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肾透明细胞癌尿液中锌指蛋白转录因子4的表达及临床意义
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作者 杨林 熊波 +3 位作者 罗军 王洪志 张成果 文爽 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期209-212,共4页
目的:探讨肾透明细胞癌尿液脱落细胞中锌指蛋白转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)的表达及临床意义。方法:分别收集58例术后病检证实为肾透明细胞癌的肾癌患者及40例健康志愿者尿液。采用RT-PCR技术检测KLF4 mRNA的表达率,Wes... 目的:探讨肾透明细胞癌尿液脱落细胞中锌指蛋白转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)的表达及临床意义。方法:分别收集58例术后病检证实为肾透明细胞癌的肾癌患者及40例健康志愿者尿液。采用RT-PCR技术检测KLF4 mRNA的表达率,Western blot检测KLF4蛋白的表达率;分析KLF4因子的表达与肾透明细胞癌患者临床病理参数的关系。结果:肾透明细胞癌患者尿液脱落细胞KLF4表达明显下调,肾透明细胞癌组KLF4表达阴性率为87.9%(51/58),表达阳性率仅12.1%;而对照组KLF4表达阴性率为7.50%(3/40),表达阳性率为92.5%,2组表达阴性率比较有统计学差异(P<0.05)。肾癌患者中KLF4表达下调与患者年龄(χ2=0.369,P=0.544)、性别(χ2=0.705,P=0.401)、肿瘤大小(χ2=3.481,P=0.062)、肾透明细胞癌患者的临床分期(χ2=0.762,P=0.859)、组织分化程度(χ2=0.064,P=0.996)、淋巴结转移(χ2=0.301,P=0.583)均无关。结论:检测尿液KLF4因子可能有助于肾透明细胞癌的诊断及术后监测。RT-PCR为临床可行的检测方法。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 Krüppel样转录因子类 早期诊断 术后监测 RT-PCR
人骨髓间充质干细胞在兔膀胱脱细胞基质微环境中的生物学特性 预览
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作者 谭云鹤 邢俊平 郭子宽 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期55-59,共5页
目的利用兔膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建微环境,从细胞增殖能力、表面标记物及分子蛋白水平探讨其对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived stem cells,hBMSCs)的影响。方法制备BAMG浸泡液培养基,... 目的利用兔膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建微环境,从细胞增殖能力、表面标记物及分子蛋白水平探讨其对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived stem cells,hBMSCs)的影响。方法制备BAMG浸泡液培养基,MTT法检测其对hBMSCs增殖的影响;流式细胞仪检测hBMSCs表面标志物CD44、CD45、CD73及PDGFRβ的表达;RT-PCR检测BAMG微环境对PPAR、OCN、α-SMA等基因表达的影响,Western blot检测不同处理方法OCT-4蛋白的表达情况。结果hBMSCs与BAMG有良好的相容性;实验组与对照组细胞曲线均呈"S"型增殖,于第3天进入快速增殖期,第7天趋于平稳;两组细胞CD44、CD45、CD73、PDGFRβ的表达量基本一致,差异不具有统计学意义;OCN、PPAR、α-SMA两组均表达目的基因;Western blot法检测亦显示OCT-4阳性表达。结论hBMSCs在兔BAMG的微环境中仍能良好保持原有的生物学特性,将该种子细胞与基质材料结合可构建需要的组织材料,为泌尿系统组织工程修复提供可能。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 膀胱脱细胞基质 RT-PCR 生物学特性 OCT-4
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云南泸西苹果病虫害调查与病原及害虫鉴定 预览
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作者 杨坤 阚望 +5 位作者 许姗姗 孔宝华 李富贵 田猛 马钧 曹克强 《南方园艺》 2019年第1期4-8,共5页
