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咖啡特异性实时荧光PCR检测方法的建立 预览
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作者 梁颖婕 冼钰茵 +3 位作者 刘婧文 黄成栋 奚星林 凌莉 《检验检疫学刊》 2019年第1期13-17,共5页
本研究通过对咖啡基因信息的检索分析,根据咖啡的XMT1基因序列设计了一组咖啡特异性的引物与探针,建立咖啡物种特异性实时荧光PCR检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性测试,结果表明,该方法能快速检测出咖啡物种特异性,定性... 本研究通过对咖啡基因信息的检索分析,根据咖啡的XMT1基因序列设计了一组咖啡特异性的引物与探针,建立咖啡物种特异性实时荧光PCR检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性测试,结果表明,该方法能快速检测出咖啡物种特异性,定性检测体系对咖啡DNA的检测灵敏度为0.1 ng/μL,特异性和稳定性良好。 展开更多
关键词 咖啡 物种特异性 实时荧光PCR 鉴别
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大鼠脑缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子A的表达变化
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作者 吴燕平 秦新月 +2 位作者 张融融 黄思源 张磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期405-410,共6页
目的探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子A(RGMa)的表达变化。方法取雄性SD大鼠30只,随机分成对照组,缺血再灌注损伤7 d、14 d模型组(I/R),采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(t MCAO);Real... 目的探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子A(RGMa)的表达变化。方法取雄性SD大鼠30只,随机分成对照组,缺血再灌注损伤7 d、14 d模型组(I/R),采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(t MCAO);Real-time PCR检测M1、M2型小胶质细胞标记分子白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导性一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶1(Arg-1)及CD206 mRNA的表达;免疫荧光检测缺血区小胶质细胞RGMa的表达;体外培养小胶质细胞,分别用M1或M2型小胶质细胞的诱导物脂多糖(LPS)或IL-4诱导24 h后,利用Real-time PCR检测M1、M2型小胶质细胞标记分子IL-1β、i NOS、Arg-1、CD206 mRNA的表达;Western blotting检测M1、M2型小胶质细胞上RGMa的表达。结果缺血再灌注损伤后7 d、14 d,M1、M2型小胶质细胞的标记分子表达增加。缺血后7 d、14 d激活的小胶质细胞上RGMa大量表达。RGMa在体外培养的LPS诱导极化的M1型小胶质细胞和IL-4诱导极化的M2型小胶质细胞上表达均显著增加。结论大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后,RGMa在缺血区M1型和M2型极化的小胶质细胞上均大量表达,RGMa可能在小胶质细胞激活极化过程中发挥重要作用。RGMa可能是缺血性脑卒中治疗的新靶点。 展开更多
关键词 排斥性导向分子A 脑缺血 再灌注损伤 小胶质细胞极化 免疫印迹法 实时定量聚合酶链反应 大鼠
对氧磷酶3基因过表达对急性中毒小鼠肝损伤的保护作用及机制
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作者 伍洋 刘英 +1 位作者 刘济滔 尹德锋 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期179-184,共6页
