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尼罗罗非鱼雌性性腺关键LncRNA的鉴定和表达分析 预览
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作者 彭锟 宋凌云 +1 位作者 乔栖梧 林艳华 《西南师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第6期40-45,共6页
生殖细胞的分化与发育是硬骨鱼类性别分化的重要环节,并受到遗传和环境2个因素的影响.为研究LncRNA在硬骨鱼类卵母细胞发育以及性别分化中的作用,课题组通过转录组测序获得了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌、雄性腺中呈现差异表达... 生殖细胞的分化与发育是硬骨鱼类性别分化的重要环节,并受到遗传和环境2个因素的影响.为研究LncRNA在硬骨鱼类卵母细胞发育以及性别分化中的作用,课题组通过转录组测序获得了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)雌、雄性腺中呈现差异表达的LncRNA,并选取LncRNA(TCONS02477925)开展研究.发现该LncRNA具有2个外显子,属于典型的基因间LncRNA(Intergenic LncRNA),转录本全长1 537 nt,基因组定位于19号连锁群(Linkage Group 19,LG19)上,并且该基因在卵巢的表达水平显著高于精巢.荧光原位杂交结果表明,该LncRNA主要表达在I和II时相的卵母细胞的细胞质中.转录组测序结果及生物信息学分析发现,qrsl1和rtn4ip1可能是该LncRNA的cis靶基因,并且2个靶基因在卵巢中表达丰度较高.因此,本研究表明该LncRNA在罗非鱼卵母细胞发育和性别分化中可能有重要的作用. 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 LncRNA 卵母细胞 性别决定与分化
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尼罗罗非鱼Hsc70的原核表达和多克隆抗体制备 预览
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作者 潘传燕 林勇 +2 位作者 冯鹏霏 张永德 罗洪林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第8期1272-1279,共8页
通过原核表达系统表达尼罗罗非鱼热休克蛋白Hsc70,纯化该蛋白并制备其多克隆抗体。对尼罗罗非鱼热休克蛋白进行生物信息学分析,设计特异性引物,扩增出Hsc 70基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,并转入大肠埃希菌B21中通过诱... 通过原核表达系统表达尼罗罗非鱼热休克蛋白Hsc70,纯化该蛋白并制备其多克隆抗体。对尼罗罗非鱼热休克蛋白进行生物信息学分析,设计特异性引物,扩增出Hsc 70基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,并转入大肠埃希菌B21中通过诱导剂IPTG进行原核诱导表达,表达产物用SDS-PAGE鉴定并用镍柱进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。结果表明,原核表达系统成功表达了尼罗罗非鱼热休克蛋白Hsc70,重组蛋白分子量约为75 ku,主要以包涵体形式表达。经镍柱纯化得到高纯度的Hsc70;该蛋白免疫日本大耳兔获得特异性多克隆抗体,效价为1∶2 048 000;Western blot检测到一条75 ku的特异性条带,表明该抗体能特异性地识别尼罗罗非鱼Hsc70蛋白。尼罗罗非鱼Hsc70蛋白在大肠埃希菌中成功表达,制备的重组蛋白和多克隆抗体为深入研究尼罗罗非鱼Hsc70的功能提供了分子工具。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 Hsc70 原核表达 多克隆抗体
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邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对罗非鱼肝脏转录组影响研究 预览
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作者 张林宝 胡莹 +2 位作者 陈海刚 贾晓平 蔡文贵 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期386-396,共11页
邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)作为生产量和使用量最多的一种邻苯二甲酸酯类化合物,其对水生生物具有多种毒性.本研究选用中国南方地区最重要的经济鱼类尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)作为实验对象,研究DEHP(50mg/kgbw)作用下... 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)作为生产量和使用量最多的一种邻苯二甲酸酯类化合物,其对水生生物具有多种毒性.本研究选用中国南方地区最重要的经济鱼类尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)作为实验对象,研究DEHP(50mg/kgbw)作用下罗非鱼肝脏组织内转录组的响应特征.