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金银花黄酮对过氧化氢诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用 预览
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作者 罗磊 张冰洁 +4 位作者 韦倩倩 樊金玲 马丽苹 关宁宁 朱文学 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期18-25,共8页
探讨金银花黄酮对RAW264.7巨噬细胞抗氧化活性的影响。通过过氧化氢诱导RAW264.7细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型,研究金银花黄酮低、中、高剂量组(62.5,125,250 mg/mL)对损伤细胞的保护作用。研究结果表明:质量浓度62.5~250 mg/mL范围... 探讨金银花黄酮对RAW264.7巨噬细胞抗氧化活性的影响。通过过氧化氢诱导RAW264.7细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型,研究金银花黄酮低、中、高剂量组(62.5,125,250 mg/mL)对损伤细胞的保护作用。研究结果表明:质量浓度62.5~250 mg/mL范围的金银花黄酮可显著促进RAW264.7细胞的增殖(P<0.05)。金银花黄酮各剂量组显著提高了细胞及细胞培养液中总抗氧化能力(P<0.05),显著提高了SOD、GSH-Px、CAT活性及GSH含量(P<0.05);显著降低了细胞及细胞培养液中MDA含量(P<0.05);显著降低了细胞中LDH活性并提高了细胞培养液中LDH活性(P<0.05)。金银花黄酮促进RAW264.7细胞的增殖,并且对过氧化氢诱导的RAW264.7细胞损伤有良好的保护作用,存在剂量依赖效应。本研究为金银花功能性食品及保健品的开发提供理论依据。 展开更多
关键词 金银花 黄酮 RAW264.7 过氧化氢 抗氧化
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台东荚蒾中一个新的齐墩果烷型三萜
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作者 吴云秋 黄云峰 +5 位作者 罗迪 邱莉 谢集照 徐焕基 武鑫铎 李哲明 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1260-1264,共5页
采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等色谱方法,对台东荚蒾乙酸乙酯部位进行分离,从中分离纯化得到7个三萜类化合物,根据其波谱数据和理化性质鉴定为3β,6β-二羟基齐墩果-11,13(18)-二烯-28-酸(1)、3β-羟基齐墩果-11,13(18)-二烯-... 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等色谱方法,对台东荚蒾乙酸乙酯部位进行分离,从中分离纯化得到7个三萜类化合物,根据其波谱数据和理化性质鉴定为3β,6β-二羟基齐墩果-11,13(18)-二烯-28-酸(1)、3β-羟基齐墩果-11,13(18)-二烯-28-酸(2)、12-烯-齐墩果-28-酸-3β-棕榈酸酯(3)、3β-乙酰古柯二醇(4)、科索酸(5)、熊果醇(6)和熊果酸(7)。其中,化合物1为新化合物,其绝对构型通过单晶衍射得以证实。化合物2~5为首次从荚蒾属中分离得到。采用LPS诱导的RAW264.7释放NO的细胞模型,评价了化合物1~7的体外抗炎活性,结果显示,与阳性对照槲皮素(IC50值为25.46±0.62μmol·L^-1)相比,化合物5显示出较强的NO抑制活性,其IC50值为25.52±0.56μmol·L^-1。 展开更多
关键词 荚蒾属 台东荚蒾 五环三萜 NO RAW264.7
衢枳壳黄酮组分抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的作用机制研究 预览
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作者 徐霄 汪洋 +2 位作者 王思为 钟松阳 楼丽君 《中国中医药科技》 CAS 2019年第4期529-532,共4页
目的:研究衢枳壳黄酮组分(the flavonoids from Quzhiqiao,TFQ)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的RAW264. 7细胞的抗炎作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)诱导RAW264. 7细胞建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓... 目的:研究衢枳壳黄酮组分(the flavonoids from Quzhiqiao,TFQ)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的RAW264. 7细胞的抗炎作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)诱导RAW264. 7细胞建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度TFQ对RAW264.7细胞活性的影响,RT-PCR法检测细胞炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β) mRNA表达情况,Western blot法和免疫荧光法分别检测细胞核因子-κB(NF-κB p65)表达情况和入核情况。结果:TFQ在10~100 mg·L^-1时,对RAW264. 7细胞活性无影响。RT-PCR结果表明,TFQ能够降低LPS诱导的RAW264. 7细胞炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达,以TFQ 100 mg·L^-1作用显著(P <0. 05);Western blot法和免疫荧光结果表明,TFQ能够显著抑制p65蛋白表达与入核。结论:TFQ具有抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症反应的作用,其机制可能与抑制p65活化减少炎性因子表达有关。 展开更多
