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γ-氨基丁酸Rho2受体在神经母细胞瘤细胞中的稳定表达及其在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用 预览
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作者 李敏 楚人杰 +2 位作者 张姣 韩思乐 李超堃 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第1期13-18,共6页
目的构建人γ-氨基丁酸(GABA)Rho2受体(GABRR2)真核表达载体,并转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立稳定表达细胞株,探讨GABRR2在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用。方法采用快速克隆方法将人脑组织GABRR2基因克隆至pIRES2-eGFP质粒,构建重组质... 目的构建人γ-氨基丁酸(GABA)Rho2受体(GABRR2)真核表达载体,并转染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立稳定表达细胞株,探讨GABRR2在谷氨酸盐致细胞死亡中的作用。方法采用快速克隆方法将人脑组织GABRR2基因克隆至pIRES2-eGFP质粒,构建重组质粒pIRES2-eGFP-Rho2,利用X-fect试剂盒将其转染至SH-SY5Y细胞中,使用遗传霉素进行筛选,建立稳定表达pIRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞株。使用流式细胞术检测稳定转染过表达pIRES2-eGFP-Rho2的细胞,利用免疫荧光法鉴定稳定转染的SH-SY5Y细胞中pIRES2-eGFP-Rho2的表达。将野生型SH-SY5Y细胞分为A1、B1、C1组,稳定表达pIRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞分为A2、B2、C2组,每组设3个平行孔,其中A1、A2组细胞使用达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)孵育,B1、B2组细胞使用含有谷氨酸盐的DMEM孵育,C1、C2组细胞使用含有谷氨酸盐和GABA的DMEM孵育,将各组细胞置于细胞培养箱中培养24h,应用乳酸脱氢酶试剂盒检测各组细胞的存活率。结果重组真核表达载体构建正确,获得了稳定表达pIRES2-eGFP-Rho2的细胞株。A1、B1、C1组细胞存活率比较差异有统计学意义(F=5.542,P<0.05);其中B1、C1组细胞存活率显著低于A1组(P<0.05),C1组细胞存活率显著高于B1组(P<0.05)。A2、B2、C2组细胞存活率比较差异有统计学意义(F=6.588,P<0.05);其中B2、C2组细胞存活率显著低于A2组(P<0.05),C2组细胞存活率显著高于B2组(P<0.01)。A2组细胞存活率与A1组比较差异无统计学意义(P>0.05),B2组细胞存活率显著低于B1组(P<0.05),C2组细胞存活率显著低于C1组(P<0.05)。结论成功构建pIRES2-eGFP-Rho2真核表达载体,建立了稳定表达pIRES2-eGFP-Rho2的SH-SY5Y细胞株,为体外研究GABRR2的功能提供了实验基础,并证明使用GABA可缓解谷氨酸盐对细胞的损伤,为缺血性脑损伤的分子生物学治疗提供了靶点。 展开更多
关键词 真核表达载体 Γ-氨基丁酸 神经母细胞 SH-SY5Y细胞 细胞克隆 基因表达
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O3氧化黑碳对SH-SY5Y细胞的毒性作用 预览
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作者 尚羽 王田田 +3 位作者 吴美英 王璐 何慧心 安静 《上海大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期550-557,共8页
以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为模型,在细胞体系探讨经O3氧化过的黑碳(O3-oxidized black carbon,OBC)颗粒对神经细胞的毒性作用.应用MTT方法评估SH-SY5Y细胞的存活率;通过测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LHD)浓度评估... 以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为模型,在细胞体系探讨经O3氧化过的黑碳(O3-oxidized black carbon,OBC)颗粒对神经细胞的毒性作用.应用MTT方法评估SH-SY5Y细胞的存活率;通过测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LHD)浓度评估细胞膜的损伤程度;利用流式细胞术评价细胞凋亡率;使用荧光探针(Fluo 3-AM)检测细胞内Ca^2+浓度.结果显示,OBC颗粒对SH-SY5Y细胞暴露24和48 h的半致死浓度(IC50)分别为202.2和133.3μg/mL;随着BC颗粒染毒浓度的增加(0,5,10,20,40μg/mL),胞外LDH浓度、细胞凋亡率和Ca^2+浓度均逐渐升高,呈显著的剂量-效应关系(p<0.05).研究表明,OBC颗粒可导致神经细胞内Ca^2+浓度升高、细胞膜损坏,并最终导致细胞凋亡的发生. 展开更多