目的探讨对氧磷酶3(PON3)对急性中毒肝损伤的保护作用及作用机制。方法将40只Balb/c小鼠随机分为4组,正常对照(NC)组、敌敌畏(DDVT)对照组、绿色荧光蛋白慢病毒(Lv-GFP)组和重组PON3慢病毒(Lv-PON3)组,每组10只。LV-GFP组和Lv-PON3组小... 目的探讨对氧磷酶3(PON3)对急性中毒肝损伤的保护作用及作用机制。方法将40只Balb/c小鼠随机分为4组,正常对照(NC)组、敌敌畏(DDVT)对照组、绿色荧光蛋白慢病毒(Lv-GFP)组和重组PON3慢病毒(Lv-PON3)组,每组10只。LV-GFP组和Lv-PON3组小鼠经尾静脉分别注射2×107TU的Lv-GFP、Lv-PON3慢病毒,3 d后腹腔注射敌敌畏(DDVT)溶液9 mg/kg,DDVT组只需腹腔注射同等剂量DDVT,NC组注射同等剂量生理盐水。各组于DDVT染毒后12 h麻醉处死10只小鼠取肝组织,ELISA法检测各组血清乙酰胆碱酯酶(ACh E)、肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)和肝组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH),HE染色法观察肝组织形态学改变,Real-time PCR检测肝组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、血红蛋白加氧酶(HO-1)和转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2) mRNA的表达。结果与NC组比较,DDVT组和Lv-GFP组肝组织MDA、ALT、AST水平,HO-1和Nrf2 mRNA表达量明显升高,ACh E、CAT、SOD、GSH水平和Keap1 mRNA表达量均明显降低(P <0. 05)。与DDVT组比较,Lv-PON3组肝组织MDA、ALT、AST水平,Keap1 mRNA表达量降低,ACh E、CAT、SOD和GSH水平均明显著升高,HO-1和Nrf2 mRNA表达量显著上升(P<0. 05)。正常对照组肝细胞结构清晰,未出现肝细胞坏死和脂肪病变的情况,DDVT组和Lv-GFP组出现肝细胞坏死和脂肪变性等病理改变,Lv-PON3组肝脏病变组织肝细胞坏死和脂肪变性细胞数有一定的减少。结论PON3可通过Keap1-Nrf2/HO-1途径缓解氧化应激反应,改善肝功能,对敌敌畏急性中毒小鼠肝损伤有一定的保护作用。 展开更多
关键词 对氧磷酶3 急性中毒 肝损伤 氧化应激 转染 实时定量聚合酶链反应 小鼠
氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为
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作者 王贞 黄怡佳 +7 位作者 乃爱桃 牛磊 罗诗诗 万炜 刘政海 陈熙 徐杨 曹文宇 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期18-23,共6页
目的探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,... 目的探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。结果与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.01),喷糖实验舔糖时间缩短(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),新事物辨别指数降低(P<0.0001),抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现(P<0.05);与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调(1.0000±0.04577比0.08337±0.01658;1.0000±0.04379比0.6672±0.03193,P<0.05),而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达(0.08337±0.01658比0.4983±0.08574;0.6672±0.03193比0.8572±0.03181,P<0.05)。结论氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。 展开更多
关键词 氟西汀 慢性束缚应激 抑郁症 溴结构域蛋白4 海马 实时定量聚合酶链反应 小鼠
MicroRNA-140-5p通过蛋白激酶C亚型ε促进肾癌细胞增殖
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作者 刘伟红 余肖 +3 位作者 任雨 刘开泰 林晨 王萍 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期185-191,共7页
目的探讨microRNA-140-5p(miR-140-5p)在肾癌发生中的作用。方法 Real-time PCR方法检测肾癌细胞(Caki-1、ACHN、OS-RC-2和786-O)中miR-140-5p的表达。MTS,流式细胞术和Western blotting检测细胞增殖,细胞周期和相关蛋白的改变。结果降... 目的探讨microRNA-140-5p(miR-140-5p)在肾癌发生中的作用。方法 Real-time PCR方法检测肾癌细胞(Caki-1、ACHN、OS-RC-2和786-O)中miR-140-5p的表达。MTS,流式细胞术和Western blotting检测细胞增殖,细胞周期和相关蛋白的改变。结果降低Caki-1细胞中miR-140-5p的水平后,细胞增殖被抑制,G0/G1期细胞数量显着增加,cyclin D、cyclin E和CDK2、CDK4也随之减少;此外,增加786-O细胞中miR-140-5p的水平后,促进体外细胞增殖和体内肿瘤发生。基因芯片结果发现,蛋白激酶C亚型ε(PKCε)基因在改变Caki-1和786-O的细胞中显著性升高。si PKCε在降低肾癌细胞(RCC)中PKCε蛋白表达的同时,还能显著性反转抑制物/模拟物诱导的细胞增殖和细胞周期的改变。结论 miR-140-5p通过PKCε促进肾癌细胞增殖。 展开更多