云南红河州泸西县为云南重要的苹果新产区,调查鉴定泸西县苹果病虫害的发生情况,对泸西县的苹果病虫害防控,苹果产业发展具有重要意义。本研究系统调查和鉴定了云南红河州泸西县向阳乡习峨村、三塘乡、向阳乡沙马村等3个苹果产区的病虫... 云南红河州泸西县为云南重要的苹果新产区,调查鉴定泸西县苹果病虫害的发生情况,对泸西县的苹果病虫害防控,苹果产业发展具有重要意义。本研究系统调查和鉴定了云南红河州泸西县向阳乡习峨村、三塘乡、向阳乡沙马村等3个苹果产区的病虫害。通过室内病原显微观察,对真菌病原进行形态鉴定,应用RT-PCR检测技术与测序鉴定病毒,害虫形态鉴定。最终结果表明:云南泸西苹果病虫害共8种,其中真菌病害3种,有斑点落叶病、枝干轮纹病、褐斑病;病毒病害2种,有苹果茎沟病毒病、苹果花叶病毒病;虫害3种,蚜虫、蓟马和金纹细蛾3种虫害。其中斑点落叶病和褐斑病为主要病害,病毒病害其次,虫害发生率较小。其次通过调查与鉴定,否定了危险性病害苹果炭疽叶枯病在云南泸西的存在。 展开更多
关键词 泸西 苹果 病虫害 RT-PCR 检测 炭疽叶枯病
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猪盖他病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用
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作者 王傲杰 周峰 +6 位作者 王新港 常洪涛 陈陆 崔丹丹 杨霞 刘红英 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期209-214,共6页
参考GenBank中猪盖他病毒(Getah virus,GETV)的全基因组序列,针对NSP3保守区域设计1对扩增片段为810bp的引物,建立了一种检测GETV的RT-PCR方法,其检测灵敏度为102.25 TCID50/mL,检测PRV、PCV2、PRRSV、CSFV、JEV、PEDV、TGEV和PoRV均为... 参考GenBank中猪盖他病毒(Getah virus,GETV)的全基因组序列,针对NSP3保守区域设计1对扩增片段为810bp的引物,建立了一种检测GETV的RT-PCR方法,其检测灵敏度为102.25 TCID50/mL,检测PRV、PCV2、PRRSV、CSFV、JEV、PEDV、TGEV和PoRV均为阴性,特异性和可重复性均良好。应用此方法首次从79份猪临床病料中检出GETV阳性4份(5.06%);从6个厂家6个种类的63批次猪用活疫苗中共检出来源于一个厂家同一种类的3个批次GETV阳性活疫苗(批次阳性率4.76%)。结果表明,该方法具有快速、灵敏、特异等优点,可分别用于临床发病猪群和疫苗污染GETV的检测,为本病的快速诊断和确保疫苗质量提供了有效手段。 展开更多
关键词 猪盖他病毒 NSP3基因 RT-PCR 疫苗污染
假单胞菌Pseudomonas fluorescens Pf0-1中转录调控因子SpfB负调控DNA磷硫酰化修饰
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作者 王俞苹 孔令新 +3 位作者 郑涛 李金丽 孙溢华 由德林 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期851-862,共12页
【目的】DNA磷硫酰化修饰是DNA骨架上非桥接的氧原子以序列选择性和R-构型被硫取代的一种新型DNA修饰。目前,磷硫酰化修饰在多种细菌、古生菌以及人类致病菌中多有发现,但其分子调控机制尚不清楚。为了全面解析磷硫酰化修饰的调控机制,... 【目的】DNA磷硫酰化修饰是DNA骨架上非桥接的氧原子以序列选择性和R-构型被硫取代的一种新型DNA修饰。目前,磷硫酰化修饰在多种细菌、古生菌以及人类致病菌中多有发现,但其分子调控机制尚不清楚。为了全面解析磷硫酰化修饰的调控机制,本文选择荧光假单胞菌Pf0-1为研究对象,开展了其DNA磷硫酰化修饰的调控机制研究。【方法】首先,构建了spfB基因缺失和回补菌株,使用碘能特异性断裂磷硫酰化修饰DNA的方法,研究了该基因缺失对修饰表型的影响。利用cDNA在相邻同方向的基因间隔区进行PCR,确定了磷硫酰化修饰基因簇spf BCDE内的共转录单元。通过荧光定量RT-PCR,分析了spfB基因缺失突变株中磷硫酰化修饰基因的转录量。利用异源表达并纯化得到的重组蛋白SpfB进行了体外功能研究。通过EMSA实验,验证了SpfB蛋白具有与spfB启动子序列结合活性。通过DNase I footprinting实验,精确定位了Spf B蛋白与DNA结合序列。【结果】spf B基因的缺失加剧了磷硫酰化修饰DNA断裂所致电泳条带弥散的表型,spf B基因的回补能够恢复该表型,证明spf B基因负调控磷硫酰化修饰。鉴定了spf基因簇中只含有1个共转录单元,且该共转录单元在?spfB突变株中转录水平明显上升。通过EMSA和DNase I footprint实验,检测了SpfB蛋白与磷硫酰化修饰基因spf BCDE的启动子区域5′-TGTTTGT-3′相结合。【结论】SpfB作为转录调控因子负调控磷硫酰化修饰基因spf BCDE的表达,为解析磷硫酰化修饰的调控机制和全面理解基因组上的部分修饰特征奠定了基础。 展开更多
关键词 假单胞菌 DNA磷硫酰化修饰 表观遗传修饰 RT-PCR 负调控蛋白
喜树碱关键酶基因的克隆与生物信息学分析 预览
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作者 王瑶瑶 丁剑兰 +3 位作者 韩卓 郭亚鑫 刘诗卉 刘晓宁 《现代农业科技》 2019年第2期92-93,97共3页