关键词 衢枳壳 黄酮组分 RAW264.7 炎性因子 NF-κB 体外实验
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激活大麻素2型受体在LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制
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作者 袁清红 刘安鹏 +4 位作者 刘强胜 郑菲 张宗泽 王焱林 詹佳 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期978-982,共5页
目的探讨激活大麻素2型受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制。方法将巨噬细胞以1×105/mL的密度接种于6孔培养板(2 mL/孔),采用随机数字表... 目的探讨激活大麻素2型受体(Cannabinoid receptor 2,CB2R)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌中的作用及其可能机制。方法将巨噬细胞以1×105/mL的密度接种于6孔培养板(2 mL/孔),采用随机数字表法将其分为4组(n=6):对照组(C组)、LPS组(LPS组)、LPS+CB2R激动剂HU308组(LPS+HU308组)、LPS+CB2R激动剂HU308+3-甲基腺苷组(LPS+HU308+3-MA组)。LPS组、LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为1 μg/mL的LPS,孵育15 min时,LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 mmol/L的3-MA,继续孵育15 min,LPS+HU308组和LPS+HU308+3-MA组加入终浓度为10 μmol/L的HU308孵育24 h。采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-18的浓度;采用RT-PCR法检测ICAM-1和NLRP3 mRNA的表达水平,采用western blot法检测LC3和Beclin1的表达水平,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果与C组比较,LPS组TNF-α[(228.86±10.20) pg/mL vs (140.05±5.54) pg/mL、IL-1β[(363.62±8.14) pg/mL vs (244.82±9.11) pg/mL]和IL-18[(293.28±13.57) pg/mL vs.(202.84±9.54) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(5.88±0.32) vs.(1.00±0.03)]和NLRP3[(8.07±0.93) vs.(1.01±0.05)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.50±0.03) vs.(0.40±0.06)]和Beclin1[(0.51±0.04) vs.(0.16±0.03)]表达上调(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+HU308组TNF-α[(165.44±7.07) pg/mL]、IL-1β[(272.09±3.35) pg/mL]和IL-18[(220.41±6.01) pg/mL]的浓度降低(均P<0.05),ICAM-1[(3.21±0.35)]和NLRP3[(1.54±0.30)] mRNA表达降低(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.71±0.03)]和Beclin1[(0.71±0.02)]表达上调(均P<0.05);与LPS+HU308组比较,LPS+HU308+3-MA组TNF-α[(197.06±5.59) pg/mL]、IL-1β[(318.98±11.54) pg/mL]和IL-18[(243.33±8.71) pg/mL]的浓度升高(均P<0.05),ICAM-1[(4.04±0.21)]和NLRP3 [(5.87±0.77)] mRNA表达升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值[(0.44±0.08)]和Beclin1[(0.32±0.03)]表达下调(均P<0.05)。结论激活大麻素2型受体可抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症因子分泌,� 展开更多
关键词 大麻素2型受体 LPS 炎症因子 分泌 免疫调节 RAW264.7 巨噬细胞 自噬 NLRP3
骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性研究
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作者 曼则热姆·热杰普 木塔力甫·艾买提 +5 位作者 伊力亚斯·艾萨 冯学召 古丽努尔·阿不力米提 雷秀英 陈倩 米娜 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第4期938-944,共7页
