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转敲低MSTN基因绵羊重构胚的移植及鉴定
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作者 杜文敬 李昊 +3 位作者 薛超 朴善花 王春生 安铁洙 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期539-543,共5页
为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)... 为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发育至桑椹胚比率(分别为15.6%和33.0%)相比,差异无统计学意义;将重构胚移植23只受体后,获得1只流产胎儿,对其进行PCR鉴定,结果显示MSTN基因干涉序列已整合入流产胎儿的基因组中。 展开更多
关键词 绵羊 MSNT基因 RNA干涉 转基因 体细胞核移植
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敲低KHDRBS3基因抑制人卵巢癌CAOV-3细胞增殖
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作者 马晓微 任丽莉 +3 位作者 张宁兮 刘超 朱艳 肖建英 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期1062-1066,共5页
目的探讨含KH RNA结合结构域信号转导相关分子3(KHDRBS3)基因对体外培养的人卵巢癌CAOV-3细胞增殖的影响。方法取对数生长期细胞,分为未转染组、无关小干涉RNA(siRNA)序列转染组、KHDRBS3-siRNA转染组。采用反转录PCR及Western blo... 目的探讨含KH RNA结合结构域信号转导相关分子3(KHDRBS3)基因对体外培养的人卵巢癌CAOV-3细胞增殖的影响。方法取对数生长期细胞,分为未转染组、无关小干涉RNA(siRNA)序列转染组、KHDRBS3-siRNA转染组。采用反转录PCR及Western blot法验证KHDRBS3基因的沉默效果;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法比较不同组别CAOV-3细胞增殖情况;采用流式细胞术检测不同处理组CAOV-3细胞的细胞周期分布。结果 KHDRBS3-siRNA转染后可明显降低CAOV-3细胞KHDRBS3的mRNA和蛋白水平,敲低CAOV-3细胞KHDRBS3水平后,细胞的增殖能力明显降低,G0/G1期细胞比例增加、S期细胞比例降低、G2/M期细胞比例无明显变化。结论敲低KHDRBS3的水平可使CAOV-3细胞发生G0/G1期阻滞,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 含KH RNA结合结构域信号转导相关分子3(KHDRBS3) 卵巢癌 CAOV-3细胞 细胞周期 RNA干涉
利用颗粒细胞筛选绵羊VEGFR有效干扰片段的研究
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作者 邹云龙 石国庆 +5 位作者 阿依木古丽 张国华 周平 杨具田 徐红伟 曹忻 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第7期10-15,291共7页
为了进一步探究血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,试验采用电穿孔技术(Electroporation)将针对血管内皮生长因子受体(VEGFR)中的两个受体FLT1和KDR/FLK-1设计的6条双链小RNA导入到绵羊颗粒细胞内,通... 为了进一步探究血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,试验采用电穿孔技术(Electroporation)将针对血管内皮生长因子受体(VEGFR)中的两个受体FLT1和KDR/FLK-1设计的6条双链小RNA导入到绵羊颗粒细胞内,通过实时定量PCR检测FLT1和KDR/FLK-1表达量的变化,筛选出针对VEGFR的有效干扰片段。结果表明:试验组F2(FLT1—siRNA-2)第1~3天的FLT1mRNA相对表达量分别为7.17×10^-6±4.97×10^-8、5.92×10^-6±4.73×10^-8和1.14×10^-5±2.84×10^-7,极显著低于其他FLT1试验组(P〈0.01),且FLT1mRNA相对表达量相差100倍或10倍;试验组Kl(KDR/FLK-1-siRNA-1)第1~3天KDR/FLK-1mRNA相对表达量分别为1.46×10^-7±6.08×10^-9、2.80×10^-7±1.82×10^-8和7.99×10^-7±2.60×10^-8,极显著低于其他KDR/FLK-1试验组(P〈0.01),且KDR/FLK-1mRNA相对表达量相差100倍或10倍。从第4天开始试验组F2FLT1 mRNA相对表达量和试验组K1KDR/FLK-1mRNA相对表达量逐渐增加,到达第9天与其他组趋于相近。最终确定针对FLT1和KDR/FLK-1最有效的干扰片段分别是FLT1-siRNA-2和KDR/FLK-1-siRNA-1。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子(VEGF) 血管内皮生长因子受体(VEGFR) RNA干涉 颗粒细胞 绵羊
棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及表达分析
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作者 朱笑婷 刘娟娟 +1 位作者 孙姣姣 李继刚 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第4期1468-1476,共9页
本研究对棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Helicoverpa armigera serine protease inhibitor,Haspi)基因的基本特征、分布情况及功能进行了初步探究。通过与已报道的家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因同源比对,利用RT-PCR技术成功克隆到3条与家蚕... 本研究对棉铃虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Helicoverpa armigera serine protease inhibitor,Haspi)基因的基本特征、分布情况及功能进行了初步探究。通过与已报道的家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因同源比对,利用RT-PCR技术成功克隆到3条与家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因相似性高的Haspi基因,分别命名为:Haspi-5、Haspi-6和Haspi-10。实时定量PCR结果表明3个基因在棉铃虫各组织部位均有转录,但在不同组织部位处的表达水平差异显著。Haspi-5基因在表皮中的表达水平最高;Haspi-6基因在头部的转录水平远远高于其他组织部位;Haspi-10基因在前肠中表达水平最高,中肠的转录水平也相比其他组织较高。构建表达Haspi-5、Haspi-6基因的ds RNA的载体,用表达ds RNA的HT115菌液喂食,其中Haspi-5基因在棉铃虫的转录水平明显下降,约降低了6.5倍,而Haspi-6基因转录水平略有下降但并不明显,约降低了1.2倍,但是没有观察到明显的表型变化。上述研究为Haspi基因的功能及棉铃虫防治研究提供科学依据。 展开更多
关键词 棉铃虫 丝氨酸蛋白酶抑制剂基因 实时定量PCR RNA干涉
辐射诱导分子lnc-RI稳定敲低细胞系建立及其功能 预览
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作者 常诚 沈丽萍 +4 位作者 张学清 李琳 李孝鑫 王治东 周平坤 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2016年第1期25-30,共6页
制备lnc-RI干涉表达的慢病毒颗粒,建立lnc-RI稳定下调的He La细胞系,探索lnc-RI对细胞辐射敏感性的作用。首先将lnc-RI特异性干涉序列插入干涉表达载体p GLV2中,并制备慢病毒颗粒;然后,将慢病毒颗粒感染He La细胞,建立lnc-RI稳定下调的... 制备lnc-RI干涉表达的慢病毒颗粒,建立lnc-RI稳定下调的He La细胞系,探索lnc-RI对细胞辐射敏感性的作用。首先将lnc-RI特异性干涉序列插入干涉表达载体p GLV2中,并制备慢病毒颗粒;然后,将慢病毒颗粒感染He La细胞,建立lnc-RI稳定下调的细胞系,并通过RT-PCR检测不同干涉序列对lnc-RI表达的干涉效果;最后,通过平板克隆形成实验分析lnc-RI表达下调对He La细胞放射敏感性的影响。结果显示,成功制备了携带lnc-RI干涉序列的慢病毒颗粒,并成功感染He La细胞,通过RT-PCR实验鉴定获得两株lnc-RI稳定敲低细胞系。克隆形成实验发现,与对照相比,lnc-RI敲低的He La细胞系的放射敏感性增加。因此,初步证实lnc-RI表达下调增加He La细胞放射敏感性。 展开更多
关键词 长链非编码RNA lnc-RI 慢病毒 RNA干涉 电离辐射
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TMV和CMV病毒外壳蛋白基因双靶向的RNA干涉载体构建 预览
6
作者 尹蕾 唐凯悦 +2 位作者 张跃新 李猷 律凤霞 《湖北农业科学》 2016年第3期759-763,共5页
