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矮生二裂委陵菜对2型糖尿病大鼠糖脂代谢关键酶和激素表达的影响
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作者 唐勋 曾阳 李锦萍 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1703-1706,共4页
目的:研究矮生二裂委陵菜总黄酮对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖影响,以及对胰岛素、抵抗素、瘦素、葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响,以期探讨矮生二裂委陵菜抗T2DM的作用机制。方法:采用高脂高糖饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素注... 目的:研究矮生二裂委陵菜总黄酮对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖影响,以及对胰岛素、抵抗素、瘦素、葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响,以期探讨矮生二裂委陵菜抗T2DM的作用机制。方法:采用高脂高糖饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素注射构建T2DM大鼠模型,并随机分为模型组,二甲双胍组,格列吡嗪组,矮生二裂委陵菜总黄酮高、低剂量组(200、100mg/kg),给药7、14、21、28d后测定空腹血糖,并于给药28d后测定糖脂代谢关键酶和激素的基因表达量。结果:与模型组比较,给药14d后二甲双胍组、格列吡嗪组和矮生二裂委陵菜总黄酮高剂量组空腹血糖显著下降(P<0.05),给药21、28d后各给药组空腹血糖显著下降(P<0.01,P<0.05);给药28d后,各药物组胰岛素、葡萄糖激酶基因表达水平显著上调(P<0.05),抵抗素、瘦素、葡萄糖-6-磷酸酶基因表达水平显著下调(P<0.01,P<0.05)。结论:矮生二裂委陵菜总黄酮能够调节糖脂代谢关键酶和激素的表达,这可能是其抗T2DM的分子机制之一。 展开更多
关键词 矮生二裂委陵菜 2型糖尿病 QRT-PCR 胰岛素 抵抗素 葡萄糖激酶
LncRNA-ATB对上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
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作者 周贇 沈璐 +1 位作者 王怡之 周晨晨 《热带医学杂志》 CAS 2019年第3期304-308,390共6页
目的研究被转化生长因子β活化长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法通过荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人正常卵巢组织细胞系及上皮性卵巢癌系A2780和OVCAR3中LncRNA-ATB表达。将OVCAR... 目的研究被转化生长因子β活化长链非编码RNA(LncRNA-ATB)对人上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法通过荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人正常卵巢组织细胞系及上皮性卵巢癌系A2780和OVCAR3中LncRNA-ATB表达。将OVCAR3细胞系分为对照组、LncRNA-ATB NC组和转染LncRNA-ATB inhibitor组,采用MTT试剂盒检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测下调LncRNAATB表达对TGF-β表达的影响,qRT-PCR法检测TGF-β处理对LncRNA-ATB表达的影响。结果与正常卵巢细胞组相比,上皮性卵巢癌A2780组、OVCAR3组LncRNA-ATB相对表达量显著升高(P<0.05);与A2780组相比,OVCAR3组LncRNA-ATB相对表达量升高(P<0.05);转染后与空白组、LncRNA-ATB NC组相比,LncRNA-ATB inhibitor组LncRNA-ATB表达、细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05);下调LncRNA-ATB表达对TGF-β的表达无影响(P>0.05);TGF-β处理后LncRNA-ATB表达显著降低(P<0.05)。结论 LncRNA-ATB在上皮性卵巢癌细胞中高表达,下调LncRNA-ATB后抑制上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 上皮性卵巢癌 LncRNA-ATB QRT-PCR
不同猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的表达差异及其与胴体、肉质性状相关性分析
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作者 陶璇 顾以韧 +13 位作者 梁艳 杨雪梅 邓小松 钟志君 杨跃奎 曾凯 陈晓晖 王言 何志平 龚建军 雷云峰 应三成 王卫 吕学斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第5期1-5,共5页