为了克隆喜树碱生物合成途径关键酶异胡豆苷合成酶的基因STR,本文对喜树幼叶进行RNA提取,利用RT-PCR克隆基因STR的CDS序列,利用在线软件ExPASy ProtParam、SignalP4.1、TMHMMV.2.0、TargetP 1.1分析蛋白理化性质、蛋白信号肽、蛋白跨膜... 为了克隆喜树碱生物合成途径关键酶异胡豆苷合成酶的基因STR,本文对喜树幼叶进行RNA提取,利用RT-PCR克隆基因STR的CDS序列,利用在线软件ExPASy ProtParam、SignalP4.1、TMHMMV.2.0、TargetP 1.1分析蛋白理化性质、蛋白信号肽、蛋白跨膜区以及亚细胞定位,利用在线工具Conserved Domain、SOPMA预测蛋白保守结构域和二级结构,利用MEGA 6.0软件构建蛋白系统进化树。结果表明,以喜树幼芽为材料,通过RT-PCR克隆喜树碱生物合成途径关键酶基因STR的CDS序列为993 bp;生物信息学分析表明,STR定位于分泌通道,为酸性蛋白,无信号肽,有1个跨膜区,由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲等二级结构组成;STR包含高度保守的结构域,聚类分析表明其与中果咖啡具有较高的相似性、较近的亲缘关系和遗传距离。 展开更多
关键词 喜树碱 异胡豆苷合成酶 RT-PCR 基因克隆 生物信息学分析
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猪繁殖与呼吸综合征类NADC30与HP-PRRSV毒株RT-PCR鉴别方法的建立与应用 预览
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作者 徐雷 赵军 +3 位作者 杨晓宇 殷鑫欢 张继宗 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期109-113,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播,导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒,其特性为变异快,存在毒株间的重组。因此,病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。本试验建立了一种能够区分类高致病... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播,导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒,其特性为变异快,存在毒株间的重组。因此,病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。本试验建立了一种能够区分类高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30与HP-PRRSV毒株的检测方法,根据nsp2基因的高变区的比对结果,选择其保守序列,设计一对检测引物,类NADC30扩增片段大小为334bp,HP-PRRSV毒株扩增片段大小为514bp,通过优化反应条件,最终建立了一种一对引物就可以区分检测类NADC30与HP-PRRSV毒株的RT-PCR检测方法。应用本试验所建立的RT-PCR方法对2017年12月至2018年2月采至四川多地区的疑似PRRSV感染发病的46份肺脏进行检测。结果显示,类NADC30检出率为32.6%,高于HP-PRRSV毒株的检出率(10.9%)。该方法的建立,为类NADC30和HP-PRRSV毒株的快速鉴别诊断提供了方法,具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 类NADC30 HP-PRRSV 鉴别诊断 RT-PCR
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新疆南疆某规模牛场轮状病毒基因分型鉴定与分析
8
作者 张迎春 崔鑫 +4 位作者 王廷龙 朱广艺 黄腾 宋健颖 胡建军 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第4期79-83,共5页
新疆南疆某规模奶牛场部分犊牛出生后1周左右出现严重腹泻,严重地影响了犊牛健康。为查明该牛场犊牛腹泻是否存在牛轮状病毒感染以及病毒基因类型,以及更好地防治犊牛腹泻发生。试验采集了部分腹泻犊牛的粪便样本,提取粪样病毒核酸、设... 新疆南疆某规模奶牛场部分犊牛出生后1周左右出现严重腹泻,严重地影响了犊牛健康。为查明该牛场犊牛腹泻是否存在牛轮状病毒感染以及病毒基因类型,以及更好地防治犊牛腹泻发生。试验采集了部分腹泻犊牛的粪便样本,提取粪样病毒核酸、设计病毒特异性扩增引物,采用RT-PCR法、基因测序、核苷酸同源性分析及构建遗传进化树。结果显示,待检样本通过VP7特异性引物(VP7-1/VP7/2)和基因分型鉴定引物(VP7-1/G10-2)的RT-PCR扩增得到大小1 062 bp、715 bp目的片段,经测序及核苷酸同源性比对分析,确定该样本为轮状病毒A群G10型,结合临床诊断、病理变化确定该牛场疑似患牛存在牛轮状病毒感染,为该病防控提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 RT-PCR 基因分型