利用IlluminaTM HiSeq4000测序平台对DEHP处理组和对照组尼罗罗非鱼肝脏RNA样品分别进行转录组测序.对照组和DEHP暴露组分别获得30.10Mb和30.16Mb待分析数据(cleanreads),对转录组数据进行组装并去冗余后得到58,585个Unigene.将DEHP处理组和对照组的转录组数据进行比较一共获得5,008个差异表达基因,其中上调表达基因和下调表达基因分别为3,217个和1,791个.通过GO和KEGG功能分析后发现这些差异表达基因主要为机体免疫、生殖内分泌以及脂类代谢相关基因,这表明DEHP对尼罗罗非鱼肝脏毒性主要表现为免疫毒性、生殖毒性和脂类代谢紊乱.另外,实时荧光定量PCR验证结果发现转录组分析数据基本可靠.上述结果为在转录组水平筛选DEHP生物标志物,解析DEHP对罗非鱼毒性作用的分子机制提供了科学参考. 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯 尼罗罗非鱼 肝脏 转录组 差异表达基因
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尼罗罗非鱼TRAF4基因的克隆、表达及功能分析
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作者 韩雪晴 高风英 +5 位作者 卢迈新 刘志刚 曹建萌 王淼 衣萌萌 张德锋 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期381-392,共12页
肿瘤坏死因子受体相关因子4 (tumor necrosis factor receptor associated factors 4, TRAF4)是TRAFs家族中比较特殊的一员,生物学功能较多且较复杂。为了明确TRAF4基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程中的作用,本研究首... 肿瘤坏死因子受体相关因子4 (tumor necrosis factor receptor associated factors 4, TRAF4)是TRAFs家族中比较特殊的一员,生物学功能较多且较复杂。为了明确TRAF4基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程中的作用,本研究首先通过反转录PCR和分段扩增获得尼罗罗非鱼TRAF4基因c DNA (GenBank No. MH986338)及基因组序列,并进行基因和蛋白质结构等生物信息学分析;然后利用qRT-PCR技术检测该基因在健康个体中的组织表达、受精后不同发育阶段的表达以及人工感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)后的表达特征;最后构建重组真核表达载体,分析TRAF4在人胚肾细胞293T中的亚细胞定位及其在Nuclear factorκB (NF-κB)通路中的作用。结果显示,TRAF4基因的cDNA序列为4 483 bp,开放阅读框为1 413 bp,可编码470个氨基酸。基因组序列分析发现,TRAF4基因含7个外显子和6个内含子。氨基酸序列分析发现,TRAF4存在1个环指(RING-finger)结构域、3个TRAF类型的锌指(zinc-finger)结构域、1个甲基多巴和TRAF同源物(meprin and TRAF-homology, MATH)结构域。组织分析表明,TRAF4基因在所检测的11个组织/器官中均有表达,脑中表达最高,脾中表达最低;该基因在受精后不同发育阶段均有表达。人工感染无乳链球菌后,尼罗罗非鱼TRAF4基因在肠、鳃、脾、肾和血液中的表达量均发生不同程度的变化,在鳃和血液中显著升高,在肠和肾中的表达量均低于对照组(0 h组)。亚细胞定位和双荧光素酶报告分析显示,TRAF4在293T细胞中主要定位于细胞质,可增强NF-κB活性。综上所述,TRAF4基因在尼罗罗非鱼的免疫应答中发挥重要作用,本研究为深入探讨TRAF4基因在罗非鱼抗感染免疫中的作用机制提供了基础资料。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子4基因(TRAF4) 尼罗罗非鱼 基因表达 转染
盐碱水和淡水养殖模式下尼罗罗非鱼肌肉品质比较 预览
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作者 程亚美 赵金良 +3 位作者 唐首杰 Christian Larbi AYISI 涂翰卿 宋凌元 《河南农业科学》 北大核心 2019年第4期125-134,共10页
为了解盐碱水和淡水养殖的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肌肉品质的差异,对不同养殖模式(淡水养殖和盐碱水养殖)下的尼罗罗非鱼肌肉的营养成分以及感官特征进行分析和比较。结果表明,盐碱水养殖尼罗罗非鱼肌肉总体感官评分高于淡... 为了解盐碱水和淡水养殖的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肌肉品质的差异,对不同养殖模式(淡水养殖和盐碱水养殖)下的尼罗罗非鱼肌肉的营养成分以及感官特征进行分析和比较。结果表明,盐碱水养殖尼罗罗非鱼肌肉总体感官评分高于淡水养殖。盐碱水养殖的尼罗罗非鱼肌肉粗蛋白含量为19.74%,显著高于淡水养殖,水分含量为74.83%,显著低于淡水养殖,其他基础营养成分差异不显著。盐碱水养殖和淡水养殖的尼罗罗非鱼的必需氨基酸与氨基酸总量比值分别为41.76%和41.52%,必需氨基酸与非必需氨基酸比值分别为71.69%和70.99%,2种养殖模式下养殖的尼罗罗非鱼肌肉的氨基酸组成均符合联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)的理想模式,属于优质蛋白质源。