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PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用 预览
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作者 辛长勋 郑书轩 +7 位作者 时建立 彭喆 吴晓燕 高梅 刘玉伟 王硕 王金宝 李俊 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第2期65-68,共4页
根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能... 根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能同时检测到PCV2、PRV及PPV的最低核酸量分别为40pg、72pg、46pg。对猪圆环病毒3型(PCV3)、猪细环病毒(TTSuV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)无扩增。应用该方法对87份临床样品进行检测,PCV2阳性检出率为28.7%(25/87),PRV野毒检出率为11.5%(10/87),PPV检出率为12.6%(11/87)。其中2种以上病毒混合感染阳性率为13.8%(12/87),3种病毒同时感染的阳性率为2.3%(2/87),其结果也与单一PCR结果一致。研究结果提示,该方法可用于PCV2、PRV、PPV三种病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒 多重PCR
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猪伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及其冻干检测试剂的制备 预览
2
作者 侯月娥 叶平 +4 位作者 伍建敏 王凤求 赵玉林 王贵平 李中圣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期19-24,共6页
猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基... 猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基因缺失疫苗株的TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性地检测出野毒感染,而对基因缺失疫苗株、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无检测信号;对PRV检测的灵敏度可达10个模板拷贝数,是普通PCR的100倍。通过优化的冻干工艺制备出PRV全预混PCR试剂,室温25℃保存3个月或37℃保存15d,敏感性仍为10个拷贝,推测储存于4℃的有效期约为24个月;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42 min时间内完成核酸诊断。本研究基于TaqMan荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的PRV PCR冻干试剂具有耐保存,便于运输,准确性高等特性,对快速诊断PRV和病毒定量检测具有重要意义。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 冻干检测试剂 TaqMan荧光定量PCR
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大中型猪场猪伪狂犬病抗体检测与分析 预览
3
作者 梁乔 《养猪》 2019年第1期118-120,共3页
为了解大中型猪场猪伪狂犬病免疫抗体水平,采用ELISA方法对辽宁3个区域大中型猪场共7个场采集猪血清样品共270份进行猪伪狂犬病gE抗体和gB抗体检测。结果显示:猪伪狂犬病gE抗体和gB抗体的总阳性率分别为15.9%和85.9%。其中区域一、区域... 为了解大中型猪场猪伪狂犬病免疫抗体水平,采用ELISA方法对辽宁3个区域大中型猪场共7个场采集猪血清样品共270份进行猪伪狂犬病gE抗体和gB抗体检测。结果显示:猪伪狂犬病gE抗体和gB抗体的总阳性率分别为15.9%和85.9%。其中区域一、区域二、区域三猪伪狂犬病gE抗体阳性率分别为21.8%、0和23.8%,猪伪狂犬病gB抗体阳性率分别为85.5%、91.3%和81.3%。结果表明:大中型猪场的免疫措施得当,免疫效果明显,但还存在感染的猪只。区域一和区域三所采样的大中型场中均有不同程度的野毒感染,区域二的野毒感染率和免疫抗体水平均优于其它两个地区。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 ELISA gE/gB抗体
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PCR结合核酸斑点杂交检测猪伪狂犬病毒 预览
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作者 乌那尔汗·吉斯汗 任衍倍 +10 位作者 孟凡峰 田似报 符玉涓 张继红 李舵 美热木古丽 任娟 林汉亮 崔治中 常爽 赵鹏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期85-89,共5页