关键词 黑碳颗粒 SH-SY5Y细胞 细胞毒性 细胞凋亡 CA^2+
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粉防己碱对神经母细胞瘤细胞增殖和迁移、侵袭能力的影响及其机制研究 预览
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作者 邓香 《中国药房》 CAS 北大核心 2019年第2期211-216,共6页
目的:探讨粉防己碱(TET)对神经母细胞瘤细胞增殖和迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法:以人神经母细胞瘤细胞系IMR-32细胞、SH-SY5Y细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测浓度分别为0(空白对照)、2.5、5、10、15、20μmo... 目的:探讨粉防己碱(TET)对神经母细胞瘤细胞增殖和迁移、侵袭能力的影响及其作用机制。方法:以人神经母细胞瘤细胞系IMR-32细胞、SH-SY5Y细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测浓度分别为0(空白对照)、2.5、5、10、15、20μmol/L的TET对细胞增殖的影响;采用Transwell小室迁移实验和侵袭实验,考察正常对照组(TET浓度为0μmol/L)和TET组(10μmol/L,IMR-32细胞;15μmol/L,SH-SY5Y细胞)的细胞跨膜情况;采用Western blotting法检测按上述浓度TET处理后的IMR-32细胞和SH-SY5Y细胞中金属基质蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、β-catenin、糖原合成激酶3β(GSK3β)、磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的蛋白表达水平。结果:5、10、15、20μmol/L的TET可显著降低IMR-32细胞和SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05或P<0.01),其半数抑制浓度分别为10.148、14.461μmol/L。细胞迁移实验和侵袭实验结果显示,与正常对照组比较,TET组跨膜细胞数均显著减少(P<0.01);Western blotting法检测结果显示,与正常对照组比较,TET组细胞中MMP-2、MMP-9、β-catenin、p-GSK3β蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论:TET对神经母细胞瘤细胞的增殖和迁移、侵袭能力具有明显的抑制作用,其机制与下调细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 粉防己碱 神经母细胞 IMR-32 细胞 SH-SY5Y细胞 增殖 迁移 侵袭
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亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞周期的影响及MPST过表达的干预 预览
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作者 柳香香 孙达权 +3 位作者 许键炜 范海琼 徐国强 潘际刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期634-639,共6页
目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Westernblot... 目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Westernblot法,分别检测细胞活力、细胞贴壁力、细胞周期及p53、CDC25A、CyclinA、CDK2等蛋白表达水平。结果经NaAsO2处理48h后,NC组细胞存活率、细胞贴壁率明显降低,而过表达MPST细胞上述变化明显得到改善(P<0.01)。同时,NaAsO2明显上调BC、NC组细胞S期比例和p53蛋白表达,而下调CDC25A、CyclinA及CDK2蛋白(P<0.01);然而,过表达MPST则明显拮抗上述效应(P<0.05,P<0.01)。结论NaAsO2通过诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞,抑制细胞生长,而过表达MPST可拮抗NaAsO2诱导的毒性效应。 展开更多
关键词 亚砷酸钠 3-巯基丙酮酸硫转移酶 SH-SY5Y细胞 细胞周期 S期阻滞 硫化氢
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雏菊叶龙胆酮对缺氧复氧处理后的SH-SY5Y细胞凋亡的影响 预览
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作者 郑渤 陈彪 赵志英 《包头医学院学报》 CAS 2019年第4期94-95,99共3页
