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猪戊型肝炎病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 预览
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作者 丁军 赵晓静 +8 位作者 虞楷锐 周天明 李慧霞 盛亚敏 陈宜阳 刘宝元 孙亚妮 周恩民 赵钦 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期2240-2248,共9页
由于猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)可跨种属感染人,因此,猪群中猪HEV感染的监测对于该病的防控和公共卫生都具有重要的意义。本试验旨在建立一种检测猪HEV抗体的间接ELISA方法,以原核表达纯化截短的猪HEV衣壳蛋白为包被抗原,... 由于猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)可跨种属感染人,因此,猪群中猪HEV感染的监测对于该病的防控和公共卫生都具有重要的意义。本试验旨在建立一种检测猪HEV抗体的间接ELISA方法,以原核表达纯化截短的猪HEV衣壳蛋白为包被抗原,优化条件,确定最佳试验条件,并分析该方法的敏感性、特异性、重复性,以及与商品化试剂盒的符合率,评价其临床应用价值。SDS-PAGE和Western blot结果证明抗原蛋白获得正确表达与纯化,并且具有良好的反应原性,可以作为后续建立ELISA方法的包被抗原。通过优化ELISA条件,最终确定抗原最佳包被量为200 ng·孔-1,血清最佳稀释度为1∶200,包被缓冲液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),封闭液为2.5%的脱脂奶粉,阴阳性判定的临界值为OD 450 nm≥0.296。该间接ELISA方法的特异性和敏感性良好,板内和板间变异系数均小于10%,与北京万泰商品化试剂盒符合率为91.2%。临床应用表明,该方法可应用于猪HEV感染猪后抗体消长以及临床猪血清抗体的检测。因此,本研究建立的猪HEV抗体间接ELISA检测方法具有较好的敏感性和特异性,准确率较高,该方法适用于临床猪血清样品的检测和猪HEV感染血清流行病学的调查。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 间接ELISA 抗体 ORF2蛋白
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猪戊型肝炎病毒液相蛋白芯片检测方法的建立 被引量:3
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作者 纪方晓 陈济铛 +5 位作者 梁焕斌 朱婉君 古洪浪 王衡 王林川 张桂红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期60-65,共6页
构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDS-PAGE和Westernblot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋... 构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDS-PAGE和Westernblot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片检测方法对猪常见的其他疾病阳性血清无交叉反应,其批内、批间变异系数分别为5%和6.6%。对102份临床血清样本检测结果显示,该方法与商品化ELISA试剂盒符合率为93.1%,关联性卡方检验显示2个方法具有一致性(P〈0.01)。本试验为临床HEV血清抗体的检测提供了一种特异、灵敏的新型快速检测技术,为建立猪病多重检测方法提供了基础。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 ORF2蛋白 原核表达 液相蛋白芯片
鸭星状病毒单克隆抗体的制备及鉴定 预览
3
作者 杨彬彬 王雨舟 +2 位作者 郭辉 张冰 张大丙 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第4期7-8,12共3页
为了制备针对鸭星状病毒(Duck astrovirus,DAstV)衣壳蛋白的单克隆抗体,以DAstV C-NGB株为免疫原,用ORF2重组蛋白作为抗原进行筛选,获得7株稳定分泌抗DAstV ORF2蛋白单抗的杂交瘤细胞。取E5C1株和C10F6株进行鉴定,结果表明,2株单抗均... 为了制备针对鸭星状病毒(Duck astrovirus,DAstV)衣壳蛋白的单克隆抗体,以DAstV C-NGB株为免疫原,用ORF2重组蛋白作为抗原进行筛选,获得7株稳定分泌抗DAstV ORF2蛋白单抗的杂交瘤细胞。取E5C1株和C10F6株进行鉴定,结果表明,2株单抗均为IgM,轻链均为κ型;细胞上清和小鼠腹水的效价分别为10^5和10^6以上;免疫印迹试验表明,2株单抗均能识别重组ORF2蛋白;特异性试验表明,E5C1株杂交瘤细胞的培养上清只与DAstV反应。 展开更多
