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靶向c-myc基因的siRNA抑制喉癌细胞系Hep-2的研究 被引量:1
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作者 唐智 王继群 +3 位作者 吴新一 张涛 林雪梨 山艳春 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期399-402,共4页
目的:探讨siRNA靶向人c-myc基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的抑制作用。方法:根据人c-myc基因设计和合成siRNA和随机的siN.C作为阴性对照.通过转染载体Lipofectamine 2000脂质体转染Hep-2细胞,进行MTT、形态学和实时PCR法... 目的:探讨siRNA靶向人c-myc基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的抑制作用。方法:根据人c-myc基因设计和合成siRNA和随机的siN.C作为阴性对照.通过转染载体Lipofectamine 2000脂质体转染Hep-2细胞,进行MTT、形态学和实时PCR法检测.观察其干扰效果。结果:①MTT结果显示人端粒酶siRNA能有效抑制Hep-2细胞增殖;②实时PCR结果显示转染组与阴性对照组和空白对照组相比.c-mycmRNA表达明显减弱,转染组S3 c-mycmRNA抑制率达到94%;③形态学结果显示人c-mycsiRNA能有效抑制Hep-2细胞增殖,肿瘤细胞异形性减小。结论:靶向c-myc的siRNA能显著抑制喉鳞状细胞癌生长增殖。 展开更多
关键词 喉肿瘤 鳞状细胞 RNA 小分子干扰 基因治疗
趋化因子受体CXCR4小干扰RNA对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用 预览 被引量:1
2
作者 许超 孙延平 +3 位作者 徐昕昀 徐燕 王全兴 王强 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期 470-473,共4页
目的:探讨趋化因子受体CXCR4小干扰RNA(siRNA)对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用.方法:采用RT-PCR、Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR4在大肠癌细胞株SW480、SW620、LoVo 细胞的表达及迁移能力.将与CXCR4 mRNA互补的 si... 目的:探讨趋化因子受体CXCR4小干扰RNA(siRNA)对人大肠癌细胞株迁移的抑制作用.方法:采用RT-PCR、Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR4在大肠癌细胞株SW480、SW620、LoVo 细胞的表达及迁移能力.将与CXCR4 mRNA互补的 siRNA及非抑制性双链RNA(Non-silencing dsRNA),在脂质体介导下以150 nmol/L终浓度转染大肠癌细胞SW480,以RT-PCR和Western印迹法检测CXCR4表达的变化,Transwell迁移实验检测大肠癌细胞SW480迁移的变化.结果:大肠癌细胞SW480高表达CXCR4,大肠癌细胞LoVo低表达CXCR4,SW620的CXCR4表达水平介于二者之间.与LoVo 细胞相比,SW480和SW620迁移细胞明显增多(P<0.01).与对照组、脂质体组和Non-silencing dsRNA组相比,siRNA组SW480细胞内CXCR4 mRNA和蛋白均明显降低,细胞迁移被明显抑制 (P<0.01).结论:CXCR4 siRNA可通过下调CXCR4的表达抑制人大肠癌细胞SW480的迁移. 展开更多
关键词 受体 CXCR4 RNA 小分子干扰 肠肿瘤 肿瘤转移
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骨桥蛋白下调对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响 预览 被引量:4
3
作者 侯志波 郑杰 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期 542-546,共5页
目的观察骨桥蛋白(osteopontin, OPN)下调后对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响.方法构建针对OPN的siRNA(small interference RNA)表达质粒, 用脂质体方法转染PC3细胞.RT-PCR和Western blot检测转染后PC3细胞OPN 的表达; MTT比色法和流... 目的观察骨桥蛋白(osteopontin, OPN)下调后对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响.方法构建针对OPN的siRNA(small interference RNA)表达质粒, 用脂质体方法转染PC3细胞.RT-PCR和Western blot检测转染后PC3细胞OPN 的表达; MTT比色法和流式细胞仪检测PC3细胞OPN下调对细胞的生长和细胞周期的影响;软琼脂生长实验检测OPN下调后对PC3细胞集落形成的影响.结果 RT-PCR和Western blot证实经RNA干扰介导的PC3细胞存在OPN表达下调,转染的细胞生长受抑制,出现细胞周期S期阻滞和细胞凋亡,在软琼脂上的细胞集落形成率下降.结论经RNA干扰的选择性OPN下调可使PC3细胞在S期阻滞并出现细胞凋亡,细胞的恶性程度下降. 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 细胞学 RNA 小干扰 骨桥蛋白 细胞凋亡 恶性类癌综合征 基因表达