关键词 MicroRNA-140-5p 肾癌细胞 细胞增殖 细胞周期 实时定量聚合酶链反应
分子与血清学检测确诊2017年西非塞拉利昂1例猴痘病毒感染病例 预览
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作者 叶飞 宋敬东 +8 位作者 赵莉 张益 夏连续 祝令伟 任娇 王文玲 武桂珍 田厚文 谭文杰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期535-538,共4页
目的对发生在西非塞拉利昂南部的疑似猴痘病毒感染者进行实验室确诊.方法采集疑似感染病人感染后12d和55d的血清,利用猴痘特异性引物进行实时定量PCR检测,并对病人血清中痘苗病毒IgG、IgM和猴痘病毒IgG抗体进行ELISA检测,并结合其流行... 目的对发生在西非塞拉利昂南部的疑似猴痘病毒感染者进行实验室确诊.方法采集疑似感染病人感染后12d和55d的血清,利用猴痘特异性引物进行实时定量PCR检测,并对病人血清中痘苗病毒IgG、IgM和猴痘病毒IgG抗体进行ELISA检测,并结合其流行病学信息进行诊断.结果实时定量PCR检测该病人感染12d后血清为猴痘病毒核酸阳性;ELISA检测病人感染后12d和55d血清,痘苗病毒IgG、IgM为阳性;猴痘病毒IgG抗体检测均为阳性,且55d较12d抗体滴度有4倍升高(3200/800).结论病人血清的核酸检测和血清学检测结果为阳性,结合病人的临床特征和野生动物接触史,确诊该病人为猴痘病毒感染. 展开更多
关键词 塞拉利昂 猴痘病毒 实时定量PCR 血清学检测
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丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型在人肺腺癌组织表达上调并促进肺腺癌细胞的增殖
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作者 陆畅畅 黄燕燕 +3 位作者 续力云 何剑营 邱雷 乐涵波 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期192-200,共9页
目的探讨肺腺癌组织丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型(SPINK1)表达与生存时间的关系及其对肺腺癌细胞生长的影响。方法用Real-time PCR法、免疫组织化学法检测285例肺腺癌组织和癌旁组织SPINK1的表达,并分析其表达水平与临床病理特征及预... 目的探讨肺腺癌组织丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型(SPINK1)表达与生存时间的关系及其对肺腺癌细胞生长的影响。方法用Real-time PCR法、免疫组织化学法检测285例肺腺癌组织和癌旁组织SPINK1的表达,并分析其表达水平与临床病理特征及预后的关系。利用SPINK1慢病毒表达载体及小干扰RNA(si RNA),处理人肺腺癌细胞系,光学显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,ELISA或Real-time PCR检测SPINK1表达水平,细胞计数和集落形成法检测肺腺癌细胞生长情况。结果肺腺癌组织SPINK1 mRNA和蛋白表达均上调(均P<0. 0001),SPINK1高表达组患者总生存时间短于低表达组(50. 0个月vs 64. 5个月,P<0. 001)。SPINK1过表达组,肺腺癌细胞上清液SPINK1蛋白高表达(P <0. 05),增殖与克隆形成能力均上调(P <0. 05);SPINK1敲减组,肺腺癌细胞SPINK1 mRNA表达下调,增殖能力下调(P<0. 05)。结论肺腺癌组织SPINK1高表达提示患者预后不良;SPINK1促进人肺腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 肺腺癌 丝氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1型 细胞增殖 实时定量聚合酶连反应
玫瑰痤疮与肠道菌群紊乱的相关性研究 预览
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作者 梁博 李国东 +4 位作者 何明璇 崔昭 刘亚维 李会荣 周建华 《中国美容医学》 CAS 2019年第7期48-51,共4页