为了研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的差异表达情况。结果:除miR-1与藏猪差异不显著外,2种miRNA在大约克夏猪背部... 为了研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的差异表达情况。结果:除miR-1与藏猪差异不显著外,2种miRNA在大约克夏猪背部皮下脂肪中的表达水平显著高于地方猪种(P<0.05);地方猪种中,miR-1和miR-369表达水平分别在藏猪和雅南猪中最高;相关性分析显示,miR-1和miR-369在背部皮下脂肪中表达水平均与瘦肉率、多不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01),与单不饱和脂肪酸含量均呈显著负相关(P<0.05),miR-369表达水平还与平均背膘厚呈极显著负相关(P<0.01)。试验表明miR-1和miR-369可能对猪脂肪沉积和单不饱和脂肪酸生成起负调控作用,对多不饱和脂肪酸生成起正调控作用。 展开更多
关键词 MIR-1 miR-369 QRT-PCR 背部皮下脂肪
多穗柯4-香豆酸辅酶A连接酶基因的克隆和表达分析 预览
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作者 邢朝斌 冯若宣 +4 位作者 王志焱 张妍彤 王卓 黄剑 龙月红 《经济林研究》 北大核心 2019年第3期16-21,共6页
为了克隆多穗柯4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate-CoAligase,4CL)基因,了解其表达情况,从而为深入研究4CL基因分子功能及黄酮类化合物生物合成奠定基础,依据多穗柯转录组测序结果,设计特异性引物,PCR扩增得到4CL基因cDNA全长序列,利用... 为了克隆多穗柯4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarate-CoAligase,4CL)基因,了解其表达情况,从而为深入研究4CL基因分子功能及黄酮类化合物生物合成奠定基础,依据多穗柯转录组测序结果,设计特异性引物,PCR扩增得到4CL基因cDNA全长序列,利用相关软件进行生物信息学分析;采用qRT-PCR法检测4CL基因在不同器官中的表达情况,使用SPSS18.0软件分析其表达量与根皮苷含量间的关系。结果表明:多穗柯4CL基因cDNA全长1704bp,包含长1629bp的开放阅读框,编码含542个氨基酸的蛋白质。该蛋白定位于细胞质中,属亲水性蛋白。多穗柯4CL基因在除根以外的各个器官中均有表达,且表达量与根皮苷含量间呈极显著的正相关关系(P<0.01)。 展开更多
关键词 多穗柯 4-香豆酸辅酶A连接酶 根皮苷 QRT-PCR
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木霉诱导下山新杨PodaPIN9基因的组织表达调控 预览
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作者 李枢航 苗蕊 +4 位作者 常媛 李俊男 燕晓杰 刘照莹 张荣沭 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期267-275,共9页
PIN蛋白具有多个跨膜结构域,影响着高等植物生长素的外向运输和众多生长发育过程。木霉菌是能促进植物生长、提高其对多种病害防御作用的生防因子。研究木霉菌对木本植物山新杨生长素的极性分布的影响有重要意义。克隆了山新杨PodaPIN9... PIN蛋白具有多个跨膜结构域,影响着高等植物生长素的外向运输和众多生长发育过程。木霉菌是能促进植物生长、提高其对多种病害防御作用的生防因子。研究木霉菌对木本植物山新杨生长素的极性分布的影响有重要意义。克隆了山新杨PodaPIN9基因,对其核酸和蛋白序列进行分析;同时,构建的进化树显示PodaPIN9与6个物种的9条PIN基因具有高度一致性(> 80%)。qRT-PCR分析表明,PodaPIN9在山新杨茎尖、成熟叶和根中均有表达。在根中表达量极低;在茎尖和叶中的表达量极高,分别是根中的503和346倍。该基因受木霉影响在茎尖和叶中的表达量均显著下调;而根中的表达量显著上调,达到对照的32. 01倍。并发现根际接种木霉48h会使杨树茎尖、叶和根中生长素含量降低。说明木霉菌能影响杨树茎尖、叶和根中IAA水平及PodaPIN9的表达量。并且Pearson相关性分析表明在茎尖、叶和根中,PodaPIN9表达量与IAA水平具有不同的相关性。 展开更多
关键词 山新杨 棘孢木霉菌 PIN基因 QRT-PCR IAA
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辣椒AP2/ERF家族转录因子CaERF109的克隆和表达分析
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作者 高升华 李宁 +4 位作者 王飞 尹延旭 余楚英 焦春海 姚明华 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2019年第19期6256-6262,共7页