目的探讨骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性。方法用不同浓度的骆驼蓬多糖干预,诱导NRK细胞自噬,用激光共聚焦显微镜观察自噬体,筛选出骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳干预浓度和时间范围;利用RAW264.7细胞,以1μg/mL脂多糖... 目的探讨骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性。方法用不同浓度的骆驼蓬多糖干预,诱导NRK细胞自噬,用激光共聚焦显微镜观察自噬体,筛选出骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳干预浓度和时间范围;利用RAW264.7细胞,以1μg/mL脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)建立体外细胞炎症模型;在骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳浓度和时间下进行干预,以CCK-8试验检测细胞活性,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用ELISA试剂盒检测炎症因子IL-1β和IL-6的分泌量。结果骆驼蓬多糖对NRK细胞诱导自噬的最佳时间为12 h,浓度范围为50~100μg/mL。骆驼蓬多糖干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型后,对细胞活力均无明显影响,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,细胞培养液中IL-6和IL-1β分泌量降低,与模型组有显著差异(P(27)0.05)。结论骆驼蓬多糖能抑制LPS刺激诱导的炎症因子的释放,诱导细胞自噬和凋亡,在50~100μg/mL范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。 展开更多
关键词 小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7 骆驼蓬多糖 脂多糖 IL-1Β IL-6
二氢丹参酮Ⅰ抑制脂磷壁酸(LTA)诱导的巨噬细胞炎症反应 预览
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作者 刘思蕊 钱峰 《世界最新医学信息文摘》 2019年第43期48-50,共3页
目的探究二氢丹参酮Ⅰ能否抑制脂磷壁酸(LTA)诱导的巨噬细胞炎症反应及其作用机制。方法以LTA为刺激剂,激活巨噬细胞,建立体外炎症模型,用Griees试剂法检测二氢丹参酮Ⅰ对LPS诱导的NO产生的影响,并用免疫蛋白印记法检测JNK、ERK、p-38、... 目的探究二氢丹参酮Ⅰ能否抑制脂磷壁酸(LTA)诱导的巨噬细胞炎症反应及其作用机制。方法以LTA为刺激剂,激活巨噬细胞,建立体外炎症模型,用Griees试剂法检测二氢丹参酮Ⅰ对LPS诱导的NO产生的影响,并用免疫蛋白印记法检测JNK、ERK、p-38、p65以及Akt磷酸化水平。结果二氢丹参酮Ⅰ能够抑制LTA诱导的NO产生,对JNK和ERK的活化无影响,但是可以抑制p38MAPK的活化,同时二氢丹参酮Ⅰ浓度依赖性地促进p65及Akt的活化。结论二氢丹参酮Ⅰ对LTA诱导的NO产生有显著抑制效果,其作用机制与抑制p38MAPK的活化有关。 展开更多
关键词 二氢丹参酮Ⅰ LTA MAPK RAW 264.7
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Toll样受体信号途径在RAW264.7细胞川崎病模型炎症反应中的作用及其机制研究 预览
7
作者 高吊清 白瑞 +4 位作者 宋晓苏 李亚蕊 张小平 李晓霞 边云飞 《中国药物与临床》 CAS 2019年第2期210-213,350共5页
目的探讨Toll样受体(TLR)2信号途径在RAW264.7细胞川崎病模型炎症反应中的作用及其分子机制。方法构建TLR2-干扰小RNA(siRNA),合成2对特异性针对TLR2基因的siRNA序列,并用于转染RAW264.7细胞。实时荧光聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测TL... 目的探讨Toll样受体(TLR)2信号途径在RAW264.7细胞川崎病模型炎症反应中的作用及其分子机制。方法构建TLR2-干扰小RNA(siRNA),合成2对特异性针对TLR2基因的siRNA序列,并用于转染RAW264.7细胞。实时荧光聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测TLR2-siRNA对干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)诱导RAW264.7 细胞p38促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)、基质多属蛋白酶(MMP)-9表达的影响,乳胶增强免疫比浊定量法检测培养基中高敏C反应蛋白(hsCRP)水平的变化;检测p38MAPK抑制剂SB 203580对LCWE 诱导RAW264.7 细胞MMP-9表达的影响。结果与对照组相比,LCWE刺激组p-p38MAPK、MMP-9的表达及hs-CRP水平都有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),与LCWE刺激组相比,TLR2-siRNA+LCWE刺激组的p-p38MAPK、MMP-9表达和hsCRP水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与LCWE刺激组相比,SB203580+LCWE刺激组的MMP-9表达减轻,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR2-siRNA可以有效减轻LCWE刺激造成的p-p38MAPK、MMP-9、hs-CRP表达升高。p38MAPK抑制剂SB203580对LCWE诱导RAW264.7 细胞MMP-9表达有抑制作用。TLR2参与了RAW264.7细胞川崎病模型中的炎症反应,其机制可能与p38MAPK途径有关。 展开更多
关键词 受体 川崎病 RAW264.7
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长春市冬季大气PM2.5对RAW264.7细胞毒性机制研究