目的:探讨玫瑰痤疮与肠道菌群的相关性。方法:选取2015年1月-2017年12月笔者医院皮肤科门诊确诊的玫瑰痤疮志愿者80例为实验组,并选取同期健康志愿者60例为对照组。采用荧光定量PCR检测肠道菌群中双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、梭... 目的:探讨玫瑰痤疮与肠道菌群的相关性。方法:选取2015年1月-2017年12月笔者医院皮肤科门诊确诊的玫瑰痤疮志愿者80例为实验组,并选取同期健康志愿者60例为对照组。采用荧光定量PCR检测肠道菌群中双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、梭杆菌和乳酸杆菌的拷贝数,分析两组肠道菌群拷贝数的差异,以及肠道菌群与玫瑰痤疮的相关性。结果:玫瑰痤疮志愿者肠道菌群中乳酸杆菌、梭杆菌、双歧杆菌的拷贝数及双歧杆菌与肠杆菌比值(B/E值)均低于健康对照组,肠球菌及拟杆菌拷贝数高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);肠杆菌拷贝数稍低于健康对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。乳酸杆菌、梭杆菌及双歧杆菌拷贝数与玫瑰痤疮病情呈负相关(P<0.05);肠杆菌及肠球菌拷贝数与玫瑰痤疮病情呈正相关(P<0.05);拟杆菌与玫瑰痤疮病情之间无明显相关性(P>0.05)。结论:肠道菌群紊乱可能在玫瑰痤疮发病中起到一定作用。 展开更多
关键词 玫瑰痤疮 肠道菌群 荧光定量PCR 相关性 菌群紊乱
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小麦K2型脱水蛋白DHN14响应非生物胁迫的功能分析 预览
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作者 史学英 田野 +2 位作者 李核 齐玉红 张林生 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第5期23-31,41共10页
【目的】研究脱水蛋白DHN14的功能及其在植物响应非生物胁迫中的潜在作用。【方法】从小麦品种'郑引1号'克隆获得脱水蛋白基因DHN14,对其进行生物信息学分析,利用实时定量PCR分析该基因在逆境胁迫下的表达水平,构建脱水蛋白DHN1... 【目的】研究脱水蛋白DHN14的功能及其在植物响应非生物胁迫中的潜在作用。【方法】从小麦品种'郑引1号'克隆获得脱水蛋白基因DHN14,对其进行生物信息学分析,利用实时定量PCR分析该基因在逆境胁迫下的表达水平,构建脱水蛋白DHN14基因的原核表达载体(重组菌pET28a-DHN14),经IPTG诱导表达后,在非生物胁迫下,研究该蛋白对大肠杆菌及乳酸脱氢酶(LDH)的保护作用。【结果】克隆获得脱水蛋白基因DHN14的CDS为339 bp,编码112个氨基酸,该蛋白含有2个保守的K片段,属于高亲水性无序蛋白,其分子质量为24 ku,等电点(pI)约为6.28;多序列比对分析表明,DHN14蛋白与WCOR726(Triticum aestivum)脱水蛋白的亲缘关系最近;实时定量RT-PCR结果表明,脱水蛋白基因DHN14受干旱、低温和ABA诱导表达;在20 mmol/L金属离子(Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+)胁迫下,表达DHN14重组蛋白的大肠杆菌的活力明显高于对照,表明该蛋白在大肠杆菌中对金属离子胁迫具有保护作用;用1.0 mmol/L过氧化氢进行胁迫处理,重组菌DHN14存活率显著增高,说明脱水蛋白DHN14能够提高大肠杆菌对过氧化氢胁迫的耐受性;在低温和脱水胁迫下,DHN14脱水蛋白对乳酸脱氢酶的活性具有保护作用。【结论】小麦脱水蛋白DHN14能够响应非生物胁迫,提高对低温、干旱、金属离子、过氧化氢的耐受性。 展开更多
关键词 脱水蛋白 非生物胁迫 小麦 乳酸脱氢酶 荧光实时定量PCR
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经支气管镜针吸活检联合多标志物检测在肺癌病理分型中的应用价值 预览
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作者 陈菁 刘旭 +1 位作者 杨硕 罗光伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期342-345,共4页