植物AP2/ERF转录因子参与多个生物学进程。为了研究辣椒AP2/ERF家族成员CaERF109在逆境和激素响应过程中的作用,从‘遵辣1号’中克隆了CaERF109,并对其基因结构、理化性质等进行生物信息学分析,利用qRT-PCR检测高温、低温、生长素、赤... 植物AP2/ERF转录因子参与多个生物学进程。为了研究辣椒AP2/ERF家族成员CaERF109在逆境和激素响应过程中的作用,从‘遵辣1号’中克隆了CaERF109,并对其基因结构、理化性质等进行生物信息学分析,利用qRT-PCR检测高温、低温、生长素、赤霉素和茉莉酸甲酯处理后CaERF109的表达情况。结果显示:CaERF109的开放阅读框长693 bp,由2个外显子组成,编码230个氨基酸,分子量为2.6 kD,等电点为7.91,含一个氨基酸组成的AP2/ERF DNA结合结构域;CaERF109与同为茄科的番茄、马铃薯、烟草同源基因具有较近的亲缘关系,氨基酸序列同源性超过76%;CaERF109基因的表达受低温诱导,不受高温和植物外源激素生长素、赤霉素和茉莉酸甲酯诱导。综上所述,CaERF109基因可能参与辣椒低温胁迫应答,更对CaERF109基因深入的研究将有利于该基因功能和调控机制的揭示。 展开更多
关键词 辣椒(Capsicum annuumL.) 基因克隆 CaERF109 低温胁迫 QRT-PCR
嗜碱盐单胞菌X3中异化型硝酸盐还原酶编码基因簇的功能验证及蛋白结构预测 预览
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作者 王越 李秋芬 张艳 《中国海洋大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期33-40,共8页
细菌的氮代谢推动环境的氮循环,硝酸盐还原反应是氮代谢途径中重要步骤之一。本文运用酶活测定、qRT-PCR和生物信息学软件分析的方法,对嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila)X3中编码细菌异化型硝酸盐还原酶(Dissimilatory nitrate redu... 细菌的氮代谢推动环境的氮循环,硝酸盐还原反应是氮代谢途径中重要步骤之一。本文运用酶活测定、qRT-PCR和生物信息学软件分析的方法,对嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila)X3中编码细菌异化型硝酸盐还原酶(Dissimilatory nitrate reductase,Nar)不同亚基的基因簇narGYJV进行了功能验证、蛋白结构预测和系统发育分析。研究表明,X3菌株中存在narGYJV基因簇并具有表达活性,测得Nar的酶活为每克蛋白21.415 U;预测到的narGYJV编码蛋白功能区域中1~1246氨基酸属于NarG超家族,编码Nar的α亚基;1261~1752氨基酸属于DMSOR-beta-like超家族,编码Nar的β亚基;2061~2279氨基酸编码γ亚基,1802~2018氨基酸编码δ亚基;Nar的二级结构中无规卷曲占37.59%,α螺旋占34.43%,延伸链占18.33%;NarG、NarY和NarV的3D结构与PDB中大肠杆菌(Escherichia coli)的1Q16 3D结构最接近,覆盖率96%~100%。系统发育树显示,菌株X3中NarG与同属菌的遗传距离较近,在不同菌属间虽然功能相似,其同源性较低;NarY与大肠杆菌中的氨基酸序列的同源关系较近,说明异化型硝酸盐还原酶Nar中不同亚基的系统发育地位不同。研究结果表明,Halomonas alkaliphila X3菌株中存在编码Nar的基因簇narGYJV,编码蛋白具有独特的3D结构,不同亚基的系统发育地位不同。研究结果为进一步研究该菌的氮代谢通路选择和调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 嗜碱盐单胞菌 异化型硝酸盐还原酶 基因簇narGYJV 3D结构 qRT-PCR 系统发育树
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香石竹DcHsfA4基因克隆及表达特性分析
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作者 万雪丽 冯依 +1 位作者 刘庆华 王奎玲 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1751-1760,共10页
热激转录因子(heat shock transcription factors, Hsfs)是响应逆境信号的重要元件。以香石竹(Dianthus caryophyllus)品种’Fancy’为材料,克隆得到热激转录因子基因DcHsfA4的完整编码序列(GenBank No. MN096327),序列全长1 173 bp,编... 热激转录因子(heat shock transcription factors, Hsfs)是响应逆境信号的重要元件。以香石竹(Dianthus caryophyllus)品种’Fancy’为材料,克隆得到热激转录因子基因DcHsfA4的完整编码序列(GenBank No. MN096327),序列全长1 173 bp,编码390个氨基酸。生物信息学分析结果显示,DcHsfA4蛋白分子式为C1963H3051N577O625S8,分子量为44.99 kD,理论等电点为5.48,脂肪系数71.95,不稳定系数49.72,预测为不稳定蛋白。疏水性/亲水性预测表明DcHsfA4蛋白为亲水蛋白。蛋白跨膜性分析显示DcHsfA4属于非跨膜蛋白。二级结构预测显示,DcHsfA4氨基酸组成包括α-螺旋(42.56%)、延伸链(6.67%)、β-折叠(3.08%)和无规则卷曲(47.69%),属于不规则结构。氨基酸序列比对显示,DcHsfA4含有高度保守的DNA结合域,此外,还包含疏水7肽重复区,核定位信号序列和C末端激活域。系统进化分析表明,DcHsfA4与拟南芥(Arabidopsis thaliana) AtHsfA4同源性最高。利用qRT-PCR技术分析了DcHsfA4在常温或不同非生物胁迫处理下的表达特性,结果显示,在42℃胁迫、ABA或甘露醇分别处理后DcHsfA4的表达水平显著提高(P<0.05),4℃胁迫下,不同时间点DcHsfA4的表达模式不同,干旱处理24 h或NaCl处理12 h诱导了DcHsfA4的转录本上调表达。该研究结果为进一步探究香石竹热激转录因子的特性及响应逆境的生物学功能提供了依据。 展开更多