目的:观察雏菊叶龙胆酮对SH-SY5Y细胞缺氧/复氧处理后凋亡的作用。方法:通过体外培养SH-SY5Y细胞,进行缺氧/复氧处理后诱导细胞凋亡,观察经雏菊叶龙胆酮处理后的SH-SY5Y细胞的凋亡情况,细胞随机分为4组:正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/... 目的:观察雏菊叶龙胆酮对SH-SY5Y细胞缺氧/复氧处理后凋亡的作用。方法:通过体外培养SH-SY5Y细胞,进行缺氧/复氧处理后诱导细胞凋亡,观察经雏菊叶龙胆酮处理后的SH-SY5Y细胞的凋亡情况,细胞随机分为4组:正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧复氧前雏菊叶龙胆酮处理组(B组)、雏菊叶龙胆酮处理后正常培养组(C组),通过形态学观察细胞状态,MTT法检测SH-SY5Y细胞存活率。结果:与对照(N组)组相比,H/R组SH-SY5Y细胞存活率降低(P<0.05);与H/R组比较,雏菊叶龙胆酮处理后(C组)可以提高缺氧/复氧后SH-SY5Y细胞存活率,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:雏菊叶龙胆酮对缺氧/复氧后SH-SY5Y细胞凋亡有抑制作用。 展开更多
关键词 SH-SY5Y细胞 凋亡 雏菊叶龙胆酮
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CB2受体激活对MPP+致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用 预览
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作者 万洪丽 马泽刚 《精准医学杂志》 2019年第3期240-244,共5页
目的研究大麻素Ⅱ型(CB2)受体激活对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP +)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法 根据药物处理的不同将细胞分为正常对照组(C组)、MPP +组(M组)、JWH-133/MPP +组(J+M组)以及JWH-133/AM630/MPP +组(J+A+M组)。用免... 目的研究大麻素Ⅱ型(CB2)受体激活对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP +)致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法 根据药物处理的不同将细胞分为正常对照组(C组)、MPP +组(M组)、JWH-133/MPP +组(J+M组)以及JWH-133/AM630/MPP +组(J+A+M组)。用免疫印迹法检测各组细胞CB2受体和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化。结果 与C组相比,M组的CB2受体蛋白表达下降( P <0.01);经JWH-133预处理后,CB2受体蛋白表达高于M组( P <0.01),此作用可被AM630所阻断;与C组相比,M组的TH表达降低( P <0.05),经JWH-133预处理后,TH表达高于M组( P <0.05),AM630预处理可抑制此作用;与C组相比,M组细胞的ΔΨm明显下降( P <0.01),经JWH-133预处理后,细胞ΔΨm下降幅度变小( P <0.01),此作用可被AM630所阻断。结论 CB2受体激活可以抑制MPP +对SH-SY5Y细胞的损伤作用。 展开更多
关键词 受体 大麻酚 CB2 大麻素受体激动剂 帕金森病 SH-SY5Y细胞
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阿利吉伦对糖氧剥夺损伤SH-SY5Y细胞的保护机制
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作者 陆婉杏 蒙兰青 黄晓华 《医学分子生物学杂志》 CAS 2019年第3期258-262,268共6页
目的研究阿利吉仑(Aliskiren)对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分成正常组[不作糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)处理],OGD 组和阿利吉仑低、中... 目的研究阿利吉仑(Aliskiren)对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分成正常组[不作糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)处理],OGD 组和阿利吉仑低、中、高剂量组(5.0, 10.0, 20. 0μmol/L),除了正常组,其余4组均OGD处理4h,流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测MKT、ERK和MTOR相应mRNA表达水平;Western印迹检测p-AKT^Thr308、p-AKT^Ser473、p-ERK1/2和p-MTOR蛋白表达水平。结果与OGD组相比,阿利吉仑组的细胞凋亡率呈剂量依赖性降低。RT-PCR和Western印迹检测结果表明:与正常组相比,OGD组的AKT、ERK和MTOR相应mRNA及磷酸化蛋白表达水平更低(P<0.05)。与OGD组比较,阿利吉仑组的AKT、ERA和MTOR相应mRNA及磷酸化蛋白表达水平呈剂量依赖性升高(P<0.05)。结论ERK1/2和PI3K/AKT/MTOR信号通路的激活可能是阿利吉仑对OGD损伤的SH-SY5Y细胞发挥保护作用的重要分子机制。 展开更多
关键词 阿利吉仑 SH-SY5Y细胞 糖氧剥夺损伤 ERK1/2信号通路 PI3K/AKT/MTOR信号通路
山楂叶金丝桃苷对高糖诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制 预览
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作者 张婷 宋小锋 +1 位作者 杜晓娜 刘仲敏 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期142-146,68共6页
