尾侧型同源转录因子-2(2)基因抑制肠神经干细胞(ENSCs)增殖的可能机制。方法 选取2013年1月-2015年12月在山东省临沂市沂水中心医院行先天性巨... 目的 探讨循环型micro RNA-92a(mi R-92a)在先天性巨结肠(HD)中的表达,以及通过上调尾侧型同源转录因子-2(2)基因抑制肠神经干细胞(ENSCs)增殖的可能机制。方法 选取2013年1月-2015年12月在山东省临沂市沂水中心医院行先天性巨结肠根治术16例HD患儿的术前血清标本。实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测血清mi R-92a m RNA的表达。提取孕15 d胎鼠肠管ENSCs,通过免疫学方法鉴定ENSCs;免疫磁珠法分选Nestin+ENSCs,脂质体转染使Nestin+ENSCs内过表达mi R-92a,噻唑蓝法检测细胞的增殖活性,q RT-PCR、Western blot检测2基因的表达。结果 HD患儿血清中mi R-92a m RNA的相对表达量为(23.5±4.66),高于对照组(=12.661,=0.000);ENSCs细胞培养早期Nestin染色阳性,具有向Tuj-1阳性、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞分化的潜能;ENSCs过表达mi R-92a后,CDX2 m RNA的相对表达为(13.024±3.882),高于对照组(=47.212,=0.000),CDX2蛋白表达为(0.436±0.0828),高于对照组(=48.793,=0.000),细胞的增殖活性在转染后24、48和72 h明显受抑制。结论 mi R-92a通过上调2基因的表达,抑制ENSCs的增殖,可能促进HD发生、发展。 展开更多
关键词 先天性巨结肠 循环型mi R-92a 2基因 肠神经干细胞
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CYP1A2基因C163A多态性与精神分裂症易感性的相关研究 预览 被引量:3
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作者 陈柯霖 张国军 +1 位作者 吕虹 康熙雄 《中国医药生物技术》 2015年第2期182-183,共2页
细胞色素P450在生物体广泛分布,参与多种药物的代谢,在许多疾病的发生、发展中都起到了重要作用。目前国内正在深入开展药物基因组学方面的研究,疾病与药物代谢酶基因多态性之间的关系研究在国际上也是一个热点。精神分裂症是一种由多... 细胞色素P450在生物体广泛分布,参与多种药物的代谢,在许多疾病的发生、发展中都起到了重要作用。目前国内正在深入开展药物基因组学方面的研究,疾病与药物代谢酶基因多态性之间的关系研究在国际上也是一个热点。精神分裂症是一种由多因子共同作用而发生的复杂疾病,流行病学证据表明,遗传因素是该病发生的重要原因。国际上已经开展了有关于CYP1A2和精神分裂症关系的研究。 展开更多
关键词 代谢酶基因多态性 精神分裂症 A2基因 易感性 药物基因组学 细胞色素P450 复杂疾病 CYP1A2
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TREM2基因与晚发型阿尔茨海默病 被引量:1
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作者 王成志 刘倩倩 +1 位作者 石胜良 贾建平 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第33期2735-2736,共2页
APOE基因作为晚发型阿尔茨海默病(late-onset AD,LOAD)最主要的致病基因得到广泛的研究.同时,近年来研究发现,编码2型髓样细胞触发受体基因(TREM2)R47H位点突变也与晚发型阿茨海默病有重大关联.研究认为TREM2基因具有抑制中枢炎症... APOE基因作为晚发型阿尔茨海默病(late-onset AD,LOAD)最主要的致病基因得到广泛的研究.同时,近年来研究发现,编码2型髓样细胞触发受体基因(TREM2)R47H位点突变也与晚发型阿茨海默病有重大关联.研究认为TREM2基因具有抑制中枢炎症及介导加强中枢单核细胞吞噬系统对Aβ、凋亡细胞碎片等吞噬功能.然而目前对其确切的作用机制却不甚明了,而其R47H位点突变与LOAD发病的发病机制也有待研究证实.本文就TREM2基因与中枢炎症及介导Aβ吞噬作用作一综述. 展开更多
关键词 晚发型阿尔茨海默病 M2基因 APOE基因 位点突变 发病机制 LOAD 阿茨海默病 致病基因
广西H3N8亚型马流感病毒耐药性分析 预览 被引量:2
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作者 颜健华 何奇松 +3 位作者 熊毅 冯淑萍 胡丽萍 韦建华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1127-1131,共5页