关键词 香石竹 香石竹热激转录因子A4(DcHsfA4) QRT-PCR 非生物胁迫
gata3基因表达与人乳腺肿瘤病理特征的相关性分析 预览
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作者 钱卫东 沈兰芳 +3 位作者 王婷 刘翌超 石丽 李永东 《陕西科技大学学报》 CAS 2019年第4期40-45,63共7页
为了检测gata3基因在不同乳腺肿瘤组织中的相对表达情况,分析gata3基因表达与乳腺肿瘤不同临床特征的相关性.自主设计了gata3基因的引物和探针,建立检测gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法,进而用建立的方法对130例临床乳腺肿瘤... 为了检测gata3基因在不同乳腺肿瘤组织中的相对表达情况,分析gata3基因表达与乳腺肿瘤不同临床特征的相关性.自主设计了gata3基因的引物和探针,建立检测gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法,进而用建立的方法对130例临床乳腺肿瘤冰冻组织样本中gata3基因的mRNA表达进行检测,并分析gata3基因表达与乳腺肿瘤患者临床病理特征的关系.结果表明:gata3基因mRNA的相对表达量在瘤旁组织中显著高于肿瘤组织(9.1392E-02Vs5.0548E-02,p=0.0071),在良性纤维腺瘤中显著高于恶性肿瘤(6.87E-02Vs3.42E-02,p=0.002);在乳腺浸润性导管癌中,gata3基因的表达与ER表型和Luminal分子亚型显著正相关(rER表型=0.512***;r分型=0.459***);而在Luminal亚型乳腺癌样本中,gata3基因的表达与肿瘤TNM高、分化级别高显著负相关(rTNM分期=-0.111*,r分化=-0.147*).gata3基因异常低表达可能促进乳腺癌的发生、发展和转移,而gata3基因高表达的乳腺癌组织多伴随ER分子高表达,对内分泌药物相对敏感、预后较好.研究建立的gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法可以为乳腺癌诊断和预后评估提供新的参考方法. 展开更多
关键词 gata3基因 QRT-PCR 乳腺肿瘤 病理特征 临床诊断
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长链非编码RNA-LINC00485在肺癌中的表达及对细胞增殖和迁移的影响 预览
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作者 王向辉 黄江平 +1 位作者 崔丰和 钱海云 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期42-46,共5页
目的观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12... 目的观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12例肺癌组织及癌旁组织中的差异性表达。通过生物信息学方法预测LINC00485可能结合的微小RNA(miRNA)及靶基因,将靶向沉默LINC00485的小干扰RNA(siRNA)通过脂质体转染至HCC827细胞。应用qRT-PCR检测LINC00485、miR-361-5p、p21活化蛋白激酶2(PAK2)mRNA的表达水平。采用Westernblot法检测PAK2蛋白的表达水平。应用MTS法检测细胞增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果与正常肺泡上皮相比,LINC00485在肺癌细胞株中均呈高表达(P<0.05),其中在HCC827细胞中表达水平最高。LINC00485在肺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织(P<0.01)。下调HCC827细胞LINC00485的表达后,miR-361-5p的表达上调(P<0.01),PAK2mRNA和蛋白的表达下调(P<0.01),HCC827细胞增殖能力降低(P<0.05),细胞迁移能力下降(P<0.01)。结论LINC00485在肺癌细胞株和组织中表达升高,下调LINC00485可通过调控miR-361-5p和PAK2基因的表达,抑制肺癌HCC827细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 肺肿瘤 长链非编码RNA-LINC00485 增殖 迁移 QRT-PCR
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草莓SnRK2基因家族的鉴定与表达分析
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作者 刘涛 王萍萍 +5 位作者 何红红 梁国平 高雪琴 卢世雄 陈佰鸿 毛娟 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2150-2163,共14页