关键词 鸭星状病毒 单克隆抗体 ORF2蛋白
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The NEK1 interactor, C21ORF2, is required for efficient DNA damage repair
4
作者 Xiao Fang Han Lin +3 位作者 Xiaohui Wang Qiuhong Zuo Jun Qin Pumin Zhang 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2015年第10期834-841,共8页
有缺点的 DNA 损坏反应是对染色体稳定性和 tumorigenesis 的一个证明原因的威胁。C21ORF2 (染色体 21 开的读物框架 2 ) 是染色体 21 上的新奇基因,并且 C21ORF2 蛋白质被发现与 NEK1 交往。更早的研究证明 C21ORF2 可能与一些人的基... 有缺点的 DNA 损坏反应是对染色体稳定性和 tumorigenesis 的一个证明原因的威胁。C21ORF2 (染色体 21 开的读物框架 2 ) 是染色体 21 上的新奇基因,并且 C21ORF2 蛋白质被发现与 NEK1 交往。更早的研究证明 C21ORF2 可能与一些人的基因疾病在症候群下面包括被联系。然而, C21ORF2 的细胞的功能仍然保持未知。在现在的学习,我们报导 C21ORF2 在电离导致的 DNA 损坏以后影响了房间增长放射,和 DNA 修理与控制房间相比在弄空 C21ORF2 的房间是不太有效的。然而, C21ORF2 击倒的房间没在 G2 阶段 DNA 损坏检查点的激活显示出缺点。而且,加入修理的相应再结合,然而并非非相应的结束,被发现在 C21ORF2 变细以后被损害,它能被 NEK1 的 overexpression 救,显示那 C21ORF2 在 DNA 损坏修理在象 NEK1 的一样的小径工作。 展开更多
关键词 DNA损伤修复 21号染色体 非同源末端连接 细胞功能 脱氧核糖核酸 orf2蛋白 开放阅读框 遗传性疾病
戊型肝炎病毒 ORF1研究进展 被引量:1
5
作者 周艳 黄维金 王佑春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期963-968,共6页
戊型肝炎病毒(hepatitus E virus,HEV)是急性病毒性戊型肝炎的病原体,近年来研究发现免疫力低下或器官移植患者感染 HEV 后形成 HEV 的持续性感染,发展成为慢性戊型肝炎。公认的 HEV包括4个基因型,其中基因1、2型只感染人,而基因... 戊型肝炎病毒(hepatitus E virus,HEV)是急性病毒性戊型肝炎的病原体,近年来研究发现免疫力低下或器官移植患者感染 HEV 后形成 HEV 的持续性感染,发展成为慢性戊型肝炎。公认的 HEV包括4个基因型,其中基因1、2型只感染人,而基因3、4型既感染人也感染猪。除人、猪 HEV 外,还发现了兔、禽、鹿、鼠等 HEV。HEV 是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的唯一成员,为无包膜、正义、单链RNA 病毒,病毒基因组全长约7.2 kb,包括5ˊ非编码区、3个开放阅读框(ORFs)和3ˊ非编码区;ORF1编码与病毒复制相关的酶等非结构蛋白,ORF2编码660 aa的病毒衣壳蛋白,ORF3编码小分子的磷蛋白。ORF2蛋白是公认的病毒抗原,是病毒的主要结构蛋白,ORF3蛋白是病毒多功能蛋白,参与多种调节及病毒释放;ORF1在明确其与病毒复制相关功能后研究较少,近年来,对 ORF1的研究报道增多,发现其新的特征,以下综述 ORF1的研究进展。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 ORF1 持续性感染 ORF2蛋白 ORF3蛋白 病毒性戊型肝炎 非编码区 非结构蛋白
戊型肝炎病毒ORF2蛋白的研究进展 被引量:1
6
作者 田亚宾 黄维金 王佑春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期159-163,共5页
戊型肝炎的病原体为戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV),主要经粪一口途径传播,临床症状类似于甲肝,为急性、自限性肝炎,但器官移植和免疫抑制患者感染HEV后可发展为慢性感染。HEV主要流行于卫生条件差的发展中国家,发达国家... 戊型肝炎的病原体为戊型肝炎病毒(hepatitis Evirus,HEV),主要经粪一口途径传播,临床症状类似于甲肝,为急性、自限性肝炎,但器官移植和免疫抑制患者感染HEV后可发展为慢性感染。HEV主要流行于卫生条件差的发展中国家,发达国家中有散发病例。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 ORF2蛋白 慢性感染 自限性肝炎 发展中国家 免疫抑制 器官移植 卫生条件
戊型肝炎患者血清ORF2抗原的检测及临床意义 预览
7
作者 耿彦生 李红权 +4 位作者 张宏馨 廉海晨 李军 耿坤静 周艳春 《世界华人消化杂志》 北大核心 2013年第36期4153-4157,共5页