为研究金丝桃苷对高糖诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞氧化损伤的保护作用及机制,用含100mmoL/L葡萄糖和分别为20、50、100μmoL/L金丝桃苷的培养基共同孵育SH-SY5Y细胞36h,检测细胞活力、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨... 为研究金丝桃苷对高糖诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞氧化损伤的保护作用及机制,用含100mmoL/L葡萄糖和分别为20、50、100μmoL/L金丝桃苷的培养基共同孵育SH-SY5Y细胞36h,检测细胞活力、细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,细胞内活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及SIRT1和NF-кB基因的mRNA水平和蛋白含量。结果显示金丝桃苷可提高高糖诱导后SH-SY5Y细胞的存活率,抑制细胞LDH释放,清除ROS,降低MDA含量与caspase-3活性,增强SOD、CAT活性和GSH含量;同时,金丝桃苷还能提高SIRT1基因的mRNA表达及蛋白含量,降低NF-кB基因的mRNA水平和蛋白含量。结果表明金丝桃苷能通过激活SIRT1基因,抑制NF-кB基因保护高糖所致SH-SY5Y细胞的氧化损伤。 展开更多
关键词 金丝桃苷 高糖 SH-SY5Y细胞 抗氧化
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MPST基因慢病毒载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达
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作者 范海琼 孙达权 +3 位作者 柳香香 王念 徐国强 潘际刚 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1812-1816,共5页
为构建MPST基因慢病毒表达载体,获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,本研究通过PCR扩增出MPST目的基因,将其克隆到慢病毒表达载体p EB-GFP (T2A) PURO上,将重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒系统(pLP/VSVG, pLP1, p LP2)共转染2... 为构建MPST基因慢病毒表达载体,获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,本研究通过PCR扩增出MPST目的基因,将其克隆到慢病毒表达载体p EB-GFP (T2A) PURO上,将重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒系统(pLP/VSVG, pLP1, p LP2)共转染293T细胞,用获得重组的慢病毒液感染SH-SY5Y细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达MPST基因的(SH-MPST)细胞株。采用Real-time PCR和Western blotting以及ELISA等方法对筛出来的SH-MPST中的MPST的表达及功能进行鉴定。与空转染组(SH-PEB)相比,SH-MPST细胞中MPST mRNA及蛋白的表达水平显著增加,且细胞内MPST酶活性、酶含量及细胞释放硫化氢的水平均显著增加(p<0.05)。以上研究表明,MPST基因慢病毒表达载体成功构建,并获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株,这将为MPST功能的深入研究提供依据。 展开更多
关键词 慢病毒 MPST 过表达 SH-SY5Y细胞 硫化氢
甲基苯丙胺对体外培养SH-SY5Y细胞线粒体膜电位、超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响 预览
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作者 牟登峰 郑丹 +4 位作者 王琪 黄仕美 官志忠 于燕妮 楼迪栋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期935-939,共5页
目的 评估甲基苯丙胺(METH)对体外培养的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响。方法 SH-SY5Y细胞中加入METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1 ),培养3、6、12、24 h;JC-1法检测SH-SY5Y细胞MMP;... 目的 评估甲基苯丙胺(METH)对体外培养的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及Mfn1、Fis1蛋白表达的影响。方法 SH-SY5Y细胞中加入METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol·L^-1 ),培养3、6、12、24 h;JC-1法检测SH-SY5Y细胞MMP;透射电镜观察SH-SY5Y细胞线粒体超微结构;Western blot检测Mfn1、Fis1蛋白表达。结果 METH作用SH-SY5Y细胞3、6、12、24 h,与对照组比较,METH组细胞MMP红绿荧光比值明显降低( P <0.05),Mfn1蛋白表达降低( P <0.05),Fis1蛋白表达升高( P <0.05);METH作用SH-SY5Y细胞24 h时,透射电镜观察见未处理组细胞线粒体呈椭圆形棒状双层膜结构,线粒体嵴正常、清晰,METH组细胞线粒体椭圆形棒状结构被分裂成小球状结构,并发现线粒体自噬小体及自噬溶酶体。结论 METH可引起SH-SY5Y细胞MMP下降、线粒体超微结构改变及Mfn1、Fis1蛋白表达水平改变,其改变可能参与METH致神经细胞损伤的发病机制。 展开更多