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Effects of RNA Interference Combined with Ultrasonic Irradiation and SonoV ue Microbubbles on Expression of STAT3 Gene in Keratinocytes of Psoriatic Lesions 预览
4
作者 冉立伟 王昊 +2 位作者 兰东 贾红侠 于思思 《华中科技大学学报:医学英德文版》 SCIE CAS 2017年第2期279-285,共7页
The most effective sequence of small interfering RNA(si RNA) silencing STAT3 of psoriatic keratinocytes(KCs) was screened out,and the effects of the most effective si RNA combined with ultrasonic irradiation and Sono ... The most effective sequence of small interfering RNA(si RNA) silencing STAT3 of psoriatic keratinocytes(KCs) was screened out,and the effects of the most effective si RNA combined with ultrasonic irradiation and Sono Vue microbubbles on the expression of STAT3 of KCs and the dose-and time-response were investigated.Three chemically-synthetic si RNAs targeting STAT3 carried by Lipofectamine 3000 were transfected into KCs,and the effects on STAT3 expression were detected,then the most effective si RNA was selected for the subsequent experiments.The negative controls of siR NA(si RNA-NC) labeled with Cy3 carried by Lipofectamine 3000 combined with ultrasonic irradiation and Sono Vue microbubbles were transfected into KCs,then the optimal parameters of ultrasonic irradiation were determined.The most effective si RNA carried by Lipofectamine 3000 combined with ultrasonic irradiation at the optimal parameters and Sono Vue microbubbles was transfected into KCs,and the dose-and time-response of RNA interference was determined.The effect of RNA interference by the most effective si RNA at the optimal time and dose carried by Lipofectamine 3000 combined with ultrasonic irradiation and Sono Vue microbubbles(LUS group) was compared with that only carried by Lipofectamine 3000(L group).The results showed that si RNA-3 achieved the highest silencing efficacy.0.5 W/cm2 and 30 s were selected as the parameters of ultrasonic irradiation.The si RNA-3 carried by Lipofectamine 3000 combined with ultrasonic irradiation and Sono Vue microbubbles could effectively knock down the STAT3 expression at m RNA and protein levels in dose-and time-dependent manners determined at 100 nmol/L