橡胶树感白粉病基因LFG1和LFG2的克隆及表达分析
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作者 李书缘 刘承圆 +2 位作者 梁鹏 何其光 缪卫国 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期754-761,共8页
白粉病是橡胶树的主要病害之一,为阐明橡胶树与白粉菌分子互作机制,本研究基于已报道的负调控基因LFG为基础,克隆出橡胶树中同源基因LFG1和LFG2,采用同源克隆方法,以橡胶树基因组DNA和cDNA为模板,PCR扩增HbLFG1和HbLFG2基因;利用生物信... 白粉病是橡胶树的主要病害之一,为阐明橡胶树与白粉菌分子互作机制,本研究基于已报道的负调控基因LFG为基础,克隆出橡胶树中同源基因LFG1和LFG2,采用同源克隆方法,以橡胶树基因组DNA和cDNA为模板,PCR扩增HbLFG1和HbLFG2基因;利用生物信息学方法分析该基因及其同源蛋白;并分别对白粉菌侵染不同时间和不同病害等级的橡胶树叶片进行RT-PCR测定,检测HbLFG1和HbLFG2的基因表达量。HbLFG1和HbLFG2基因的核酸和氨基酸分析结果分别为:cDNA序列全长均为729 bp及由242个氨基酸编码组成,蛋白的分子量为27.220 kD和27.248 kD,等电点为8.24和8.63,正负电荷残基数为15和12与13和11,脂肪系数是132.52和130.50,不稳定系数为24.19和26.51,总平均亲水性0.958和1.011。两个基因都有7个跨膜结构域,不含有信号肽,蛋白都属于BI-1家族,蛋白模序有5处差异,两个基因与辣椒和柑橘的BI1-like蛋白同源性最为接近。HbLFG1随白粉菌侵染时间和病害等级的增加均呈现先上升后下降的趋势;HbLFG2随病害等级的上升呈现先上升后下降的趋势,但是随白粉菌侵染时间的增加呈现持续上升的趋势。HbLFG1和HbLFG2两个基因的表达量都与橡胶树白粉菌的侵染有关,但两者存在一定差异。本研究有助于深入阐释橡胶树与白粉菌分子互作机制。 展开更多
关键词 橡胶树 白粉菌 HbLFG HbLFG2 RT-PCR
结直肠癌中VEGF-C和MMP-2蛋白表达量与肿瘤侵袭转移关系的研究 预览
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作者 顾玉兰 丘佳明 +2 位作者 蒋廷旺 宛传丹 赵一琳 《现代肿瘤医学》 CAS 2019年第9期1576-1580,共5页
目的:研究VEGF-C、MMP-2在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达,分析其表达与临床病理特征间关系,探讨其在结直肠癌中的表达及其意义。方法:收集46例常熟市第二人民医院病理科2014年至2017年结直肠癌手术切除的新鲜肿瘤组织及20例癌旁正常... 目的:研究VEGF-C、MMP-2在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达,分析其表达与临床病理特征间关系,探讨其在结直肠癌中的表达及其意义。方法:收集46例常熟市第二人民医院病理科2014年至2017年结直肠癌手术切除的新鲜肿瘤组织及20例癌旁正常组织。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测46例结直肠癌与癌旁正常组织中VEGF-C mRNA、MMP-2的表达,应用免疫组织化学方法检测结直肠癌与癌旁正常组织VEGF-C、MMP-2蛋白的表达,分析VEGF-C mRNA、MMP-2 mRNA和蛋白表达与临床病理分期特征间关系。结果:46例结直肠癌中VEGF-C mRNA(P<0.05)、MMP-2 mRNA(P<0.05)转录水平显著高于癌旁正常组织。VEGF-C mRNA转录水平与患者年龄、性别和肿瘤直径等无相关性(P>0.05),与组织学分级、TNM分期、淋巴结和远处转移等有相关性(P<0.05);MMP-2 mRNA转录水平与年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结和远处转移等无相关性(P>0.05),而与组织学分级、TNM分期上有统计学差异(P<0.05)。VEGF-C蛋白表达量与性别、肿瘤直径和远处转移无相关性(P>0.05),而与患者年龄、淋巴结转移、组织学分级和TNM分期等相关(P<0.05);MMP-2蛋白表达量与年龄、性别、肿瘤直径和远处转移无相关性(P>0.05),只与组织学分级和TNM分期等相关(P<0.05)。两基因间mRNA转录水平与蛋白表达水平呈线性相关性(P<0.01)。结论:VEGF-C、MMP-2蛋白的高表达与结直肠癌细胞侵袭及转移过程的发生密切相关,可为作潜在靶向标志物,为临床上进一步诊断治疗及预后提供理论依据。 展开更多
关键词 结直肠癌 VEGF-C MMP-2 RT-PCR 免疫组织化学
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霍山石斛β-1,4-木糖基转移酶(IRX9)基因克隆及生物信息学分析
