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甲型流感病毒非结构蛋白NS1功能研究进展 预览
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作者 刘瑞寒 朱汝南 钱渊 《微生物与感染》 2019年第1期39-45,共7页
甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)是每年季节性流感的主要病原体,也是全球儿童急性呼吸道感染的重要病毒性病原。非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)是由病毒基因组编码的蛋白,表达于被感染的细胞中,但不存在于病毒颗粒中。... 甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)是每年季节性流感的主要病原体,也是全球儿童急性呼吸道感染的重要病毒性病原。非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)是由病毒基因组编码的蛋白,表达于被感染的细胞中,但不存在于病毒颗粒中。近年来,大量研究表明NS1是IAV的重要毒力因素,通过NS1-RNA之间、NS1-蛋白之间的相互作用,在拮抗宿主抗病毒反应、抑制宿主细胞凋亡、调节宿主及自身基因表达等多方面发挥作用。深入研究NS1与宿主细胞的相互作用,不仅可加深对IAV致病机制的理解,还可为预防和控制IAV的传播甚至暴发奠定理论基础,在新型抗病毒药物及疫苗研制中有着重要的应用价值。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 非结构蛋白1 干扰素 天然免疫
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黄热病毒NS1蛋白的制备及免疫原性鉴定 预览
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作者 刘朵朵 任瑞文 +5 位作者 张培 李春缘 余楠 刘乐斌 陈荣华 陈月 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期424-428,433共6页
目的原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印... 目的原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印记、免疫荧光和酶联免疫吸附实验验证其免疫原性。结果成功构建重组质粒pQE30-YFV NS1,制备纯化可溶性YFV NS1蛋白;该重组YFV NS1蛋白与登革病毒、黄热病毒、乙脑病毒、西尼罗河病毒免疫小鼠腹水及寨卡病毒NS1、YFV NS1蛋白免疫小鼠血清均发生反应,重组YFV NS1蛋白免疫小鼠血清与YFV感染细胞超声上清也发生反应。结论获得高纯度YFV NS1重组蛋白,且具有较好的免疫原性,含天然NS1蛋白表位,为基于NS1黄热病毒早期抗原诊断方法和蛋白功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 黄热病毒 非结构蛋白1 免疫原性
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探究黄热病毒NS1蛋白在感染早期的诊断价值
3
作者 刘朵朵 陈月 +3 位作者 任瑞文 郭勇晖 温坤 余楠 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期356-361,共6页
为了探讨黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)在感染早期的诊断价值。颅内注射YFV-17D感染乳鼠,每日处死1窝,收集抗凝血。Vero细胞和C6/36细胞感染YFV-17D病毒后,每隔12h收集培养上清。分别... 为了探讨黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)在感染早期的诊断价值。颅内注射YFV-17D感染乳鼠,每日处死1窝,收集抗凝血。Vero细胞和C6/36细胞感染YFV-17D病毒后,每隔12h收集培养上清。分别采用荧光定量PCR和基于YFV NS1多克隆抗体的双抗体夹心酶联免疫(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测感染后乳鼠血液、C6/36和Vero细胞上清中YFV的扩增情况和NS1蛋白的分泌规律。乳鼠感染YFV-17D后第2d在血清中即可检测到YFV NS1,第3d血液中检测到YFV核酸。敏感细胞株在感染YFV-17D后第36h培养上清中可检测到YFV NS1,而48h后才能检测到YFV核酸。YFV NS1蛋白具有作为YFV感染早期的诊断靶标的潜在价值。 展开更多
关键词 黄热病毒(YFV) 非结构蛋白1 多克隆抗体
磷酸化修饰动态调控流感病毒复制
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作者 郑伟楠 李晶 刘文军 《科学通报》 CSCD 北大核心 2017年第17期1823-1830,共8页