蔗糖非酵解相关蛋白激酶(sucrose non-fermenting-1-related protein kinase,SnRK)是一类植物特有的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋白激酶,在植物抗逆研究中扮演着重要的角色。为探究草莓(Fragaria vesca)中SnRK2基因家族的数量、结构以及... 蔗糖非酵解相关蛋白激酶(sucrose non-fermenting-1-related protein kinase,SnRK)是一类植物特有的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋白激酶,在植物抗逆研究中扮演着重要的角色。为探究草莓(Fragaria vesca)中SnRK2基因家族的数量、结构以及响应非生物胁迫表达的差异性,以拟南芥(Arabidopsis thaliala)和水稻(Oryza sativa)SnRK2基因保守序列为基础,使用生物信息学工具,对草莓SnRK2基因家族成员进行同源比对,对其基因结构、系统进化、保守基序、蛋白理化性质、蛋白二级结构和顺式作用元件等进行分析,并采用qRT-PCR对基因在模拟逆境胁迫下的表达情况进行分析。结果显示,从草莓基因组数据库中鉴定得到10个SnRK2基因家族成员,分为3个亚族,编码氨基酸数为258~364个,分子量为29469.75~41481.68 D,理论等电点介于4.68~9.10之间,分布于草莓4条染色体上。基因结构和motif分析表明,多数基因有9个外显子;同一亚族的motif分布情况基本相似。亚细胞定位预测结果表明,FvSnRK2基因家族主要在细胞质中表达。蛋白二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为主。上游2 kb顺式作用元件分析显示,FvSnRK2基因家族所有成员均含有MYB和MYC转录因子应答元件。qRT-PCR分析表明,FvSnRK2基因家族成员中,有5个基因在10%PEG6000处理后12 h时相对表达量最高,FvSnRK2.4响应最明显,为0 h的15倍;100μmol/L脱落酸(abscisic acid,ABA)处理后有6个基因相对表达量在24 h时最高,2个基因在12 h时最高,且FvSnRK2.5和FvSnRK2.9响应强烈,分别为0 h时的16.2倍和42.4倍;7个基因在200 mmol/L NaCl处理后相对表达量在2 h时最高,FvSnRK2.10响应强烈,为0 h时的65.2倍,FvSnRK2.5在12 h时最高,为0 h时的94.7倍。FvSnRK2.5和FvSnRK2.10在ABA和NaCl处理后响应强烈,在草莓抗逆境信号调节中有重要的调节作用。本研究为草莓SnRK2基因功能验证及育种工作提供了理论参考。 展开更多
关键词 草莓 SnRK2基因家族 进化分析 QRT-PCR
酸碱度对StRALF基因表达量的影响及初步分析
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作者 朱飞宇 马周杰 +3 位作者 孙艳秋 何世道 姚远 高增贵 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-37,共9页
快速碱化因子(RALF)是一种能够参与植物发育调控的植物肽激素,在真菌中也广泛存在并且影响真菌对寄主的侵染状况。通过外源添加酸碱来明确pH值对玉米大斑菌生长的影响,使用实时荧光定量PCR技术分析玉米大斑病菌中StRALF基因在外源添加... 快速碱化因子(RALF)是一种能够参与植物发育调控的植物肽激素,在真菌中也广泛存在并且影响真菌对寄主的侵染状况。通过外源添加酸碱来明确pH值对玉米大斑菌生长的影响,使用实时荧光定量PCR技术分析玉米大斑病菌中StRALF基因在外源添加酸、碱时表达量的变化。运用预测网站对克隆得到的StRALF基因编码区蛋白序列的基本性质进行分析。结果表明,玉米大斑瓋菌在碱性环境下生长状态较好。碱性条件下,StRALF基因比酸性条件下基因表达量高。在侵染寄主过程中,96 h及以后表达量达到最大。经预测分析,初步确定其为分泌蛋白或膜蛋白。在弱碱性条件下,StRALF基因表达量较高并参与侵染过程及侵染后的生长阶段。 展开更多
关键词 玉米 玉米大斑病菌 StRALF QRT-PCR
红梨实时荧光定量PCR内参基因的筛选
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作者 张雪 王荔 +1 位作者 瞿飞 杨胜俊 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期361-370,共10页
红梨(Pyrus pyrifolia)果皮花青苷的合成积累是影响红梨果实着色的关键因素,其生物合成由各步酶促反应基因调控,筛选出稳定可靠的内参基因对于研究红梨果实着色关键基因及其调控机制具有重要意义。本研究旨在筛选红梨的不同品种(早白蜜... 红梨(Pyrus pyrifolia)果皮花青苷的合成积累是影响红梨果实着色的关键因素,其生物合成由各步酶促反应基因调控,筛选出稳定可靠的内参基因对于研究红梨果实着色关键基因及其调控机制具有重要意义。本研究旨在筛选红梨的不同品种(早白蜜,中熟32,云红梨1号),在不同生长发育时期(幼果期,缓慢生长期,快速生长期,成熟期)和不同遮光处理(自然光照,部分遮光及完全遮光)条件下均稳定表达的内参基因,以用于qRT-PCR分析。选取红梨果皮为实验材料,以梨树(Pyrus communis)中常见的6个管家基因—β-肌动蛋白基因(β-actin, ACT)、18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA, 18S rRNA)、甘油醛三磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、组蛋白基因(histone, His)、转录延伸因子基因(elongation factor 1α, EF-1α)及α微管蛋白基因(α-tubulin, TUB)作为候选内参基因,分别进行q RT-PCR扩增效率、内参基因稳定性参数及不同样品中相对表达量分析。