目的评价甲状腺转录因子-1(TTF-1)、p63、细胞角蛋白(CK)5、CK7等指标单独或联合应用在肺癌病理分型中的诊断价值。方法通过经支气管镜针吸活检术获得肺癌病理组织标本,采用实时PCR法检测TTF-1、p63、CK5、CK7等标志物的表达水平。结果... 目的评价甲状腺转录因子-1(TTF-1)、p63、细胞角蛋白(CK)5、CK7等指标单独或联合应用在肺癌病理分型中的诊断价值。方法通过经支气管镜针吸活检术获得肺癌病理组织标本,采用实时PCR法检测TTF-1、p63、CK5、CK7等标志物的表达水平。结果与肺腺癌相比,肺鳞状细胞癌中TTF-1(P=0.006)、CK7(P=0.012)表达水平显著降低,p63(P=0.008)、CK5(P=0.025)表达水平显著升高。综合各指标建立综合评分诊断模型,计算综合评分(TS)。TS诊断腺癌和鳞状细胞癌分型时,与各单个指标相比,具有最高的灵敏度(0.942)和特异度(0.841),诊断价值最佳。而与单因素指标相比,TS的腺癌检出率(P=0.040)、鳞状细胞癌检出率(P=0.013)及总检出率(P<0.001)均显著升高。结论利用经支气管镜针吸活检术获取肺癌患者病理组织,并应用实时PCR法检测肺癌分型重要分子标志物TTF-1、p63、CK7、CK5等的表达水平,能够对肺癌病理分型进行诊断分析,且综合运用各分子标志物的TS能够获得更高的诊断效率。 展开更多
关键词 针吸活检 实时PCR 肺癌分型 分子标志物
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2015-2017年新疆石河子市手足口病病原学检测分析
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作者 梁洁 钟敏 陆志刚 《医学动物防制》 2019年第4期359-361,共3页
目的了解2015-2017年石河子市手足口病病原学分布特征,为石河子市手足口病的防控提供科学依据。方法采用实时荧光RT-PCR方法对采集的192份手足口病患儿标本进行检测,对检测结果进行统计描述和分析。结果192份手足口病病例标本中共检出... 目的了解2015-2017年石河子市手足口病病原学分布特征,为石河子市手足口病的防控提供科学依据。方法采用实时荧光RT-PCR方法对采集的192份手足口病患儿标本进行检测,对检测结果进行统计描述和分析。结果192份手足口病病例标本中共检出肠道病毒核酸阳性34份,阳性率为17. 71%,其中EV 7l阳性23份,Cox A16阳性9份,EV 7l和Cox A16双重阳性2份;阳性率分别为11. 98%(23/192)、4. 69%(9/192)和1. 04%(2/192);手足口病全年各月均可发病,具有明显的季节性,主要集中在5~7月。不同年份和不同性别的肠道病毒阳性检出率差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 EV 71、Cox A16是石河子市手足口病的主要病原,应持续开展手足口病病原学监测,并加强手足口病疫苗的预防接种。 展开更多
关键词 手足口病 荧光RT-PCR EV 71 COX A16
实时荧光PCR法鉴定食用淀粉植物来源
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作者 韩建勋 陈颖 +2 位作者 吴亚君 王斌 邓婷婷 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期291-300,共10页
以红薯g3pdh基因、藕ITS1-5.8S-ITS2基因、山药rbcL基因和葛根CHI基因等设计红薯、藕、山药以及葛根特异性引物探针;结合文献报道的木薯、大米、小麦、玉米及马铃薯特异性引物探针,建立红薯、木薯、马铃薯、藕、山药、葛根、大米、玉米... 以红薯g3pdh基因、藕ITS1-5.8S-ITS2基因、山药rbcL基因和葛根CHI基因等设计红薯、藕、山药以及葛根特异性引物探针;结合文献报道的木薯、大米、小麦、玉米及马铃薯特异性引物探针,建立红薯、木薯、马铃薯、藕、山药、葛根、大米、玉米及小麦等9种常见食用淀粉的实时荧光PCR检测方法。该方法特异性强,绝对灵敏度0.01 ng/μL,相对灵敏度1%(质量分数)。对50份市售淀粉样品的检测表明,在红薯淀粉、马铃薯淀粉、藕粉及葛根粉等中均检出非标识的马铃薯、木薯或玉米等成分,标签错误标识率达32%。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 淀粉 鉴定 红薯
EB病毒核酸定量检测试剂性能验证及评价 预览
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作者 曲沛 郭杰 +4 位作者 徐新民 焦炳欣 郭晶晶 方茜 王雅杰 《标记免疫分析与临床》 CAS 2019年第5期863-866,共4页
目的验证EB病毒核酸定量检测试剂的分析性能是否与厂商提供参数相符从而评估检测指标对于临床的服务能力。方法采用首都医科大学附属北京地坛医院收集的不同浓度的临床标本,对EB病毒核酸定量检测试剂的精密度、准确性、线性范围等性能... 目的验证EB病毒核酸定量检测试剂的分析性能是否与厂商提供参数相符从而评估检测指标对于临床的服务能力。方法采用首都医科大学附属北京地坛医院收集的不同浓度的临床标本,对EB病毒核酸定量检测试剂的精密度、准确性、线性范围等性能参数进行方法学性能验证和评价。结果高浓度和低浓度标本的批内精密度CV值(0.58%,2.3%)及批间精密度CV值(2.25%,0.49%)均≤5%,符合要求。准确性验证偏移(1.47%、2.99%、-1.89%、-3.10%、-0.30%和-2.68%)均≤7.5%的标准,符合要求;在7.74×10~6.71×10^6IU/mL分析测量线性范围良好。结论通过验证,EB病毒核酸定量检测试剂可以满足目前EB病毒的筛查和临床疗效监测的需要,适用于临床常规检测。 展开更多