磷酸化是一种常见的蛋白质翻译后修饰形式,调控蛋白质的活性、稳定性、细胞内定位和蛋白质互作等功能.在真核细胞中,丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸是最常见的磷酸化位点.在流感病毒复制的生命周期中,病毒蛋白可被宿主激酶磷酸化修饰,并调节其... 磷酸化是一种常见的蛋白质翻译后修饰形式,调控蛋白质的活性、稳定性、细胞内定位和蛋白质互作等功能.在真核细胞中,丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸是最常见的磷酸化位点.在流感病毒复制的生命周期中,病毒蛋白可被宿主激酶磷酸化修饰,并调节其核质穿梭、信号转导等功能,从而调控病毒的生长、复制和致病力.本文就近年来关于流感病毒内部核蛋白、基质蛋白1、非结构蛋白1的磷酸化修饰位点和其生物学功能进行综述,为深入了解流感病毒复制周期及抗病毒药物研发提供理论基础. 展开更多
关键词 磷酸化修饰 流感病毒 核蛋白(NP) 基质蛋白M1 非结构蛋白NS1
猪流行性腹泻病毒nsp1对Ⅰ型干扰素应答的影响 被引量:2
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作者 王晓雪 李红杰 +6 位作者 李永涛 高冬生 陈陆 常洪涛 刘红英 王川庆 赵军 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1325-1334,共10页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)能抑制宿主Ⅰ型干扰素及其诱导的细胞抗病毒免疫应答,但是PEDV抑制Ⅰ型干扰素应答的分子机制尚不明了,尤其是PEDV非结构蛋白(Nonstructural proteins,nsps)在Ⅰ型干扰素应答中的调控作用研究不多。为研究PED... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)能抑制宿主Ⅰ型干扰素及其诱导的细胞抗病毒免疫应答,但是PEDV抑制Ⅰ型干扰素应答的分子机制尚不明了,尤其是PEDV非结构蛋白(Nonstructural proteins,nsps)在Ⅰ型干扰素应答中的调控作用研究不多。为研究PEDV非结构蛋白1(nsp1)对细胞Ⅰ型干扰素应答的影响,构建了真核表达载体p CAGGS-nsp1,采用Western blotting和间接免疫荧光试验确定nsp1在细胞中的表达。通过报告基因法、ELISA以及病毒复制抑制试验评估nsp1对Ⅰ型IFN的影响。结果显示,nsp1在转染细胞和病毒感染细胞中均高效表达。双荧光报告基因试验结果表明,nsp1能显著抑制IFN-β启动子活性,且具有剂量依赖性。ELISA结果显示,nsp1能显著抑制IFN-β蛋白的表达。水泡性口炎病毒(VSV)复制抑制试验结果显示,nsp1明显抑制poly(I:C)介导的Ⅰ型IFN的抗病毒作用。结果提示,nsp1作为PEDV的保守蛋白,具有拮抗Ⅰ型干扰素启动子活性和应答的功能,为揭示PEDV逃逸宿主天然免疫应答的机制和研发新型高效抗PEDV疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 非结构蛋白1 Ⅰ型干扰素
Ⅱ型登革病毒非结构蛋白1多克隆抗体制备和免疫特征分析 预览
6
作者 杨小猛 赵丹 +2 位作者 杜丽伟 陈相 江丽芳 《分子诊断与治疗杂志》 2016年第4期256-260,共5页
目的制备抗Ⅱ型登革病毒(dengue virus type 2,DENV2)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)多克隆抗体,分析该抗体的免疫特性。方法采用NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取血分离血清,纯化获得抗NS1抗体。酶联免疫吸附试验法(enzyme li... 目的制备抗Ⅱ型登革病毒(dengue virus type 2,DENV2)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1)多克隆抗体,分析该抗体的免疫特性。方法采用NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取血分离血清,纯化获得抗NS1抗体。酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分析抗NS1抗体与NS1蛋白和DENV2结合特性。免疫荧光法测定抗NS1抗体与人微血管内皮细胞株1(human microvascular endothelial cell 1,HMEC-1)的交叉反应性。ELISA法分析抗NS1抗体、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养体系中活化补体的含量。结果抗NS1抗体能与NS1和DENV2特异性结合,抗体最高滴度分别为1∶1 280和1∶640。抗NS1抗体能与HMEC-1细胞交叉结合,抗NS1抗体、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养上清液中C3a、C4a、C5a和s C5b-9含量均显著高于HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养(均P〈0.05),以及PBS、HMEC-1和新鲜同系小鼠血清共培养(均P〈0.05)。结论抗DENV2 NS1抗体能交叉结合于血管内皮细胞并激活补体系统,可能在登革出血热的免疫病理机制中起重要作用。 展开更多
