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重组柯萨奇病毒构建及其感染性研究
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作者 周冬 高孟 +8 位作者 高丽美 吴洁 杨宏宏 陈刚 高磊 姜云水 李剑波 李永学 庄昉成 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2019年第2期93-98,共6页
目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR... 目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长cDNA,PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体,利用T7聚合酶系统将线性基因组cDNA体外转录得到病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得重组病毒Re,并对Re进行显微镜观察、基因测序、免疫荧光等方法检测鉴定其感染性.结果构建的CV-A6、CV-A16、Re经电泳鉴定可见约7 500 bp的条带.得到的pBM16A-CV-A6、pBM16A-CV-A16、pBM16A-Re经限制性内切酶双酶切鉴定,可见约7 500 bp的目的条带和约1 800 bp的载体条带.构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致.细胞形态学鉴定显示,CV-A16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变,CV-A6及Re组则没有明显病变;RT-PCR鉴定也得出相同结果.结论成功构建重组CV-A6、CV-A16和重组病毒Re,重组CV-A16与母本野生型病毒增殖特性基本一致,重组病毒pBM16A-Re丧失细胞感染性. 展开更多
关键词 柯萨奇病毒感染 反向遗传技术 重组病毒 感染性
一株携带犬细小病毒VP2融合基因的重组狂犬病毒的构建 预览 被引量:1
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作者 谭业平 赵静 +1 位作者 郭霄峰 何孔旺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期866-870,共5页
为构建预防狂犬病毒和犬细小病毒的疫苗候选毒株,将编码狂犬病毒G蛋白的中和抗原表位的碱基序列插入犬细小病毒VP2基因中,再将VP2融合基因插入狂犬病毒全基因组的G和L基因之间,然后应用反向遗传操作技术构建重组狂犬病毒。直接免疫荧光... 为构建预防狂犬病毒和犬细小病毒的疫苗候选毒株,将编码狂犬病毒G蛋白的中和抗原表位的碱基序列插入犬细小病毒VP2基因中,再将VP2融合基因插入狂犬病毒全基因组的G和L基因之间,然后应用反向遗传操作技术构建重组狂犬病毒。直接免疫荧光染色结果显示成功获得重组狂犬病毒r HEP-r VP2;生物学特性研究结果显示重组病毒随着在BHK-21细胞上传代次数的增加,病毒滴度逐渐升高,呈现良好繁殖特性;RT-PCR结果显示携带VP2融合基因的重组病毒具有良好遗传稳定性,重组病毒免疫小鼠可诱导产生保护性抗狂犬病毒和犬细小病毒抗体。 展开更多
关键词 狂犬病毒 犬细小病毒VP2基因 反向遗传技术
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反向遗传学技术在鸡传染性法氏囊病病毒研究中的应用进展
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作者 沈巍巍 陈果 +1 位作者 何秀苗 韦平 《中国家禽》 北大核心 2016年第17期45-49,共5页
反向遗传学技术是研究鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的一种新手段,从"基因-性状"层面对基因突变、节段重排等生物学特性的改变进行解读,可突破常规的对IBDV从"性状-基因"进行研究的局限性。本文主... 反向遗传学技术是研究鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的一种新手段,从"基因-性状"层面对基因突变、节段重排等生物学特性的改变进行解读,可突破常规的对IBDV从"性状-基因"进行研究的局限性。本文主要对IBDV反向遗传操作系统的建立及其在IBDV细胞嗜性、毒力分子基础、致病机制及致弱机理等重要生物特性中的应用进行综述。 展开更多
关键词 反向遗传技术 鸡传染性法氏囊病病毒 细胞嗜性 毒力相关分子
鞭毛蛋白及鸡GM-CSF重组新城疫病毒对鸡的免疫增强作用 预览 被引量:1
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作者 王卉 张天援 +7 位作者 吕政 孙田 尹杰超 吴云舟 刘云野 吴金 任桂萍 李德山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期40-43,共4页
为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rCl... 为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rClone30-fliC和rClone30-GM-CSF.RT-PCR和ELISA检测结果表明:fliC和chGM-CSF基因正确插入重组病毒,并获得稳定表达;重组病毒免疫7d后重组NDV HI抗体效价检测显示,实验组平均HI效价分别达到4.5 log2和4.8 log2,而rClone30组和空白组HI效价仅为3 log2和1 log2;免疫7d后攻毒,空白组SPF鸡均死亡,rClone30组有两例发病,实验组SPF鸡全部存活并且无任何临床症状.本研究结果表明,FliC和chGM-CSF作为佐剂能够有效提高弱毒疫苗的免疫效果. 展开更多
关键词 鞭毛蛋白 鸡GM-CSF 新城疫病毒 反向遗传操作技术
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