目的:研究戊型肝炎患者戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)-Ag与其他检测指标的相关关系,评价HEV-Ag检测在临床诊断戊型肝炎中的意义.方法:116例急性戊型肝炎患者血清标本应用酶联免疫吸附试验试剂盒进行抗HEVIgM、抗HEVIgG和HEV... 目的:研究戊型肝炎患者戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)-Ag与其他检测指标的相关关系,评价HEV-Ag检测在临床诊断戊型肝炎中的意义.方法:116例急性戊型肝炎患者血清标本应用酶联免疫吸附试验试剂盒进行抗HEVIgM、抗HEVIgG和HEV-Ag检测.应用RT-Nested—PCR进行HEVRNA检测,通过比较分析血清中HEV-Ag与HEVRNA检测结果,对HEV-Ag检测的临床意义进行评价.结果:诊断为戊型肝炎的116例患者初次采集的血清进行HEv感染标志物的检测,其中55.2%(64/1161为HEV-Ag阳性.116例患者中分别有5、21、63和27例为抗HEVIgM-IgG-、IgM-IgG-、IgM+IgG+和IgM-IgG+.这4组中HEV-Ag的检出率分别为100%、90.5%、61.9%和3.7%.64例抗原阳性样本中40例(62.5%,40/64)为HEVRNA阳性,而52抗原阴性样本中只有1例(1.9%,1/52)为HEVRNA阴性.对HEV-Ag检测和HEVRNA检测的结果进行相关性分析,Kappa指数为0.582,显示血清中HEV-Ag检测和HEvRNA检测具有比较好的一致性.结论:HEV-Ag与HEVRNA的检测结果具有较好的一致性,HEV.Ag检测有助于戊型肝炎的早期诊断及慢性感染的诊断. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 戊型肝炎 HEV ORF2蛋白 抗原检测 酶联免疫吸附试验
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猪圆环病毒2型衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 预览 被引量:3
8
作者 姚永红 崔然 +3 位作者 赵钦 王刚 肖一红 周恩民 《山东农业科学》 2012年第9期9-12,21共5页
为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化人大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS—PAGE和Westernblot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加EL... 为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516bp的ORF2基因片段克隆入pET-28a(+),转化人大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS—PAGE和Westernblot对表达产物进行鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检测两株单克隆抗体识别的抗原表位关系。SDS—PAGE和Westernblot结果表明重组蛋白ORF2得到高效表达;筛选获得两株稳定分泌抗ORF2单克隆抗体的杂交瘤细胞系3H3和3F2,其分泌的单体均为IgGl亚型;且均具有较高的特异性和敏感性;叠加ELISA显示,两株单克隆抗体识别不同的抗原表位。本研究制备的单抗有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速准确诊断方法的建立提供了平台。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 ORF2蛋白 单克隆抗体
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戊型肝炎病毒ORF2蛋白与新型融合标签Halo Tag的融合表达 被引量:2
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作者 马天武 黄芬 +2 位作者 井申荣 曾韦锟 禹文海 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1583-1586,共4页