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作者 周佩娜 李阳 +3 位作者 蒲天珍 余坤 张秀桥 龚玲 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1212-1219,共8页
目的 克隆霍山石斛β-1,4-木糖基转移酶(IRX9)基因,并进行生物信息学、密码子偏性分析。方法 根据霍山石斛转录组数据获得的IRX9基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR技术得到IRX9基因cDNA的全长序列,并进行生物信息学分析。结果 霍山石斛... 目的 克隆霍山石斛β-1,4-木糖基转移酶(IRX9)基因,并进行生物信息学、密码子偏性分析。方法 根据霍山石斛转录组数据获得的IRX9基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR技术得到IRX9基因cDNA的全长序列,并进行生物信息学分析。结果 霍山石斛IRX9基因全长1 553 bp,包含一个长度为1 047 bp的开放阅读框,编码348个氨基酸,理论相对分子质量为39 350,等电点为7.26,为不含信号肽的亲水性稳定蛋白,定位于质膜,具有多个磷酸化位点和糖基化位点。系统进化树表明,该序列与同科植物铁皮石斛的同源性最高,且具有GT-A超家族的保守区域“DXD”。密码子偏性分析表明,该基因偏好使用以A/T结尾的密码子,具有27个偏性密码子,烟草为该基因最适合的外源表达宿主。结论 成功克隆IRX9基因,为从分子水平调控霍山石斛的生长发育和改善药材产量和品质提供理论基础。 展开更多
关键词 霍山石斛 β-1 4-木糖基转移酶 基因克隆 生物信息学分析 RT-PCR
甲状腺癌组织中PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A表达检测及作用探讨
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作者 姜家利 夏玉军 《医学检验与临床》 2019年第2期5-9,共5页
目的:通过对甲状腺癌及癌旁正常组织中磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3Kp85α)、EZRIN和抑癌基因染色质重建复合物SWI/SNF亚基(AT rich interactive domain 1A:ARID1A)的mRNA和蛋白质的表达情况进行检测,探讨PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A... 目的:通过对甲状腺癌及癌旁正常组织中磷脂酰肌醇3-激酶p85α亚单位(PI3Kp85α)、EZRIN和抑癌基因染色质重建复合物SWI/SNF亚基(AT rich interactive domain 1A:ARID1A)的mRNA和蛋白质的表达情况进行检测,探讨PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A的相互之间的关联性,及三个检测指标与甲状腺癌病理分类因素的关系,来试图阐明PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A的表达在甲状腺癌发生、侵袭及转移中的意义。方法:收集2017年1月-2018年5月忑枣庄市立医院乳腺甲状腺外科就诊的患者,就诊前无任何措施的治疗,经病理诊断的甲状腺癌组织114例及癌旁正常甲状腺组织43例。应用免疫组织化法和RT-PCR的方法检测甲状腺癌及癌务正常甲状腺组织中的PI3Kp85α、EZRIN和ARID1A的表达水平(实验结果采用SPSS19.0软件进行统计分析学分析处理)。结果:①与癌务正常组织相比较,PI3Kp85α、EZRIN在甲状腺癌中的阳性表达率及mRNA的表达显著升高(P<0.01),而ARID1A阳性表达率及mRNA的表达显著降低(P<0.01);②ARID1A mRNA的表达与甲状腺癌分化恶性程度呈负相关(P<0.05r=-0.689);PI3Kp85α、EZRIN与甲状腺癌的恶性程度呈正相关。(P<0.05 r=0.625)结论:PI3Kp85α、EZRIN、ARID1A的异常表达与甲状腺癌有较高的相关性,ARID1A的缺失或降低,能够促进PI3Kp85α和EZRIN蛋白的高表达,进而促进甲状腺癌的发生、发展和侵袭;联合检测该三项指标,有助于甲状腺癌对潜能侵袭转移的判断,从而为甲状腺癌的治疗和疗效评估,提供依据。 展开更多
关键词 甲状腺癌 PI3Kp85α EZRIN蛋白 ARID1A RT-PCR
检测COL1A1-PDGFB融合基因协助诊断萎缩型隆突性皮肤纤维肉瘤
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作者 丁小洁 徐文俊 王亚琴 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期100-102,共3页