本研究基于猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)gE基因,建立了一种PCR结合核酸斑点杂交检测方法来鉴别野毒株和疫苗株,并利用这一方法对山东省部分地区的猪临床病料中PRV进行了检测。结果显示,建立的PCR结合核酸斑点杂交检测... 本研究基于猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)gE基因,建立了一种PCR结合核酸斑点杂交检测方法来鉴别野毒株和疫苗株,并利用这一方法对山东省部分地区的猪临床病料中PRV进行了检测。结果显示,建立的PCR结合核酸斑点杂交检测方法只与PRV野毒株反应,而与PRV gE基因缺失疫苗、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪圆环病毒2型不反应。PCR结合核酸斑点杂交方法在53份病料中检出PRV阳性病料5份,阳性率为9.43%,高于单纯PCR的检出率(7.55%)。结果表明,本研究建立的PCR结合斑点杂交的方法特异性强,灵敏度高,适合PRV野毒的检测以及流行病学调查,可应用于PRV的鉴别诊断和净化。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 核酸斑点杂交 GE基因 鉴别
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2012年—2016年云南省部分地区规模猪场4种常见病毒感染情况的调查 预览 被引量:1
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作者 宋春莲 曾敬元 +12 位作者 陶杨 张雪 谢相悦 刘永波 吴常月 李鑫 凌万旭 何锦 张桂生 兰春林 王艳芬 李鲜 舒相华 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期117-120,共4页
为了解云南省部分地区4种常见病毒感染情况,2012年-2016年在云南省部分地区共采集1632份样品,用PCR、RT-PCR进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的抗原检测。检测结果显示,... 为了解云南省部分地区4种常见病毒感染情况,2012年-2016年在云南省部分地区共采集1632份样品,用PCR、RT-PCR进行了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的抗原检测。检测结果显示,CSFV的阳性率在2012年—2016年分别为16.27%、9.09%、9.09%、4.11%和7.14%,PRRSV的阳性率分别为13.16%、10.48%、29.93%、16.87%和29.58%,PRV的阳性率分别为2.38%、0.00%、2.65%、13.33%和1.37%,PVC2的阳性率分别为43.75%、37.25%、28.38%、53.06%和47.83%;有二重感染,其中PRRSV+PCV2最多,为6.32%,CSFV+PRV最少,为0.62%;三重感染CSFV+PRV+PCV2与PRRV+PRV+PCV2分别为0.71%和0.68%;无四重感染。CSFV、PRRSV、PRV、PCV2在滇中的阳性率分别为5.31%、28.33%、4.44%和48.62%,在滇南的阳性率分别为12.12%、20.37%、3.70%和29.03%,在滇西的阳性率分别为6.38%、20.41%、7.69%和47.37%,在滇东的阳性率分别为15.57%、7.58%、0.90%和27.27%。说明云南省规模猪场以上4种病毒感染比较严重,应加强监督和防控工作。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 感染
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表达PEDV中国变异株S基因重组猪伪狂犬病病毒的构建和纯化
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作者 杨盼盼 吴艳阳 +4 位作者 杨东东 高冬生 王川庆 赵军 李存法 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1057-1065,共9页
为了研制出能够同时预防猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪伪狂犬病病毒(pseu—dorabies virus,PRV)感染的二联活疫苗,本研究将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和PEDV中国变异株的纤突蛋白免疫决定簇区域... 为了研制出能够同时预防猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪伪狂犬病病毒(pseu—dorabies virus,PRV)感染的二联活疫苗,本研究将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和PEDV中国变异株的纤突蛋白免疫决定簇区域(S1)基因分别克隆至舍有PRV胸苷激酶(TK)基因上、下游同源臂的穿梭载体pTK中,构建重组PRV转移质粒pTK—EGFP和pTK—S1。将重组质粒pTK—EGFP与PRV疫苗毒株Bartha—K61基因组DNA共转染Vero细胞,经绿色荧光蚀斑纯化得到重组病毒rPRV—EGFP。随后将重组质粒pTK—S1与rPRV—EGFP基因组DNA共转染Vero细胞,通过反向筛选EGFP阴性蚀斑,蚀斑纯化得到表达PEDVS蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-S1。本研究将为更有效防控猪伪狂犬病和猪流行性腹泻提供辅助工具。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 猪流行性腹泻病毒 EGFP S1基因
猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒二重Luminex x-TAG方法的建立
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作者 朱余军 徐宁 +7 位作者 肖丽 伍妙梨 饶丹 徐凤娇 练月晓 黄韧 郭鹏举 陈梅丽 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2258-2261,共4页