关键词 Ⅱ型登革病毒 非结构蛋白1 抗非结构蛋白1抗体 膜攻击复合物
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禽坦布苏病毒NS1-ELISA的初步建立 预览 被引量:3
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作者 万春和 潘异哲 +7 位作者 傅秋玲 陈珍 陈翠腾 傅光华 陈红梅 程龙飞 施少华 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2015年第11期1027-1031,共5页
对禽坦布苏病毒非结构蛋白NS1基因进行原核表达,并进行生物学活性鉴定。将表达成功具有生物学活性的重组蛋白经纯化后,作为抗原包被ELISA平板,通过条件优化,建立检测禽坦布苏病毒血清学检测方法。结果表明,表达的NS1重组蛋白大小约为60... 对禽坦布苏病毒非结构蛋白NS1基因进行原核表达,并进行生物学活性鉴定。将表达成功具有生物学活性的重组蛋白经纯化后,作为抗原包被ELISA平板,通过条件优化,建立检测禽坦布苏病毒血清学检测方法。结果表明,表达的NS1重组蛋白大小约为60kd,该蛋白经Western blot检测具有良好的生物学活性。将该重组蛋白纯化后包被ELISA板建立检测禽坦布苏病毒血清学间接ELISA方法,该方法优化后的参数为2.5μg·mL^-1包被ELISA板;一抗(鸭血清)血清稀释度为1∶100;酶标二抗为1∶3 000。本研究建立的方法特异性强,批内和批间重复性较好。用建立的间接ELISA方法对坦布苏病毒灭活苗免疫鸭血清和自然感染鸭血清进行检测,结果表明,本研究建立的NS1-ELISA不能用于区分禽坦布苏自然感染和疫苗免疫血清的鉴别诊断。 展开更多
关键词 禽坦布苏病毒 非结构蛋白NS1 表达 间接ELISA
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NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其DotELISA检测方法的建立 预览
8
作者 赵朴 苏红辽 +5 位作者 刘兴友 赵坤 胡建和 王三虎 姚四新 郑玉姝 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2015年第6期共6页
【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(DotELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET... 【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(DotELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28aNS1为模板,PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′,EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET32a(+),构建pET32aNS1′,经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta,用IPTG诱导表达,纯化NS1′并免疫家兔制备多克隆血清,对其进行SDSPAGE、Western blotting 检测和免疫荧光分析,并以纯化的NS1′作为包被抗原初步建立DotELISA检测方法。【结果】 PCR扩增获得了长约250 bp的H3N2 SIV NS1′片段;成功构建了重组载体pET32aNS1′;SDSPAGE 和 Western blotting 检测结果显示,融合蛋白NS1′大小约34 ku,该蛋白可溶,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且用纯化蛋白NS1′制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NS1,建立的DotELISA检测方法可鉴别猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪。【结论】 实现了H3N2 SIV NS1′蛋白的可溶性表达,表达产物具有良好的抗原性,以NS1′作为包被抗原,建立了检测NS1抗体的DotELISA方法。 展开更多
关键词 猪流感病毒 非结构蛋白1 主要抗原区域 可溶性表达 斑点酶联免疫吸附试验
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GPV YZ株非结构蛋白1基因的克隆及序列分析 预览
9
作者 吕春伟 朱峰伟 +1 位作者 杨丽金 朱新产 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期27-37,共11页
对鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因进行克隆、测序、比对及蛋白质结构和功能等生物信息学分析,探究了非结构蛋白1的基因分子特征和理化特性及病理学相关致病机理。通过PCR、质粒克隆及核苷酸序列测定方法获得病毒YZ株非结构蛋白1基因序... 对鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因进行克隆、测序、比对及蛋白质结构和功能等生物信息学分析,探究了非结构蛋白1的基因分子特征和理化特性及病理学相关致病机理。通过PCR、质粒克隆及核苷酸序列测定方法获得病毒YZ株非结构蛋白1基因序列,采用DNAsis、Mega 5.10、Blast等多种生物学软件完成核苷酸序列及氨基酸序列和系统进化分析。结果显示,鹅细小病毒YZ株非结构蛋白1的基因全长1 881个核苷酸,编码627个氨基酸。与GPV-GB标准株、MDPV、ChPV、AAV的NS1基因序列存在很高的同源相似性,与MDPV的亲缘关系最近,提示番鸭和鹅细小病毒来自共同的祖先,其宿主的不同而演化为不同的分支。对应GPVNS1-YZ的同源区段序列(293-524)含231个氨基酸,分子量为26.446 kDa、PI=6.04,带负电的氨基酸30个,带正电的氨基酸28个,体外表达半衰期为5.5 h时,不稳定系数为40.23,脂肪系数为78.01,平均疏水值为-0.43,表明这一蛋白质为亲水性蛋白;该蛋白还存在9个抗原肽的位置:55-69,185-195,94-129,156-167,19-30,76-83,6-12,205-210,40-45,出现16个可能的B细胞抗原表位,表明它具有较高的免疫原性;但不存在跨膜片段,也不含信号肽和二硫键,可能不会分泌到宿主细胞的细胞膜外发生作用;其二级结构包含α-螺旋占30.74%,β-折叠占17.32%,无规则卷曲占51.95%,三级结构近似球状,包含一个SF3解旋酶超家族的DNA病毒解旋酶功能域(AA17-AA173),提示鹅细小病毒的非结构蛋白1可能在感染发生后参与病毒DNA自我复制中的DNA解旋过程。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 非结构蛋白基因 非结构蛋白1 序列分析
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蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1原核表达载体的构建 预览 被引量:1
10
作者 宋天一 李菁华 +2 位作者 张哲 史红艳 孙延波 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期620-624,共5页
目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。... 目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。将重组后质粒pEASYTM-E1-NS1转化至BL21细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后进行镍离子亲和纯化,利用Bradford法测定蛋白浓度。采用SDS-PAGE和Western blotting法分析融合蛋白的表达水平。结果:含TBEV NS1的原核表达载体pEASYTM-E1-NS1经诱导后,可获得以包涵体形式存在的融合蛋白,通过亲和纯化得到较高纯度的蛋白质。SDS-PAGE和Western blotting,在相对分子质量约40 000处有特异性蛋白条带。结论:成功构建重组pEASYTM-E1-NS1原核表达载体,获得高纯度的重组TBEV NS1的融合蛋白。 展开更多
关键词 蜱传森林脑炎病毒 非结构蛋白1 原核表达 融合蛋白
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猪日本乙型脑炎病毒NS1基因的表达和抗体制备 预览
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作者 沈红霞 韩秀杰 +3 位作者 赵凡凡 张保新 余风艳 王晓杜 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期396-400,共5页
猪Sus scrofa domestica日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是引起母猪繁殖机能障碍的重要病原之一,其NS1蛋白参与病毒复制和组装、调节宿主免疫反应功能。提取猪日本乙型脑炎上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,... 猪Sus scrofa domestica日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是引起母猪繁殖机能障碍的重要病原之一,其NS1蛋白参与病毒复制和组装、调节宿主免疫反应功能。提取猪日本乙型脑炎上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,扩增该病毒的NS1基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS1,转化大肠埃希菌Escherichia co1i BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组JEV-NS1蛋白,获得分子量大小为46 kDa的重组蛋白。为了提高表达量,JEV-NS1基因的958~1 245 bp被截短。聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明:JEV-NS1表达量明显提高,纯化后含量达到总蛋白的85%以上。纯化后的蛋白免疫ICR小鼠Mus musculus,制备了小鼠抗JEV-NS1多克隆抗体,western-blotting验证了JEV-NS1的抗原性和抗体的特异性。 展开更多