报告1例萎缩型隆突性皮肤纤维肉瘤。患者女,24岁。患者2年前无明显诱因胸部皮肤出现红斑,逐渐变大,中央萎缩。皮肤科检查:胸部一3 cm×4 cm暗紫红色近圆形斑块,表面光滑,中央萎缩,触之质地韧,无凸起包块,无触痛。皮损组织病理检查:... 报告1例萎缩型隆突性皮肤纤维肉瘤。患者女,24岁。患者2年前无明显诱因胸部皮肤出现红斑,逐渐变大,中央萎缩。皮肤科检查:胸部一3 cm×4 cm暗紫红色近圆形斑块,表面光滑,中央萎缩,触之质地韧,无凸起包块,无触痛。皮损组织病理检查:表皮轻度乳头瘤样增生,真皮萎缩变薄,真皮及皮下脂肪可见短梭形细胞增生,增生细胞和表皮之间可见肿瘤细胞无浸润带;真皮浅、中层区域肿瘤细胞数目较少,排列稍稀疏,细胞呈波浪状排列,平行于表皮;真皮深部和皮下脂肪层可见密集排列的梭形细胞增生,梭形细胞密集排列呈车幅状、席纹状或束状。免疫组化示肿瘤细胞强阳性表达CD34。采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测COL1A1-PDGFB融合基因阳性。诊断:萎缩型隆突性皮肤纤维肉瘤。 展开更多
关键词 隆突性皮肤纤维肉瘤 萎缩型 COL1A1-PDGFB RT-PCR
一株牛副流感病毒3型的分离鉴定及系统进化树分析
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作者 崔一龙 杨达汉 +3 位作者 石芸 尹有勤 薛江东 马德慧 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期25-28,共4页
目的分离鉴定一株疑似为牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的毒株,并分析系统进化树。方法从内蒙古某牛场患有呼吸道疾病的病牛鼻液中分离一株疑似为BPIV3的毒株,将分离毒株在MDBK细胞上进行增殖,并通过血凝试... 目的分离鉴定一株疑似为牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的毒株,并分析系统进化树。方法从内蒙古某牛场患有呼吸道疾病的病牛鼻液中分离一株疑似为BPIV3的毒株,将分离毒株在MDBK细胞上进行增殖,并通过血凝试验及RT-PCR鉴定,同时对其N基因序列进行测定及分析,建立亲缘关系进化树。结果该分离病毒可在MDBK细胞上增殖,且可产生特异性细胞病变,第6代细胞的毒力为10^7.1 TCID50/100μL,与GenBank中已发表的BPIV3毒株N基因片段的同源性为99.9%,与序列号为D84095.1的BPIV3等亲缘性最近。结论本研究获得的分离株为BPIV3,与日本分离株(D84095.1)同源性较高。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 病毒分离 血凝试验 RT-PCR 系统进化树
凡纳滨对虾野田村病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 预览
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作者 雷燕 肖洋 +3 位作者 王娟 张文文 胡芳源 唐绍林 《广东海洋大学学报》 CAS 2019年第2期53-57,共5页
【目的】建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。【方法】根据GenBank中获得的凡纳滨对虾野田村病毒的基因序列,应用Oligo6.0软件设计合成1对特异性扩增引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的... 【目的】建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。【方法】根据GenBank中获得的凡纳滨对虾野田村病毒的基因序列,应用Oligo6.0软件设计合成1对特异性扩增引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立快速检测凡纳滨对虾野田村病毒的RT-PCR方法。用该方法对感染野田村病毒的凡纳滨对虾进行RT-PCR检测。【结果】RT-PCR可扩增出与设计相符的413 bp的特异性目的条带,而对白斑症病毒(WSSV)阳性虾、对虾杆状病毒(BP)阳性虾、传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)阳性虾、肝胰腺细小病毒(HPV)阳性虾、黄头病毒(YHV)阳性虾、传染性肌肉坏死病毒(IMNV)阳性虾、桃拉病毒(TSV)阳性虾和健康虾的扩增结果均为阴性。测序比对结果表明,该方法检测结果准确,最低可检测出约100 fg/mL的野田村病毒重组质粒DNA;用该方法对从福建、广东、海南、广西、江苏、浙江、山东等地的386份临床样品进行RT-PCR检测,共检出野田村病毒阳性样品64份。【结论】该方法可用于凡纳滨对虾野田村病毒的快速检测。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 野田村病毒 RT-PCR 快速检测
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猪非典型性瘟病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用 预览
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作者 郭佳琪 杨晓宇 +3 位作者 冯宇 杨钒 徐志文 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期357-362,共6页
