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橡胶树炭疽菌CsPbs2基因的原核表达分析
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作者 廖小淼 何其光 +6 位作者 刘耀 徐良向 龙熙平 刘文波 张宇 林春花 缪卫国 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2126-2132,共7页
HOG MAPK途径参与植物病原真菌生长发育、致病和对杀菌剂敏感性等过程,CsPbs2基因是HOG MAPK信号通路的关键成员。为研究CsPbs2蛋白的互作蛋白及其调控机制,本研究克隆了橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense) CsPbs2基因,构建融合蛋... HOG MAPK途径参与植物病原真菌生长发育、致病和对杀菌剂敏感性等过程,CsPbs2基因是HOG MAPK信号通路的关键成员。为研究CsPbs2蛋白的互作蛋白及其调控机制,本研究克隆了橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense) CsPbs2基因,构建融合蛋白表达载体,利用SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达。结果显示橡胶树炭疽菌(C. siamense)的CsPbs2基因全长2 051 bp,编码667个氨基酸,包含个1个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域。CsPbs2基因在进化关系上与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)的Pbs2基因有最近的亲缘关系。构建的GST-CsPbs2蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG:0.6 mmol/L, 0.8 mmol/L,1.0 mmol/L温度16℃和25℃)均可较好诱导表达,GST-CsPbs2融合蛋白大小约为96 kD。用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合。本研究成功构建了GSTCsPbs2蛋白融合表达载体,纯化得到GST-CsPbs2融合蛋白,为后续利用Pull-down技术钓取Cs Pbs2的互作蛋白提供基础。 展开更多
关键词 橡胶树 橡胶树炭疽菌 Pbs2基因 蛋白纯化 原核表达
一种来源于链格孢菌的MAPK激酶AtPBS2基因的克隆及功能分析
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作者 冯飞 纪春艳 +2 位作者 杨秀芬 曾洪梅 邱德文 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期52-57,共6页
通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)cDNA酵母表达文库并筛选获得MAPK激酶AtPBS2基因,该基因全长2492bp,编码683个氨基酸。AtPbs2p与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AtPbs2p(XP_752961)、粗糙脉... 通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)cDNA酵母表达文库并筛选获得MAPK激酶AtPBS2基因,该基因全长2492bp,编码683个氨基酸。AtPbs2p与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AtPbs2p(XP_752961)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)的NcPbs2p(XP_965727)、稻瘟菌(Magnaporthe grisea)MGCH7(XP_001522946)及酵母(Saccharomyces cerevisiae)ScPbs2p(EDN63254)序列分别具有52%、52%、49%和47%的相似性。在高渗环境下,AtPBS2基因与酵母的ScPBS2基因功能相同,具有耐高渗透压环境的能力。细极链格孢菌(A.tenuissima)中存在HOG通路信号途径,AtPBS2基因可能与链格孢菌(A.tenuissima)的逆境适应性调节密切相关。 展开更多
关键词 MAPK激酶 细极链格孢菌(Alternaria tenuissima) HOG途径 PBS2基因
烟曲霉pbs2基因功能初步探讨 被引量:4
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作者 马彦 乔建军 +1 位作者 刘伟 李若瑜 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1126-1130,共5页
目的克隆烟曲霉pbs2基因,并构建烟曲霉pbs2基因突变株,了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化。方法通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组找出与酿酒酵母pbs2基因同源的序列,分析其结构并通过PCR扩增... 目的克隆烟曲霉pbs2基因,并构建烟曲霉pbs2基因突变株,了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化。方法通过基因同源性比对,在烟曲霉基因组找出与酿酒酵母pbs2基因同源的序列,分析其结构并通过PCR扩增烟曲霉pbs2基因连同其上下游各约1.0kb的DNA片段,将该片段重组到质粒pDHt/SK中形成PA,再通过PCR扩增pyrG作为筛选标记插入到PA的pbs2基因开放阅读框架(ORF)中,构建好pbs2基因敲除载体PB。将敲除载体转化到根瘤农杆菌,再利用ATMT法转化嘧啶营养缺陷株烟曲霉AF293.1,筛选出烟曲霉pbs2基因缺陷株△pbs2。观察突变株和野生株AF293在基础培养基上的生长速度并测定二者对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化。结果经过SMART软件分析发现烟曲霉pbs2基因编码一种磷酸转移酶。在基础培养基上△pbs2生长速度同野生株间差异无统计学意义(P〉0.05),但在氧化压力和渗透压的信号传导中,△pbs2对氧化压力和渗透压的敏感性较野生株AF293敏感。结论烟曲霉中pbs2基因不仅参与渗透压的传导,还参与氧化压力的传导,但只参与传导特定的氧化压力。 展开更多
关键词 烟曲霉 pbs2基因 信号传导
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