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作者 郑梅竹 坚伟宁 +2 位作者 张薇 范亚军 倪秀珍 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期5-8,共4页
目的研究长春市冬季大气PM2.5对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)的毒性作用。方法采用2016年11月16日至2017年3月18日期间基于空气质量指数的五级及以上雾霾天气采集的长春市大气PM2.5对RAW264.7细胞进行体外染毒,终浓度分别... 目的研究长春市冬季大气PM2.5对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞)的毒性作用。方法采用2016年11月16日至2017年3月18日期间基于空气质量指数的五级及以上雾霾天气采集的长春市大气PM2.5对RAW264.7细胞进行体外染毒,终浓度分别为0、50、100、200、400μg/ml。以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力,用酶标仪测定胞内活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量及Ca^2+浓度,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,用ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果PM2.5染毒浓度为100、200、400μg/ml时,RAW264.7细胞存活率明显低于对照组,LDH、ROS水平和Ca^2+浓度明显高于对照组,TNF-α和IL-6含量明显高于对照组,细胞凋亡率亦随染毒浓度的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论长春市冬季重污染大气PM2.5可使RAW264.7细胞产生炎症损伤和氧化应激,进而引起细胞凋亡。 展开更多
关键词 PM2.5 RAW264.7细胞 炎症 氧化损伤 细胞凋亡
鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及比较 预览
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作者 祁芳菲 楼滨 杨青 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期445-453,共9页
目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态... 目的建立鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型并比较其生物学特征。方法体外培养鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞,经氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激后,油红O染色,于荧光倒置显微镜下观察泡沫细胞形态及脂质富集情况。采用qRT-PCR技术检测ox-LDL对细胞内炎性因子表达的影响;流式细胞术检测ox-LDL对细胞凋亡的影响;酶标仪分别检测ox-LDL对细胞内脂质过氧化标志物活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平的影响;HPLC检测ox-LDL对鼠、人源巨噬细胞内催化色氨酸沿犬尿氨酸途径(kynurenine pathway,KP)分解代谢的限速酶吲哚胺2,3-双加氧化酶1(indoleamine 2,3 dioxygenase 1,IDO1)活性的影响。结果鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞经ox-LDL处理后,大量脂质在细胞内富集沉积,形成泡沫细胞。ox-LDL既可诱发巨噬细胞内炎性因子高表达,也会引起ROS和MDA水平显著升高,表明ox-LDL可以诱导鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞内炎症反应和脂质过氧化产生。ox-LDL更容易引发人源THP-1巨噬细胞的凋亡,而对鼠源RAW264.7巨噬细胞凋亡却无明显影响。ox-LDL在鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞中均可激活KP。结论鼠源RAW264.7和人源THP-1巨噬细胞均可通过ox-LDL处理来建立稳定的鼠、人源巨噬细胞源性泡沫细胞模型。 展开更多
关键词 泡沫细胞 RAW264.7 THP-1 炎症因子 活性氧(ROS) 丙二醛(MDA) 吲哚胺2 3-双加氧化酶1(IDO1)
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团状雪灵芝化学成分及其抗炎活性的研究
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作者 王国军 杨莉 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期225-229,共5页