关键词 甲基苯丙胺 SH-SY5Y细胞 线粒体膜电位 线粒体超微结构 线粒体融合蛋白1 线粒体分裂蛋白1
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知母须根中1个新的二苯甲酮类化合物
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作者 廖振东 许凤清 +2 位作者 吴德玲 张伟 黄琪 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1392-1396,共5页
采用硅胶、Sephadex LH-20结合高压半制备高效液相色谱技术研究知母Anemarrhena asphodeloides的须根中的化学成分。通过理化性质和波谱数据鉴定了5个化合物:methyl 2-[2,4-dihydroxy-3-(4-hydroxybenzoyl)-6-methoxypheyl]acetate(1)、... 采用硅胶、Sephadex LH-20结合高压半制备高效液相色谱技术研究知母Anemarrhena asphodeloides的须根中的化学成分。通过理化性质和波谱数据鉴定了5个化合物:methyl 2-[2,4-dihydroxy-3-(4-hydroxybenzoyl)-6-methoxypheyl]acetate(1)、4-[formyl-5-(methoxymethyl)-1H-pyrrol-1-yl] butanoate(2)、川芎哚(3)、丁香脂酚-4′-β-D-葡萄糖苷(4)和4′,6-dihydroxy-4-methoxybenzophenone-2-O-(2″),3-C-(1″)-1″-desoxy-α-L-fructofuranoside(5)。其中化合物1为新化合物,化合物2~5均为首次从该植物中得到。并检测新化合物1对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的神经保护活性。 展开更多
关键词 知母须根 化学成分 SH-SY5Y细胞
玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用 预览
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作者 魏俊 赵范范 +3 位作者 刘馨君 劳凤学 黄汉昌 商迎辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期163-168,共6页
研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。实验分为空白组、损伤组(模型组)、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素(tunicamycin,TM)建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养... 研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。实验分为空白组、损伤组(模型组)、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素(tunicamycin,TM)建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。结果显示:TM质量浓度在2 μg/mL以上时,可显著降低SH-SY5Y细胞活性(P<0.01);与TM损伤组相比,2~10 μmol/L玉米黄素预处理可显著提高细胞存活率(P<0.05),降低LDH的释放率,先用TM处理30 min后再加2、5、10 μmol/L的玉米黄素处理24 h的玉米黄素后处理组结果相同。因此,TM通过诱导内质网应激可引起细胞损伤,玉米黄素能够减轻该损伤作用,并且在一定程度上可逆转TM引起的损伤。 展开更多
关键词 玉米黄素 衣霉素 内质网应激 SH-SY5Y细胞
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多巴胺通过促进RNF20降解抑制神经细胞中组蛋白H2B泛素化
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作者 董婷婷 刘艳萍 +5 位作者 李云芳 李胜 张国安 刘增甲 黄鑫 崔文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期421-427,共7页