关键词 动物学 日本乙型脑炎病毒 NS1 原核表达 纯化 抗体
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重组日本乙型脑炎病毒NS1的可溶性表达及抗原性分析 预览 被引量:1
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作者 周丹娜 梁望旺 +6 位作者 郭锐 段正赢 罗明杰 杨克礼 袁芳艳 刘泽文 田永祥 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第2期 358-360,366,共4页
根据日本乙型脑炎病毒(JEV)Whe株非结构蛋白质1(NS1)的基因序列,设计引物,利用反转录PCR从实验室保藏JEV Whe株中克隆NS1全长序列,并将其插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒NS1-pET28a,转化大肠杆菌BL21(ED3),经IPTG诱导,得到... 根据日本乙型脑炎病毒(JEV)Whe株非结构蛋白质1(NS1)的基因序列,设计引物,利用反转录PCR从实验室保藏JEV Whe株中克隆NS1全长序列,并将其插入pET28a表达载体,构建重组表达质粒NS1-pET28a,转化大肠杆菌BL21(ED3),经IPTG诱导,得到可溶性表达的融合蛋白质His-NS1。结果表明,该融合蛋白质分子量为46ku,大量表达于上清中。镍离子亲和层析柱进行纯化得到His-NS1蛋白质,经Western-blot检测,证明其具有良好的免疫学活性,这为进一步研究JEV NS1的功能及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎 非结构蛋白质1 可溶性表达 抗原性分析
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猪细小病毒NS1基因密码子偏爱性分析 预览 被引量:3
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作者 罗丹丹 李兴玉 +6 位作者 叶勇刚 王秋实 廖党金 李江凌 于吉锋 曹冶 谢晶 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第5期60-67,共8页
为给猪细小病毒(Porcineparvovirus,PPV)主要非结构蛋白(NS1)基因选择良好的宿主表达系统提供参考依据,本研究运用EMBOSS在线分析软件的CHIPS和CUSP程序对PPVNS1基因进行密码子偏爱性分析。结果显示PPVNS1基因的CAI值为0.642,EN... 为给猪细小病毒(Porcineparvovirus,PPV)主要非结构蛋白(NS1)基因选择良好的宿主表达系统提供参考依据,本研究运用EMBOSS在线分析软件的CHIPS和CUSP程序对PPVNS1基因进行密码子偏爱性分析。结果显示PPVNS1基因的CAI值为0.642,ENC值为39.703,这表明NS1在密码子使用上存在较明显的偏爱性,且第三位核苷酸尤其偏爱A或T;从与PPVNS1基因密码子使用频率比值上看,使用频率差异较大的在大肠杆菌有33个、酵母有26个、人有27个;PPVNS1基因共有71个大肠杆菌稀有密码子,并且还有多个稀有密码子多次串联成簇出现的情况。结果表明酵母等真核生物与其密码子偏爱性较为接近,可作为该基因体外表达宿主的首选。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1 密码子偏爱性
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Structural basis for dsRNA recognition by NS1 protein of influenza A virus 预览 被引量:2
14
作者 Ao Cheng Sek Man Wong Y Adam Yuan 《细胞研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2009年第2期187-195,共9页