依据RNA干扰机制构建多病毒基因靶向的RNA干涉双元载体系统,为培育抗病毒复合侵染的番茄品种提供遗传转化载体。以烟草病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)病毒外壳蛋白基因作为RNA干扰靶标基因,针对病毒株系间外壳蛋白基因同源区域设... 依据RNA干扰机制构建多病毒基因靶向的RNA干涉双元载体系统,为培育抗病毒复合侵染的番茄品种提供遗传转化载体。以烟草病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)病毒外壳蛋白基因作为RNA干扰靶标基因,针对病毒株系间外壳蛋白基因同源区域设计靶序列引物,经RT-PCR获得两段靶标基因的DNA靶序列。借助T载体将两段靶序列连接成一条DNA序列。酶切后正向、反向锚定连接到p UCCRNAi中间载体的克隆位点,形成靶序列在载体中的双向重复结构;重复结构酶切后插入含超强启动子的p C2300-35s-OCS表达载体,重组的表达载体质粒电击转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中,完成RNAi双元载体系统的构建。 展开更多
关键词 烟草病毒病(TMV) 黄瓜花叶病毒(CMV) 番茄 RNA干涉 载体构建
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油菜种子低亚油酸和亚麻酸含量异交稳定技术的建立
7
作者 郎春秀 王伏林 +3 位作者 吴学龙 石江华 陈锦清 吴关庭 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1716-1721,共6页
为降低油菜种子中的亚油酸和亚麻酸含量并使之在异交条件下保持基本稳定,以高油品种CY2作为受体亲本,采用RNA干涉技术沉默油菜内源Bn FAD2基因的表达,抑制油酸脱饱和反应。育成的3个独立转基因株系的亚油酸和亚麻酸含量下降到6%以下,其... 为降低油菜种子中的亚油酸和亚麻酸含量并使之在异交条件下保持基本稳定,以高油品种CY2作为受体亲本,采用RNA干涉技术沉默油菜内源Bn FAD2基因的表达,抑制油酸脱饱和反应。育成的3个独立转基因株系的亚油酸和亚麻酸含量下降到6%以下,其中亚油酸含量较受体亲本降低78.2%-86.5%,亚麻酸含量降低53.4%-65.8%。将3个转基因株系与2个亚油酸和亚麻酸含量较高的常规品种正反交,F1种子中这2种脂肪酸的含量依然保持在与转基因亲本相仿的低水平。由此可知,通过RNA干涉技术沉默Bn FAD2基因的表达可赋予油菜低亚油酸和亚麻酸含量的异交稳定特性。这一特性的获得对于今后培育异交稳定的高油酸油菜新品种具有重要意义。 展开更多
关键词 油菜 亚油酸 亚麻酸 FAD2基因 RNA干涉
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水稻细胞色素P450基因家族成员CYP81A6基因RNAi载体构建 被引量:1
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作者 田迪 刘早利 +2 位作者 陈亚红 王春台 刘新琼 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期370-373,共4页
水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以c DNA为模板扩增3’非翻译区的特异片断,将目的产物连接到T载体上... 水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以c DNA为模板扩增3’非翻译区的特异片断,将目的产物连接到T载体上,经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序。测序结果表示,目的片断已正确克隆到T载体上。然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301,通过分子检测表明,CYP81A6的RNAi载体构建成功,有助于后续的基因功能和作用机理的研究。 展开更多
关键词 水稻 CYP81A6 RNA干涉 基因克隆
敲低STAT3基因可下调存活蛋白(survivin)水平促进U87MG胶质瘤细胞凋亡 被引量:2
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作者 王雷 刘艳波 +1 位作者 赵信理 沈维高 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期789-792,796共5页
目的探讨信号转导子与转录激活子3(STAT3)特异性小干扰RNA(siRNA)对U87MG胶质瘤细胞的促凋亡作用及其作用机制。方法体外培养U87MG胶质瘤细胞,利用MTT法观察si STAT3质粒对细胞增殖的影响,通过流式细胞术及吖啶橙染色观察其对细胞... 目的探讨信号转导子与转录激活子3(STAT3)特异性小干扰RNA(siRNA)对U87MG胶质瘤细胞的促凋亡作用及其作用机制。方法体外培养U87MG胶质瘤细胞,利用MTT法观察si STAT3质粒对细胞增殖的影响,通过流式细胞术及吖啶橙染色观察其对细胞凋亡影响,反转录PCR和Western blot法检测下调STAT3对存活蛋白(survivin)的调控效应。结果 si STAT3质粒可明显抑制U87MG胶质瘤细胞增殖,敲低STAT3可明显促进胶质瘤细胞凋亡,下调STAT3水平可明显降低survivin mRNA和蛋白水平。结论敲低U87MG细胞STAT3可下调survivn水平、促进胶质瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 胶质瘤 信号转导子与转录激活子3(STAT3) RNA干涉 凋亡 SURVIVIN