为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPVNS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CS... 为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPVNS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,该方法对APPV的最低检出量为1μl4.95×104拷贝,重复性试验中组间、组内试验结果均与预期相符。应用该方法对68份疑似患病的仔猪样品进行检测,阳性病料检出率为7.35%。利用Mega7.0绘制APPV系统进化树,对APPV进行遗传进化分析,结果显示本试验检出的APPV(SC株)与中国报道的APPV的亲缘关系较近。建立的APPVRT-PCR检测方法可用于APPV的临床诊断及流行病学检测。 展开更多
关键词 猪非典型性瘟病毒 RT-PCR 检测
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良、恶性葡萄胎组织中P-选择素和HPA的表达及其临床意义 预览
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作者 齐洁敏 于淑莉 +1 位作者 白兴武 王闯 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期273-277,共5页
目的 探讨P-选择素和乙酰肝素酶(heparanase,HPA)在良、恶性葡萄胎组织中的表达特点及临床意义。方法 采用免疫组化SP法及RT-PCR技术检测40例良性葡萄胎、12例恶性葡萄胎组织中P-选择素和HPA的表达情况,同时对比观察40例正常胎盘绒毛。... 目的 探讨P-选择素和乙酰肝素酶(heparanase,HPA)在良、恶性葡萄胎组织中的表达特点及临床意义。方法 采用免疫组化SP法及RT-PCR技术检测40例良性葡萄胎、12例恶性葡萄胎组织中P-选择素和HPA的表达情况,同时对比观察40例正常胎盘绒毛。结果 P-选择素和HPA在正常胎盘绒毛、良性葡萄胎、恶性葡萄胎组织中蛋白的阳性表达率、阳性表达强度及mRNA相对表达量均呈逐渐上升趋势,组间比较差异均有统计学意义(P均<0. 05)。P-选择素和HPA在良、恶性葡萄胎中的表达均呈正相关(P均<0. 05)。结论 P-选择素和HPA过表达促进葡萄胎的发生、发展,检测两者表达对于良、恶性葡萄胎的鉴别诊断及预后评估有重要意义,有望成为葡萄胎恶性发展的生物学预测指标。 展开更多
关键词 葡萄胎 P-选择素 HPA 免疫组织化学 RT-PCR
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黑龙江地区番茄斑萎病毒的鉴定及其部分生物学特征分析 预览
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作者 王凯娜 战斌慧 周雪平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期37-43,共7页
近年来,番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt tospovirus (TSWV)在我国多个地区发生严重危害。本研究采用小RNA深度测序和RT-PCR相结合的方法对采自黑龙江的番茄病毒病样品中的病毒进行了鉴定。提取番茄样品的RNA并构建小RNA文库进行测序,... 近年来,番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt tospovirus (TSWV)在我国多个地区发生严重危害。本研究采用小RNA深度测序和RT-PCR相结合的方法对采自黑龙江的番茄病毒病样品中的病毒进行了鉴定。提取番茄样品的RNA并构建小RNA文库进行测序,数据分析发现比对至TSWV基因组的reads数占比对到病毒核酸总reads数的92.64%,表明侵染此番茄样品的病原物可能是TSWV。利用RT-PCR方法进一步确定侵染此番茄样品的病毒为TSWV,将其命名为TSWV-HLJ1。对TSWV-HLJ1的核苷酸序列进行分析并构建系统进化树,结果表明TSWV-HLJ1与TSWV云南甜椒分离物(TSWV-YNgp)的亲缘关系最近。介体传毒试验表明,西花蓟马可将TSWV-HLJ1传播感染健康寄主植物。摩擦接种试验表明,TSWV黑龙江分离物能够侵染本氏烟、辣椒和番茄。这是我国首次报道在黑龙江地区发现TSWV的危害。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 小RNA深度测序 RT-PCR检测
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滇重楼甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的分子克隆与分析
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作者 杨莉 樊小莉 +6 位作者 刘琴 王芳 刘静 徐智斌 冯波 周强 王涛 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1435-1441,共7页