with maximum downregulation on m RNA at 48 h,and on protein at 72 h after transfection.The LUS group achieved the highest silencing efficacy.It was concluded that si RNA-3 carried by Lipofectamine 3000 combined with ultrasonic irradiation and SonoV ue microbubbles could effectively knock down the STAT3 expression in psoriatic KCs,and the optimized transfecti 展开更多
关键词 角质形成细胞 RNA干扰 STAT3 超声辐照 基因治疗 银屑病 微泡 脂质体介导
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siRNA抑制乙肝病毒的研究进展 被引量:2
5
作者 苏蓝 张萍 +1 位作者 汪杨俊琦 钟儒刚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期102-107,共6页
乙型肝炎作为一种发病率高、死亡率高的传染性疾病,已严重威胁人类健康,乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)是诱发乙型肝炎的重要病因。目前,最主要的治疗方法是运用抗病毒药物控制病情,但这些药物都不能完全治愈乙型肝炎且复发率高。... 乙型肝炎作为一种发病率高、死亡率高的传染性疾病,已严重威胁人类健康,乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)是诱发乙型肝炎的重要病因。目前,最主要的治疗方法是运用抗病毒药物控制病情,但这些药物都不能完全治愈乙型肝炎且复发率高。近年来,RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)逐渐成为有效、快速治疗乙型肝炎的新疗法。利用RNA干扰技术体外合成针对HBV基因的siRNA,选择适当的载体将其运送至靶细胞,使HBV基因沉默,从而抑制病毒复制,可有效达到治疗乙肝的效果。本文围绕siRNA沉默HBV基因的设计原理、递送载体、靶向策略、以及治疗效果与应用前景等方面进行了系统综述,为今后siRNA治疗乙肝的临床应用提供参考。 展开更多
关键词 乙肝病毒 RNA干扰 小干扰RNA
哺乳动物中RNA干扰沉默基因表达的研究进展
6
作者 曹腾威 谷凌云 +2 位作者 黄和 高振 郦明芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期24-31,共8页
RNA干扰及相关基因沉默导致的代谢通路变化已经彻底改变了人们对基因调控的理解。基因沉默技术已经被用来作为一种研究工具来控制某些细胞基因的表达,特异的siRNA导入不同的细胞需要不同的转染载体才能达到最大的转染效率,并且不会产... RNA干扰及相关基因沉默导致的代谢通路变化已经彻底改变了人们对基因调控的理解。基因沉默技术已经被用来作为一种研究工具来控制某些细胞基因的表达,特异的siRNA导入不同的细胞需要不同的转染载体才能达到最大的转染效率,并且不会产生较大的细胞毒性。近年来尤其是碳纳米管等新型纳米材料载体的应用拓展了人们对传统脂质体和病毒载体的认识。首先介绍RNA干扰技术及其发展历程,随后对利用几种不同的载体来设计和进行RNA干扰试验进行了比较,最后对最初的脂质体到生物病毒再到高分子纳米材料介导的RNA干扰在疾病的治疗和临床诊断进行了展望。 展开更多
关键词 RNA干扰 基因沉默 转染 碳纳米管
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RNAi在抗肿瘤研究中的应用
7
作者 郁兵 淡飞妮 罗雯 《科学技术与工程》 2009年第20期 6114-6121,共8页
RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。... RNA干扰作用(RNA interferenc,RNAi)是近年来发现的一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默现象(post transcriptional gene silencing,PTGS)。随着RNAi作用机制的逐渐阐明,已被广泛应用于多种领域。它不但是研究基因功能的有力工具,而且为特异性基因治疗提供了新的技术手段。RNAi技术的进一步发展,为肿瘤基因治疗开拓了一条新的途径。本文介绍RNAi的作用机制与抗肿瘤应用的研究进展。 展开更多
关键词 RNA干扰作用 小分子干扰RNA 双链RNA 基因沉默
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非编码RNA和RNA沉默 被引量:1
8
作者 毛新国 董玉琛 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第1期 6-12,22,共8页