褐飞虱NlTgo基因的克隆及功能研究 预览
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作者 陈龙飞 万品俊 +2 位作者 王渭霞 傅强 朱廷恒 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期653-660,共8页
转录因子Tango(Tgo)在昆虫神经元发生、血细胞生成、性别决定、肠道发育等过程中发挥重要作用。克隆了褐飞虱Tango基因(NlTgo),应用荧光定量PCR和RNAi探索了NlTgo在褐飞虱中的表达动态和生物学功能。结果表明,NlTgo的开放阅读框为20... 转录因子Tango(Tgo)在昆虫神经元发生、血细胞生成、性别决定、肠道发育等过程中发挥重要作用。克隆了褐飞虱Tango基因(NlTgo),应用荧光定量PCR和RNAi探索了NlTgo在褐飞虱中的表达动态和生物学功能。结果表明,NlTgo的开放阅读框为2007bp,推测编码669个氨基酸残基。多序列比对表明NlTgo与已知的Tgo高度同源,其中与人体虱(Pediculus humanus corporis)Tgo的一致性达68%。系统进化分析表明,NlTgo与豌豆长管蚜(Acyrthosiphon pisum)、始红蝽(Pyrrhocoris apterus)和臭虫(Cimex lectularius)的Tgo在系统发育树中形成一个类群。时空表达谱表明NlTgo在褐飞虱1龄、2龄时期高表达,在卵期表达量较低;在卵巢中表达量最高,在体壁的表达量较低。RNAi结果表明,注射ds NlTgo后4d,NlTgo的表达量较空白对照组显著降低了77%,并导致若虫不能正常蜕皮而死亡。其中,处理5d后褐飞虱的存活率仅为23%,显著低于注射dsGFP的对照组(98%)。结果显示,NlTgo与褐飞虱的生长发育有关,可作为防治褐飞虱的潜在靶标。 展开更多
关键词 褐飞虱 TANGO RNA干涉 蜕皮 害虫防治
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RNA干涉对心血管损伤过程的影响 预览
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作者 段丽 《湖北科技学院学报:医学版》 2016年第4期366-368,共3页
RNA干涉也称RNA沉默,由反义RNA介导作用。反义RNA通常是一段短的非编码蛋白质的单链小分子RNA(microRNA),一般位于大分子RNA链的基因间隔区,并由其剪切而来,自身不被翻译成蛋白质,能与其互补mRNA分子特异结合而使之降解。RNA干涉可调... RNA干涉也称RNA沉默,由反义RNA介导作用。反义RNA通常是一段短的非编码蛋白质的单链小分子RNA(microRNA),一般位于大分子RNA链的基因间隔区,并由其剪切而来,自身不被翻译成蛋白质,能与其互补mRNA分子特异结合而使之降解。RNA干涉可调节相关基因表达的活性,在生物体的发育过程中发挥着重要作用,该技术可能成为治疗心血管疾病的一种重要手段。 展开更多
关键词 RNA干涉 MICRORNA 心血管损伤 动脉粥样硬化
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谷胱甘肽过氧化物酶2干涉慢病毒系统构建及对人肝癌细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 曹江平 唐刘君 +3 位作者 张建宏 詹轶群 杨晓明 葛常辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期832-837,共6页
目的构建人谷胱甘肽过氧化物酶2(Glutathione peroxidase 2,GPX2)慢病毒干涉载体,获得稳定下调GPX2的高滴度慢病毒,检测敲低GPX2对细胞凋亡的影响。方法通过筛选具有显著干涉效果的si RNA序列,构建p Sico R-GPX2慢病毒干涉载体,包装... 目的构建人谷胱甘肽过氧化物酶2(Glutathione peroxidase 2,GPX2)慢病毒干涉载体,获得稳定下调GPX2的高滴度慢病毒,检测敲低GPX2对细胞凋亡的影响。方法通过筛选具有显著干涉效果的si RNA序列,构建p Sico R-GPX2慢病毒干涉载体,包装病毒并感染人肝癌Hep G2细胞,分别用Western-blot和RT-PCR方法检测GPX2表达情况,应用流式细胞术分析敲低GPX2对人肝癌细胞凋亡的影响。结果成功构建p Sico R-GPX2干涉慢病毒载体并获得高滴度慢病毒颗粒,GPX2蛋白表达水平和RNA表达水平均有显著下调,且人肝癌细胞感染GPX2干涉慢病毒后对凋亡更加敏感,其原因可能是促凋亡蛋白Bax的活化和抗凋亡蛋白Bcl-2活性的抑制。结论成功构建人GPX2基因干涉慢病毒,为肝癌靶标治疗提供新的线索,为后续GPX2功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 谷胱甘肽过氧化物酶2 慢病毒 RNA干涉 凋亡
