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一种基于VP6基因的A组轮状病毒拷贝数实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 黄蓉 蒋鸿超 +4 位作者 李小曼 王明英 王美芬 孙强明 张桢 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期575-578,共4页
目的建立一种基于VP6基因的A组轮状病毒(rotavirus,RV)拷贝数的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。方法提取病毒液中RV基因组RNA,经RT-PCR扩增VP6基因片段,回收PCR产物克隆至pMD-19T载体,将鉴定正确的阳性菌株常规培养制备标准品质粒,... 目的建立一种基于VP6基因的A组轮状病毒(rotavirus,RV)拷贝数的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法。方法提取病毒液中RV基因组RNA,经RT-PCR扩增VP6基因片段,回收PCR产物克隆至pMD-19T载体,将鉴定正确的阳性菌株常规培养制备标准品质粒,建立RT-qPCR病毒拷贝数检测方法,以标准品质粒Ct值为横坐标,拷贝数的对数为纵坐标绘制标准曲线,依据标准曲线方程检测样品中RV拷贝数。结果标准品质粒经酶切及测序鉴定证明构建正确;获得RV标准品质粒的标准曲线方程为y=-0. 246 3 x+10. 957,R2=0. 995 5;原倍及稀释度为1×10-3的样品溶液的RV病毒拷贝数分别为265 319. 903 5、1 682. 228 735 copies/μL。结论建立的RT-qPCR拷贝数检测方法,能在早期快速准确的检测RV,该方法稳定性较好,可据此标准曲线方程对样品中的RV进行绝对定量,为RV研究及临床检查提供了检测工具。 展开更多
关键词 轮状病毒 VP6基因 实时荧光定量PCR 基因拷贝数
猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒和轮状病毒多重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 刘邓 贾泽颖 +5 位作者 张丹 全炎铭 郭又春 刘莉如 刘修全 陈华林 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第8期45-50,288,289共8页
为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针... 为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针,优化反应条件,开展特异性、敏感性、重复性和验证试验。结果表明:该方法的检测最低限为1×10~2拷贝/μL的RNA标准品或1×10~(-2)TCID_(50)/mL的疫苗毒,具有较高的敏感性;变异系数均小于10%,符合统计学要求;利用本试验所建立的方法以及商品化试剂盒对20份临床样品进行检测,符合率为100%。说明本试验建立的方法特异性好,敏感性高,重复性稳定,可用于PEDV、TGEV和RV的鉴别诊断和防控。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 轮状病毒(RV) 检测 多重实时荧光定量PCR
轮状病毒的早期细胞侵入机制
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作者 冉旭华 刘阳阳 闻晓波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第9期986-989,共4页
轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界范围内婴幼儿及多种幼龄动物腹泻的最主要传染性病原。该无囊膜病毒可以通过多种方式侵入细胞,而且不同的病毒毒株在细胞侵入机制上存在较大差异。阐明RV的细胞侵入机制将有助于解析病毒的致病机... 轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界范围内婴幼儿及多种幼龄动物腹泻的最主要传染性病原。该无囊膜病毒可以通过多种方式侵入细胞,而且不同的病毒毒株在细胞侵入机制上存在较大差异。阐明RV的细胞侵入机制将有助于解析病毒的致病机制并有利于疾病防控,降低其所造成的社会负担和经济损失。本文对RV在细胞侵入的早期阶段的侵入机制作一综述。 展开更多
关键词 轮状病毒 病毒侵入 受体 内吞
轮状病毒在不同细胞上培养效果的比较
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作者 李云富 李刚 +5 位作者 黄伟荣 黄勇 刘春庭 付臻鹏 林上炎 罗翀 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期641-643,共3页