目的在大肠杆菌KRX中表达戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)ORF2与新型融合标签Halo Tag融合蛋白。方法采用RT-PCR法从4型HEV毒株中扩增ORF2基因部分片段(aa 382~620),插入含新型融合标签Halo Tag的原核表达载体pFN18the中,构建... 目的在大肠杆菌KRX中表达戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)ORF2与新型融合标签Halo Tag融合蛋白。方法采用RT-PCR法从4型HEV毒株中扩增ORF2基因部分片段(aa 382~620),插入含新型融合标签Halo Tag的原核表达载体pFN18the中,构建重组表达质粒pFN18the-ORF2,转化大肠杆菌KRX,鼠李糖诱导表达Halo-ORF2融合蛋白,纯化后Western blot分析融合蛋白的反应原性。结果经RT-PCR扩增出717 bp的目的基因片段;重组表达质粒pFN18the-ORF2经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的融合蛋白Halo-ORF2相对分子质量为57 900,表达量约占菌体总蛋白的15%,以包涵体形式表达,纯化后纯度达90%以上,可与HEV IgG阳性血清特异性结合。结论在大肠杆菌KRX中表达了Halo-ORF2融合蛋白,为HEV结构蛋白抗原表位的筛选及戊肝血清学诊断的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 戊型 ORF2蛋白 HALOTAG 融合蛋白 原核细胞 基因表达
猪戊型肝炎病毒tORF2蛋白的基因克隆表达及免疫原性测定
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作者 邓生珍 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期 106-108,共3页
戊型肝炎(hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的以黄疸为主的急性病毒性肝炎。该病主要经粪-口途径传播,在非人灵长类动物、啮齿类动物、猪、牛、羊、鸡等其他动物中广泛分布和传播,是一种人畜共患病。因此,... 戊型肝炎(hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的以黄疸为主的急性病毒性肝炎。该病主要经粪-口途径传播,在非人灵长类动物、啮齿类动物、猪、牛、羊、鸡等其他动物中广泛分布和传播,是一种人畜共患病。因此,该病已经成为预防医学和公共卫生学领域研究的热点之一,受到广泛关注。该病临床表现为发热、食欲不振、恶心、呕吐、尿色深黄、常见黄疸,病程可持续1周,但具有自限性。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因克隆表达 ORF2蛋白 免疫原性 非人灵长类动物 测定 VIRUS
2005-2008年浙江省生猪主产区猪戊型肝炎血清流行病学调查 预览 被引量:4
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作者 帅江冰 张晓峰 +2 位作者 徐晶靓 陈宁 方维焕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期 1037-1042,共6页
本研究旨在建立检测猪戊型肝炎病毒(HEV)感染的间接ELISA方法,并将其用于分析浙江省生猪主产区猪群的HEV感染状况。首先人工合成并原核表达了HEV ORF2蛋白的主要抗原表位区,免疫印迹显示表达产物对HEV抗体阳性的猪血清具有良好的反... 本研究旨在建立检测猪戊型肝炎病毒(HEV)感染的间接ELISA方法,并将其用于分析浙江省生猪主产区猪群的HEV感染状况。首先人工合成并原核表达了HEV ORF2蛋白的主要抗原表位区,免疫印迹显示表达产物对HEV抗体阳性的猪血清具有良好的反应性。以此纯化蛋白为包被抗原建立了猪血清中HEV特异性抗体的ELISA检测方法,检测结果显示其与商品化HEV抗体诊断试剂盒的检测符合率达91.5%。对2005-2008年采集自浙江省不同地区46个猪场的1330份血清进行了检测,有741份血清检测为猪HEV抗体阳性,平均阳性率为55.7%。其中2005和2006年HEV抗体阳性率分别为62.7%(175/279)和61.4%(301/490),明显高于2007年的43.1%(59/137)和2008年的48.6%(206/424)。同时,66-100日龄中猪的血清HEV抗体阳性率(58.2%,110/189)显著高于30-65日龄小猪(39.7%,73/184)和101-160日龄大猪(44.1%,83/188)。从猪场水平来看,仅有3个猪场未检测到HEV抗体,场阳性率93.2%。结果表明本研究建立的ELISA方法切实可行,检测结果显示浙江省猪场中HEV感染相当普遍。 展开更多
关键词 猪戊型肝炎病毒 间接ELISA ORF2蛋白 血清学调查
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猪圆环病毒Ⅰ型ORF2蛋白序列与其核定位功能的相关性 预览 被引量:2
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作者 陈美玲 陈焕春 +1 位作者 宋云峰 黄红亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期 459-461,共3页
软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合... 软件分析PCV1-ORF2的核苷酸序列发现其N端的氨基酸序列中包含一段核定位序列,将具有核定位序列特征的区域删除,构建缺失核定位序列的PCV1-ORF2基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,同时构建PCV1-ORF2全基因与绿色荧光蛋白的真核融合表达载体,分别转染Hela细胞,可观察到后者绿色荧光聚集在细胞核区域;而前者转染Hela细胞结果显示核定位现象消失,从而可以推断这一区域是CPV1-ORF2蛋白核定位的功能区. 展开更多