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番茄MSI2-like基因的克隆及功能初探 被引量:1
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作者 李頔 唐晓凤 刘永胜 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期871-878,共8页
研究通过对番茄MSI2-like蛋白序列与其它模式植物的蛋白序列进行同源性比对,发现番茄MSI2-like与马铃薯的同源性最高;另外还预测了其蛋白质的理化性质及三级结构.酵母双杂交实验证明,MSI2-like与UV—Damaged DNA Binding Protein1(... 研究通过对番茄MSI2-like蛋白序列与其它模式植物的蛋白序列进行同源性比对,发现番茄MSI2-like与马铃薯的同源性最高;另外还预测了其蛋白质的理化性质及三级结构.酵母双杂交实验证明,MSI2-like与UV—Damaged DNA Binding Protein1(DDBl)具有相互作用.同时,利用RNA干涉技术构建植物双元载体,农杆菌介导法转化番茄得到转基因植株,该转基因植株在干旱胁迫条件下有一定的抗旱功能.再利用实时荧光定量PCR分析MSI2-like基因表达的组织差异性,发现它在各个组织中都表达,但是在生殖器官花中的表达量明显较其他组织高. 展开更多
关键词 番茄 MSI2-like基因 酵母双杂交 RNA干涉 干旱胁迫
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干扰paralemmin-3表达抑制脂多糖诱导的肺泡上皮细胞的炎性反应 预览 被引量:3
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作者 陈旭昕 孟激光 +4 位作者 韩志海 刘振千 李泳群 张燕 段蕴铀 《西部医学》 2015年第7期964-966,970共4页
目的探讨干扰paralemmin-3(PALM3)表达对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮A549细胞炎性反应的影响。方法实验分为正常细胞组(未转染)、对照转染组(转染control siRNA)及PALM3siRNA转染组(转染针对PALM3的小干扰核糖核苷酸siRNA)三组... 目的探讨干扰paralemmin-3(PALM3)表达对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮A549细胞炎性反应的影响。方法实验分为正常细胞组(未转染)、对照转染组(转染control siRNA)及PALM3siRNA转染组(转染针对PALM3的小干扰核糖核苷酸siRNA)三组;采用Western-blot法测PALM3蛋白表达水平,检验PALM3siRNA的干扰效率。三组细胞同时给予LPS刺激12h后,收集细胞培养上清液和总蛋白,ELISA法检测各组细胞培养上清中的TNF-α、IL-1β含量,同时用Western-blot法检测各组细胞中单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)表达水平。结果特异性siRNA转染后成功干扰了PALM3在A549细胞中的表达;给予LPS刺激后,与正常细胞组及对照转染组相比,PALM3siRNA转染组细胞培养上清中TNF-α、IL-1β水平显著下降,同时PALM3siRNA转染组细胞中SIGIRR的表达上调。结论干扰PALM3的表达可减轻A549细胞对LPS诱导的炎性反应,其可能机制是通过上调Toll样受体/白介素-1受体(TIR)负调控分子SIGIRR的表达来实现的。 展开更多
关键词 paralemmin-3 脂多糖 肺泡上皮细胞 RNA干涉 炎症
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siRNA沉默STAT3基因对肝癌细胞株HepG2中STAT3及其下游相关基因表达的影响 被引量:1
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作者 靳秋月 张东昌 +1 位作者 张敏 陈立军 《武警后勤学院学报:医学版》 2015年第2期92-96,F0002共6页
【目的】探讨小分子干扰RNA片段(small interfering RNA,si RNA)沉默信号转导与转录活化因3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)基因对肝癌细胞株Hep G2生长、凋亡及STAT3与其下游基因表达的影响。【方法... 【目的】探讨小分子干扰RNA片段(small interfering RNA,si RNA)沉默信号转导与转录活化因3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)基因对肝癌细胞株Hep G2生长、凋亡及STAT3与其下游基因表达的影响。【方法】构建STAT3-si RNA,并将其稳定转染到肝癌细胞株Hep G2中,建立Hep G2/STAT3-si RNA细胞株。