流行性感冒 A 病毒是引起周期的流行威胁的重要人的病原体。Nonstructural 蛋白质 1 (NS1 ) 流行性感冒的蛋白质一个病毒(NS1A ) 对主人防卫防护病毒。这里,我们报导在 1.7 点绑在双 stranded RNA (dsRNA ) 的 NS1A RNA 有约束力的领域... 流行性感冒 A 病毒是引起周期的流行威胁的重要人的病原体。Nonstructural 蛋白质 1 (NS1 ) 流行性感冒的蛋白质一个病毒(NS1A ) 对主人防卫防护病毒。这里,我们报导在 1.7 点绑在双 stranded RNA (dsRNA ) 的 NS1A RNA 有约束力的领域(RBD ) 的水晶结构 ? 。NS1A RBD 形成 homodimer 由它二聚的反平行的伪 - helices 形成的保存凹面表面在一个长度无关的模式认出 A 形式 dsRNA 的主要的沟。dsRNA 被广泛的氢契约被一双不变的精氨酸(Arg38 ) 从两单体抛锚。根据结构的观察,唯一的 Arg38-Arg38 对和二 Arg35-Arg46 配对的等温的滴定热量测定试金表演为 dsRNA 绑定是关键的,并且那 Ser42 和 Thr49 为 dsRNA 绑定也是重要的。Agrobacterium 合作渗入试金进一步支持唯一的 Arg38 对在在 vivo 有约束力的 dsRNA 起重要作用。 展开更多
关键词 流性行感冒病毒 蛋白质 RNA NS1
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轮状病毒非结构蛋白1与种属限制性的相关性研究 被引量:2
15
作者 刘凯军 李晋涛 +1 位作者 魏昆 连冠 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期194-197,共4页
目的研究轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSP1)与种属限制性的相关性,探讨NSP1在RV种属限制性机制中的作用。方法对UniProt数据库中的RV NSP1 C末端、全序列以及GenBank数据库中NSP1基因的3′端非... 目的研究轮状病毒(rotavirus,RV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NSP1)与种属限制性的相关性,探讨NSP1在RV种属限制性机制中的作用。方法对UniProt数据库中的RV NSP1 C末端、全序列以及GenBank数据库中NSP1基因的3′端非编码序列利用DNAStar(Lasergene)7.1软件进行种属间和种属内的序列比对和进化树分析。结果NSP1种属间的多样性与RV宿主特异性一致,NSP1的C末端、NSP1基因3′端非编码序列与NSP1全序列种属内的一致性较高,且高于种属间一致性(P〈0.01)。结论NSP1与RV种属限制性密切相关。NSP1与宿主特异的干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)相结合的特性和RV的种属限制性相关,其结合区域可能是决定RV种属限制性的关键区域。NSP1基因3′端非编码序列可能在基因水平参与调控RV种属限制性。 展开更多
关键词 轮状病毒 非结构蛋白1 种属限制性 干扰素调节因子
禽流感病毒A/Chicken/Mudanjiang/0823/00(H9N2)株NS1基因的克隆及序列分析 预览
16
作者 孙进华 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期 115-117,共3页
用PCR方法,成功扩增出国内分离株禽流感病毒H9N2型非结构蛋白(NS1)基因cDNA,并将该片段连接到pMD18-T载体上,转化TGI感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆,提取质粒,经限制性内切酶鉴定,对目的片段进行测序,结果获... 用PCR方法,成功扩增出国内分离株禽流感病毒H9N2型非结构蛋白(NS1)基因cDNA,并将该片段连接到pMD18-T载体上,转化TGI感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆,提取质粒,经限制性内切酶鉴定,对目的片段进行测序,结果获得了NSI基因全长,约700bp。该片段的核酸序列与已知A/Chick/HongKong/1074/99(H9N2)、A/Chick/HongKong/1073/99(H9N2)毒株序列进行同源性比较,同源性皆为94.37%,氨基酸序列同源性分别为93.91%和93.48%。 展开更多
关键词 禽流感病毒 非结构蛋白 NS1基因 克隆 序列分析
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虫媒登革病毒的研究——Ⅰ.Den 2病毒非结构蛋白NS1从感染细胞膜中的分离 预览
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作者 许琳 陈焕辉 +1 位作者 刘乐和 郭辉玉 《中山大学学报论丛》 1995年第2期112-115,共4页
应用Con-A亲和层析方法从两株Den2病毒(New Guinea C株和从中国海南省分离的H-87株)感染的C6/36细胞膜中分离的糖蛋白,发现了一种感染细胞中特有的蛋白质。经SDS-PAGE证明该蛋白分子量约46000D,分析其为Den 2病毒的非结构蛋白NS1。并利... 应用Con-A亲和层析方法从两株Den2病毒(New Guinea C株和从中国海南省分离的H-87株)感染的C6/36细胞膜中分离的糖蛋白,发现了一种感染细胞中特有的蛋白质。经SDS-PAGE证明该蛋白分子量约46000D,分析其为Den 2病毒的非结构蛋白NS1。并利用Western blot筛选出针对该蛋白4种单克隆抗体。 展开更多
关键词 登革病毒2型(Den 2) 非结构蛋白1(NS1) 刀豆素A(Con-A)亲和层析