目的研究团状雪灵芝的化学成分及其抗炎活性。方法利用MCI、D101大孔树脂、固相萃取和反相C18半制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过1HNMR、13CNMR波谱技术鉴定结构。采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,探究团状雪灵芝... 目的研究团状雪灵芝的化学成分及其抗炎活性。方法利用MCI、D101大孔树脂、固相萃取和反相C18半制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过1HNMR、13CNMR波谱技术鉴定结构。采用脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,探究团状雪灵芝中化学成分对巨噬细胞经LPS刺激后产生的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)炎症因子的影响,评价其抗炎活性。结果从团状雪灵芝中分离得到8个黄酮类化合物,分别鉴定为:小麦黄素(Ⅰ)、槲皮素(Ⅱ)、异槲皮素(Ⅲ)、山柰酚(Ⅳ)、小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅴ)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅵ)、isoquercitrin-6″-O-p-hydroxybenzoate(Ⅶ)、杨梅素-3′-O-β-D-吡喃木糖苷(Ⅷ)。抗炎活性检测表明:化合物Ⅰ~Ⅷ对炎症因子TNF-α和IL-1β均呈现不同程度的抑制作用,其中,化合物Ⅴ~Ⅷ对炎症因子的抑制作用较强。结论化合物Ⅱ~Ⅷ为首次从该植物中分离得到,其中,化合物Ⅴ~Ⅷ对炎症因子的抑制作用最强,其IC50最小仅为9.34μg·mL^-1,研究首次发现了团状雪灵芝的抗炎活性成份。 展开更多
关键词 团状雪灵芝 分离 化学成分 黄酮 炎症 RAW264.7 脂多糖 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素1Β
Lnc RNA-GAS5对BCG感染小鼠巨噬细胞后细胞坏死的调控作用
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作者 徐雅楠 于嘉霖 +3 位作者 马臣杰 曾瑾 吴晓玲 邓光存 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期858-868,共11页
【背景】LncRNA-GAS5是由Gas5基因编码的功能性LncRNA分子,对细胞极化、细胞凋亡、坏死和自噬等多种生物学过程具有重要的调控作用。【目的】探讨LncRNA-GAS5对卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7坏... 【背景】LncRNA-GAS5是由Gas5基因编码的功能性LncRNA分子,对细胞极化、细胞凋亡、坏死和自噬等多种生物学过程具有重要的调控作用。【目的】探讨LncRNA-GAS5对卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7坏死的调控作用。【方法】构建LncRNA-GAS5的过表达及干扰载体,分别转染巨噬细胞RAW264.7后使用BCG感染,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率,通过透射电镜观察细胞坏死形态,利用碘化丙啶(Propidine iodide,PI)单染法流式细胞仪检测细胞坏死率,通过实时荧光定量PCR和Western blot法研究坏死相关调控因子RIP1、RIP3和MLKL的表达水平。【结果】BCG感染巨噬细胞后,LncRNA-GAS5表达水平显著上调;同时,采用LncRNA-GAS5过表达载体单独转染或结合BCG感染后,巨噬细胞存活率均下降且细胞坏死率显著增加。同时坏死关键调控因子RIP1、RIP3和MLKL的mRNA及蛋白表达水平均显著上调(P<0.001),而GAS5干扰载体可有效抑制这一效果。【结论】LncRNA-GAS5通过上调坏死相关因子RIP1、RIP3及MLKL的表达促进BCG感染巨噬细胞后诱导的细胞坏死,研究结果为进一步探讨LncRNA-GAS5对BCG感染巨噬细胞后细胞坏死调控的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 LncRNA-GAS5 RAW264.7细胞 卡介苗 细胞坏死
苦橙叶精油化学成分及抗炎作用研究 预览
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作者 叶一丹 张楠 +1 位作者 李玉红 姚雷 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期760-765,802共7页
为探究苦橙叶精油的抗炎作用。实验采用气相-质谱联用法(GC-MS)分析精油成分,并建立脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型,用Griess法检测一氧化氮(NO)含量评价其体外抗炎作用,随后进一步通过巴豆油致小鼠耳肿胀模型和鸡蛋清致小鼠足... 为探究苦橙叶精油的抗炎作用。实验采用气相-质谱联用法(GC-MS)分析精油成分,并建立脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞炎症模型,用Griess法检测一氧化氮(NO)含量评价其体外抗炎作用,随后进一步通过巴豆油致小鼠耳肿胀模型和鸡蛋清致小鼠足肿胀模型评价其体内抗炎作用。结果表明苦橙叶精油成分以酯类、醇类物质为主;25μg/mL浓度能显著抑制RAW 264.7细胞NO的释放;中浓度苦橙叶精油能明显减轻小鼠耳肿胀程度;低、中、高浓度苦橙叶精油均对小鼠足肿胀模型有炎症缓解作用,并于肿胀前期呈浓度依赖性。以上实验证明苦橙叶精油在体外和体内具有一定抗炎作用。 展开更多
关键词 苦橙叶精油 抗炎 RAW 264.7细胞 耳肿胀 足肿胀
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睾酮对结核分枝杆菌感染的RAW264.7细胞自噬的影响
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作者 袁乐永 柯尊琼 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期785-789,共5页