盐碱水养殖的尼罗罗非鱼肌肉的不饱和脂肪酸含量为61.66%,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸(EPA+DHA)的含量为5.77%,n-3/n-6的值为0.57,均显著高于淡水养殖。盐碱水养殖的尼罗罗非鱼肌肉的鲜味氨基酸总量为194.43 mg/kg,甜味氨基酸总量为1 214.90 mg/kg,总游离氨基酸量为1 752.40 mg/kg,均显著高于淡水养殖。盐碱水养殖的尼罗罗非鱼肌肉和盐碱水养殖水样中异味物质(土臭素和二-甲基异茨醇)含量均显著低于淡水养殖组。综上,盐碱水养殖的尼罗罗非鱼肌肉的营养价值和感官特征明显优于淡水养殖。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 肉质 盐碱水 淡水 品质评价
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尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备
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作者 潘传燕 冯鹏霏 +3 位作者 林勇 罗洪林 张永德 苏乾莲 《生物技术》 CAS 2019年第1期16-22,共7页
[目的]构建尼罗罗非鱼ZAP-70原核表达载体,纯化其重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用无缝克隆技术构建尼罗罗非鱼ZAP-70重组表达载体,并转入大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的ZAP-70蛋白免疫日本大耳兔得到多克隆抗体,采用Western Blot... [目的]构建尼罗罗非鱼ZAP-70原核表达载体,纯化其重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用无缝克隆技术构建尼罗罗非鱼ZAP-70重组表达载体,并转入大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的ZAP-70蛋白免疫日本大耳兔得到多克隆抗体,采用Western Blotting和ELISA技术鉴定抗体的特异性和效价。[结果]成功构建原核表达重组质粒p ET-B2m-ZAP-70,诱导表达的重组蛋白分子量约为39 k Da,主要以包涵体的形式表达;获得效价为1∶512 000的多克隆抗血清,WB检测显示该抗体能够特异性的识别所表达的ZAP-70重组蛋白。[结论]尼罗罗非鱼ZAP-70重组质粒在大肠杆菌B21中高效表达,分子量约为39 k Da,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步探索ZAP-70在尼罗罗非鱼免疫系统中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 罗非鱼 ZAP-70 原核表达 多克隆抗体 免疫印迹
镉离子对尼罗罗非鱼精巢N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的失活动力学
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作者 林心宇 张颖 +3 位作者 张伟妮 吴方达 黄一帆 黄小红 《应用与环境生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期609-614,共6页
镉离子污染对水生生物的繁殖造成了不利影响,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)被认为参与了动物的受精过程.为了解镉离子对罗非鱼繁殖的影响,以尼罗罗非鱼精巢分离获得的NAGase酶为研究对象,采用底物反应动力学方法,建立镉离子对NA... 镉离子污染对水生生物的繁殖造成了不利影响,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)被认为参与了动物的受精过程.为了解镉离子对罗非鱼繁殖的影响,以尼罗罗非鱼精巢分离获得的NAGase酶为研究对象,采用底物反应动力学方法,建立镉离子对NAGase酶的失活模型,探究镉离子对该酶活性的影响.结果显示,镉离子对NAGase表现出了可逆的抑制,对NAGase抑制的IC_(50)为40.95 mmol/L.镉离子对NAGase的抑制机理为竞争型抑制,抑制常数KI为17.13mmol/L,同时测定了微观失活速度常数.本研究表明镉离子对NAGase的抑制类型为竞争型的可逆抑制,结果可为后期研究镉离子对罗非鱼繁殖性能的研究提供理论基础. 展开更多
关键词 失活动力学 N-乙酰-Β-D-氨基葡萄糖苷酶 罗非鱼 镉离子
尼罗罗非鱼主要组织相容性复合体Ⅱβ(MHCⅡβ)基因的克隆、表达和多态性 预览
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作者 何佳男 罗文娜 +1 位作者 刘晓春 林浩然 《中山大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期7-20,共14页