目的比较轮状病毒(rotavirus,RV)在不同细胞上的培养效果,确定RV最适培养细胞株。方法采用原代牛肾细胞(PCKC)、MA104细胞、CV-1细胞、Vero细胞4种细胞培养RV,观察RV在不同细胞培养过程中细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并... 目的比较轮状病毒(rotavirus,RV)在不同细胞上的培养效果,确定RV最适培养细胞株。方法采用原代牛肾细胞(PCKC)、MA104细胞、CV-1细胞、Vero细胞4种细胞培养RV,观察RV在不同细胞培养过程中细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并检测病毒收获液的病毒毒力及病毒RNA。结果 MA104和PCKC细胞较适宜RV的增殖培养,其次是CV-1细胞,而Vero细胞感染病毒后3 d才出现CPE,6 d才有约75%的细胞圆缩死亡,这时收获的病毒液滴度也不及前3种细胞的病毒收获液滴度,且收获液的病毒RNA电泳的条带较模糊。结论 MA104、PCKC、CV-1细胞较适宜RV的增殖培养,而应用于大规模生产疫苗的Vero细胞培养RV要想达到前3种细胞的效果,还需进一步完善感染和培养方法。 展开更多
关键词 轮状病毒 细胞培养
轮状病毒的LLR疫苗株全基因组克隆及结构蛋白VP6基因遗传特征 预览 被引量:1
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作者 赵雅静 魏然 +4 位作者 冯德杰 刘晨鸣 魏至栋 高雪军 朱莉萍 《微生物学免疫学进展》 2015年第1期1-7,共7页
目的 了解轮状病毒(RV)的LLR疫苗株全基因组基因和蛋白特征、完善关键基因遗传稳定性研究,为疫苗的质量控制和研发提供依据.方法 将LLR株毒种第38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR方法扩增LL... 目的 了解轮状病毒(RV)的LLR疫苗株全基因组基因和蛋白特征、完善关键基因遗传稳定性研究,为疫苗的质量控制和研发提供依据.方法 将LLR株毒种第38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR方法扩增LLR株(38代)全基因组11个dsRNA片段和传代病毒VP6基因,分别将其克隆到pGEM-T载体中,进行序列测定与分析.结果 LLR株全基因组11条RNA,由18 498个核苷酸组成,共编码5 796个氨基酸;全基因组研究表明,所克隆的LLR株属于G10P[15]/NSP4[A]/SG Ⅰ基因型.LLR株VP6基因全长1 356 bp,含编码397个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF).各代次病毒的VP6基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBank中LLR参考株(L11595)同源性分别为99.9%和99.7%.与16株SG Ⅰ亚群RV代表株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.0% ~ 99.7%和97.0% ~ 99.2%;与不同亚群RV代表株之间,VP6基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为77.7% ~ 82.2%和92.2% ~93.5%;LLR株各代病毒VP6基因核苷酸、氨基酸序列高度保守,各关键功能区未发生变异.结论 LLR疫苗株关键基因遗传特性稳定,为在分子水平保证LLR株毒种及其生产疫苗的安全性提供了依据;其全基因组克隆,为进一步研究RV生物学、免疫学和确定该病毒的分类学地位提供了科学依据. 展开更多
关键词 轮状病毒 兰州羔羊轮状病毒(LLR)株 基因组克隆 VP6基因 遗传稳定性
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牛UK株轮状病毒VP8蛋白多拷贝嵌合表位的免疫原性分析 被引量:1
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作者 冉旭华 张峣 +4 位作者 苗艳 曹思 魏晓曼 闻晓波 倪宏波 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1429-1434,共6页
轮状病毒VP8*蛋白由纤突蛋白VP4裂解形成,VP8*蛋白决定了VP4蛋白血清特异性中和反应相关,本试验原核表达UK株牛轮状病毒VP8*多拷贝嵌合肽段,纯化并比较分析其免疫原性。首先根据GenBank上发表的牛轮状病毒UK株VP8*蛋白的编码序列及... 轮状病毒VP8*蛋白由纤突蛋白VP4裂解形成,VP8*蛋白决定了VP4蛋白血清特异性中和反应相关,本试验原核表达UK株牛轮状病毒VP8*多拷贝嵌合肽段,纯化并比较分析其免疫原性。首先根据GenBank上发表的牛轮状病毒UK株VP8*蛋白的编码序列及可能的主要抗原表位区(aa 1~11和aa 218~235),设计并合成引物,以扩增这两个区段的嵌合基因,克隆到原核表达载体pET-28α(+)上,并通过酶切位点连接构建嵌合基因的3拷贝重复重组表达载体,同时构建单拷贝和全长VP8*表达载体。重组载体转化到E.coli感受态细胞中,IPTG诱导表达后,重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot证实重组蛋白大小与预期相符且能与His-tag单抗发生特异性反应;ELISA结果表明免疫后3拷贝蛋白较单拷贝蛋白血清抗体水平更高。本试验确定了原核表达的3拷贝嵌合VP8*重组蛋白免疫后具有良好的抗原性,为今后抗轮状病毒疫苗的研制及抗轮状病毒药物的发展提供参考。 展开更多