目的探讨睾酮对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的鼠源巨噬细胞RAW264.7细胞自噬的影响及其分子机制。方法MTB感染RAW264.7细胞24h后,给予10-8mol/L睾酮处理24h;采用透射电镜观察细胞自噬情况,Westernblot法检测细胞... 目的探讨睾酮对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的鼠源巨噬细胞RAW264.7细胞自噬的影响及其分子机制。方法MTB感染RAW264.7细胞24h后,给予10-8mol/L睾酮处理24h;采用透射电镜观察细胞自噬情况,Westernblot法检测细胞自噬相关蛋白以及MAPKs信号通路蛋白。结果睾酮干预MTB感染的RAW264.7细胞后自噬体、自噬特异标志物LC3Ⅱ均明显增加(P<0.01),通路蛋白JNK磷酸化水平明显上调(P<0.001)。结论睾酮可能通过激活JNK信号通路诱导MTB感染的RAW264.7细胞自噬。 展开更多
关键词 睾酮 结核分枝杆菌 RAW264.7 细胞自噬
Krupple样因子6及诱导型一氧化氮合酶在铜绿假单胞菌上清液感染RAW264.7凋亡过程中的表达 预览
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作者 刘梦茹 王雅琪 +3 位作者 张伟 姚富荣 苍林 柴文戍 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期940-944,共5页
目的 检测Krupple样因子6(Krupple-like factor 6,KLF6)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)在铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)上清液感染的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)中的表达水平,探讨K... 目的 检测Krupple样因子6(Krupple-like factor 6,KLF6)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)在铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)上清液感染的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)中的表达水平,探讨KLF6及iNOS在PA上清液感染RAW264.7凋亡过程中的作用。方法 MTT法检测PA上清液对RAW264.7增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率;Hoechst33342染色检测RAW264.7细胞核形态变化;Western blot检测PA上清液对KLF6、iNOS表达的影响。结果 PA上清液抑制RAW264.7的增殖,且其抑制作用呈浓度和时间依赖性,PA上清液能够明显增加RAW264.7的凋亡比例,促进KLF6、iNOS的表达。结论 PA能够抑制RAW264.7的增殖,其可能通过增加KLF6及iNOS的表达,从而诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 RAW264.7 凋亡 KLF6 INOS 炎症
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外泌体miR-125a-5p对NIH/3T3细胞增殖和凋亡的影响
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作者 张建会 王永星 +5 位作者 郝长付 于兴浩 黄婼旋 魏静静 杨果 姚武 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2019年第7期669-675,共7页
[背景]矽肺发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用,其中成纤维细胞是肺纤维过程中关键的效应细胞。近年来研究发现,成纤维细胞的增殖除了受转化生长因子-β等细胞因子的调节之外,外泌体作为细胞间信号的载体也在其中发挥重要的作用。... [背景]矽肺发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用,其中成纤维细胞是肺纤维过程中关键的效应细胞。近年来研究发现,成纤维细胞的增殖除了受转化生长因子-β等细胞因子的调节之外,外泌体作为细胞间信号的载体也在其中发挥重要的作用。外泌体mi RNAs介导的细胞间信号可能在Si O2诱导的成纤维细胞转分化和增殖中发挥作用。前期研究发现mi R-125a-5p是一条差异表达的miRNAs。[目的]探讨外泌体miR-125a-5p对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和凋亡的影响。[方法]培养RAW264.7细胞,收取上清提取外泌体,并采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和Western blot对其进行鉴定。设立对照组和SiO2组(100μg/mL SiO2),观察SiO2粉尘对RAW264.7细胞外泌体及其中miR-125a-5p表达的影响。建立RAW264.7与NIH/3T3的共培养模型,分为对照组、SiO2组(100μg/mL)和外泌体组(10μg/mL外泌体作用于NIH/3T3,并且该组无RAW264.7),24、48 h时采用Western blot和CCK-8检测NIH/3T3细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和增殖活性。培养NIH/3T3细胞,分为模拟剂组、抑制剂组和对照组,于转染24、48 h后收集细胞,采用荧光定量PCR、CCK-8和流式细胞术分别检测NIH/3T3细胞中mi R-125a-5p的表达、细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡的情况。[结果]透射电镜下观察到外泌体具有圆形或茶托样的膜结构。纳米颗粒跟踪分析结果显示外泌体呈聚团或散在分布,粒径大多在30~150 nm。Western blot可检测到外泌体膜标志蛋白TSG101、Alix,未检测到内质网蛋白calnexin。与对照组相比,SiO2粉尘刺激后RAW264.7细胞外泌体含量增多;外泌体膜标志蛋白TSG101和Alix相对表达量升高;mi R-125a-5p的相对表达量上升(P <0.05)。共培养24、48 h检测结果显示,与对照相比,Si O2组和外泌体组collagenⅠ、α-SMA相对表达量均上升;细胞增殖活性升高(P <0.05)。NIH/3T3细胞转染24 展开更多