MHCⅡβ基因在鱼类免疫反应中起重要作用。采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)技术,克隆了尼罗罗非鱼的MHCⅡβ基因。MHCⅡβ基因含有5个外显子和4个内含子,其c DNA全长为1 142 bp,开放读码框为750 bp,编码249个氨基酸。通过同源性分... MHCⅡβ基因在鱼类免疫反应中起重要作用。采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)技术,克隆了尼罗罗非鱼的MHCⅡβ基因。MHCⅡβ基因含有5个外显子和4个内含子,其c DNA全长为1 142 bp,开放读码框为750 bp,编码249个氨基酸。通过同源性分析和进化树分析发现,与其他硬骨鱼类和哺乳类的相似性在30.6%-78.6%,和鲈形目的鱼类同源性最高。从25尾罗非鱼的50个开放读码框的阳性克隆中共获得10条不同的核苷酸序列,分别编码不同的氨基酸。氨基酸序列比对分析发现,多态性位点主要集中在MHCⅡβ基因的第2外显子上。通过对海豚链球菌感染后易感个体和抗病个体的PCR-SSCP电泳分析,发现电泳条带出现2-12条不同的单带,测序结果表明个体存在1-6个等位基因,暗示至少存在3个MHCⅡβ基因座。q PCR检测表明,MHCⅡβ基因在鳃、心脏、脾脏等组织高度表达,在肾脏、肌肉、脑等组织中中度表达,而在皮肤、肠、肝脏等组织中表达最弱。在攻毒后的头肾组织中,MHCⅡβ基因的表达量呈现下降-上升-下降的变化趋势,表明MHCⅡβ参与了罗非鱼的免疫反应。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 MHCⅡβ 组织分布 多态性
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尼罗罗非鱼IgM单抗的制备及IgM + B淋巴细胞吞噬能力的研究 预览
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作者 吴丽婷 孔令贺 +3 位作者 王君如 杨延舰 尹晓雪 叶剑敏 《华南师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第5期60-68,共9页
采用免疫亲和层析方法纯化尼罗罗非鱼抗TNP特异性IgM,并以此为抗原免疫Babl/c小鼠进行单克隆抗体制备.免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合成杂交瘤细胞,利用酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法(WesternBlot)和流式细胞术筛选获得2株... 采用免疫亲和层析方法纯化尼罗罗非鱼抗TNP特异性IgM,并以此为抗原免疫Babl/c小鼠进行单克隆抗体制备.免疫的小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合成杂交瘤细胞,利用酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法(WesternBlot)和流式细胞术筛选获得2株抗IgM重链的单克隆抗体,分别命名为3B3和9D12.纯化后的单克隆抗体3B3和9D12在1g/L质量浓度下的抗体效价分别为740741和359712unit/mL.利用制备的单抗结合激光共聚焦显微镜检测发现,膜结合型IgM位于B细胞膜表面(IgM+B细胞).流式细胞术检测尼罗罗非鱼IgM+B细胞的免疫组织分布,发现IgM+B细胞分布存在组织差异性,其中在外周血(PBL)所占比例最大,约为37.6%,其次是脾脏(SPL),占33.7%,头肾(AK)约为23.9%,而后肾(PK)约为20%.对IgM+B细胞荧光微球的吞噬能力分析发现,IgM+B细胞对0.5μm的荧光微球吞噬能力强于1.0μm的荧光微球.另外,IgM+B细胞的吞噬能力存在免疫组织差异性,其中对于0.5μm荧光微球的吞噬能力,PBL明显高于其他组织,而AKIgM+B细胞对1.0μm荧光微球的吞噬能力最强.以上结果表明:该研究成功地制备了鼠抗尼罗罗非鱼IgM单抗工具,并利用其IgM单抗发现IgM+B细胞具有吞噬能力,且其吞噬能力存在组织差异性,表明IgM+B细胞在先天性免疫中可能发挥重要作用. 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 IGM 单克隆抗体 IgM+B细胞 吞噬能力
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尼罗罗非鱼Lck多克隆抗体的制备及鉴定 预览
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作者 张永德 林勇 +5 位作者 冯鹏霏 陈忠 杜雪松 黄姻 潘传燕 罗洪林 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2304-2310,共7页
【目的】制备及鉴定尼罗罗非鱼淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)多克隆抗体,为深入研究罗非鱼Lck蛋白功能及其免疫机制打下基础。【方法】采用无缝克隆技术构建重组质粒pET-B2m-Lck,然后转入大肠杆菌B21(DH3)中进行诱导表达;经Ni-NTA... 【目的】制备及鉴定尼罗罗非鱼淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck)多克隆抗体,为深入研究罗非鱼Lck蛋白功能及其免疫机制打下基础。【方法】采用无缝克隆技术构建重组质粒pET-B2m-Lck,然后转入大肠杆菌B21(DH3)中进行诱导表达;经Ni-NTA树脂层析柱纯化后,以纯化的融合蛋白免疫日本大耳白兔制备Lck多克隆抗体,并采用Western blotting和ELISA检测多克隆抗体的特异性和免疫效价。【结果】尼罗罗非鱼Lck蛋白的亲水性均值(GRAVY)为-0.454,属于亲水性蛋白,具有较丰富且分布均匀的潜在抗原表位位点,无典型的跨膜区。经原核载体诱导表达获得的融合蛋白分子量约67.0kD,主要以包涵体形式存在。免疫日本大耳白兔后可获得效价为1∶256000的Lck多克隆抗体,且该多克隆抗体能特异性识别Lck蛋白。经Protein G亲和层析柱纯化的抗体浓度在10mg/mL以上,纯度约95%,抗体纯化效果良好。【结论】经原核载体诱导表达获得的尼罗罗非鱼Lck融合蛋白具有良好的免疫原性,其免疫日本大耳白兔后获得的多克隆抗体具有高效价和特异性,可用于细菌感染罗非鱼后机体免疫机制的研究。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(Lck) 原核表达 包涵体 多克隆抗体