关键词 猪圆环病毒Ⅰ型 ORF2蛋白 HELA细胞 绿荧光蛋白 核定位序列
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抗猪圆环病毒Ⅱ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 预览 被引量:13
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作者 陈美玲 陈焕春 +2 位作者 黄红亮 琚春梅 宋云峰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期 567-569,共3页
利用本室构建的质粒PGEXORF2转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,得到PCV2-ORF2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原,采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合,经间接酶联免疫吸附试验(ELISA)... 利用本室构建的质粒PGEXORF2转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,得到PCV2-ORF2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原,采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合,经间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得了2株抗PCV2-ORF2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3B2F4和9C3D2,其细胞培养上清效价分别为1:1024、1:512,小鼠腹水效价分别为1:204 800、1:102 400.ELISA结果显示,3B2F4和9C3D2仅与融合表达的PCV2-ORF2蛋白反应,而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不反应,说明此2株单抗特异性好.间接免疫荧光结果显示,3B2F4和9C3D2能与PCV2发生反应,而不与PCV1发生交叉反应,表明所获得的2株单抗是PCV2型特异性的.这2株单抗的获得为进一步研究PCV2-ORF2基因的功能,及建立准确快速的鉴别PCV1和PCV2的诊断方法提供了强有力的手段. 展开更多
关键词 猪圆环病毒Ⅱ型 ORF2蛋白 单克隆抗体
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酵母表达的重组戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白的抗原性鉴定 被引量:2
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作者 佟玉品 毕胜利 +2 位作者 鲁健 江永珍 詹美云 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期 258-261,共4页
目的对应用巴氏毕赤酵母表达系统制备的重组戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2蛋白的抗原性进行鉴定.方法以原核细胞表达的重组HEV ORF2抗原作为对照,应用间接ELISA方法鉴定重组HEV ORF2蛋白在HEV IgM和IgG抗体检测中的特异性和敏感性;并测... 目的对应用巴氏毕赤酵母表达系统制备的重组戊型肝炎病毒(HEV)结构区ORF2蛋白的抗原性进行鉴定.方法以原核细胞表达的重组HEV ORF2抗原作为对照,应用间接ELISA方法鉴定重组HEV ORF2蛋白在HEV IgM和IgG抗体检测中的特异性和敏感性;并测定不同保存时间对抗原稳定性的影响.同时,比较了两种重组抗原与国外5株HEV ORF2单克隆抗体的反应特性.结果应用酵母抗原可检测到HEV抗体的最低包被量为12.5 ng/ml,可检测到HEV IgM、IgG抗体的血清最大稀释度皆为1:5 120.重组蛋白与其他类型肝炎患者血清无交叉反应,37℃加速试验证实重组蛋白4℃保存12个月可保持良好的抗原性.各株单克隆抗体与酵母表达的HEV ORF2蛋白有更好的反应性,其中4B2、2E2与酵母表达的HEV ORF2蛋白的反应性比与原核表达抗原的反应性分别高出125倍和25倍.结论应用巴氏毕赤酵母表达系统制备的重组HEV ORF2蛋白可能包含了更为广泛的构象依赖性抗原表位,具有良好抗原性、特异性和稳定性.提示其可作为开发戊型肝炎诊断试剂的一个独具优势的候选抗原. 展开更多
关键词 酵母 重组戊型肝炎病毒 ORF2蛋白 抗原 ELISA 戊型肝炎
戊型肝炎病毒Ⅳ型的ORF3及ORF2蛋白的分片段表达、纯化及抗原性分析 被引量:13