关键词 miR-125a-5p 外泌体 增殖 凋亡 RAW264.7 NIH/3T3
miR-21调控TIMP-3影响LPS诱导下RAW264.7细胞中MMP-2和MMP-9表达 预览
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作者 陈翔 黄莹 +1 位作者 龙春艺 廖品琥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1295-1299,共5页
目的:探讨miR-21对LPS刺激下RAW264.7中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响及机制。方法:对RAW264.7细胞给予10 μg/ml LPS刺激,24 h后采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测miR-21和MMP-2、MMP-9在LPS组与对照组中的表达水平,并运... 目的:探讨miR-21对LPS刺激下RAW264.7中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响及机制。方法:对RAW264.7细胞给予10 μg/ml LPS刺激,24 h后采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测miR-21和MMP-2、MMP-9在LPS组与对照组中的表达水平,并运用Pearson分析miR-21和MMP-2、MMP-9表达的相关性。构建外源性miR-21干扰的LPS刺激下RAW264.7细胞模型,采用Western blot检测miR-21对MMP-2、MMP-9和TIMP-3蛋白表达影响。结果: LPS组miR-21、MMP-2和MMP-9表达水平较对照组上升,两者呈正相关( P <0.05)。通过miR-21模拟物(miR-21 mimic)外源性上调miR-21表达,MMP-2、MMP-9表达升高,TIMP-3表达降低( P <0.05);通过miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor)抑制miR-21表达,MMP-2、MMP-9表达降低,TIMP-3表达升高( P <0.05)。结论: miR-21能促进RAW264.7细胞MMP-2和MMP-9表达,其机制可能与靶向抑制TIMP-3有关。 展开更多
关键词 MIR-21 基质金属蛋白酶 脓毒症 RAW264.7
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天名精根提取物调控TLRs信号抑制RAW264.7细胞炎症的研究 预览
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作者 乐翊飞 汪俊成 +4 位作者 唐利华 吴尹洁 徐扬 王萃 卢德赵 《浙江中医药大学学报》 CAS 2019年第4期360-367,共8页
[目的]阐明天名精根提取物对RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制。[方法]采集野生天名精全株,处理得天名精根粉末,制备天名精根乙醇和石油醚提取物,并以高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测其中主要成分... [目的]阐明天名精根提取物对RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制。[方法]采集野生天名精全株,处理得天名精根粉末,制备天名精根乙醇和石油醚提取物,并以高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测其中主要成分;采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、灭活的金黄色葡萄球菌(heat-inactivated preparations of Staphylococcus aureus pathogens,SAC)刺激RAW264.7细胞,构建体外炎症模型。以MTT法检测细胞增殖,qPCR检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Toll样受体-2(Toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response 88,MyD88)、核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65蛋白表达。[结果]与正常对照组比较,LPS或SAC刺激后RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达增加(P<0.01),NF-κB蛋白与mRNA表达增加(P<0.01);LPS刺激后TLR-4、MyD88 mRNA表达增加(P<0.01,P<0.05),SAC刺激后TLR-2、MyD88 m RNA表达增加(P<0.01)。天名精根提取物干预后,与LPS组或SAC组比较,RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达减低(P<0.01),同时NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达也减低(P<0.01);TLR-4和MyD88 mRNA表达明显低于LPS组(P<0.01,P<0.05),TLR-2和MyD88 mRNA表达表达明显低于SAC组(P<0.01,P<0.05)。[结论]天名精根提取物可以抑制由LPS和灭活的金黄色葡萄球菌引起的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制TLRs-NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 天名精 RAW264.7 脂多糖 金黄色葡萄球菌 中药提取物 炎症