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尼罗罗非鱼CRTC2基因克隆及其表达规律分析 预览
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作者 钟艺文 褚武英 +7 位作者 许友卿 丁兆坤 张建社 李玉珑 成嘉 陈亨德 安晓玲 王利香 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2539-2544,共6页
【目的】掌握尼罗罗非鱼活化环磷酸腺苷效应元件结合蛋白调节转录共激活因子2(CRTC2)基因的表达变化规律,并探究饥饿对其表达的影响,为研究尼罗罗非鱼CRTC2基因功能打下基础。【方法】采用RACE-PCR从尼罗罗非鱼肌肉组织中克隆CRTC2基因... 【目的】掌握尼罗罗非鱼活化环磷酸腺苷效应元件结合蛋白调节转录共激活因子2(CRTC2)基因的表达变化规律,并探究饥饿对其表达的影响,为研究尼罗罗非鱼CRTC2基因功能打下基础。【方法】采用RACE-PCR从尼罗罗非鱼肌肉组织中克隆CRTC2基因,对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析不同组织/器官中CRTC2基因的表达量。【结果】尼罗罗非鱼CRTC2基因全长6927bp,其开放阅读框(ORF)2388bp,5'端非编码区(5'UTR)343bp,3'端非编码区(3'UTR)4196bp,编码795个氨基酸,具有保守的CORC-N、CORC-M和CORC-C结构域。由基于CRTC2氨基酸序列同源性构建的系统发育进化树可知,尼罗罗非鱼与红鳍东方鲀的亲缘关系最近。尼罗罗非鱼的白肌、红肌、心脏、脾脏、肝脏、肾脏、脑组织和肠道等8个不同组织/器官中均有CRTC2基因表达,但以脑组织和白肌中的表达量较高;与正常投喂的尼罗罗非鱼相比,饥饿7 d的尼罗罗非鱼白肌CRTC2基因表达无显著变化(P>0.05),但饥饿15 d后CRTC2基因表达显著上调(P<0.05)。【结论】尼罗罗非鱼各组织/器官中CRTC2基因的表达具有一定规律性,长期饥饿会影响CRTC2基因表达,即CRTC2可能与糖代谢密切相关,直接或间接影响尼罗罗非鱼的能量吸收和代谢。因此,尼罗罗非鱼CRTC2基因可作为信号转导调控糖代谢的候选基因。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 CRTC2基因 表达规律 饥饿 糖代谢
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饲料中不同磷水平对尼罗罗非鱼生长性能、体组成及血液钙、磷代谢的影响 预览 被引量:1
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作者 刘洋 尹向辉 阴明杰 《中国饲料》 北大核心 2018年第6期82-87,共6页
本试验旨在研究饲料不同磷水平对尼罗罗非鱼生长和磷代谢的影响。以磷酸二氢钙为磷源,制备D1~D7[磷含量:D1(0.68%),D2(0.83%),D3(1.07%),D4(1.28%),D5(1.42%),D6(1.65%),D7(1.79%)]7种饲料,饲养尼罗罗非鱼[体重(8.68±0.46)g/尾]56 ... 本试验旨在研究饲料不同磷水平对尼罗罗非鱼生长和磷代谢的影响。以磷酸二氢钙为磷源,制备D1~D7[磷含量:D1(0.68%),D2(0.83%),D3(1.07%),D4(1.28%),D5(1.42%),D6(1.65%),D7(1.79%)]7种饲料,饲养尼罗罗非鱼[体重(8.68±0.46)g/尾]56 d。结果显示,除D2组外,D3组平均增重率和特定生长率显著高于其他各组(P<0.05);D3和D4组饲料效率及蛋白质效率均显著高于其他各组(P<0.05)。随着饲料磷含量增加,所得鱼体肌肉粗脂肪含量显著降低;而肌肉粗灰分含量显著升高,其中D6、D7组肌肉粗脂肪含量显著低于D1、D2和D3组(P<0.05)。D2、D3组肌肉粗灰分含量与其他各组差异不显著(P>0.05),在饲料磷含量为1.79%(D7)时达到最大值,显著高于D1组(P<0.05)。血清降钙素随着饲料磷含量的升高先升高后降低(P<0.05),在D5组时达到最高,显著高于D1、D2、D3和D7组(P<0.05);血清甲状旁腺素含量随饲料磷含量增加呈先下降后上升的趋势,在D5组时降到最低。综上所述,在本试验条件下,尼罗罗非鱼最适饲料有效磷含量为1.13%~1.64%。 展开更多
关键词 饲料磷含量 尼罗罗非鱼 磷代谢 体组成
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尼罗罗非鱼β2m基因SNP位点和单倍型与无乳链球菌抗性的关联分析 预览
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作者 张栋 高风英 +4 位作者 卢迈新 曹建萌 刘志刚 可小丽 王淼 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期903-912,共10页