关键词 轮状病毒 VP8*蛋白 表位疫苗 原核表达 免疫原性
复合模式介质Captocore700纯化轮状病毒 被引量:3
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作者 姜英 韩平 +4 位作者 胡广宏 王名强 包红 汪洲 周旭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期72-78,共7页
目的采用复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒(rotavirus,RV),去除培养液中的残余细胞宿主蛋白和DNA,提高病毒收率。方法将RV LH9毒种接种Vero细胞,制备RV原液,澄清、超滤后,用Capto core 700纯化:样品LH9、LH9+150 mmol/L Na ... 目的采用复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒(rotavirus,RV),去除培养液中的残余细胞宿主蛋白和DNA,提高病毒收率。方法将RV LH9毒种接种Vero细胞,制备RV原液,澄清、超滤后,用Capto core 700纯化:样品LH9、LH9+150 mmol/L Na Cl[以缓冲液A(20 mmol/L PB+150 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化分别标记为A、B组合,样品LH9+300 mmol/L Na Cl[以缓冲液B(20mmol/L PB+300 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为C组合,样品LH9+450 mmol/L Na Cl[以缓冲液C(20 mmol/L PB+450 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为D组合,洗脱,收集流穿峰,检测纯化后病毒的滴度和收率、RV RNA、RV抗原性、残余宿主细胞蛋白(HCP)和DNA;并用初步筛选出的纯化组合纯化3批RV超滤浓缩液,检测各项指标,进行进一步验证。结果用20 mmol/L PB+150 mmol/L Na CL缓冲体系和样品中加入150 mmol/L Na Cl的组合纯化RV,病毒收率在80%以上,病毒核酸完整,其抗原性未发生改变,可去除94%以上的HCP,残余DNA符合《中国药典》三部(2010版)标准。结论 Capto core 700纯化RV收率和残余蛋白去除效率均较高,组合B操作相对简便,工艺时间短,病毒收率高,更适于RV的纯化。 展开更多
关键词 Capto CORE 700 纯化 轮状病毒
轮状病毒原液不同澄清、超滤方式效果的比较
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作者 姜英 王明强 +4 位作者 胡广宏 安红 包红 寇桂英 周旭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第10期1321-1324,共4页
目的 比较轮状病毒(rotavirus,RV)原液不同澄清、超滤方式的效果。方法RV原液经0.65μm中空纤维微滤或圆片膜澄清后,分别采用750、300、100、300+100 KD中空纤维及100、300 KD膜包进行超滤,比较两种澄清方式所得样品的浊度、病毒滴... 目的 比较轮状病毒(rotavirus,RV)原液不同澄清、超滤方式的效果。方法RV原液经0.65μm中空纤维微滤或圆片膜澄清后,分别采用750、300、100、300+100 KD中空纤维及100、300 KD膜包进行超滤,比较两种澄清方式所得样品的浊度、病毒滴度、收率和操作时间及各种超滤方式所得样品的病毒滴度、收率、病毒RNA稳定性、抗原性、Vero细胞残余蛋白和残余DNA。结果 经0.65μm中空纤维和圆片膜澄清后,病毒收获液的浊度、滴度和收率差异均无统计学意义(P均〉0.05),圆片膜澄清时间更短;经300 KD中空纤维超滤后,病毒滴度和收率较高,去除Vero细胞残余蛋白的效果明显,操作更简便。结论0.65μm中空纤维和膜片澄清RV原液的效果无明显差异;300 KD中空纤维超滤RV原液,在病毒收率及去除残余蛋白方面具有明显优势。 展开更多
关键词 轮状病毒 中空纤维 澄清 超滤
灭活轮状病毒与灭活肠道病毒71型联合疫苗的免疫效果 被引量:3