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c-fos在破骨细胞分化中的作用及机制 被引量:1
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作者 朱伟 孙琴 +2 位作者 张博燃 马净植 李文强 《临床口腔医学杂志》 2019年第1期3-7,共5页
目的:探究c-fos在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的作用及可能的表观遗传学作用机制。方法:用30 ng/m L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和50 ng/m L核因子κB受体活化素配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,达指定天数后,TRAP染色... 目的:探究c-fos在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的作用及可能的表观遗传学作用机制。方法:用30 ng/m L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和50 ng/m L核因子κB受体活化素配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,达指定天数后,TRAP染色观察破骨细胞形成,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测c-fos和破骨细胞分化相关基因mRNA表达水平。过表达和抑制c-fos后,诱导RAW264.7细胞分化,TRAP染色观察破骨细胞形成,qRT-PCR检测c-fos和破骨细胞分化相关基因的mRNA表达水平。利用DIANA、miRDB、PicTar、Target Scan 4个生物信息学软件预测可能调控c-fos表达的microRNA。结果:c-fos在破骨细胞分化过程中逐渐上调。过表达c-fos促进破骨细胞分化,抑制c-fos抑制破骨细胞分化。生物信息学分析提示miR-101a-3p和miR-101b-3p可能是c-fos基因的上游microRNA。结论:c-fos促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化,miR-101a-3p和miR-101b-3p可能对c-fos基因表达有调控作用。 展开更多
关键词 C-FOS RAW264.7 细胞分化 根尖周炎 MICRORNA
利用CRISPR/Cas9系统构建Prdx6基因敲除的RAW264.7细胞系 预览
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作者 翟菲菲 全芷仪 +12 位作者 王路鹿 张士军 鞠丹迪 水一鸣 常江 常恒祯 胡盼 李岩松 卢士英 周玉 柳增善 李兆辉 任洪林 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期36-40,共5页
利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉... 利用CRISPR/Cas9系统构建敲除Prdx6基因的RAW264.7小鼠巨噬细胞系,为探讨Prdx6与布鲁菌感染及胞内寄生的关系构建细胞模型。针对Prdx6基因的第1外显子设计sgRNA,构建重组表达载体Prdx6-pX459-sgRNA,将重组质粒转染RAW264.7细胞,嘌呤霉素初步筛选。单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。结果表明,在敲除细胞株基因组中存在碱基缺失,导致移码突变。说明成功获得敲除Prdx6基因的RAW264.7细胞系。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 RAW264.7 Prdx6 移码突变 布鲁菌
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巴特日七味丸不同部位提取物抗炎镇痛活性的筛选
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作者 李淑艳 包黎明 +2 位作者 包晓华 李淑红 王玉华 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期38-42,共5页
目的筛选蒙药巴特日七味丸不同提取物的抗炎活性,并考察活性部位的镇痛作用。方法采用对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖的影响和脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子、白介素6的影响等方法筛选巴特日七味丸的抗炎活性部位;采用... 目的筛选蒙药巴特日七味丸不同提取物的抗炎活性,并考察活性部位的镇痛作用。方法采用对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖的影响和脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子、白介素6的影响等方法筛选巴特日七味丸的抗炎活性部位;采用冰乙酸致小鼠疼痛和小鼠热刺激反应考察巴特日七味丸活性部位的镇痛作用。结果巴特日七味丸乙酸乙酯-正丁醇部位提取物的抗炎活性较强。结论巴特日七味丸不同部位提取物均具有抗炎活性,其中乙酸乙酯-正丁醇部位的活性较强,且与巴特日七味丸水提物的镇痛作用无显著性差异,可能为巴特日七味丸的有效部位。 展开更多
关键词 巴特日七味丸 蒙药 抗炎作用 镇痛 活性部位 小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7 脂多糖 冰乙酸 扭体反应 热板法
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