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蜜蜂幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR检测方法的建立
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作者 王建峰 高峰 +4 位作者 郑剑 倪健波 黄素文 张体银 陈先锋 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第1期80-84,共5页
为建立新型高灵敏度的幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,针对幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因设计特异性引物和探针。通过对反应体系优化,建立幼虫芽孢杆菌ddPCR检测方法,并对方法的灵敏度、线性关系、特异性及... 为建立新型高灵敏度的幼虫芽孢杆菌微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,针对幼虫芽孢杆菌16S rRNA基因设计特异性引物和探针。通过对反应体系优化,建立幼虫芽孢杆菌ddPCR检测方法,并对方法的灵敏度、线性关系、特异性及重复性进行评估。结果:建立的方法与其他6株非幼虫芽孢杆菌无交叉反应,具有良好的特异性;线性关系良好(R^2=0.991 4);灵敏度为2.9 copies/μL;ddPCR检测的相对标准偏差(RSD)在0.93%~5.27%,重复性好。试验表明本研究建立的ddPCR方法可以对幼虫芽孢杆菌进行绝对定量检测。 展开更多
关键词 幼虫芽孢杆菌 微滴式数字PCR 检测
Comparative susceptibility and immune responses of Asian and European honey bees to the American foulbrood pathogen, Paenibacillus larvae
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作者 Sasiprapa Krongdang Jay D.Evans +2 位作者 Yanping Chen Wannapha Mookhploy Panuwan Chantawannakul 《昆虫科学:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期831-842,共12页
American foulbrood (AFB) disease is caused by Paenibacillus larvae. Currently, this pathogen is widespread in the European honey bee— Apis mellifera. However, little is known about infectivity and pathogenicity of P.... American foulbrood (AFB) disease is caused by Paenibacillus larvae. Currently, this pathogen is widespread in the European honey bee— Apis mellifera. However, little is known about infectivity and pathogenicity of P. lan'ae in the Asiatic cavity-nesting honey bees, Apis cerana. Moreover, comparative knowledge of P. larvae infectivity and pathogenicity between both honey bee species is scarce. In this study, we examined susceptibility, larval mortality, survival rate and expression of genes encoding antimicrobial peptides (AMPs) including defensin, apidaecin, abaecin, and hymenoptaecin in A. mellifera and A. cerana when infected with P. larvae. Our results showed similar effects of P. larvae on the survival rate and patterns of AMP gene expression in both honey bee species when bee larvae are infected with spores at the median lethal concentration (LC5 0 ) for A. mellifera. All AMPs of infected bee larvae showed significant upregulation compared with noninfected bee larvae in both honey bee species. However, larvae of A. cerana were more susceptible than A. mellifera when the same larval ages and spore concentration of P. larvae were used. It also appears that A. cerana showed higher levels of AMP expression than A. mellifera. This research provides the first evidence of survival rate, LC50 and immune response profiles of Asian honey bees, A. cerana, when infected by P. larvae in comparison with the European honey bee, A. mellifera. 展开更多
关键词 APIS cerana APIS MELLIFERA HONEY bee immune gene PAENIBACILLUS LARVAE SUSCEPTIBILITY