以BIO-RAD CFX Manager v2.0软件对稳定性参数指标—循环阈值(cycle threshold, Ct)、平均表达系数(M)和变异系数(variation coefficient, CV)进行分析和综合对比,结果显示,不同候选内参基因的表达稳定性存在差异,其中EF-1α和His在红梨不同品种、不同生长发育时期及不同遮光处理条件下均稳定表达;对于不同样本中内参基因相对表达量的分析显示,EF-1α和His在不同样本中的表达量相对稳定。上述结果提示,EF-1α和His可作为红梨果皮组织qRTPCR分析的内参基因,为后续开展红梨果实着色相关基因的表达分析提供了校正和标准化基因选择。 展开更多
关键词 红梨 QRT-PCR 内参基因 筛选
小麦金属硫蛋白基因的克隆与组织表达分析
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作者 强承魁 秦越华 +3 位作者 张明 梁玉莹 曹丹 丁永辉 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4518-4523,共6页
为了解小麦金属硫蛋白(metallothionein,MT)的分子生物学特征及组织表达特性,本研究从‘徐麦30’(Xm-30)、‘保麦2号’(Bm-2)中克隆出该基因(TaMT)后进行序列分析,并采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)解析了其在小麦不同组织间的表达差... 为了解小麦金属硫蛋白(metallothionein,MT)的分子生物学特征及组织表达特性,本研究从‘徐麦30’(Xm-30)、‘保麦2号’(Bm-2)中克隆出该基因(TaMT)后进行序列分析,并采用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)解析了其在小麦不同组织间的表达差异。结果表明,2个品种中该基因DNA序列长度分别为339 bp和338 bp且一致性达99.71%,均编码49个氨基酸,含有1个CXC结构和2个CXXXC结构,预测的分子量和理论等电点分别为4.77 kD和4.78,二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲各占20.41%、12.24%、8.16%和59.18%,亚细胞定位于细胞核、线粒体、细胞骨架、细胞质和液泡的比例分别为69.6%、13.0%、8.7%、4.3%和4.3%;TaMT蛋白与硬粒小麦的同源性高达100%,与大麦的同源性为95.9%,显示出高度保守性;qRT-PCR检测该基因在2个小麦的4种组织中均有表达,但存在组织特异性,其中茎表达量最高,其次依次为根、叶和籽粒;‘Bm-2’根、茎、叶和籽粒中的表达量均显著高于‘Xm-30’。上述研究结果可为后续开展小麦MT解毒机理和功能等研究提供理论依据。 展开更多
关键词 小麦 金属硫蛋白 基因克隆 QRT-PCR 组织表达
IGF-1和PPARγ在不同猪种皮下脂肪中的差异表达研究 预览
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作者 陶璇 顾以韧 +6 位作者 梁艳 杨雪梅 钟志君 杨跃奎 陈晓晖 曾凯 吕学斌 《养猪》 2019年第5期65-68,共4页
为了研究mRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,试验采用荧光定量PCR技术(QRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中IGF-1和PPARγ的差异表达情况。结果显示:大约克夏猪IGF-1相对表达量显著或极显著高于所... 为了研究mRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,试验采用荧光定量PCR技术(QRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中IGF-1和PPARγ的差异表达情况。结果显示:大约克夏猪IGF-1相对表达量显著或极显著高于所有地方猪种(P<0.05或P<0.01),地方猪种中藏猪最高,显著高于丫杈猪、内江猪、青峪猪(P<0.05);大约克夏猪PPARγ相对表达量极显著高于青峪猪、藏猪(P<0.01),显著高于雅南猪(P<0.05),地方猪种中成华猪、丫杈猪显著高于青峪猪和藏猪(P<0.05)。相关分析显示,IGF-1、PPARγ分别与体脂率呈极显著和显著负相关(P<0.01,P<0.05),与多不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01);此外,IGF-1与单不饱和脂肪酸含量呈极显著负相关(P<0.01),PPARγ与肌内脂肪含量呈显著负相关(P<0.05)。 展开更多
关键词 IGF-1 PPARΓ QRT-PCR 背部皮下脂肪
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大豆JAZ基因家族的鉴定及其对疫霉胁迫的响应
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作者 黄建丽 邓肃霜 +4 位作者 沈甲诚 卜远鹏 赵晋铭 郭娜 邢邯 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期868-878,共11页