【目的】了解广西H3N8亚型马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)对抗流感病毒药物的耐药性,为临床科学用药提供参考。【方法】采用RT-PCR对广西H3N8亚型EIV分离株A/Equine/Guangxi/1/09(简称GX09株)进行M基因和NA基因扩增,测序分... 【目的】了解广西H3N8亚型马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)对抗流感病毒药物的耐药性,为临床科学用药提供参考。【方法】采用RT-PCR对广西H3N8亚型EIV分离株A/Equine/Guangxi/1/09(简称GX09株)进行M基因和NA基因扩增,测序分析M2基因和NA基因特征及其与耐药性相关的氨基酸位点,并进行生物学耐药性试验。【结果】GX09株M2基因的相关耐药性位点(L26F、V27A、A30T、S31N、G34E)均未发生变异;在NA基因相关耐药性位点方面,也仅在S247A位点处出现氨基酸替换,其他位点均较保守,未出现氨基酸替换。生物学耐药性试验结果表明,GX09株对金刚烷胺敏感,对奥司他韦已产生耐药性。【结论】广西目前流行的EIV对金刚烷胺敏感,在流感易发季节仍可选用烷胺类药物对广西地区的马流感进行预防和治疗。 展开更多
关键词 马流感病毒 H3N8亚型 M2基因 NA基因 耐药性
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江西省季节性A(H1N1)流感病毒的基因特点及耐药性分析 被引量:2
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作者 熊英 龚甜 +3 位作者 李健雄 周珺 施勇 徐刚 《中国卫生检验杂志》 2015年第2期153-156,共4页
目的分析江西省2005年-2009年季节性H1N1流感病毒M2以及NA基因的特点,掌握其耐药情况,为流感防控提供参考。方法从江西省流感监测网中随机选择26株季节性A(H1N1)流感病毒,经核酸提取和one-step RTPCR扩增M以及NA基因片段,双向序列测定... 目的分析江西省2005年-2009年季节性H1N1流感病毒M2以及NA基因的特点,掌握其耐药情况,为流感防控提供参考。方法从江西省流感监测网中随机选择26株季节性A(H1N1)流感病毒,经核酸提取和one-step RTPCR扩增M以及NA基因片段,双向序列测定,采用DNAStar 5.0和Mage 4.0序列分析软件分析M2以及NA基因特征以及耐药性位点。结果除2005年分离的3株病毒和2009年分离的2株病毒的M2基因重要位点未发生变异外,其他21株病毒均发生了S31N的氨基酸替换;2009年的5株分离株均发生H274Y突变外,其他21株病毒NA蛋白催化活性位点和辅助位点均未发生氨基酸替换。结论 2005年分离株均对奥司他韦敏感,部分毒株对金刚烷胺类药物耐药;2006年-2008年的分离株对金刚烷胺类药物耐药,但对奥司他韦敏感;2009年的分离株均对奥司他韦耐药,部分毒株对金刚烷胺类药物也耐药,应加强流感病毒耐药性监测。 展开更多
关键词 季节性A(H1N1)流感病毒 M2基因 NA基因 耐药性
siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响 被引量:5
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作者 苏颖 何火聪 +3 位作者 吴君心 邹长棪 林可焴 陈超 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期214-218,共5页
目的 探讨siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌CNE-2(R743)细胞放射敏感性的影响.方法 化学合成Annexin A2基因的siRNA经HiPerFect转染入R743细胞.RT-PCR和蛋白印迹法检测转染前后Annexin A2的mRNA和蛋白表达,克隆形成实验分析转染... 目的 探讨siRNA沉默Annexin A2基因表达对鼻咽癌CNE-2(R743)细胞放射敏感性的影响.方法 化学合成Annexin A2基因的siRNA经HiPerFect转染入R743细胞.RT-PCR和蛋白印迹法检测转染前后Annexin A2的mRNA和蛋白表达,克隆形成实验分析转染前后对细胞放射敏感性的影响,流式细胞仪和TUNEL实验分别检测转染前后经X线照射后细胞周期、细胞凋亡情况.结果 RT-PCR和蛋白印迹法结果显示转染组细胞Annexin A2基因及蛋白表达下调.克隆形成实验分析结果表明转染组Do、Dq、SF2值均低于单纯照射组和转染对照组,其相应放射增敏比(Do值比)分别为1.30和1.27.X线照射后转染组细胞G2+M期比例增加并高于单纯照射组和转染对照组(32.46%、9.42%、9.17%,P=0.000、0.000),转染组凋亡率也高于单纯照射组和转染对照组(35.20%、10.87%、11.33%,P=0.000、0.000).结论 siRNA沉默Annexin A2基因表达可增强R743细胞放射敏感性,可能与DNA损伤修复、细胞周期时相分布变化有关. 展开更多
关键词 RNA干扰 ANNEXIN A2基因 细胞系 鼻咽肿瘤 放射敏感性
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