关键词 EB病毒 定量检测 性能验证 荧光定量PCR
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CCNB1基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义 预览
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作者 崔宇平 马洪 +1 位作者 段晓峰 孙昆俊 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期395-397,共3页
目的:研究细胞周期蛋白B1(CCNB1)mRNA在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CCNB1 mRNA在42例OSCC组织和17例口腔正常黏膜组织中的表达,并分析其相对表达量与临床特... 目的:研究细胞周期蛋白B1(CCNB1)mRNA在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:利用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测CCNB1 mRNA在42例OSCC组织和17例口腔正常黏膜组织中的表达,并分析其相对表达量与临床特征的关系。结果:CCNB1 mRNA在OSCC中高表达(P<0.05),高分化组织中表达量低于中低分化者(P<0.05),临床Ⅰ、Ⅱ期组低于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)。不同年龄、不同性别组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CCNB1基因表达的增高可能在OSCC增殖过程中起到重要作用。 展开更多
关键词 细胞周期蛋白B1(CCNB1) 口腔鳞状细胞癌(OSCC) 实时定量荧光聚合酶链反应
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NO及SA诱导三生烟草抗逆调控基因的动态分析
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作者 宿梅飞 王俊红 魏小红 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1796-1803,共8页
本研究以8~10真叶期的三生烟草为试验材料,用浓度均为0.5 mmol/L的NO供体硝普钠(SNP)和水杨酸(SA)喷施处理0、12 h、24 h和36 h后取样,通过实时荧光定量PCR (RT-PCR)等一系列分子生物学手段探讨外源NO和SA诱导烟草中抗逆顺乌头酸基因(Nt... 本研究以8~10真叶期的三生烟草为试验材料,用浓度均为0.5 mmol/L的NO供体硝普钠(SNP)和水杨酸(SA)喷施处理0、12 h、24 h和36 h后取样,通过实时荧光定量PCR (RT-PCR)等一系列分子生物学手段探讨外源NO和SA诱导烟草中抗逆顺乌头酸基因(NtACO)、非表达子病程相关蛋白基因(NPR1)和谷胱甘肽转硫酶基因(GST)的表达动态。结果表明:在处理12~36 h后,外源SNP和SA都不能诱导NtACO基因加强表达,不同的是SNP处理后NtACO基因相对表达水平呈现先升高后降低的趋势。SA处理后NtACO基因相对表达水平呈下降趋势;在处理12~36 h后,SNP和SA都能诱导NPR1基因表达量增加,但在不同时间内产生不同的效应。外源施用SNP处理烟草后NPR1基因相对表达水平呈先升高后降低的变化趋势,其表达水平在12 h增至最高(p<0.01)。SA处理后NPR1基因相对表达水平一直呈上升的动态变化(p<0.01),且随处理时间的延长表达量增加;在处理12~36 h后,SNP与SA处理对GST基因的调控作用不同。SNP处理GST基因表达呈下降趋势(p<0.01)。SA处理GST基因表达总体呈上升趋势,并在36 h GST基因相对表达水平达到最高(p<0.01),表明SA正向调控GST基因表达。本研究通过外源NO和SA对上述三个基因的研究,以明晰NO和SA在植物抗逆反应中的关键作用,旨在为培育优良烟草新品种与提高烟草抗逆性提供一定的科学依据。 展开更多
关键词 一氧化氮 水杨酸 基因表达 实时荧光定量PCR
陆川猪Myf5基因克隆及其在背最长肌中发育性变化表达研究
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作者 朱麒 谭家明 +3 位作者 夏琴 瞿秋红 蒋钦杨 黄艳娜 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期6-10,16共6页