为了建立一种快速、特异、灵敏且能同时检测猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)二重Luminex x-TAG方法,参照GenBank中PPV的NS-1基因序列和PRV的ICP8基因序列,设计了2对特异性引物,其中上游引物5′端加一段TAG序列,下游引物5′端用生... 为了建立一种快速、特异、灵敏且能同时检测猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)二重Luminex x-TAG方法,参照GenBank中PPV的NS-1基因序列和PRV的ICP8基因序列,设计了2对特异性引物,其中上游引物5′端加一段TAG序列,下游引物5′端用生物素标记,进行二重PCR扩增。然后将PCR产物与链霉亲和素-藻红蛋白、磁珠混匀,42℃孵育25min,混合物在Luminex200仪器上进行读数分析。并用该方法进行特异性、灵敏度、重复性及临床样品的检测。结果显示,该方法与其他猪的病原无交叉反应,两者的检测下限都可达1×10^2 copies/μL,批内批间的变异系数都在4%以下;在30份临床样品中,PPV和PRV的检出率分别为13.3%和60.0%,比普通PCR的检出率高。结果表明,本研究建立的二重Luminex x-TAG方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好,可同时检测PPV和PRV两种病毒,可用于猪场中PPV和PRV的流行病学调查。 展开更多
关键词 猪细小病毒 猪伪狂犬病病毒 LUMINEX x-TAG
Isolation and Identification of a Porcine Pseudorabies Virus Strain in Taizhou City 预览
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作者 Guangfu GUO Aiping ZHU +2 位作者 Junping CAO Cailian JIN Lihong DAI 《农业生物技术:英文版》 CAS 2018年第5期133-135,142共4页
关键词 病毒 城市 鉴定 科学预防 金提取 孤立 PCR
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猪伪狂犬病病毒灭活疫苗工艺研究 预览
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作者 李洪艳 巩福丽 《饲料博览》 2018年第5期33-37,共5页
伪狂犬病又称Aujeszky氏病,是由猪疱疹病毒I型所引起的以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主症的一种急性传染病。据报道,全世界已有50多个国家和地区爆发过该病,对养猪业的发展构成了严重威胁。本病尚无有效治疗药物,疫苗免疫接... 伪狂犬病又称Aujeszky氏病,是由猪疱疹病毒I型所引起的以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主症的一种急性传染病。据报道,全世界已有50多个国家和地区爆发过该病,对养猪业的发展构成了严重威胁。本病尚无有效治疗药物,疫苗免疫接种是预防和控制猪伪狂犬病的根本措施。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 病毒灭活疫苗 预防
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猪伪狂犬病病毒贵州部分流行株的gE基因变异
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作者 石远菊 汤德元 +7 位作者 曾智勇 黄涛 王彬 韦冠东 胡玲玲 龙冬梅 杨伟 叶丽 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1661-1665,1669共6页
为了解近年来贵州省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)流行株的分子流行特征和遗传变异情况,收集了贵州不同地区的4株PRV分离株,即Guizhou-DY株、GZ-Z1株、GZ-TH株和GZ-TD株,对其gE基因进行遗传变异分析。结果显示:Guizhou-DY... 为了解近年来贵州省猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)流行株的分子流行特征和遗传变异情况,收集了贵州不同地区的4株PRV分离株,即Guizhou-DY株、GZ-Z1株、GZ-TH株和GZ-TD株,对其gE基因进行遗传变异分析。结果显示:Guizhou-DY株和GZ-Z1株与2012年以前国内外的传统分离株的核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为98.3%-99.4%及96.7%-98.4%,而近期分离的GZ-TD株和GZ-TH株与2012年以来国内不同省份分离的PRV变异株的核苷酸及氨基酸序列的同源性较高,分别为98.7%-99.9%及98.1%-99.5%。Guizhou-DY株和GZZ1株的gE氨基酸第48位和第496位均没有天冬氨酸(D)的插入,但近期分离的GZ-TD株和GZ-TH株的gE氨基酸第48位和第496位均有D的插入,与2012年以来发现的PRV新毒株氨基酸变异位点相同。Guizhou-DY株和GZ-Z1株与传统PRV分离毒株的亲缘关系较近,而GZ-TD株和GZ-TH株与2012年之后的PRV变异毒株的亲缘关系较近。结果表明:猪伪狂犬病病毒贵州流行毒株的gE基因存在一定程度的变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 贵州流行毒株 GE基因 变异分析
猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究 预览
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作者 潘慧 李艳华 +4 位作者 向柯宇 唐栋 程珍珠 罗永文 琚春梅 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期9-15,共7页
【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株.【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒 株的缺失重组转移质粒 pMD-LA-RA及携带标记基因的重组转移质粒 pMD-LA-EGFP-RA,将 pMD- LA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH... 【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株.【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒 株的缺失重组转移质粒 pMD-LA-RA及携带标记基因的重组转移质粒 pMD-LA-EGFP-RA,将 pMD- LA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带基因的 基因缺失突变株PRV 以此毒株与pMD-LA-RA进行第2 次同源重组,筛选去除五GFi5基因的基因缺失突变株 PRVAHg £ 7 g r ,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗 传稳定性及免疫原性.【结果】通过2 次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了 PRV AH 经 PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株狀和g /基因被成功缺失,且不携带五GFP标记基因.生 物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好.【结论】采用同源重组技术 成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫 苗奠定了-定的基础. 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 流行毒株 基因缺失 同源重组 生物学特性
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猪伪狂犬病病毒gE蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立 预览
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作者 寇晓晶 高峰 +1 位作者 郭慧琳 刘剑锋 《中国动物检疫》 CAS 2018年第5期91-94,共4页
以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,... 以原核表达的猪伪狂犬病毒gE蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法并进行相应优化,研制出了猪伪狂犬病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,并与国内市场标杆产品进行比较,发现阳性符合率为88.03%,阴性符合率为91.47%,总体符合率达到89.84%。同时,该试剂盒批间、批内变异系数均小于10%,具有较好的重复性。该检测试剂盒的研制,可为猪场猪伪狂犬病毒野毒感染的检测提供技术支撑。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gE蛋白 间接ELISA试剂盒 符合率
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一种检测猪伪狂犬病野毒方法的建立 预览
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作者 马良 许磊 李晓冉 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第2期41-43,共3页
猪伪狂犬病是危害养猪业的重要病毒性传染病,如何鉴别疫苗接种动物和野毒感染动物是控制和净化该病的前提。本试验根据不同猪伪狂犬疫苗株gE基因缺失的特点,建立了一种猪伪狂犬病野毒病原核酸的PCR检测方法。该方法可以检出猪伪狂犬病野... 猪伪狂犬病是危害养猪业的重要病毒性传染病,如何鉴别疫苗接种动物和野毒感染动物是控制和净化该病的前提。本试验根据不同猪伪狂犬疫苗株gE基因缺失的特点,建立了一种猪伪狂犬病野毒病原核酸的PCR检测方法。该方法可以检出猪伪狂犬病野毒,而不能检出猪伪狂犬病疫苗株,实现了疫苗毒和野毒的鉴别检验,同时不能检测出猪常见病毒性传染病病原。最低检测限度为10^3个病毒核酸拷贝。在组织样品检测中不受宿主组织核酸干扰,能区分野毒感染动物组织和疫苗免疫动物组织,是一种值得推广的伪狂犬病毒野毒检测方法。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 野毒 鉴别 PCR
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猪伪狂犬病毒流行株JL1株主要基因的遗传变异分析 预览
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作者 张姗姗 冷雪 +6 位作者 时坤 李健明 宫庆龙 刘艺 孙志博 刘亚东 杜锐 《中国兽药杂志》 2018年第5期7-17,共11页