生物体内存在大量的非编码RNA,它们形态各异,功能也千差万别,在生物的生长、发育、分化进程中扮演着不同的角色,尤其是siRNA,它是RNA沉默的诱因。RNA沉默是真核生物特有的现象,它需要一系列因子的参与,其中RNA依赖性的RNA聚合酶... 生物体内存在大量的非编码RNA,它们形态各异,功能也千差万别,在生物的生长、发育、分化进程中扮演着不同的角色,尤其是siRNA,它是RNA沉默的诱因。RNA沉默是真核生物特有的现象,它需要一系列因子的参与,其中RNA依赖性的RNA聚合酶是沉默起始的关键,Dicer酶是形成siRNA的基础,而RNA沉默诱导复合体(RSIC)等是发生RNA沉默“链式反应”的关键因子。 展开更多
关键词 非编码RNA RNA沉默 小干扰RNA RNA依赖性RNA聚合酶 RNA沉默诱导复合体
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Tat-LK15运载NR2B siRNA治疗慢性炎性疼痛的效果 预览 被引量:1
9
作者 杨雪 吴昊鹏 +1 位作者 彭捷 陆建华 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第3期333-336,共4页
目的探讨大鼠鞘内注射细胞穿透肽Tat-LK15介导NR2B siRNA治疗大鼠慢性炎性疼痛的可行性。方法健康雄性SD大鼠72只,6周龄,体质量180~200 g,采用随机数字表法分为4组(n=18):空白对照组(C组)、慢性炎性痛模型组(CFA组)、Tat-LK15/NR... 目的探讨大鼠鞘内注射细胞穿透肽Tat-LK15介导NR2B siRNA治疗大鼠慢性炎性疼痛的可行性。方法健康雄性SD大鼠72只,6周龄,体质量180~200 g,采用随机数字表法分为4组(n=18):空白对照组(C组)、慢性炎性痛模型组(CFA组)、Tat-LK15/NR2B siRNA组(si Tat-LK15组)和Tat-LK15/阴性对照siRNA组(nc Tat-LK15组)。除C组不给予任何处理外,其余大鼠右后趾皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)制作慢性炎性痛模型。CFA组、si Tat-LK15组及nc Tat-LK15组于模型制备后第1、3、5天分别鞘内注射生理盐水、Tat-LK15/NR2B siRNA及Tat-LK15/阴性对照siRNA 10μL。每组取12只大鼠于造模前1 d及鞘内注射后3、7、14、21 d时测定机械缩足反应阈(PWMT)和热缩足反应潜伏期(PWTL)。每组取6只大鼠于鞘内注射后7 d处死后取脊髓,检测鞘内注射对大鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响。结果鞘内注射后7 d,si Tat-LK15组大鼠脊髓NR2B蛋白表达下调。鞘内注射后3、7、14及21 d,si Tat-LK15组PWMT与PWTL与CFA组相比明显升高,差异有统计学意义(P〈0.01),而nc Tat-LK15组PWMT与PWTL较CFA组相比差异无统计学意义(P〉0.05)。结论鞘内注射Tat-LK15/NR2B siRNA可有效减轻CFA所致大鼠慢性炎性疼痛。 展开更多
关键词 注射 鞘内 细胞穿透肽 基因疗法 转染 RNA 小分子干扰 受体 N-甲基-D-天冬氨酸 炎性痛
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新型siRNA抗流感病毒活性的研究 预览
10
作者 张永欣 赵斐 +2 位作者 王宇佳 张瑞欣 岑山 《中国医药生物技术》 2017年第3期207-214,共8页
目的设计合成具有广谱性抗流感病毒活性的siRNA,分别在细胞内和小鼠体内进行活性评价。方法从甲型流感病毒毒株A/WSN/33的基因(PB2、PB1、PA、M、NS)中提取高度保守的序列设计合成siRNA。通过293T-Gluc系统和单轮感染流感病毒系统对si... 目的设计合成具有广谱性抗流感病毒活性的siRNA,分别在细胞内和小鼠体内进行活性评价。方法从甲型流感病毒毒株A/WSN/33的基因(PB2、PB1、PA、M、NS)中提取高度保守的序列设计合成siRNA。通过293T-Gluc系统和单轮感染流感病毒系统对siRNA进行活性筛选。然后在细胞水平检测siRNA对流感病毒复制的抑制作用,并且经雾化给药途径对siRNA的体内抗流感活性进行评价。结果活性筛选得到4条具有50%以上抑制活性的siRNA(siPB2-1、siPB2-2、siPB1-2和siNS-1),EC50值在0.4-1.3 nmol/L之间。4条siRNA对另外两株A/PR/8/34和B/Beijinghaidian/1386/2013(Victoria系)流感病毒均表现出较好的抑制活性。动物实验表明,siPB2-1经雾化给药途径可以对流感病毒感染的小鼠产生一定的保护作用。结论新合成的siRNA在细胞水平和小鼠体内均具有良好的抗流感病毒活性。 展开更多
关键词 流感病毒 A型 RNA 小分子干扰 动物实验
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小分子RNA干扰Notch1基因对肾癌Caki-1细胞增殖的影响 预览 被引量:1
11
作者 张振 王凯 +2 位作者 曹振龙 邵志强 郭丰富 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第2期292-295,共4页