表观遗传修饰参与了药物成瘾的形成过程,而在药物成瘾过程中组蛋白泛素化水平的变化仍未可知。药物成瘾过程中常表现为多巴胺(dopamine,DA)表达量的升高,因此本研究欲探讨多巴胺升高对神经细胞组蛋白泛素化的影响及其机制。Western印迹... 表观遗传修饰参与了药物成瘾的形成过程,而在药物成瘾过程中组蛋白泛素化水平的变化仍未可知。药物成瘾过程中常表现为多巴胺(dopamine,DA)表达量的升高,因此本研究欲探讨多巴胺升高对神经细胞组蛋白泛素化的影响及其机制。Western印迹结果显示,在终浓度0.8 mmol/L的多巴胺作用8 h后,人神经母细胞瘤细胞系SHSY5Y细胞中环指蛋白20(ring finger protein 20, RNF20)表达量降低(0.29 ± 0.032 vs. 1.0 ± 0.025,P< 0.0001),泛素化组蛋白H2B(H2Bub1)表达量下降(0.28 ± 0.032 vs. 1.0 ± 0.017,P< 0.0001)。但是RT-PCR结果显示,多巴胺处理SH-SY5Y细胞后,RNF20在mRNA水平的表达无明显变化。在SH-SY5Y细胞中沉默RNF20的表达,H2Bub1在蛋白质水平的表达明显降低(0.20 ± 0.069 vs. 1.0 ± 0.060,P=0.001)。在加入多巴胺的基础上,分别加入蛋白酶体抑制剂MG132、自噬体形成抑制剂3-MA以及空泡型H+-ATP酶特异性抑制剂Baf-A1等药物来检测RNF20的降解途径,结果发现,加入MG132、3-MA以及Baf-A1后,RNF20表达量均比DA处理组显著上升(1.51 ± 0.095, P=0.0003;0.89 ± 0.075,P=0.0021;2.74 ± 0.099, P<0.0001;vs. 0.27 ± 0.044)。上述结果表明,在SH-SY5Y细胞中,RNF20对H2Bub1具有调控作用,多巴胺可通过泛素化及自噬两种途径促进RNF20降解,从而抑制组蛋白H2B泛素化。 展开更多
关键词 多巴胺 SH-SY5Y细胞 环指蛋白20 泛素化 自噬
锰中毒对SH-SY5Y细胞线粒体自噬作用的影响 预览
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作者 李慧颖 陆潭丽 王进 《广西中医药大学学报》 2019年第1期6-9,共4页
[目的]探讨锰中毒对SH-SY5Y细胞线粒体自噬作用的影响。[方法]取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,予MnCl2处理24 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中多巴胺(DA)的分泌量,蛋白免疫印迹法检测自噬标记蛋白LC3、线粒体分裂蛋... [目的]探讨锰中毒对SH-SY5Y细胞线粒体自噬作用的影响。[方法]取对数生长期的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,予MnCl2处理24 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中多巴胺(DA)的分泌量,蛋白免疫印迹法检测自噬标记蛋白LC3、线粒体分裂蛋白Drp1、线粒体融合蛋白Mfn1、Mfn2的表达。[结果]与正常对照组相比,MnCl2组多巴胺的分泌量显著减少(P<0.05),LC3-Ⅱ表达增加(P<0.05),Drp1表达降低(P<0.05),Mfn1及Mfn2表达增加(P<0.05)。[结论]锰中毒可显著降低SH-SY5Y细胞中多巴胺的分泌量,抑制线粒体的分裂并促进线粒体融合,导致线粒体自噬增多,这可能是锰中毒性帕金森综合征的病理机制之一。 展开更多
关键词 锰中毒 帕金森综合征 线粒体自噬 线粒体融合分裂 SH-SY5Y细胞 实验研究
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注射用血塞通对SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤模型Lingo-1表达的影响
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作者 吴爽 张海艳 +3 位作者 杨田田 岑锴 周东蕊 朱陵群 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期3859-3865,共7页
目的建立SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤模型,考察注射用血塞通对缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞存活、凋亡及Lingo-1 mRNA及蛋白表达的影响。方法采用RPMI 1640无糖培养基和三气培养箱缺氧法制备SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤模型,CCK8法测定细胞存活率... 目的建立SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤模型,考察注射用血塞通对缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞存活、凋亡及Lingo-1 mRNA及蛋白表达的影响。方法采用RPMI 1640无糖培养基和三气培养箱缺氧法制备SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤模型,CCK8法测定细胞存活率,确定最佳缺氧时间及最适注射用血塞通质量浓度,Annexin V-FITC/PI双染法检测SH-SY5Y细胞凋亡率,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法测定Lingo-1 mRNA表达情况,Western blotting法测定Lingo-1蛋白表达情况。结果SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤模型的最佳缺氧时间为16 h,注射用血塞通最适质量浓度为640 mg/L,在该质量浓度条件作用下,血塞通组与模型组相比,SH-SY5Y细胞的凋亡率显著降低,Lingo-1的mRNA表达水平及蛋白表达水平均显著降低。结论当SH-SY5Y细胞受到缺糖缺氧损伤后,细胞凋亡率显著升高,Lingo-1呈高表达状态,血塞通可以明显减少缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞的凋亡,同时抑制Lingo-1的高表达,具有抑制凋亡和显著的神经保护作用。 展开更多