β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)作为MHCⅠ类分子的亚基,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用。实验采用直接测序法从P0代尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的β2m基因组序列中筛选到30个SNPs,其中1个SNP位于5?UTR,16个SNPs位于外显... β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)作为MHCⅠ类分子的亚基,在鱼类的免疫系统中发挥重要作用。实验采用直接测序法从P0代尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的β2m基因组序列中筛选到30个SNPs,其中1个SNP位于5?UTR,16个SNPs位于外显子区域(15个非同义突变位点,1个同义突变位点),9个SNPs位于内含子区域,4个SNPs位于3?UTR。利用snapshot分型法对F1代的102尾易感群体和102尾抗病群体进行基因分型,并通过Popgen32和PIC-CALC软件统计分析尼罗罗非鱼β2m基因序列的SNPs的He、Ho、Ne和PIC等遗传参数,表明易感群体中7个SNPs属于中度多态水平(0.25<PIC<0.5),抗病群体中25个SNPs属于中度多态水平(0.25<PIC<0.5)。采用SPSS 23.0软件分析了30个SNPs在F1代2个群体中的基因型频率和等位基因频率,分析其与链球菌抗性或易感性状之间的相关性。结果表明:24个SNPs的基因型和等位基因频率与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)抗性/易感性状显著相关(P<0.05)。通过连锁不平衡分析发现30个SNPs构成4个单倍块和14种单倍型。其中,4个单倍型与无乳链球菌抗性性状显著相关(P<0.05),4个单倍型与易感性状显著相关(P<0.05)。标签SNP分析发现,单倍块2中的4个SNPs和单倍块3中的13个SNPs彼此之间高度连锁(r2>0.9),这意味着我们在β2m基因中发现2个htSNPs。研究筛选到的与链球菌抗性/易感性状相关的SNP位点及单倍型具有辅助尼罗罗非鱼抗链球菌病品种选育的潜力。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 Β2M SNPS 无乳链球菌 连锁不平衡 单倍型 标签SNPs
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“灭非灵”对观赏鱼养殖池塘中外来种尼罗罗非鱼的杀灭效果
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作者 顾党恩 余梵冬 +7 位作者 杨叶欣 马光明 胡隐昌 牟希东 徐猛 刘超 罗渡 韦慧 《生态学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期2985-2988,共4页
为有效清除观赏鱼养殖中混入的外来物种尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus),减少其对养殖品种生长和繁殖的干扰,增加养殖效益,本研究利用大型观赏鱼池塘,通过两次投放0.16 mg·L^-1的"灭非灵",对罗非鱼特异性杀灭药物"灭非灵... 为有效清除观赏鱼养殖中混入的外来物种尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus),减少其对养殖品种生长和繁殖的干扰,增加养殖效益,本研究利用大型观赏鱼池塘,通过两次投放0.16 mg·L^-1的"灭非灵",对罗非鱼特异性杀灭药物"灭非灵"的杀灭效果进行了验证试验。结果表明:该浓度的"灭非灵"能有效清除池塘中的罗非鱼个体,清除率达到99%以上;且能将该药物对其他物种的危害降到最低,在实验过程中,未发现对池塘中的多个养殖种产生影响,取得了特异性杀除罗非鱼的效果。与以往在实验室内的验证相比,本次实验为"灭非灵"的首次大型池塘实验,证明了"灭非灵"可以用于观赏鱼养殖中尼罗罗非鱼的特异性杀灭和控制,为以后观赏鱼行业中罗非鱼的清除提供了一种新的方法,同时也为外来鱼类的防控提供了新的思路。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 特异性杀灭 养殖池塘 灭非灵
尼罗罗非鱼IgT重链的蛋白表达及表达分析 预览
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作者 曹琦琦 王玉红 +2 位作者 仲小芳 陈常仪 王安利 《华南师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第4期62-67,共6页
IgT(Immunoglobulin T)作为新型免疫球蛋白在粘膜免疫中具有重要作用.文中根据尼罗罗非鱼IgT基因序列构建原核表达载体获得IgT重组蛋白,相对分子量约75 k Da,并制备出效价较高的小鼠抗罗非鱼IgT的多克隆抗体.荧光定量PCR检测证明:健... IgT(Immunoglobulin T)作为新型免疫球蛋白在粘膜免疫中具有重要作用.文中根据尼罗罗非鱼IgT基因序列构建原核表达载体获得IgT重组蛋白,相对分子量约75 k Da,并制备出效价较高的小鼠抗罗非鱼IgT的多克隆抗体.荧光定量PCR检测证明:健康尼罗罗非鱼中IgT在多种组织中都有表达,其中脾脏、皮肤、肠和鳃中表达量相对较高.无乳链球菌感染后,皮肤和头肾中IgT mRNA的相对表达量分别在12 h和4 d显著上调.免疫组化结果显示:IgT蛋白在头肾和皮肤中均有少量分布,在无乳链球菌刺激后,在皮肤中出现大量分布.以上结果表明:IgT在尼罗罗非鱼皮肤粘膜免疫中具有重要作用. 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 无乳链球菌 IGT 免疫组化 粘膜免疫