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作者 叶静 米鍇 +3 位作者 吴晋元 郭莉莉 李鸿钧 孙茂盛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期292-295,共4页
目的评价灭活轮状病毒(rotavirus,RV)与灭活肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠,同时设单价疫苗组,均经小鼠腿部肌肉... 目的评价灭活轮状病毒(rotavirus,RV)与灭活肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠,同时设单价疫苗组,均经小鼠腿部肌肉注射,隔2周免疫1次,共2次,分别于每次免疫后2周,经小鼠尾静脉采血,分离血清,经56。c灭活30rain后,采用血清中和试验检测小鼠血清中抗RV和抗EV71中和抗体效价。结果初次免疫后14d,各组小鼠血清中RV特异性中和抗体阳转率为50%-67%,中和抗体效价为2.2-2.8,加强免疫后14d,抗体阳转率达100%,中和抗体效价为28.5-35.9。初次免疫后14d,各组小鼠血清中抗EV71中和抗体阳转率为83%-100%,中和抗体效价为4.0-7.1,加强免疫后14d,中和抗体阳转率达100%,中和抗体效价为25.4-71.8;联合疫苗组与单价疫苗组间抗RV及抗EV71中和抗体效价差异无统计学意义(P〉0.05);Rv和EV71抗原量按160/160EU配比时,可诱导出最高的抗RV抗体及抗EV71抗体应答。结论Rv与EV71联合疫苗可诱导小鼠产生针对两种病毒的体液免疫应答,抗体应答水平与疫苗抗原配比剂量相关,未发现两种抗原间有协同或拈抗作用。 展开更多
关键词 轮状病毒 肠道病毒71型 灭活疫苗 联合疫苗
轮状病毒致腹泻机制的研究进展 被引量:18
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作者 吴剑 段晨阳 +1 位作者 刘梦颖 何海洋 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第12期2389-2392,共4页
轮状病毒(Rotavirus,RV)是发展中国家致5岁内婴幼儿胃肠道感染,引起感染性腹泻的重要原因,每年因此而死亡的病例高达600,000多人。[1]近年来对此的研究也越来越多,但是其引起腹泻的具体病理生理机制始终未达成统一的说法。目前主要是... 轮状病毒(Rotavirus,RV)是发展中国家致5岁内婴幼儿胃肠道感染,引起感染性腹泻的重要原因,每年因此而死亡的病例高达600,000多人。[1]近年来对此的研究也越来越多,但是其引起腹泻的具体病理生理机制始终未达成统一的说法。目前主要是有两种假说,即轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)假说和肠道神经系统(ENS)假说。对于轮状病毒腹泻的预防及治疗,现阶段主要是进行减毒活疫苗预防,但其疗效不甚令人满意,并且有可能导致肠梗阻。[2-3]本文将对轮状病毒致婴幼儿腹泻的可能机制及其研究进展进行综述,此外,针对其独特的致病机制将讨论轮状病毒感染可能的预防策略。 展开更多
关键词 轮状病毒(Rotavirus RV) 感染性腹泻 非结构蛋白4(NSP4) 肠道神经系统(ENS)
轮状病毒LLR疫苗株非结构蛋白NSP4基因稳定性研究 预览 被引量:1
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作者 赵雅静 魏然 +4 位作者 冯德杰 刘晨鸣 魏至栋 高雪军 朱莉萍 《微生物学免疫学进展》 2013年第4期25-30,共6页
目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株NSP4基因的遗传特征及基因稳定性,为疫苗的质量控制提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增NSP4基因片段,将其克隆入质... 目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株NSP4基因的遗传特征及基因稳定性,为疫苗的质量控制提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38代在原代牛肾细胞上连续传至49代,提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增NSP4基因片段,将其克隆入质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析。结果 LLR株NSP4基因全长751 bp,含编码175个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF)。各代次病毒的NSP4基因核苷酸与推导的氨基酸序列完全一致,与GenBank中LLR参考株(AY219873)进行比较,核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为99.1%和99.7%,各关键功能区均未发生改变。与27株A~F不同基因群RV代表株进行比较,LLR株与A基因群RV的NSP4同源性较高,核苷酸推导的氨基酸同源性为89.2%~95.5%;与B、C、D、E、F基因群RV核苷酸推导的氨基酸同源性分别为83.5%~87.5%、85.2%~87.5%、65.9%~67.8%、27.6%~30.8%、77.8%;系统发生树显示LLR株与A基因群RV在一个分支内。结论轮状病毒LLR疫苗株在原代牛肾细胞上连续传代NSP4基因遗传特性极其稳定,从分子水平证明LLR疫苗株毒种及其生产的疫苗是安全的。 展开更多