目的:探讨Notch1在肾透明细胞癌株中的表达,采用短片段RNA(small interferhtg RNA,siRNA)干扰技术沉默肾透明细胞癌中Notch1的表达,并观察其对Caki-1增殖的影响。方法:体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2及人肾癌细胞786—0和Cak... 目的:探讨Notch1在肾透明细胞癌株中的表达,采用短片段RNA(small interferhtg RNA,siRNA)干扰技术沉默肾透明细胞癌中Notch1的表达,并观察其对Caki-1增殖的影响。方法:体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2及人肾癌细胞786—0和Caki-1。实时荧光定量PCR(RT—PCR)检测Notch1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测Notch1蛋白的含量。特异性Notch1 siRNA干扰肾癌Caki-1细胞,用Lipofectamine2000转染48h后,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测其中Notch1 mRNA、蛋白的表达变化,CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果:Notch1在肾癌细胞株中的表达要明显高于正常肾小管上皮细胞,差异具有统计学意义(P〈0.05)。siRNA—Notch1干扰以后可以明显降低Caki-1细胞中Notch1 mRNA和蛋白的表达,差异具有统计学意义(P〈0.05),同时检测Caki-1细胞增殖能力也随之下降(P〈0.05)。结论:Notch1在肾癌透明细胞癌中高表达,下调Notch1信号通路可以抑制肾细胞癌Caki—1的增殖,调节肾癌的生长。 展开更多
关键词 NOTCH1基因 RNA小分子干扰 肾细胞癌 Caki-1细胞 细胞增殖
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亲环素A小干扰RNA对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响 被引量:2
12
作者 严金川 李瑛 +2 位作者 王翠平 袁伟 王中群 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期593-597,共5页
目的:观察慢病毒介导的亲环素A(cyclophilin A,CyPA)小干扰RNA对载脂蛋白E基因敲除( ApoE^-/-)小鼠动脉粥样斑块的影响。方法采用ApoE^-/-小鼠颈动脉硅胶圈置入法快速建立动脉粥样斑块模型,然后将小鼠分为CyPA小干扰RNA慢病毒载... 目的:观察慢病毒介导的亲环素A(cyclophilin A,CyPA)小干扰RNA对载脂蛋白E基因敲除( ApoE^-/-)小鼠动脉粥样斑块的影响。方法采用ApoE^-/-小鼠颈动脉硅胶圈置入法快速建立动脉粥样斑块模型,然后将小鼠分为CyPA小干扰RNA慢病毒载体治疗组( CyPA-RNAi-LV组)和绿色荧光蛋白-慢病毒载体对照组(NC-GFP-LV组),采用局部注射法将10μl(1.0×108 TU/ml)慢病毒载体局部作用硅胶圈置入处10 min,干预ApoE^-/-小鼠颈动脉斑块。采用苏木素-伊红染色法观察各组小鼠动脉粥样斑块大小。采用实时聚合酶链反应( RT-PCR)法检测各组小鼠动脉粥样硬化斑块中CyPA mRNA的表达水平,Western blot法检测其蛋白水平。结果转染6周后,CyPA-RNAi-LV组小鼠动脉粥样硬化斑块进展慢于NC-GFP-LV组,斑块面积分别为(9085±671)μm^2(18021±1901)μm^2两组比较差异有统计学意义(P<0.05),斑块中脂质含量较NC-GFP-LV组少[(17.8±4.5)%比(28.9±6.3)%, P<0.05],胶原含量较NC-GFP-LV组多[(35.1±5.2)%比(24.2±4.8)%, P<0.05],内膜/中膜比值NC-GFP-LV组较高(0.65±0.12比0.36±0.11,P<0.05),管腔狭窄较NC-GFP-LV组轻(内膜/管腔比值,0.18±0.02比0.33±0.03, P<0.05)。 CyPA-RNAi-LV组小鼠促炎因子和基质金属蛋白酶表达水平均较NC-GFP-LV组低( P均<0.05)。结论慢病毒介导的CyPA小干扰RNA能抑制ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的进展,减轻斑块局部炎症反应。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 亲环素A RNA 小分子干扰
siRNA沉默肾上腺髓质素基因对黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响 被引量:2
13
作者 李志加 孙立新 +1 位作者 陆洁 段昕所 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期878-881,共4页