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作者 王佑春 张华远 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期 257-261,共5页
目的:对戊型肝炎病毒(HEV)Ⅳ型ORF3的全长基因片段和4个覆盖全长ORF2的互相重叠的基因片段进行了表达,对表达产物进行了纯化及抗原性分析。方法:将O3、FB5、E4、F2-2和E5基因片段分别连接到融合性表达质粒pThioHis,用IPTG进行诱... 目的:对戊型肝炎病毒(HEV)Ⅳ型ORF3的全长基因片段和4个覆盖全长ORF2的互相重叠的基因片段进行了表达,对表达产物进行了纯化及抗原性分析。方法:将O3、FB5、E4、F2-2和E5基因片段分别连接到融合性表达质粒pThioHis,用IPTG进行诱导表达,并用反向、分子筛、离子交换和亲和层析方法进行纯化,用纯化的蛋白分别制备检测抗HEV IgG的诊断试剂,用该试剂检测急性散发性的戊肝病人和非戊肝病人血清。结果:位于ORF2-N端的FB5蛋白在急性期的戊肝病人血清中具有最强的反应性;而且仍有部分被HEV I型或/和Ⅱ型的诊断试剂排除的急性非戊肝病人血清对HEV Ⅳ型的多肽吴阳性反应。结论:为早期诊断戊肝病毒的感染,其诊断试剂应含有HEVⅣ型的ORF2N-端的蛋白片段。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒Ⅳ型 戊型肝炎病毒 基因重组 基因表达 质粒 ORF3蛋白 ORF2蛋白
酶母表达的重组HEV ORF2蛋白在戊型肝炎诊断中的初步应用 被引量:1
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作者 佟玉品 鲁健 +2 位作者 江永珍 毕胜利 詹美云 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期 189-190,共2页
戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病,对人民健康影响很大,疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)结构区蛋白ORF2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点... 戊型肝炎是经消化道途径传播的传染病,对人民健康影响很大,疫苗和诊断抗原的研制和开发是预防和控制其流行和传播的重要手段。戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)结构区蛋白ORF2存在多个抗原性决定簇并可能具有中和抗体的结合位点,因此戊型肝炎病毒基因工程重组蛋白的研制主要集中于ORF2。我们应用巴氏毕赤酵母(pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎病毒结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2,将其作为抗原建立酶联免疫吸附试验(简称P-ELISA),检测正常人群及戊型肝炎患者血清中抗HEV-IgG和HEV-IgM抗体,同时以原核细胞表达的重组HEV ORF2建立的ELISA(简称E-ELISA)作为对照,旨在进一步研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,探讨其作为诊断抗原在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。 展开更多
关键词 酶母 表达 戊型肝炎 重组HEV ORF2蛋白 诊断
戊型肝炎病毒载体疫苗的研发 预览
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《微生物学免疫学进展》 2015年第3期71-71,共1页
戊型肝炎病毒是一种单链核糖核酸构成的无包膜病毒,通过粪口途径传播,会导致人类的急性肝炎。当前市面上无戊型肝炎疫苗(HEV)可用。HEV繁殖缺乏合适的细胞培养系统,HEV假衣壳(ORF2蛋白)既可以在大肠杆菌、也可以在昆虫细胞中产... 戊型肝炎病毒是一种单链核糖核酸构成的无包膜病毒,通过粪口途径传播,会导致人类的急性肝炎。当前市面上无戊型肝炎疫苗(HEV)可用。HEV繁殖缺乏合适的细胞培养系统,HEV假衣壳(ORF2蛋白)既可以在大肠杆菌、也可以在昆虫细胞中产生,在猴子抗病毒和避免人感染HEV方面这种伪衣壳都是有效的。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 载体疫苗 研发 ORF2蛋白 昆虫细胞 HEV 核糖核酸 急性肝炎
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基于ORF2的基因型-1和基因型-4ELISA检测抗-HEV-IgM和IgG的评价与人类基因型-4HEV感染的研究 预览
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作者 曹婕(摘译) 张占卿(审校) 《世界感染杂志》 2007年第5期 440,共1页