目的皂苷是滇重楼的主要药效成分,获取滇重楼皂苷合成途径中关键基因(MVD)的cDNA全长序列,并对该序列进行生物信息学及表达量分析。方法通过同源克隆法得到滇重楼MVD cDNA的保守片段,利用RACE技术获得MVD c DNA全长序列,命名为PpMVD,并... 目的皂苷是滇重楼的主要药效成分,获取滇重楼皂苷合成途径中关键基因(MVD)的cDNA全长序列,并对该序列进行生物信息学及表达量分析。方法通过同源克隆法得到滇重楼MVD cDNA的保守片段,利用RACE技术获得MVD c DNA全长序列,命名为PpMVD,并进行生物信息学分析,通过实时荧光定量(RT-PCR)法检测PpMVD在滇重楼不同组织中的表达情况。结果 PpMVD基因cDNA全长1 583 bp,开放阅读框(ORF)长1 269 bp,编码422个氨基酸,该蛋白质的相对分子质量为46 820,等电点为5.69,不稳定指数为45.40;滇重楼Pp MVD蛋白质二级结构中含有159个α-螺旋,占37.68%;19个β折叠,占4.50%;69个延伸链,占16.35%;175个无规卷曲,占41.47%;该蛋白没有跨膜螺旋区,且不存在信号肽,其全部氨基酸都位于细胞膜表面;该基因包含MVD1-Superfamily家族的保守结构域,属于GHMP激酶蛋白家族成员;RT-PCR结果显示,滇重楼PpMVD基因在种子、叶片、茎和块茎中均有表达,但表达量呈显著差异(P>0.05),由高到低依次为块茎>叶片>种子>茎,其中主要药用组织块茎中表达量最高,为最低表达量(茎)的3.3倍。结论首次克隆了滇重楼Pp MVD cDNA全长序列,并检测了该基因在滇重楼各组织中的表达量,为进一步研究Pp MVD基因在提高皂苷生物合成过程中的影响提供了基础,并对重楼药用资源的可持续利用提供了支持。 展开更多
关键词 滇重楼 Pp MVD 基因克隆 表达分析 RACE RT-PCR
敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因互作研究 预览
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作者 张梦瑶 杨峰 +3 位作者 刘积凤 刘开东 贺建宁 柳楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期229-238,共10页
旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒及共转染成纤维细胞后,通过基因表达量变化研究两基因的互作。以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA,参照GenBank中Hoxa5、BMPR1B基因序列信息分别设计... 旨在构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒及共转染成纤维细胞后,通过基因表达量变化研究两基因的互作。以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成cDNA,参照GenBank中Hoxa5、BMPR1B基因序列信息分别设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMPR1B基因片段,将得到的Hoxa5、BMPR1B基因分别连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-Hoxa5、pEASYTM-T1-BMPR1B重组质粒并转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后构建pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B重组质粒,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞。其次,对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Hoxa5、BMPR1B基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Hoxa5、pcDNA3.1-BMPR1B构建成功,并且共转染成纤维细胞BMPR1B基因的表达量明显下降,Hoxa5基因的表达量明显升高且共转染组的表达量极显著地高于单转染组(P<0.01)。成功构建了敖汉细毛羊Hoxa5、BMPR1B基因的质粒,并且成功共转染成纤维细胞,Hoxa5基因的表达量明显升高,BMPR1B基因的表达量明显下降,因而Hoxa5基因抑制了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因促进了Hoxa5基因的表达,结果可为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 敖汉细毛羊 成纤维细胞 Hoxa5 BMPR1B 基因互作 质粒构建 RT-PCR WESTERN BLOT
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