目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默。肾上腺髓质素(ADM)基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测干扰效果,并选出干扰效果最好的siRNA。用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组;转染非特异... 目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默。肾上腺髓质素(ADM)基因对黑素瘤细胞系A375增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测干扰效果,并选出干扰效果最好的siRNA。用筛选出的最有效siRNA转染A375细胞为实验组;转染非特异序列的细胞为阴性对照组,未转染的细胞为空白对照组。免疫细胞化学法蛋白水平检测干扰效果;噻唑蓝法(M1Tr)分iiJJN定沉默ADM基因24、48h后A375细胞增殖的变化;流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48h后A375细胞的凋亡情况。结果qRT-PCR显示ADM-siRNA-2干扰效果最好。免疫细胞化学结果显示转染ADM-siRNA-2后ADM蛋白的表达显著低于未转染组和阴性对照组。MTr结果显示,转染ADM-siRNA-2的细胞24、48h吸光度A值为0.389±O.0375,0.469±0.0330,低于空白对照组(0.574±0.0733、0.685±0.0154)和阴性对照组(0.548±0.0376、0.676±0.0374),差异均有统计学意义(P值均〈0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P值均〉0.05)。FCM检测显示转染ADM-siRNA-2组的细胞早期凋亡率为(20.200±6.046)%,高于空白对照组(1.667±0.340)%和阴性对照组(4.587±1.294)%,差异有统计学意义(P值均〈0.05),空白对照组和阴性对照组比较,差异无统计学意义(P值均〉0.05)。结论siRNA沉默ADM基因对A375增殖有抑制作用;而对凋亡则有明显促进作用。 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 肾上腺髓质素 黑色素瘤 细胞系 肿瘤 流式细胞术
靶向碱性成纤维生长因子的小分子干扰RNA诱导胶质瘤U251细胞凋亡机制的初步探讨 被引量:5
14
作者 吴静超 冯学泉 +4 位作者 王金环 刘俊 张飚 徐新女 刘宏胜 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期928-932,共5页
目的初步探讨靶向碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的小分子干扰RNA(siRNA)诱导胶质瘤U251细胞凋亡的作用机制。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组,空载组和实验组按感染复数(MOI)=100分别进行空载体腺病毒(Ad—null)和含... 目的初步探讨靶向碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的小分子干扰RNA(siRNA)诱导胶质瘤U251细胞凋亡的作用机制。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组,空载组和实验组按感染复数(MOI)=100分别进行空载体腺病毒(Ad—null)和含有bFGF小分子干扰RNA的重组腺病毒(Ad-bFGF-siRNA)转染,转染72h后通过Western blot方法检测相关蛋白的表达,并应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化,多组间均数比较采用单因素方差分析(One—way ANOVA)。结果实验组细胞经转染Ad—bFGF—siRNA72h后,Western blot结果显示,与对照组和空载组相比bFGF蛋白表达明显降低,同时Cytochrome C、Caspase-3及Bax凋亡相关蛋白的表达增强,Bcl—xl和Bcl-2蛋白的表达降低;经流式细胞仪检测,线粒体膜电位高的细胞所占的比例实验组为74.4%±4.7%与对照组的92.1%±2.5%、空载组的90.9%±1.8%相比明显下降,差异有统计学意义(F=28.805,P〈0.05);激光共聚焦显微镜的结果显示实验组的红色荧光与绿色荧光的比值为0.83±0.12与对照组的1.36±0.40和空载组的1.32±0.35相比明显下降,差异具有统计学意义(F=7.920,P〈0.05)。结论靶向bFGF的siRNA可能通过线粒体途径诱导胶质瘤U251细胞非淋菌性尿道凋亡。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子2 RNA 小分子干扰 神经胶质瘤 细胞系 肿瘤 细胞 凋亡
COX-2 siRNA诱导人肝癌Hep3B细胞凋亡实验研究 预览
15
作者 刘靳波 何鹏 +2 位作者 朱喜丹 陶华林 王开正 《泸州医学院学报》 2012年第1期 30-34,共5页
目的:观察COX-2在人肝癌细胞Hep3B中的表达及小干扰1KNA(smallinterfering RNA,siRNA)沉默COX-2基因对COX-2mRNA和蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:将siRNA-COX-2质粒载体转染Hep3B细胞,wsT-8法检测细胞增殖抑制情况,透射... 目的:观察COX-2在人肝癌细胞Hep3B中的表达及小干扰1KNA(smallinterfering RNA,siRNA)沉默COX-2基因对COX-2mRNA和蛋白表达、细胞增殖及凋亡的影响。方法:将siRNA-COX-2质粒载体转染Hep3B细胞,wsT-8法检测细胞增殖抑制情况,透射电镜观察凋亡小体出现情况;筛选单克隆细胞株Hep3B-sh,采用RT-PCR和Westernblotting检测COX-2mRNA和蛋白情况。结果:siRNA-COX-2能抑制Hep3B细胞的增殖,稳定转染pshRNA-COX-2可使Hep3B细胞中COX-2mRNA及蛋白的表达明显减弱(P〈0.01);透射电镜下可见凋亡小体出现,发生凋亡细胞数增加。结论:COX-2siRNA能有效抑制肝癌Hep3B细胞中COX-2的表达和细胞的增殖,促进凋亡发生,为肝细胞癌基因治疗提供实验依据和治疗靶点。 展开更多