MTT比色法检测转染对细胞增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测STAT3基因及其下游细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、存活蛋白(survivin)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因m RNA和蛋白表达水平;Hochest33342荧光染色法检测细胞凋亡。【结果】MTT结果显示,转染后Hep G2细胞存活率显著降低(t=4.262,P=0.001;t=25.330,P=0.000;t=50.288,P=0.000)。RT-PCR和Western blotting结果显示,转染后Hep G2细胞STAT3、cyclin D1、survivin、VEGF基因m RNA和蛋白表达水平显著降低(F=770.918,P=0.000;F=940.630,P=0.000;F=723.783,P=0.000;F=582.362,P=0.000)(F=496.363,P=0.000;F=484.556,P=0.000;F=468.469,P=0.000;F=193.845,P=0.000)。Hochest33342荧光染色结果显示,转染后细胞凋亡显著增加(F=3311.491,P=0.000)。【结论】通过RNA干扰技术沉默STAT3基因可有效下调肝癌细胞Hep G2中STAT3基因及cyclin D1、survivin、VEGF基因表达并抑制肝癌细胞存活增加细胞凋亡,STAT3-si RNA有望成为治疗原发性肝癌的新技术。 展开更多
关键词 STAT3基因 肝癌 RNA干涉 HEPG2细胞株 基因表达
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GDF9下调转基因小鼠模型对繁殖与生长的影响 被引量:1
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作者 习欠云 焦莉 +1 位作者 肖敏 张永亮 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2015年第7期1157-1162,共6页
本研究旨在对转GDF9shRNA基因小鼠进行扩群繁殖,统计分析转基因小鼠的产仔数及增重,检测GDF9shRNA、GDF9表达水平以及血清中FSH和GH的水平,以观察GDF9的下调对转基因小鼠繁殖性能及生长发育的影响。通过RT-PCR方法,分别检测了GDF9shRNA... 本研究旨在对转GDF9shRNA基因小鼠进行扩群繁殖,统计分析转基因小鼠的产仔数及增重,检测GDF9shRNA、GDF9表达水平以及血清中FSH和GH的水平,以观察GDF9的下调对转基因小鼠繁殖性能及生长发育的影响。通过RT-PCR方法,分别检测了GDF9shRNA在体内的表达,以及下丘脑、垂体和卵巢中GDF9mRNA表达水平;同时用ELISA检测了血液中FSH和GH水平。结果表明,扩群后得到16只GDF9shRNA阳性小鼠,转基因GDF9shRNA在小鼠体内广泛表达,转基因小鼠的产仔数与野生型小鼠相比差异显著(P<0.05);转GDF9shRNA阳性公鼠的体重比阴性公鼠高,且在第7周差异显著(P<0.05),而母鼠间体重无显著差异;与阴性小鼠相比,转GDF9shRNA阳性小鼠GDF9基因的表达量在下丘脑、垂体中分别下降35.4%和39.8%,差异显著(P<0.05),在母鼠卵巢中表达水平差异不显著(P>0.05);阳性母鼠血液中FSH水平比阴性母鼠高55%,差异极显著(P<0.01)。结果表明,GDF9基因下调可以提高动物繁殖性能,为提高大型牲畜繁殖力提供了有利的素材和靶点参考。 展开更多
关键词 GDF9 RNA干涉 繁殖 转基因小鼠
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RNA干涉技术及眼科应用 预览 被引量:1
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作者 孔怡淳 赵堪兴 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期370-374,共5页
RNA干涉(RNAi)是将细胞内引入与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(dsRNA),使该mRNA发生特异性降解,调控目标基因的表达.作为转录后基因沉默(PTGs)的一种,这种现象普遍存在于生物体内.眼科相关领域的研究表明,RNAi对多种眼... RNA干涉(RNAi)是将细胞内引入与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(dsRNA),使该mRNA发生特异性降解,调控目标基因的表达.作为转录后基因沉默(PTGs)的一种,这种现象普遍存在于生物体内.眼科相关领域的研究表明,RNAi对多种眼科疾病均有预防和治疗作用,包括眼科新生血管性疾病、抗青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化、眼内肿瘤、自身免疫性葡萄膜视网膜炎等.由于RNAi能够高效地、特异性地抑制体内特定基因的表达,近年来逐渐受到人们的关注.就RNAi干涉的基本概念、作用机制、作用特点以及在眼科领域的研究进展进行综述.. 展开更多