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尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(NCC)分离条件的优化 预览
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作者 郑琦 陈一锦 +5 位作者 黄瑜 蔡佳 汤菊芬 鲁义善 吴灶和 简纪常 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第3期123-126,共4页
破碎尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)头肾组织,用RPMI-1640培养基制成细胞悬液,添加至两层不同浓度的Percoll分离液液面,离心,得非特异性细胞毒性细胞(Non-specificcytotoxiccell,NCC),优化下层Percoll浓度、离心力、离心时... 破碎尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)头肾组织,用RPMI-1640培养基制成细胞悬液,添加至两层不同浓度的Percoll分离液液面,离心,得非特异性细胞毒性细胞(Non-specificcytotoxiccell,NCC),优化下层Percoll浓度、离心力、离心时间。结果表明,当下层Percoll体积分数为43%,上层Percoll体积分数为34%,离心力为500g,离心时间为30min时,尼罗罗非鱼NCC得率最高,为71.28%。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 非特异性细胞毒性细胞 Percoll分离液
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尼罗罗非鱼TRIM16和TRIM25基因的克隆及表达分析
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作者 郑建美 高风英 +4 位作者 卢迈新 刘志刚 曹建萌 可小丽 王淼 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期861-873,共13页
泛素连接酶E3家族在脊椎动物的先天免疫中发挥重要作用,由于RING finger结构域的存在,三重基序(tripartite motif,TRIM)蛋白家族的很多成员被报道具有泛素连接酶活性。为了研究TRIM16和TRIM25基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticu... 泛素连接酶E3家族在脊椎动物的先天免疫中发挥重要作用,由于RING finger结构域的存在,三重基序(tripartite motif,TRIM)蛋白家族的很多成员被报道具有泛素连接酶活性。为了研究TRIM16和TRIM25基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程中的作用,本研究通过逆转录PCR和RACE获得了尼罗罗非鱼TRIM16和TRIM25基因的cDNA及基因组序列,并进行了基因结构和蛋白二级结构分析,qRT-PCR检测基因的组织分布、在胚胎发育过程中表达变化及其对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染的响应。结果表明,TRIM16基因的cDNA(GenBank登录号:KY746714)全长2 314 bp,ORF 1 677 bp,编码558个氨基酸;TRIM25基因的cDNA(GenBank登录号:KY968697)全长2 748 bp,ORF1 677 bp,编码558个氨基酸,二者基因组序列均无内含子。氨基酸序列分析显示,TRIM16和TRIM25均具有TRIM家族的RING finger结构域、B-box结构域等保守结构。组织分析表明,在所检测的11个组织和器官中,TRIM16和TRIM25基因均有表达,血液中表达最高,肝脏中表达最低,血液中的表达量分别为肝脏(对照组)的60.46和274.07倍。这两个基因在尼罗罗非鱼胚胎发育过程中均有表达。人工感染无乳链球菌后,TRIM16和TRIM25基因在所检测的5个组织和器官中的表达量均存在升高的阶段,TRIM16基因在肠、脾、鳃、肾脏和血液中的最高表达量分别为0 h(对照组)的1.30、2.09、1.61、7.81和6.05倍,TRIM25基因在肠、脾、鳃、肾脏和血液中的最高表达量分别为对照组的11.13、1.22、1.26、61.41和77.80倍。上述结果表明,TRIM16和TRIM25基因在尼罗罗非鱼抗无乳链球菌感染的过程中发挥了重要作用。研究结果为进一步了解罗非鱼的抗感染免疫机制、探索病害防治新途径提供了理论基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 三重基序(TRIM)蛋白家族 基因克隆 无乳链球菌
广西主要养殖区内逃逸尼罗罗非鱼形态差异分析 预览 被引量:4