JAZ(Jasmonate ZIM-domain)蛋白是茉莉酸信号途径中重要的负调控因子,对植物的防御反应具有重要意义。然而,鲜有关于大豆JAZ基因的报道,为了揭示大豆中JAZ基因家族的特征和潜在功能,本研究利用生物信息学方法从大豆基因组中鉴定到24个JA... JAZ(Jasmonate ZIM-domain)蛋白是茉莉酸信号途径中重要的负调控因子,对植物的防御反应具有重要意义。然而,鲜有关于大豆JAZ基因的报道,为了揭示大豆中JAZ基因家族的特征和潜在功能,本研究利用生物信息学方法从大豆基因组中鉴定到24个JAZ基因,分别命名为GmJAZ1~GmJAZ24,并对这24个基因进行基因结构分析、保守基序分析、系统进化树构建、染色体定位、启动子顺式作用元件分析以及大豆疫霉菌胁迫下的响应分析。结果表明:(1)24个GmJAZs基因不均匀的分布在大豆的14条染色体上,其中9号染色体上分布的数目最多,为4个;(2)大豆、拟南芥和水稻的JAZ基因家族可分成5个亚组(C1~C5),其中大豆与拟南芥的JAZ基因亲缘关系最近;(3)该家族成员大多含有响应茉莉酸和脱落酸等激素的顺式作用元件,少数含有响应逆境胁迫的顺式作用元件;(4)大豆疫霉菌处理后,C4亚组成员显著上调表达,C1亚组成员微弱上调,而C2、C3和C5亚组成员下调表达,表明大豆JAZ基因家族成员对大豆疫霉菌的胁迫具有不同的响应模式。 展开更多
关键词 大豆 JAZ基因家族 生物信息学 大豆疫霉 QRT-PCR
抗草甘膦与磷高效吸收基因双价表达载体的构建及对甘蓝型油菜的遗传转化 预览
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作者 王朋宝 张晶晶 +3 位作者 石菁 王威 曹智 张金文 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期31-39,46共10页
【目的】甘蓝型油菜是产油效率较高的油料作物,在其生长过程中往往伴随着土壤环境中磷素匮乏及杂草胁迫,严重影响着最终产量和品质.因此,同时解决有效磷匮乏及草害问题已经成为目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了与草... 【目的】甘蓝型油菜是产油效率较高的油料作物,在其生长过程中往往伴随着土壤环境中磷素匮乏及杂草胁迫,严重影响着最终产量和品质.因此,同时解决有效磷匮乏及草害问题已经成为目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了与草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA )的相关目的基因,随后构建了双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化甘蓝型油菜,对转化植株进行PCR检测筛选,并通过qRT-PCR法对筛选的阳性植株内目的基因的表达进行定量分析.【结果】将PCR扩增得到的片段经琼脂糖凝胶电泳检测,结果符合预期.测序结果也与GenBank注册序列同源性高度一致,可用于后续试验.对转基因油菜进行草甘膦抗性筛选和PCR扩增检测,共获得5株转基因阳性植株.实时荧光定量结果发现转基因阳性植株内 phyA和EPSPS 基因的表达量均较对照植株有显著提高.【结论】本研究成功构建了抗草甘膦和磷高效吸收基因双价植物表达载体,获得的转基因阳性植株同时兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,为培育甘蓝型油菜优良种质资源提供了理论依据. 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 植酸酶基因 遗传转化 特异性启动子 QRT-PCR
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小麦丙氨酸-乙醛酸转氨酶基因(TaAGT2)的克隆、生物信息学预测及表达分析 预览
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作者 吴凡 徐德芳 +2 位作者 宋少帅 李超卿 穆平 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期895-902,共8页
光呼吸是植物细胞H2O2的重要来源,也是维持细胞氧化还原的重要成分,影响植物对生物和非生物逆境的应答,因此,挖掘与光呼吸有关的基因对提高植物的抗逆性具有重要意义。本研究以耐旱小麦品种青麦6号转录组数据为基础,通过RACE技术克隆得... 光呼吸是植物细胞H2O2的重要来源,也是维持细胞氧化还原的重要成分,影响植物对生物和非生物逆境的应答,因此,挖掘与光呼吸有关的基因对提高植物的抗逆性具有重要意义。本研究以耐旱小麦品种青麦6号转录组数据为基础,通过RACE技术克隆得到小麦 AGT2基因的全长cDNA,将其命名为 TaAGT2,并对其进行了生物信息学预测及表达模式分析。结果表明, TaAGT2开放阅读框长1 434bp,编码477个氨基酸。该蛋白属于亲水性稳定蛋白,定位于线粒体中,二级结构以α-螺旋(42.14%)和无规则卷曲(32.91%)为主。 TaAGT2基因包含AAT-I基因族保守区域,与二穗短柄草 AGT2的相似性高达97%。通过qRT-PCR对基因 TaAGT2在不同组织中(根、茎和叶)及4种非生物胁迫(低温、ABA、干旱、高盐)下的表达特性进行分析,结果表明, TaAGT2在根、茎和叶中均有表达,茎中的表达显著高于根和叶,在不同胁迫条件下上调表达,表明该基因可能参与调控植物的抗逆反应。 展开更多
关键词 小麦 AGT2 RACE 生物信息学 QRT-PCR