关键词 轮状病毒(RV) LLR株 NSP4基因 基因稳定性 序列分析
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1568例婴幼儿腹泻轮状病毒检测及流行病学特征分析 预览 被引量:6
12
作者 姚淑雯 梁卓夫 +1 位作者 林爱君 王淑慧 《中国医药科学》 2013年第21期73-74,共2页
目的对1568例婴幼儿腹泻患者进行粪便轮状病毒(RV)抗原检测,分析其流行病学特征。方法以免疫金标记技术对2012年1-12月来我院就诊的腹泻患儿的1568例粪便标本进行RV抗原检测,并对检测结果进行统计分析。结果1568例粪便标本中,阳性... 目的对1568例婴幼儿腹泻患者进行粪便轮状病毒(RV)抗原检测,分析其流行病学特征。方法以免疫金标记技术对2012年1-12月来我院就诊的腹泻患儿的1568例粪便标本进行RV抗原检测,并对检测结果进行统计分析。结果1568例粪便标本中,阳性检出632例,阳性率为40.3%;不同性别腹泻患儿的阳性检出率差异不显著,无统计学意义(P〉0.05);10~12月的阳性检出率最高,其中12月最高,为51.7%。结论RV是婴幼儿腹泻的主要病原,其发病具有显著的季节性,建议于流行季节为6~24月龄的婴幼儿接种疫苗。 展开更多
关键词 腹泻 婴幼儿 轮状病毒(RV) 流行病学特征
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2011-2012年北京市密云县病毒性腹泻病原学监测分析 被引量:2
13
作者 贾丽丽 高雷 杨育松 《职业与健康》 CAS 2013年第23期3136-3137,共2页
目的探讨北京市密云县病毒性腹泻的病原学特点,为病毒性腹泻的防控提供参考依据。方法2011年4月-2012年3月采集在密云县医院、中医院和妇幼保健院肠道门诊就诊的腹泻患者粪便标本,进行病原学监测。结果133份粪便标本实验室检测结果显... 目的探讨北京市密云县病毒性腹泻的病原学特点,为病毒性腹泻的防控提供参考依据。方法2011年4月-2012年3月采集在密云县医院、中医院和妇幼保健院肠道门诊就诊的腹泻患者粪便标本,进行病原学监测。结果133份粪便标本实验室检测结果显示,杯状病毒的阳性检出率最高,为16.54%;其次为轮状病毒阳性率,为7.52%。对上述2种病毒与感染者性别、年龄以及发病季节的比较发现,除轮状病毒和杯状病毒与发病季节差异有统计学意义(P〈0.05)外,其余均无统计学意义。结论轮状病毒和杯状病毒是引起密云县病毒性腹泻的主要病原体,应进一步开展病毒性腹泻监测和阳性毒株分型工作。 展开更多
关键词 病毒性腹泻 轮状病毒 杯状病毒
轮状病毒与细胞表面受体相互作用的分子机制研究 预览 被引量:2
14
作者 张旭辉(综述) 周旭(审校) 余黎(审校) 《微生物学免疫学进展》 2012年第6期58-63,共6页
目的轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的重要病因。轮状病毒感染宿主细胞是一个多因素参与的复杂过程,包括病毒表面两种外壳蛋白与细胞表面唾液酸、整合素、热应激同源蛋白70等多种受体分子的相互作用。就轮状病毒与细胞受体相互作用的分... 目的轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的重要病因。轮状病毒感染宿主细胞是一个多因素参与的复杂过程,包括病毒表面两种外壳蛋白与细胞表面唾液酸、整合素、热应激同源蛋白70等多种受体分子的相互作用。就轮状病毒与细胞受体相互作用的分子机制作了简要论述。 展开更多
关键词 轮状病毒 唾液酸 整合素 热应激同源蛋白70 神经氨酸酶 相互作用
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悬浮Vero细胞快速扩增轮状病毒
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作者 张标 易山 +3 位作者 张光明 谢天宏 李鸿钧 孙茂盛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期526-528,532共4页