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作者 管嘉俊 郑惠芳 +4 位作者 乔庆 周毅 郭忠宝 陈日钊 李文红 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期2071-2077,共7页
【目的】明确地理生境对野外逃逸尼罗罗非鱼形态变异的影响,为今后研究罗非鱼种群入侵及制定防治对策提供参考依据。【方法】在广西玉林、南宁、钦州、贵港、防城港和北海6个主要养殖区域采集一龄左右的雄性逃逸尼罗罗非鱼自然群体,... 【目的】明确地理生境对野外逃逸尼罗罗非鱼形态变异的影响,为今后研究罗非鱼种群入侵及制定防治对策提供参考依据。【方法】在广西玉林、南宁、钦州、贵港、防城港和北海6个主要养殖区域采集一龄左右的雄性逃逸尼罗罗非鱼自然群体,以形态测量、主成分分析、判别分析和聚类分析等方法进行形态特征和多变量形态度量分析。【结果】在尼罗罗非鱼全长、体长、体高、头长、吻长和体质量方面,均以玉林地区的最高、钦州地区的最低,且两地差异显著(P<0.05)。主成分分析结果显示,前3个主成分贡献率分别为74.31%、9.23%和6.21%,累积贡献率达89.75%,能较好地概括不同养殖区域野外逃逸尼罗罗非鱼的生长特征。判别分析结果表明,通过全长、体厚、头长、吻长、眼径、眼间距和体质量等7项体表性状建立的判别函数能有效区分不同养殖区域的尼罗罗非鱼,其综合判别准确率为96.11%。经聚类分析发现,钦州地区的尼罗罗非鱼与其他地区的相似性最低,变异程度最大,单独聚为一支。不同养殖区域尼罗罗非鱼样本体质量与全长、体长、体高、体厚、头长、吻长、眼径、眼间距间的相关性均极显著(P<0.01),其中与全长、体长和体高的相关系数较高,分别为0.9375、0.9359和0.8327,而与眼径的相关性最低(0.5947)。【结论】主成分分析和判别分析是辨别逃逸罗非鱼来源的可行手段,而分析逃逸尼罗罗非鱼的全长、体长和体质量有助于了解其生存状态,并为控制其入侵提供参考依据。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 逃逸 形态差异 主成分分析 判别分析
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罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:1
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作者 邝伟键 黄良宗 +2 位作者 刘明杰 涂常松 顾万军 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第9期62-66,共5页
从广东省佛山市2个水产养殖场患病罗非鱼中分离到2株细菌,分别编号为T4SH和G6C,经形态学、培养特性观察、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析证实为无乳链球菌。2株分离菌株均为革兰阳性菌,呈β溶血;16S rDNA基因序列与无乳链球菌同源性达... 从广东省佛山市2个水产养殖场患病罗非鱼中分离到2株细菌,分别编号为T4SH和G6C,经形态学、培养特性观察、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析证实为无乳链球菌。2株分离菌株均为革兰阳性菌,呈β溶血;16S rDNA基因序列与无乳链球菌同源性达99%以上。2株菌均对青霉素类、头孢类、林可胺类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类抗生素敏感,对氨基糖苷类不敏感;而对磺胺类、喹诺酮类的敏感性存在差异。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌 分离 16S RDNA 药物敏感性
投喂模式对吉富罗非鱼摄食和生长的影响 预览 被引量:2
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作者 赵美娜 赵早亚 +1 位作者 孙彩云 李文笙 《广东农业科学》 CAS 2017年第3期120-127,共8页
以不同的投喂水平(100%、90%、80%、70%、60%、50%饱食投喂量)、每天投喂两次,不同的投喂频率(每天分别投喂1、2、3、4次)但日投喂总量(100%饱食投喂量)相同、分别投喂吉富罗非鱼幼鱼8周,分析不同投喂水平和投喂频率对吉富罗非鱼... 以不同的投喂水平(100%、90%、80%、70%、60%、50%饱食投喂量)、每天投喂两次,不同的投喂频率(每天分别投喂1、2、3、4次)但日投喂总量(100%饱食投喂量)相同、分别投喂吉富罗非鱼幼鱼8周,分析不同投喂水平和投喂频率对吉富罗非鱼摄食生长性能、白肌生化组成及相关摄食因子mRNA转录水平的影响。结果表明,投喂水平较高或较低均会导致饲料系数和下丘脑NPY mRNA转录水平升高,特定生长率、饲料转化率和CCK1 mRNA转录水平降低,白肌生化成分中只有粗脂肪含量受投喂水平的影响达到显著性差异;投喂频率对罗非鱼生长各指标的影响均未达到显著性差异,但可观察到各指标的变化趋势,投喂频率过高或过低均会导致吉富罗非鱼的饲料转化率、特定生长率降低,饲料系数、下丘脑NPY mRNA转录水平升高,白肌各种生化成分含量随投喂频率的增加均有先升后降的趋势,全脑CCK1mRNA转录水平则逐渐降低,全脑Orexin mRNA转录水平逐渐升高。综合分析各种指标,吉富罗非鱼的最适投喂水平为80%饱食投喂量,每天投喂两次。 展开更多
关键词 吉富罗非鱼 投喂模式 生长摄食 生化成分 mRNA转录水平
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