关键词 注射用血塞通 SH-SY5Y细胞 缺糖缺氧损伤模型 LINGO-1 凋亡
橙皮苷减轻鱼藤酮诱导的神经细胞损伤 预览
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作者 徐妍 叶小磊 严旺 《中华危重症医学杂志(电子版)》 CAS CSCD 2019年第3期182-186,共5页
帕金森病是一种与年龄相关的、进行性的神经退行性疾病,患病者年龄往往超过50岁。近年来,帕金森病的实验研究已经取得较多进展,特别是通过使用细胞模型对该疾病进行研究。在体外建立稳定的多巴胺能神经元细胞模型可用于研究帕金森病的... 帕金森病是一种与年龄相关的、进行性的神经退行性疾病,患病者年龄往往超过50岁。近年来,帕金森病的实验研究已经取得较多进展,特别是通过使用细胞模型对该疾病进行研究。在体外建立稳定的多巴胺能神经元细胞模型可用于研究帕金森病的发病机制,并有助于为临床提供新的治疗策略。目前常用的可用于帕金森病研究的细胞模型主要包括嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PHEO)细胞,人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞和原代培养的脑神经元[1-2]。 展开更多
关键词 神经细胞损伤 神经退行性疾病 鱼藤酮 橙皮苷 SH-SY5Y细胞 多巴胺能神经元 人神经母细胞 帕金森病
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α3神经型尼古丁受体基因下调对SH-SY5Y DYN1和AP180表达的影响 预览
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作者 吕园园 王晓玲 +3 位作者 邓于新 李毅 官志忠 齐晓岚 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第9期2225-2227,共3页
目的研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因下调对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)发动蛋白(DYN)1和衔接蛋白(AP)180蛋白表达的影响,探讨α3nAChR的在AD发病机制中的神经保护作用。方法将重组质粒α3nAChRshRNAPlasmid转染到SH-SY5Y细胞中,48... 目的研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因下调对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)发动蛋白(DYN)1和衔接蛋白(AP)180蛋白表达的影响,探讨α3nAChR的在AD发病机制中的神经保护作用。方法将重组质粒α3nAChRshRNAPlasmid转染到SH-SY5Y细胞中,48h后收集细胞,用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)和Western印迹法检测α3nAChR、DYN1和AP180蛋白表达。结果SH-SY5Y细胞转染α3nAChRshRNAPlasmid后,与对照组及空载组比较,α3nAChR、DYN1、AP180mRNA及蛋白水平均明显降低(P<0.05)。结论通过转染使SH-SY5Y细胞α3nAChR表达成功下调;α3nAChR下调降低细胞DYN1和AP180表达,可能影响了突触囊泡回收从而影响突触功能,与AD发病有一定关联。 展开更多
关键词 α3尼古丁受体 SH-SY5Y细胞 DYN1 AP180
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miR-138-5p在锰致SH-SY5Y细胞自噬中的作用 被引量:1
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作者 张媛媛 陈丽 +5 位作者 马俊香 陈田 宋冬梅 张诗玄 贾嘉欣 牛丕业 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2018年第1期60-65,共6页
[目的]探讨miR-138-5p在氯化锰(MnCl2)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的作用及其机制。[方法]以生理盐水处理组作为对照,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L MnCl2染毒SH-SY5Y细胞6 h后,利用MTT法检测细胞活力;0.25和0.5 mmol/L MnCl2... [目的]探讨miR-138-5p在氯化锰(MnCl2)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的作用及其机制。