目的探讨在悬浮Vero细胞中快速扩增轮状病毒(RV)的方法。方法 Vero细胞经消化后,直接接种KMG1b7株RV。采用微量滴定法、PAGE和RT-PCR等方法比较悬浮扩增、静置培养及微载体发酵培养RV的感染性滴度、基因组核酸带型和型特异VP7基因序列... 目的探讨在悬浮Vero细胞中快速扩增轮状病毒(RV)的方法。方法 Vero细胞经消化后,直接接种KMG1b7株RV。采用微量滴定法、PAGE和RT-PCR等方法比较悬浮扩增、静置培养及微载体发酵培养RV的感染性滴度、基因组核酸带型和型特异VP7基因序列;采用电镜观察和Westernblot鉴定悬浮扩增RV的形态及结构蛋白的抗原性。结果悬浮细胞扩增的RV接种24h后病毒感染性滴度达峰值,为6.00lgCCID50/ml;而静置培养和微载体发酵培养分别在接种后(96±24)h和(48±6)h达峰值,分别为(6.00±0.25)lgCCID50/ml和(6.50±0.25)lgCCID50/ml。悬浮扩增的RV基因组呈典型的4-2-3-2G1血清型带型,G1型特异基因VP7序列未发生突变。悬浮扩增的RV形态和结构蛋白的抗原性未发生改变。结论在悬浮Vero细胞中扩增RV可以缩短病毒制备周期,提高病毒收获量,有利于RV疫苗的研制或生产。 展开更多
关键词 轮状病毒 VERO细胞 悬浮 扩增
急性轮状病毒腹泻患儿外周血单核细胞Toll样受体3 mRNA表达及血清γ干扰素和肿瘤坏死因子α水平 被引量:1
16
作者 资捷 王前 +2 位作者 郑磊 赵源 林立鹏 《中国小儿急救医学》 CAS 2010年第3期214-216,共3页
目的 探讨外周血单核细胞Toll样受体3(TLR3)mRNA表达与急性轮状病毒(RV)腹泻的关系.方法 选取61例急性RV腹泻患儿为研究对象,以实时荧光定量RT-PCR检测外周血单核细胞TLR3 mRNA表达,采用ELISA法检测血清IFN-γ、TNF-α,水平.结果 ... 目的 探讨外周血单核细胞Toll样受体3(TLR3)mRNA表达与急性轮状病毒(RV)腹泻的关系.方法 选取61例急性RV腹泻患儿为研究对象,以实时荧光定量RT-PCR检测外周血单核细胞TLR3 mRNA表达,采用ELISA法检测血清IFN-γ、TNF-α,水平.结果 重型腹泻组外周血单核细胞TLR3 mRNA表达及血清IFN-γ、TNF-α水平分别为0.820±0.051、(33.67±12.88)pg/ml、(62.21±14.65)pg/ml,而轻型腹泻组为0.717±0.040、(24.01±10.06)pg/ml、(50.99±12.18)pg/ml,正常对照组为0.525±O.029,(12.52±5.19)pg/ml、(28.65±7.44)pg/ml.与正常对照组相比,重型和轻型腹泻组TLR3 mRNA表达及血清IFN-γ、TNF-α水平明显升高,差异有非常显著性(P〈0.01),重型腹泻组与轻型腹泻组相比,差异有非常显著性(P〈0.01).外周血单核细胞TLR3表达和血清IFN-γ、TNF-α水平呈正相关(r=0.431,P〈0.05,r=0.372,P〈0.05).结论 急性RV腹泻患儿外周血单核细胞TLR3 mRNA表达上调,TLR3及其介导的免疫应答与急性RV腹泻的发生发展存在一定的相关性. 展开更多
关键词 轮状病毒 TOLL样受体3 外周血单核细胞 Γ干扰素 肿瘤坏死因子Α 腹泻 儿童
抗轮状病毒LLR株G10血清型特异性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
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作者 鱼轲 魏至栋 +1 位作者 李萍 蒋琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第10期1005-1009,共5页
目的制备抗轮状病毒(RV)LLR株G10血清型特异性单克隆抗体,并鉴定其特性。方法以纯化的RVLLR株(血清型为G10)为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术筛选分泌G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。采用层析法纯化单抗,常规免疫学方... 目的制备抗轮状病毒(RV)LLR株G10血清型特异性单克隆抗体,并鉴定其特性。方法以纯化的RVLLR株(血清型为G10)为抗原免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术筛选分泌G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。采用层析法纯化单抗,常规免疫学方法鉴定单抗的特性。结果经筛选获得5G5、1H1和7F6共3株可稳定分泌高效价且具有G10血清型特异性单抗的杂交瘤细胞株。3株细胞分泌的单抗分别为IgG2a/κ、IgG2a/κ和IgG1/κ型;腹水效价均可达1.024×106;分别识别两个抗原位点;相对亲和力依次为1H1﹥7F6﹥5G5;5G5和1H1(细胞上清)均与G1-G4和G6血清型RV抗原无交叉反应;3株杂交瘤细胞分泌的单抗均识别相对分子质量约为34000的VP7蛋白,且均有不同程度的中和活性。结论已成功制备了抗RVLLR株G10血清型特异性单抗,该单抗可用于G10血清型RV的分型检测或LLR毒株的鉴别。 展开更多
关键词 轮状病毒 G10血清型 单克隆抗体 中和活性
轮状病毒LLR疫苗株VP7基因的遗传变异研究 预览 被引量:6