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人星状病毒I型非结构蛋白nsP1a及其C末端蛋白nsP1a/4的原核表达及鉴定 被引量:1
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作者 刘文慧 阚丽丽 +4 位作者 崔永胜 谭李倩 梁雪雪 李新 赵微 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期46-50,共5页
人星状病毒(Human Astrovirus,HastV)是导致婴幼儿腹泻的重要病原体。HastV非结构蛋白nsP1a 及C末端蛋白nsP1a/4含有各种保守的功能结构域,在星状病毒的复制、转录,病毒与宿主的相互作用中起重要作用。为获得nsP1a 及其 nsP1a/4蛋... 人星状病毒(Human Astrovirus,HastV)是导致婴幼儿腹泻的重要病原体。HastV非结构蛋白nsP1a 及C末端蛋白nsP1a/4含有各种保守的功能结构域,在星状病毒的复制、转录,病毒与宿主的相互作用中起重要作用。为获得nsP1a 及其 nsP1a/4蛋白,为后续蛋白相关研究提供平台,本研究在E.coli系统中进行人星状病毒非结构蛋白nsP1a及nsP1a/4蛋白的表达并对表达产物进行鉴定。首先将nsP1a 及nsP1a/4 基因克隆入原核表达载体PGEX-4T-1,构建nsP1a及nsP1a/4蛋白融合表达质粒;在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,摸索两种融合蛋白表达的最优条件并对表达蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明nsP1a蛋白在 30 ℃,1mM IPTG诱导12 h时,蛋白表达量达到最高;nsP1a/4蛋白在20 ℃,0.5 mM IPTG诱导8 h时,蛋白表达量达到最高。 Western blot结果显示两种融合蛋白既可与nsP1a蛋白免疫血清发生特异性反应,也可被GST标签抗体所识别。本研究成功利用原核系统表达并鉴定了人星状病毒非结构蛋白nsP1a及其C末端蛋白nsP1a/4,为进一步研究星状病毒非结构蛋白的功能及病毒的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 人星状病毒 非结构蛋白nsP1a nsP1a/4 原核表达 融合蛋白
细小病毒非结构蛋白诱导细胞凋亡研究进展 被引量:1
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作者 涂梦雨 刘菲 +2 位作者 陈舜 汪铭书 程安春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期679-684,共6页
迄今,据最新报道可感染哺乳动物和禽类的细小病毒有17余种。被感染细胞常出现不同程度的凋亡和坏死,呈现典型以细胞折光性增强、圆缩直至溶解脱落等为特征的细胞病变。NS1蛋白是细小病毒主要的非结构蛋白,其结构和功能保守,在病毒生命... 迄今,据最新报道可感染哺乳动物和禽类的细小病毒有17余种。被感染细胞常出现不同程度的凋亡和坏死,呈现典型以细胞折光性增强、圆缩直至溶解脱落等为特征的细胞病变。NS1蛋白是细小病毒主要的非结构蛋白,其结构和功能保守,在病毒生命周期与感染宿主中扮演重要角色。它不仅影响病毒复制,还参与诱导宿主细胞凋亡。细小病毒NS1蛋白主要经由线粒体途径诱导被感染宿主细胞发生凋亡,本文全面归纳与总结细小病毒NS1蛋白诱导细胞凋亡的分子机制的最新研究进展。 展开更多
关键词 细小病毒 非结构蛋白NS1 细胞凋亡
家蚕二分浓核病毒NS1蛋白的表达及定位
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作者 张清 张晓龙 +2 位作者 李国辉 姚勤 胡朝阳 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期243-246,共4页
[目的]在Bm N细胞中表达家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,Bm BDV)非结构蛋白NS1,并分析其亚细胞定位。[方法]在病毒非结构蛋白NS1基因5'端加上kozak序列、3'端融合Flag标签序列;将重组序列克隆至昆虫细胞表达载体pIBV5/... [目的]在Bm N细胞中表达家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus,Bm BDV)非结构蛋白NS1,并分析其亚细胞定位。[方法]在病毒非结构蛋白NS1基因5'端加上kozak序列、3'端融合Flag标签序列;将重组序列克隆至昆虫细胞表达载体pIBV5/His上,转染BmN细胞,通过Western blot和免疫荧光检测NS1蛋白的表达和亚细胞定位。[结果]PCR和酶切鉴定显示重组表达载体构建正确;Western blot检测到一条大小约37 kDa的特异条带,免疫荧光分析显示表达的蛋白主要定位于细胞核中。[结论]构建的真核表达质粒能在BmN细胞中稳定表达NS1蛋白,该蛋白主要定位在细胞核中。 展开更多
关键词 家蚕二分浓核病毒 非结构蛋白NS1 表达 亚细胞定位
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