关键词 肝癌 小分子干扰 COX-2 细胞凋亡 HEP3B细胞
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KIR2DS2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
16
作者 窦立萍 达万明 +8 位作者 王畅 康慧媛 卢学春 范辉 薄剑 靳海杰 高春记 韩晓萍 于力 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2008年第2期 128-130,共3页
目的:构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体。方法:针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pSicoR.GFP载体[含U... 目的:构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体。方法:针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaI和XhoI酶切后的pSicoR.GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV—shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV—shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV.shKIR2DS2。293T细胞测定病毒滴度为6×10^8TU/ml。结论:成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体。 展开更多
关键词 RNA小分子干扰 KIR2DS2 慢病毒属
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与眼科相关的分子生物学研究进展 预览 被引量:1
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作者 何世坤 赵明威 陈有信 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期 859-861,共3页
近10年来分子生物学领域的研究取得了重大进展,包括RNA干扰技术、蛋白质组学、分子图谱及纳米技术等的实际应用。生物医学与其他学科的相互交叉和促进又为生物医学的发展提供了强大动力,眼科领域的进展亦是如此。为了加深对某些全身... 近10年来分子生物学领域的研究取得了重大进展,包括RNA干扰技术、蛋白质组学、分子图谱及纳米技术等的实际应用。生物医学与其他学科的相互交叉和促进又为生物医学的发展提供了强大动力,眼科领域的进展亦是如此。为了加深对某些全身疾病与眼病发生的内在联系及其治疗机制的理解与认识,笔者就与眼科研究相关的分子生物学领域的最新进展予以简要综述,以供同行参考。 展开更多
关键词 RNA 小分子干扰 蛋白质组学 纳米技术
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人核小体结合蛋白1小分子干扰RNA重组慢病毒抑制非激素依赖性前列腺癌体内生长的实验研究 预览 被引量:5
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作者 蒋宁 周利群 +1 位作者 姚鲲 黄晨 《中华临床医师杂志(电子版)》 2010年第2期 25-28,共4页
目的探讨重组慢病毒介导的人核小体结合蛋白1(NSBP1)基因沉默对非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145移植瘤生长的抑制作用及机制。方法慢病毒lentivirus-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145。用转染细胞成瘤,观察抑瘤效果。运用实... 目的探讨重组慢病毒介导的人核小体结合蛋白1(NSBP1)基因沉默对非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145移植瘤生长的抑制作用及机制。方法慢病毒lentivirus-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145。用转染细胞成瘤,观察抑瘤效果。运用实时RT-PCR和Western blot方法检测移植瘤中NSBP1、cyclinB1与Bcl-2的mRNA和蛋白的表达。结果体内实验证实NSBP1表达水平的降低,对肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤率没有影响,但对肿瘤的生长有明显抑制作用。同时随着NSBP1表达水平的降低,cyclinB1和Bcl-2的mRNA及蛋白的表达也降低。结论NSBP1-RNAi-lentivirus重组慢病毒能有效抑制DU145细胞移植瘤的生长,NSBP1可能通过调控cyclinB1、Bcl-2基因的变化影响肿瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 RNA 小分子干扰 HMGN1蛋白质 慢病毒属 印迹法 蛋白质