为了获得广西陆川猪生肌调节因子(Myf5)基因编码区序列(CDS),并探讨该基因在陆川猪背最长肌中的发育性表达情况,试验以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,克隆获得Myf5基因CDS,运用生物信息学软件进行测序及分析,并利用实时荧光定量PCR技... 为了获得广西陆川猪生肌调节因子(Myf5)基因编码区序列(CDS),并探讨该基因在陆川猪背最长肌中的发育性表达情况,试验以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,克隆获得Myf5基因CDS,运用生物信息学软件进行测序及分析,并利用实时荧光定量PCR技术检测30,150,180,240,300日龄陆川猪背最长肌中Myf5基因的相对表达量。结果表明:试验克隆得到的陆川猪Myf5基因CDS全长为768 bp;与GenBank上公布的香猪(KC456667.1)Myf5基因CDS的同源性为99.6%;陆川猪存在第205位点的C→A,导致亮氨酸突变为蛋氨酸;广西陆川猪与香猪的遗传距离最近,它们聚为同一支;陆川猪Myf5蛋白氨基酸组成中丝氨酸含量最高,占氨基酸总数的13.7%;Myf5蛋白具有较强的亲水性,其蛋白高级结构包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲;陆川猪背最长肌Myf5基因相对表达量表现为30日龄时最高,在30~240日龄呈下降趋势,240~300日龄呈上升趋势。 展开更多
关键词 陆川猪 Myf5基因 克隆 背最长肌 发育性变化 生物信息学 实时荧光定量PCR
猪圆环病毒3型感染BALB/c小鼠的实验观察 预览
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作者 张超林 刘攀 +10 位作者 沈萌 王妍 王娟 颜世君 严权斌 邓均华 孙哲 郭小参 王同燕 李向东 田克恭 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期353-358,共6页
目的研究猪圆环病毒3型(porcine circovirus3,PCV3)对BALB/c小鼠的感染情况。方法将雌性BALB/c小鼠分为两组,实验组感染PCV3组织毒,对照组接种同样剂量的PBS。感染后每天观察小鼠状态,并在第0,3,7,11和14天采血进行荧光定量PCR检测和EL... 目的研究猪圆环病毒3型(porcine circovirus3,PCV3)对BALB/c小鼠的感染情况。方法将雌性BALB/c小鼠分为两组,实验组感染PCV3组织毒,对照组接种同样剂量的PBS。感染后每天观察小鼠状态,并在第0,3,7,11和14天采血进行荧光定量PCR检测和ELISA检测。实验结束后,对所有动物进行安乐死和剖检,对心脏、肝、脾、肺、肾、脑和淋巴结取样进行荧光定量PCR检测,并制片进行组织病理学检查。选择PCR检测阳性组织进行PCV3CAP基因测序分析。结果PCV3组织毒感染小鼠不引起明显的临床症状和病理变化。病毒可在感染早期的血清中检测到,病毒含量最高的器官是肝脏和脾脏,PCV3感染小鼠后核酸序列未发生变化。随着感染时间的增加血清中抗体水平逐渐升高。结论PCV3可以感染BALB/c小鼠,并在小鼠体内增殖。本研究结果为猪圆环病毒3型致病性的研究以及防控提供了参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 BALB/C小鼠 感染 荧光定量PCR ELISA 组织病理学
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紫苏茉莉酸羟基甲基转移酶基因PfJMT的克隆及表达分析 预览
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作者 白辉扬 鲁庚 +3 位作者 陆俊杏 管丽 唐鑫 张涛 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1657-1666,共10页
[目的]茉莉酸羟基甲基转移酶(jasmonic acidc arboxyl methyltransferase,JMT)是植物茉莉酸甲酯生物合成的关键酶,通过克隆紫苏JMT,并研究其在不同胁迫下和种子不同发育时期的表达模式,为研究JMT在植物防御和种子发育中的作用提供理论... [目的]茉莉酸羟基甲基转移酶(jasmonic acidc arboxyl methyltransferase,JMT)是植物茉莉酸甲酯生物合成的关键酶,通过克隆紫苏JMT,并研究其在不同胁迫下和种子不同发育时期的表达模式,为研究JMT在植物防御和种子发育中的作用提供理论依据。[方法]根据紫苏种子转录组测序结果设计引物,从紫苏中克隆得到紫苏茉莉酸羟基甲基转移酶基因的DNA和cDNA序列,命名为PfJMT,通过生物信息学分析该基因的结构、稳定性、亲水性、亚细胞定位及保守结构域等,利用系统进化树分析PfJMT和其他物种JMT蛋白的进化关系。取开花期的紫苏根、茎、叶、花等组织用于组织特异性表达分析。取开花后5、10、15、20、25和30d的种子用于JMT在种子不同发育时期表达模式的研究。用25μmol·L^-1茉莉酸甲酯(methy ljasmonate,MeJA)和1mmol·L^-1水杨酸(salicylic acid,SA)喷洒处理具有4片真叶的紫苏幼苗并浇灌根部,分别于处理0、2、4、8、16、24和48h后取样,研究JMT在不同胁迫下的表达模式。