幼虫芽孢杆菌和蜂房蜜蜂球菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 何晓杰 王科珂 +5 位作者 叶尔保勒 阿斯喀 张婕妤 哈森 季新成 王振宝 《中国动物传染病学报》 北大核心 2018年第3期51-56,共6页
为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序... 为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对P.larvae和M.pluton的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中P.larvae和M.pluton的定量分析。 展开更多
关键词 美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 欧洲幼虫腐臭病 蜂房蜜蜂球菌 双重TaqMan荧光定量PCR
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蜜蜂幼虫芽孢杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 预览 被引量:2
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作者 何晓杰 叶尔保勒 +6 位作者 王科珂 阿斯喀 艾山江 李胜 哈森 王振宝 巴音查汗 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期569-572,共4页
为建立蜜蜂幼虫芽孢杆菌(P.larvae)荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中幼虫芽孢杆菌16SrRNA基因保守序列设计特异性引物和探针,经反应体系及条件优化,建立了检测P.larvaeTaqMan荧光定量PCR方法。结果表明:该方法与其它病... 为建立蜜蜂幼虫芽孢杆菌(P.larvae)荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中幼虫芽孢杆菌16SrRNA基因保守序列设计特异性引物和探针,经反应体系及条件优化,建立了检测P.larvaeTaqMan荧光定量PCR方法。结果表明:该方法与其它病原无交叉反应;最低可检出1.3x10拷贝/μL的阳性质粒,比普通PCR灵敏度高100倍;重复试验显示该方法的批内和批间变异系数均小于3%。应用该方法对50份实验室模拟样品和100份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于美洲幼虫腐臭病(AFB)的早期快速检测及P.larvae定量分析。 展开更多
关键词 美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 TaqMan荧光定量PCR
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蜂蜜中蜜蜂美洲幼虫腐臭病的检测方法研究 预览
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作者 杨东来 刘丹 +1 位作者 王旭 彭菲 《中国动物检疫》 CAS 2017年第7期105-107,共3页
美洲幼虫腐臭病是世界上最严重的蜜蜂病害之一,病原体是幼虫芽孢杆菌。在蜂蜜中检测幼虫芽孢杆菌的有效方法很少。本研究将微生物培养法和PCR法结合,改进了对病原菌的培养和分离,再用PCR法进行定性鉴别,从而降低了检出限,提高了检... 美洲幼虫腐臭病是世界上最严重的蜜蜂病害之一,病原体是幼虫芽孢杆菌。在蜂蜜中检测幼虫芽孢杆菌的有效方法很少。本研究将微生物培养法和PCR法结合,改进了对病原菌的培养和分离,再用PCR法进行定性鉴别,从而降低了检出限,提高了检测的准确性。 展开更多
关键词 美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 蜂蜜 检测 微生物培养 PCR法
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蜜蜂(Apis mellifera)美洲幼虫腐臭病最新研究进展 预览 被引量:2
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作者 陈傲 孙杰 缪晓青 《中国蜂业》 2013年第Z2期28-31,共4页
美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)是目前危害蜜蜂幼虫生长的主要细菌病之一,其致病菌为拟幼虫芽孢杆菌原(Paenibacillus Larvae)。本文介绍了它的流行病学特征,并对目前检测美洲幼虫腐臭病病原和防治该病的最新研究进展作一综述。
关键词 美洲幼虫腐臭病 拟幼虫芽孢杆菌 检测 防治
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植物精油在养蜂业中的应用前景 预览 被引量:2
7
作者 苏晓玲 赵东绪 +1 位作者 华启云 胡福良 《中国蜂业》 2013年第Z1期20-24,共5页
近年来,蜜蜂种群受到多种病敌害的威胁,世界蜂群数量急剧减少,严重影响养蜂业的健康持续发展。植物精油是植物体内的一类次生代谢物质,具有杀虫、抗菌等多种生物活性。相比于其他化学药物,精油具有安全、无污染、不易产生抗药性等优点,... 近年来,蜜蜂种群受到多种病敌害的威胁,世界蜂群数量急剧减少,严重影响养蜂业的健康持续发展。植物精油是植物体内的一类次生代谢物质,具有杀虫、抗菌等多种生物活性。相比于其他化学药物,精油具有安全、无污染、不易产生抗药性等优点,在蜜蜂疾病防治方面有着广阔的应用前景。本文介绍了植物精油在5种重要蜜蜂病害(蜂螨、美洲幼虫腐臭病、白垩病、曲霉病和蜜蜂微孢子虫病)防治方面的研究进展。 展开更多
关键词 植物精油 狄斯瓦螨 幼虫芽孢杆菌 球囊菌 微孢子虫
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The Use of RIDA<sup>®</sup>COUNT for Monitoring the American Foulbrood Pathogen 预览
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作者 Stepan Ryba Vaclav Kristufek Dalibor Titera 《兽医学(英文)》 2012年第4期233-236,共4页