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茶树光敏色素基因家族成员的生物信息学及其表达量与黄酮含量的相关性分析 预览
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作者 莫晓丽 周子维 +3 位作者 把熠晨 武清扬 赖钟雄 孙云 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1173-1182,共10页
【目的】分析茶树光敏色素(PHY)基因(CsPHY)的生物学信息及不同采摘时间点茶叶中光敏色素基因表达量与黄酮含量的相关性,为茶叶适时采摘及品质调控提供理论参考。【方法】从茶树基因组数据库(CSA)中筛选出CsPHY基因家族成员,对其进行生... 【目的】分析茶树光敏色素(PHY)基因(CsPHY)的生物学信息及不同采摘时间点茶叶中光敏色素基因表达量与黄酮含量的相关性,为茶叶适时采摘及品质调控提供理论参考。【方法】从茶树基因组数据库(CSA)中筛选出CsPHY基因家族成员,对其进行生物信息学分析,并通过邻接法(NJ)构建系统发育进化树。以一天中不同时间点0:00(R0)、6:00(R6)、12:00(R12)和18:00(R18)采摘的乌龙茶品种肉桂鲜叶为试材,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CsPHY基因家族成员在不同时间点的表达量,并采用三氯化铝比色法检测茶叶中黄酮含量的日变化,以皮尔逊(Pearson)相关系数评估CsPHY基因相对表达量与黄酮含量的相关性。【结果】共筛选获得6个CsPHY基因家族成员,编码蛋白的氨基酸数量674~1142个,分子量为76126.75~126714.53Da,等电点(pI)为5.74~5.96,脂溶性系数为91.11~95.27,其中,CsPHY1基因属于PHYC亚族,CsPHY2和CsPHY4基因属于PHYA亚族,CsPHY3和CsPHY5基因属于PHYB亚族,CsPHY6基因属于PHYE亚族,说明CsPHY2和CsPHY4蛋白属于PhyI型光敏色素,CsPHY1、CsPHY3、CsPHY5和CsPHY6蛋白属于PhyII型光敏色素。6个CsPHY蛋白均与双子叶植物PHY蛋白的亲缘关系较近,其中,CsPHY2蛋白与水晶兰PHYA亚族蛋白的亲缘关系较近,CsPHY4蛋白与美味猕猴桃PHYA亚族蛋白的亲缘关系较近;CsPHY3和CsPHY5蛋白均与美味猕猴桃PHYB亚族蛋白的亲缘关系较近,且CsPHY5蛋白与葡萄PHYB亚族蛋白的亲缘关系相近;CsPHY1蛋白与河岸葡萄PHYC亚族蛋白的亲缘关系较近,CsPHY6蛋白与中华猕猴桃和河岸葡萄PHYE亚族蛋白的亲缘关系较近。CsPHY1、CsPHY3、CsPHY4和CsPHY5基因在R6时的表达量最高,其中,CsPHY4和CsPHY5基因在R6时的表达量显著高于其他时间点的表达量(P<0.05,下同),而CsPHY2和CsPHY6基因分别在R12和R18时的表达量达最高,其中CsPHY6基因在R18时的表达量显著高于R12时的表达量。在R0~R18时段内茶树鲜叶中� 展开更多
关键词 茶鲜叶 采摘时间 光敏色素基因 QRT-PCR 黄酮
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石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化 预览
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作者 俞演 古玉 +11 位作者 王承东 胡静 杨瑷宁 杨乔 李德生 张和民 邓林华 凌珊珊 左之才 彭广能 钟志军 马晓平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1449-1457,共9页
本试验旨在研究石膏样小孢子菌经皮肤感染小鼠后皮肤损伤组织中模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化规律。通过对C57BL/6小鼠皮下接种大熊猫源石膏样小孢子菌,分别在第3、7和14天取病变皮肤组织,经PAS染色和HE染色观... 本试验旨在研究石膏样小孢子菌经皮肤感染小鼠后皮肤损伤组织中模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化规律。通过对C57BL/6小鼠皮下接种大熊猫源石膏样小孢子菌,分别在第3、7和14天取病变皮肤组织,经PAS染色和HE染色观察孢子定植部位和病理损伤;分别在第3、6和12小时取病变皮肤组织,用荧光定量PCR检测受体mRNA的转录表达量;分别在第1、3、7和14天取样,用荧光定量PCR检测细胞因子mRNA的转录表达量。结果表明:石膏样小孢子菌感染小鼠后导致皮下脓肿,大量的炎性细胞浸润,并伴有角质层增厚。试验中模式识别受体Dectin-1、TLR-2和TLR-4的转录表达量增加(P<0.01),细胞因子IL-6、IL-1β、IL-23、 TGF-β、IL-17A、IL-17F和IL-22的转录表达量增加(P<0.01)。模式识别受体通过识别病原菌表面模式识别分子而引发免疫反应。本研究表明,机体感染石膏样小孢子菌后,模式识别受体表达显著增加,并通过识别菌体表面模式识别分子从而激活Th17途径,分化成熟的Th17细胞分泌细胞因子IL-22、IL-17A和IL-17F,从而发挥抗菌作用。 展开更多
关键词 石膏样小孢子菌 DECTIN-1 TLR-2 TLR-4 细胞因子 病理学检测 qRT-PCR
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