[结果]PfJMT的ORF长1050bp,编码349个氨基酸。生物信息学分析表明,PfJMT为不稳定的亲水蛋白,亚细胞定位于细胞质,含有一个甲基转移酶-7(Methyltransf-7)保守结构域。通过与其他物种的JMT蛋白多序列比对发现,紫苏JMT和丹参JMT的序列一致度最高,为80.5%,和水稻的序列一致度最低,为36.8%。在对多种不同植物基于JMT蛋白构建系统进化树的分析中发现紫苏和拟南芥、丹参等双子叶植物亲缘关系较近,而与建兰、水稻等单子叶植物亲缘关系较远,说明JMT在单子叶和双子叶植物的进化过程中可能存在较大的差异。荧光定量PCR结果表明,PfJMT在紫苏根和茎中的相对表达量最低,叶和花中的相对表达量比根和茎中略高,在开花后5d的种子中的表达量最高,并且随着种子的发育表达逐渐下调,说明JMT在种子发育中起着重要作用。在使用外源MeJA和SA处理的� 展开更多
关键词 紫苏 茉莉酸羟基甲基转移酶 茉莉酸甲酯 种子发育 荧光定量PCR
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猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型双重荧光PCR检测方法的建立
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作者 修晓娜 李天芝 +1 位作者 于新友 唐娜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期954-960,共7页
为建立快速简便检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的方法,本研究根据GenBank中已登录的PRRSVORF7基因序列和PCV2 ORF1基因序列,设计了2对特异性引物和2条TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测PRRSV和PCV2的双... 为建立快速简便检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的方法,本研究根据GenBank中已登录的PRRSVORF7基因序列和PCV2 ORF1基因序列,设计了2对特异性引物和2条TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了检测PRRSV和PCV2的双重荧光PCR方法。结果显示,该方法特异性好,不与其他常见猪病病原体发生交叉反应,检测PRRSV和PCV2的灵敏度分别可达1.05 TCID50/100L和6.30 TCID50/100μL,表明,本试验建立的双重TaqMan荧光定量PCR检测方法可对PRRSV和PCV2进行快速诊断,适合现场检测,为这两种疫病的诊断和防控奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 荧光PCR TAQMAN探针
土贝母苷甲对单纯疱疹病毒1型和2型的增殖和基因组复制的抑制效应
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作者 王巧利 于立坚 +3 位作者 王一飞 马润娣 李风 于廷曦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期569-577,共9页
土贝母苷甲(Tubeimoside 1,TBMS1),简称苷甲,是一种独特的,由贝咢苷元和4种单糖(葡萄糖、鼠李糖、木糖和阿拉伯糖)组成的五环三萜皂苷。以前的研究证实,苷甲具有抗人免疫缺陷病毒的活性。本文研究苷甲对单纯疱疹病毒(Herpes simplex vir... 土贝母苷甲(Tubeimoside 1,TBMS1),简称苷甲,是一种独特的,由贝咢苷元和4种单糖(葡萄糖、鼠李糖、木糖和阿拉伯糖)组成的五环三萜皂苷。以前的研究证实,苷甲具有抗人免疫缺陷病毒的活性。本文研究苷甲对单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)1型和2型增殖和基因组复制的影响。从土贝母块茎中提取、分离苷甲(在本实验中使用的纯度大于95%),以空斑法测定病毒滴度,通过观察致细胞病变效应和空班形成抑制试验来检测苷甲的抗病毒活性,用实时定量PCR技术检测苷甲对HSV-1和HSV-2基因组复制的影响。结果显示,苷甲显著抑制HSV-1和HSV-2毒株的增殖,显著抑制HSV-1和HSV-2的UL27、UL52和UL54三个基因的拷贝数,且其抑制作用呈明显量效依赖关系。无毒高浓度(0.39μg/mL~0.78μg/mL)的苷甲对阿昔洛韦(acyclovir,ACV)耐药毒株HSV-1/106的增殖也显示抑制活性。本研究结果揭示苷甲具有显著抑制HSV-1和HSV-2增殖及基因组复制的活性,无毒高浓度苷甲对HSV-1/106耐药毒株的增殖也显示抑制活性。 展开更多
关键词 土贝母苷甲(TBMS1) 单纯疱疹病毒(HSV)1型和2型 细胞病变效应(CPE) 空班形成抑制试验 增殖 实时定量PCR 基因组复制
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