American Foulbrood (AFB) is currently one of the most dangerous diseases in honeybees due to its high virulence and worldwide spread. Quick evaluation of the diagnosis of this disease is crucial. Successful eradicatio... American Foulbrood (AFB) is currently one of the most dangerous diseases in honeybees due to its high virulence and worldwide spread. Quick evaluation of the diagnosis of this disease is crucial. Successful eradication in the area indicates a need to test all bee colonies, but this is expensive and time consuming. A new method of detecting Paenibacillus larvae using the RIDA?COUNT test (R-Biopharm AG, Germany) was verified in the present study. The test is based on the principle of the cultivation test with MYPGPn medium, coloration of the bacteria with TTC (2,3,5-triphenyltetra-zoliumchloride) chromophore, and heat treatment of the sample. Using this new method, color-highlighted colonies of P. larvae can be established on the seventh day after inoculating the spores. An identical number of colonies grown with the classic cultivation test on Petri dishes containing MYPGPn medium or RIDA?COUNT-P. larvae (RC-PL) sheets were verified. 展开更多
关键词 AFB APIS MELLIFERA L. Bacterial Disease Diagnosis Diseases of HONEYBEES MYPGPn Medium PAENIBACILLUS larvae
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蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的原核表达及多克隆抗体的制备 预览 被引量:1
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作者 葛婷 何晓杰 +3 位作者 叶尔保勒 阿斯喀·夏热甫汉 雷程红 王振宝 《动物医学进展》 北大核心 2018年第5期49-54,共6页
克隆蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP,构建其原核表达载体后进行重组蛋白的表达及纯化,接种公兔制备多克隆抗体,以期为研究幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定基础。用PCR方法扩增幼虫芽胞杆菌PLMP基因,扩增产物克隆至表达载体pGEX-4T-1... 克隆蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP,构建其原核表达载体后进行重组蛋白的表达及纯化,接种公兔制备多克隆抗体,以期为研究幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定基础。用PCR方法扩增幼虫芽胞杆菌PLMP基因,扩增产物克隆至表达载体pGEX-4T-1并转化至E.coliBL21(DE3)感受态中。经不同的诱导时间、IPTG浓度诱导表达PLMP重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。用目的蛋白对公兔进行4次免疫后,采集血清制备多抗。PCR扩增得到1 242bp的PLMP基因片段;构建原核表达载体pGEX-4T-1-PLMP,经终浓度0.8mmol/L IPTG、37℃诱导表达5h得到分子质量为70ku目的蛋白;用目的蛋白免疫公兔得到的多抗经间接ELISA检测效价达到1∶12 800,Western blot检测出现条带,证明所制备的多抗能够用于PLMP抗原的检测。研究结果构建了表达幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP的原核载体,获得了PLMP蛋白,制备了兔抗PLMP多克隆抗体,为建立幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 蜜蜂幼虫芽胞杆菌 金属蛋白酶基因 原核表达 多克隆抗体
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蜜蜂(Apjs mellifera)美洲幼虫腐臭病研究进展 预览 被引量:5
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作者 戎映君 陈盛禄 +1 位作者 陈集双 苏松坤 《中国蜂业》 2006年第8期 11-13,共3页
美洲幼虫腐臭病是目前危害蜜蜂幼虫生长的主要细菌病,不合理地使用抗生素防治该病是导致蜂产品抗生素残留的重要因素。本文介绍了它的病原(Paenibacillus larvae subspecies Larvae)和流行病学特征,并就目前检测美洲幼虫腐臭病病原... 美洲幼虫腐臭病是目前危害蜜蜂幼虫生长的主要细菌病,不合理地使用抗生素防治该病是导致蜂产品抗生素残留的重要因素。本文介绍了它的病原(Paenibacillus larvae subspecies Larvae)和流行病学特征,并就目前检测美洲幼虫腐臭病病原和防治该病的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 美洲幼虫腐臭病 幼虫芽孢杆菌 检测 防治
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