为了解我国吉林省某地区猪伪狂犬病毒流行株JL1株的遗传变异情况,对PRV JL1株TK、gI、gD、gE和gB基因进行克隆测序,并与GenBank上发表的国内外毒株进行序列分析和遗传进化分析。结果显示,JL1株TK、gI、gD、gE和gB基因与国内外其他参考... 为了解我国吉林省某地区猪伪狂犬病毒流行株JL1株的遗传变异情况,对PRV JL1株TK、gI、gD、gE和gB基因进行克隆测序,并与GenBank上发表的国内外毒株进行序列分析和遗传进化分析。结果显示,JL1株TK、gI、gD、gE和gB基因与国内外其他参考毒株的核苷酸同源性为99.6%-100%,96.4%-99.9%,98.8%-99.9%,98.1%-99.9%,98.4%-99.9%;氨基酸同源性为99.4%-100%,94.3%-99.7%,97.3%-99.8%,95.7%-99.5%,97%-99.7%。氨基酸多序列比对发现,PRV JL1株gE基因第48位和496位各插入一个天冬氨酸(D),与流行变异株的基因特征一致;同时gD基因、gI基因和gB基因分别有不同数量的氨基酸的插入和缺失。遗传进化分析表明,JL1株与国内近年来分离的流行毒株亲缘关系较近,尤其与JS-2012流行毒株亲缘关系相对最近,而与国外分离的经典毒株亲缘关系较远。通过对PRV JL1流行毒株的重要基因进行遗传变异分析,进一步了解PRV变异情况,可为当前流行的猪伪狂犬病防控以及疫苗的研究提供参考依据。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 变异 遗传变异分析
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猪伪狂犬病病毒野毒SYBR-Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法的建立 预览
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作者 常晨 张道华 +3 位作者 唐波 刘国阳 华涛 侯继波 《江西农业学报》 CAS 2017年第9期1-4,共4页
根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gI/g E基因序列,设计一对特异性引物,建立了鉴别PRV野毒感染的荧光定量PCR方法。该方法灵敏度达到102拷贝/μL,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙脑病毒(JEV)不发生交叉反... 根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gI/g E基因序列,设计一对特异性引物,建立了鉴别PRV野毒感染的荧光定量PCR方法。该方法灵敏度达到102拷贝/μL,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪瘟病毒(CSFV)、乙脑病毒(JEV)不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;用PRV强毒攻毒仔猪,荧光定量PCR比普通PCR能更灵敏检出组织带毒量。该方法可以用于猪的组织样品,如脑、肺、扁桃体、淋巴结等样品中伪狂犬野毒的定量,可用于临床伪狂犬野毒感染的早期检测和定量分析猪伪狂犬病毒感染程度。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 SYBR-GreenⅠ 荧光定量PCR 野毒 检测
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猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析 预览
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作者 贾刚 樊梅娜 谷巍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1175-1181,共7页
本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB蛋白的表达并分析其免疫原性,以PRV病毒液为模板,设计特异性引物,扩增大小为612bp的保守片段并测序,将其克隆到表达载体pET-28a中,转化表达菌BL21(DE3),经诱导表达、纯化得... 本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB蛋白的表达并分析其免疫原性,以PRV病毒液为模板,设计特异性引物,扩增大小为612bp的保守片段并测序,将其克隆到表达载体pET-28a中,转化表达菌BL21(DE3),经诱导表达、纯化得到目的蛋白,进行Western blotting分析验证并分析免疫原性。结果表明,表达的gB蛋白大小为30ku,主要以包涵体形式存在,复性后浓度为106μg/mL,且具有良好的反应原性。应用市售试剂盒检测到样品中含13份PRV阳性血清和16份阴性血清,利用检出的阳性血清,初步可建立以PRV gB蛋白为包被抗原的PRV抗体ELISA检测方法。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 gB蛋白 原核表达 免疫原性
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闽西地区新流行猪伪狂犬病病毒gD基因分子特征 被引量:1
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作者 范克伟 戴爱玲 +5 位作者 林炜明 闫娜娜 林青青 林建伟 费世港 杨小燕 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期776-780,786共6页