关键词 RNA干涉 RNA 干涉 基因学 基因沉默 基因疗法 眼科
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RNA 沉默技术在食用菌分子遗传学中的应用 预览
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作者 茅文俊 周陈力 鲍大鹏 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期137-143,共7页
RNA 沉默技术有效地避免了食用菌遗传操作中同源重组率低的缺点,应用于食用菌分子遗传学研究中有诸多优势,正在发展成为食用菌基础研究中必不可缺的遗传操作技术。本文综述了食用菌中的 RNA 沉默相关途径与相关基因的研究进展以及 RNA... RNA 沉默技术有效地避免了食用菌遗传操作中同源重组率低的缺点,应用于食用菌分子遗传学研究中有诸多优势,正在发展成为食用菌基础研究中必不可缺的遗传操作技术。本文综述了食用菌中的 RNA 沉默相关途径与相关基因的研究进展以及 RNA 沉默技术在食用菌基因功能研究中的应用,并探讨了 RNA 沉默技术在食用菌应用中的优缺点与应用前景。 展开更多
关键词 食用菌 RNA沉默 RNA干涉 分子遗传学
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紫红线茄转基因体系优化及SmARF8基因RNA干涉表达载体的遗传转化 被引量:3
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作者 包崇来 杜黎明 +3 位作者 胡天华 朱琴妹 胡海娇 毛伟海 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1105-1114,共10页
建立了以紫红线茄下胚轴为外植体的高效转基因体系。利用该方法,以获得茄子SmARF8基因RNA干涉转基因植株为目的,构建了以NPTⅡ基因为筛选标记的融合表达载体pCAMBIAI35S-2300-SmARF8-INT,并通过农杆菌介导,侵染茄子下胚轴外植体。含有2 ... 建立了以紫红线茄下胚轴为外植体的高效转基因体系。利用该方法,以获得茄子SmARF8基因RNA干涉转基因植株为目的,构建了以NPTⅡ基因为筛选标记的融合表达载体pCAMBIAI35S-2300-SmARF8-INT,并通过农杆菌介导,侵染茄子下胚轴外植体。含有2 mg·L-1吲哚乙酸,0.5 mg·L-1玉米素,25 mg·L-1卡那霉素和500 mg·L-1头孢氨苄的MS选择培养基可直接诱导外植体产生转基因分化苗,再生率达到80%。转基因苗继续生长并在不含激素的MS培养基上产生健壮根系,最终获得转基因株系。RT-PCR和qRT-PCR分析验证了T0代转基因株系中内源基因SmARF8被干涉后不表达或表达量降低,Southern blot分析显示选择的T0代转基因株系中存在1个T-DNA插入拷贝。以上研究结果表明利用建立的转基因体系SmARF8基因在茄子中被成功敲除。 展开更多
关键词 茄子 转基因 RNA干涉 农杆菌
RNA干涉E-cadherin表达对乳腺癌细胞紫杉醇化疗敏感性的影响 被引量:5
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作者 张自森 李灿宇 +4 位作者 王宁 薛长年 巴楠 张剑 樊青霞 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2014年第7期1106-1108,共3页
目的:探讨RNA干涉E-cadherin表达对人乳腺癌MCF-7细胞紫杉醇化疗敏感性的影响,探讨可能的分子机制。方法:通过慢病毒介导的E-cadherin干涉RNA感染乳腺癌MCF-7细胞,MTr法检测紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测... 目的:探讨RNA干涉E-cadherin表达对人乳腺癌MCF-7细胞紫杉醇化疗敏感性的影响,探讨可能的分子机制。方法:通过慢病毒介导的E-cadherin干涉RNA感染乳腺癌MCF-7细胞,MTr法检测紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,RT-PCR检测Bcl-2、Bax和E-cadherinmRNA表达变化。结果:E-cad-herin干涉RNA感染后,乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇作用下的生长抑制率和细胞凋亡率均显著降低。与对照相比,凋亡诱导时E-cadherin干涉组细胞中Bcl-2mRNA表达显著升高,E-cadherinmRNA表达显著降低。结论:E-cadherin表达抑制显著降低了乳腺癌细胞对紫杉醇化疗的敏感性,其凋亡影响机制可能与Bcl-2表达上调有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 E-CADHERIN 紫杉醇 RNA干涉 化疗敏感性
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