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作者 赵雅静 高雪军 +3 位作者 刘晨鸣 魏至栋 冯德杰 朱莉萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期 1074-1077,1082,共5页
目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株VP7基因的遗传特征,为疫苗的质量控制和发展提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38在原代牛肾细胞上连续传至49代。提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增VP7基因片段,将其克隆入质粒pGEM-... 目的研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株VP7基因的遗传特征,为疫苗的质量控制和发展提供依据。方法将LLR株轮状病毒毒种LLR38在原代牛肾细胞上连续传至49代。提取第38、43、44、49代病毒RNA。通过RT-PCR扩增VP7基因片段,将其克隆入质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析。结果LLR株VP7基因全长1062bp,含编码326个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF)。各代次病毒的VP7基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBanK中LLR参考株(L11602)同源性分别为99.9%和99.7%。与14株GIO血清型RV毒株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.3%。87.4%和92.7%~94.9%;与不同血清型RV代表株间,VP7基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为62.2%。76.8%和72.9%.83.1%;在A、B、C3个重要抗原表位,LLR株与同一血清型RV代表株B223氨基酸同源性高达97.5%,而与不同血清型仅为42.5%~62.5%。结论轮状病毒LLR疫苗株VP7基因具有良好的遗传稳定性,与来自不同国家同一型别的RV株VP7蛋白氨基酸序列之间无明显差异,在遗传上密切相关,从VP7基因分子水平证明LLR株毒种及其制备的疫苗是安全可靠的。 展开更多
关键词 轮状病毒 LLR株 VP7基因 遗传 变异 序列分析
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口服轮状病毒活疫苗的安全性临床观察 预览 被引量:5
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作者 沈国红 辛强 +1 位作者 于小红 孟璐欣 《微生物学免疫学进展》 2006年第3期 13-14,共2页
为了观察口服轮状病毒活疫苗的安全性,2004年4~10月在济南市中心医院预防接种门诊对总服用该疫苗的410例7月龄~3岁的幼儿密切观察其反应,测量腋下体温并询问有无不适症状等。结果显示,95.61%幼儿(392/410)无不良反应;约4.3... 为了观察口服轮状病毒活疫苗的安全性,2004年4~10月在济南市中心医院预防接种门诊对总服用该疫苗的410例7月龄~3岁的幼儿密切观察其反应,测量腋下体温并询问有无不适症状等。结果显示,95.61%幼儿(392/410)无不良反应;约4.39%(18/410)出现发热、腹泻等不良副反应,其中强反应3例(0.73%),中度反应11例(2.68%),轻度反应4例(0.98%),均于对症治疗后3日内缓解并消失。临床资料证明,使用该疫苗是安全的。 展开更多
关键词 轮状病毒 口服活疫苗 安全性
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轮状病毒肠道外感染的研究进展 预览 被引量:19
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作者 陈瑶(综述) 姚英民(审校) 《医学综述》 2006年第3期 145-147,共3页
近年来发现轮状病毒(RV)不仅引起腹泻,也可发生肠道外多器官的感染,主要见于中枢神经系统、呼吸系统、其他消化器官.循环及血液系统等.并且在部分受累器官已找到明确的的证据.甚至RV肠道外多器官的感染已成为导致死亡的重要原因... 近年来发现轮状病毒(RV)不仅引起腹泻,也可发生肠道外多器官的感染,主要见于中枢神经系统、呼吸系统、其他消化器官.循环及血液系统等.并且在部分受累器官已找到明确的的证据.甚至RV肠道外多器官的感染已成为导致死亡的重要原因之一,这提示着RV可能存在新的感染途任和感染机制.对临床诊断与治疗和预防提出了新的课题。 展开更多
关键词 轮状病毒 肠道外感染 组织扩散
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