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SUMO-1基因siRNA抑制肝癌细胞SMMC-7721生长的研究 预览 被引量:3
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作者 郭武华 袁丽华 +2 位作者 肖志华 罗良平 张吉翔 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第1期 4-6,81,共4页
目的:研究SUMO-1基因siRNA沉默人肝癌细胞SMMC-7721中SUMO-1基因表达的效果及对SMMC-7721生长的影响。方法:将人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段转染体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,采用RT-PCR、Westernblot方法在mRNA及蛋白水平检... 目的:研究SUMO-1基因siRNA沉默人肝癌细胞SMMC-7721中SUMO-1基因表达的效果及对SMMC-7721生长的影响。方法:将人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段转染体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,采用RT-PCR、Westernblot方法在mRNA及蛋白水平检测siRNA沉默肝癌细胞中SUMO-1基因的效果。通过MTT、流式细胞仪及TUNEL试验检测SUMO-1基因沉默后对肝癌细胞生长的影响。结果:人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段能显著地抑制SMMC-7721中SUMO-1基因的表达,48h抑制率可达73.43%。MTT结果显示肝癌细胞SMMC-7721转染SUMO-1siRNA后生长明显受到抑制,流式细胞仪检测G2期细胞明显增加,但TUNEL试验未发现凋亡细胞。结论:SUMO-1siRNA沉默肝癌细胞SMMC-7721中SUMO-1基因效果良好,SUMO-1基因控制SMMC-7721的生长,SUMO-1基因是肝癌生长的一个重要的调控因素。 展开更多
关键词 肝肿瘤 细胞系 肿瘤 RNA 小分子干扰 基因沉默
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整合素β1表达下调对非小细胞肺癌细胞迁移和黏附能力的影响 预览 被引量:5
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作者 鞠立霞 周彩存 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期188-193,共6页
目的:构建整合素β1基因特异的RNA干扰质粒,探讨抑制整合素β1蛋白表达对非小细胞肺癌(non-small cell lungcarcinoma,NSCLC)细胞生物学行为的影响。方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,选择设计1条能转录短发夹... 目的:构建整合素β1基因特异的RNA干扰质粒,探讨抑制整合素β1蛋白表达对非小细胞肺癌(non-small cell lungcarcinoma,NSCLC)细胞生物学行为的影响。方法:根据GenBank数据库提供的整合素β1基因核苷酸序列,选择设计1条能转录短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,命名为17-2;同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为N。将设计序列与pUC19质粒载体连接,转化感受态大肠埃希菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒。2种重组质粒分别转染NSCLC耐药细胞株PC-9/AB2细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定转染株。荧光显微镜、实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测整合素β1 mRNA及蛋白表达水平。细胞划痕实验和黏附实验比较整合素β1对细胞迁移和黏附能力的影响。结果:G418筛选出稳定转染2种质粒的PC-9/AB2细胞,荧光显微镜下可见满视野带绿色荧光的细胞,转染17-2组细胞中整合素β1的mRNA及蛋白表达水平明显低于转染N组细胞及母细胞PC-9/AB2。划痕实验和黏附实验表明,整合素β1抑制可以使细胞迁移和黏附能力明显降低。结论:成功构建针对整合素β1基因的特异性shRNA真核表达载体,转染NSCLC细胞后可抑制整合素β1蛋白表达。整合素β1表达抑制后细胞迁移和黏附能力明显降低。 展开更多
关键词 非小细胞肺 RNA干扰 整合素类 基因表达 细胞运动
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