本研究收集闽西不同地区的17株猪伪狂犬病病毒(PRV)分离株,并对其gD基因进行遗传变异分析,探讨2013—2015年闽西地区PRV流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律。结果显示,17株PRV分离株与7株PRV国内分离株核苷酸及氨基酸序列的... 本研究收集闽西不同地区的17株猪伪狂犬病病毒(PRV)分离株,并对其gD基因进行遗传变异分析,探讨2013—2015年闽西地区PRV流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律。结果显示,17株PRV分离株与7株PRV国内分离株核苷酸及氨基酸序列的同源性较高均为99.0%~100.0%;与4株国外PRV经典株的核苷酸及氨基酸序列同源性相对较低,分别为98.6%~99.3%,97.0%~99.0%。核苷酸多序列比对结果显示,17株PRV分离株最具有特征性的变化是在831~836bp插入了连续的6个碱基CCGGCC,进而导致gD氨基酸序列275~276位增加了2个氨基酸RP。抗原性分析结果显示,这2个氨基酸还位于gD蛋白的抗原表位区内。遗传进化树分析结果显示,17株PRV分离株与7株国内分离株、韩国Yangsan株及美国Becker株位于一个相对独立的遗传分支内,亲缘关系较近;与Bartha及Kaplan 2株匈牙利分离株位于不同的大遗传进化分支中,亲缘关系较远。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GD基因 分子特征
河南省猪伪狂犬病毒野毒感染的防控效果评估
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作者 郭振华 张桂悦 +3 位作者 王楠楠 白杨 宋臣 乔松林 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第9期79-82,共4页
为了解当前河南省猪伪狂犬病毒(PRV)野毒感染状况及总结评估有效的应对措施,利用g E-ELISA鉴别诊断试剂盒,对采集的900余份血清样品,进行了PRV野毒感染的血清学调查。同时针对一些代表性的猪场,进行长期的跟踪观察,评估PRV野毒感染的... 为了解当前河南省猪伪狂犬病毒(PRV)野毒感染状况及总结评估有效的应对措施,利用g E-ELISA鉴别诊断试剂盒,对采集的900余份血清样品,进行了PRV野毒感染的血清学调查。同时针对一些代表性的猪场,进行长期的跟踪观察,评估PRV野毒感染的控制效果。结果显示,野毒感染血清阳性率为46.7%(427/915),猪场阳性率为76.7%(23/30),提示PRV在我省感染流行较为广泛。猪场跟踪显示,利用现有的疫苗,通过制定合适的免疫程序,在野毒感染的猪场依然可以生产出野毒阴性的上市商品猪,为现阶段猪伪狂犬的控制和净化提供了参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 gE-ELISA 免疫程序
闽西地区新流行猪伪狂犬病病毒gB基因分子特征分析 被引量:2
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作者 戴爱玲 范克伟 +5 位作者 杨小燕 杨守深 闫娜娜 林青青 林建伟 费世港 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期592-596,600共6页
为了解2013-2015年闽西地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,收集闽西不同地区的24株PRV分离株,并对其gB基因进行遗传变异分析。结果表明:24株PRV分离株与2012年国内不同省份分离的7株PRV变异株核... 为了解2013-2015年闽西地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,收集闽西不同地区的24株PRV分离株,并对其gB基因进行遗传变异分析。结果表明:24株PRV分离株与2012年国内不同省份分离的7株PRV变异株核苷酸及氨基酸的同源性较高,分别为99.7%-100.0%和99.3%-100.0%;而与4株国外PRV经典株的核苷酸及氨基酸同源性相对较低,分别为98.3%-98.7%和96.6%-97.7%。氨基酸多序列比对结果发现,24株PRV分离株与7株2012年国内不同省份分离的PRV变异株gB基因氨基酸序列同源性较高,在几个部位均发生了一致性的变化,有很多相同的特征性氨基酸缺失与替换。遗传进化树分析结果表明,24株PRV分离株与7株PRV变异株处于一个相对独立的亚遗传分支,亲缘关系较近。而与Bartha疫苗株等4株国外经典毒株位于不同的大分支中,亲缘关系较远。预测的抗原表位表明PRV闽西分离株与Bartha疫苗株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示闽西地区流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚需待进一步研究。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GB基因 分子特征
南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定 预览 被引量:3
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作者 常晨 张道华 +3 位作者 唐波 刘国阳 华涛 侯继波 《江西农业学报》 CAS 2016年第6期82-86,共5页
于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离... 于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 分离 鉴定 GE基因
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