用杆状病毒(baculovirus)表达系统表达人戊型肝炎病毒(human hepatitis E virus,基因型-1)和猪戊型肝炎病毒(swine hepatitis E virus,基因型-4)的开放度码框架-2(ORF2)蛋白,分别称为H—ORF2蛋白和S—ORF2蛋白。已知H—ORF2... 用杆状病毒(baculovirus)表达系统表达人戊型肝炎病毒(human hepatitis E virus,基因型-1)和猪戊型肝炎病毒(swine hepatitis E virus,基因型-4)的开放度码框架-2(ORF2)蛋白,分别称为H—ORF2蛋白和S—ORF2蛋白。已知H—ORF2蛋白和S—ORF2蛋白的氨基酸序列有91.4%的同源性。分别收集实验感染人戊型肝炎病毒的猴和实验感染猪戊型肝炎病毒的猪的系列血清,用H—ORF2和S—ORF2 ELISA检测抗.HEV-IgM和IgG,两种方法的检测结果相似。 展开更多
关键词 ORF2蛋白 ELISA检测 抗-HEV-IgM 基因型 IGG HEV感染 戊型肝炎病毒 人类
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兔戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白的抗原表位分析 预览
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作者 王松 戴星 +3 位作者 董晨 董敏 梁久红 孟继鸿 《东南大学学报:医学版》 CAS 2013年第3期261-266,共6页
目的:研究新发现的兔戊型肝炎病毒(HEV)与所有已知基因型HEV抗原表位的异同,为阐明动物HEV的人畜共患特征及戊型肝炎的诊断提供依据。方法:制备兔HEV ORF2重组蛋白R166(aa452-617),并免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(McAb);采用间... 目的:研究新发现的兔戊型肝炎病毒(HEV)与所有已知基因型HEV抗原表位的异同,为阐明动物HEV的人畜共患特征及戊型肝炎的诊断提供依据。方法:制备兔HEV ORF2重组蛋白R166(aa452-617),并免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(McAb);采用间接ELISA法及免疫印迹法,检测McAbs与已知基因型HEV ORF2重组蛋白p166Bur(1型)、p166Mex(2型)、p166US(3型)和p166Chn(4型)的交叉反应性。用获得的杂交瘤细胞制备腹水,利用基于PCR的HEV体外中和试验,检测它们对基因1、4型人HEV和兔HEV的中和活性。结果:获得3株稳定分泌抗-R166的McAbs的杂交瘤细胞株,即1C1、6F9和10D2。其中1C1和6F9分泌的McAbs与已知1、2、3、4基因型p166均结合;10D2分泌的McAb只与R166特异结合,而不与1、2、3、4基因型p166结合。3株McAbs腹水均不能中和基因1、4型人HEV和兔HEV,提示3株McAbs针对非中和性抗原表位。结论:兔HEV与已知1、2、3、4基因型HEV既含有共同的抗原表位,也含有不同的抗原表位,具有不同的抗原特征。 展开更多
关键词 兔戊型肝炎病毒 重组ORF2蛋白 抗原表位 单克隆抗体
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酵母表达的重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白在实验感染恒河猴血清抗体检测中的应用 被引量:5
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作者 鲁健 佟玉品 +1 位作者 江永珍 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期 382-383,共2页
诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容,以E.Coli及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体的检测以及HEV特异性抗... 诊断试剂的研制和开发亦是戊型肝炎研究的重要内容,以E.Coli及昆虫细胞表达的重组戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白作为抗原建立的免疫学检测方法已应用临床戊型肝炎的诊断、实验感染灵长类动物抗戊型肝炎病毒(HEV)抗体的检测以及HEV特异性抗原的检测.这些方法包括:Western blot,IFA,ELISA等.研究证实,重组HEV ORF2蛋白具有较好的抗原性[1-3].我们应用巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)成功表达了戊型肝炎结构区蛋白ORF2,制备了新型重组HEV ORF2[4],将其作为抗原建立ELISA应用于实验感染恒河猴血清抗-HEV抗体的检测,旨在研究酵母表达的重组HEV ORF2蛋白的抗原性,以进一步探讨该重组蛋白在戊型肝炎诊断上的价值. 展开更多
关键词 酵母 表达 重组戊型肝炎病毒ORF2蛋白 血清抗体 检测 实验感染
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