[方法]以生理盐水处理组作为对照,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L MnCl2染毒SH-SY5Y细胞6 h后,利用MTT法检测细胞活力;0.25和0.5 mmol/L MnCl2处理细胞6 h后,采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达;MnCl2染毒6 h后,使用反转录PCR和Western blot检测miR-138-5p和组蛋白脱乙酰酶SIRT1 mRNA以及蛋白表达的变化;使用miRNA模拟物转染细胞实现miR-138-5p过表达,然后0.25 mmol/L MnCl2染毒6 h,检测SIRT1 mRNA和蛋白的表达以及自噬相关蛋白LC3和Beclin1的变化。[结果]MnCl2可剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活力(趋势χ2=12.42,P〈0.05)。与对照组相比,0.25、0.5 mmol/L MnCl2染毒后,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I值和Beclin1表达水平明显增加(P〈0.05);miR-138-5p表达下调,SIRT1 mRNA及蛋白表达上调(均P〈0.05)。miR-138-5p过表达后,相比未过表达的MnCl2染毒组,SIRT1 mRNA及蛋白表达均出现下调,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I值及Beclin1蛋白表达也相应下调(P〈0.05)。[结论]miR-138-5p过表达可通过调节SIRT1的表达抑制锰诱导的SH-SY5Y细胞自噬。 展开更多
关键词 miR-138-5p SIRT1 人神经母细胞 SH-SY5Y细胞 自噬
丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬 预览
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作者 戴旭芳 闫小晶 +1 位作者 谢鹏 连继勤 《南方医科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1415-1420,共6页
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4... 目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4BmRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化。结果VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。VPA处理不影响SHSY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05)。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05)。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05)。结论VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 SH-SY5Y细胞 ATG4B miR-34c-5p 自噬
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多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用 预览
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作者 曹振杰 《肿瘤基础与临床》 2018年第4期283-286,共4页
目的探讨多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用.方法阳性对照组SH-SY5Y细胞以1.25mg·L-1的多柔比星处理,低、中、高剂量实验组SH-SY5Y细胞分别以1.25mg·L-1的... 目的探讨多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用.方法阳性对照组SH-SY5Y细胞以1.25mg·L-1的多柔比星处理,低、中、高剂量实验组SH-SY5Y细胞分别以1.25mg·L-1的多柔比星+10-7、10-5、10-3mol·mL-1Met-ENK处理,阴性对照组细胞以等量生理盐水处理.MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,流式细胞术和Hoeschest33258细胞核染色检测各组SH-SY5Y细胞凋亡情况,WesternBlot法检测各组SH-SY5Y细胞p-Tau蛋白表达情况.结果与阴性对照组比较,干预24、48、72h后,阳性对照组和各实验组细胞存活率降低,且实验组低于阳性对照组,实验组细胞存活率随着Met-ENK浓度的增大逐渐降低(P〈0.05).与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P〈0.05);阳性对照组和各实验组S期细胞比例显著降低,中、高剂量实验组低于阳性对照组(P〈0.05).与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞p-Tau蛋白相对表达量明显升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P〈0.05).结论多柔比星联合Met-ENK可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长,并促进其凋亡,这可能与上调Tau蛋白磷酸化水平有关. 展开更多
关键词 神经母细胞 蛋氨酸脑啡肽 多柔比星 SH-SY5Y细胞 增殖 凋亡 TAU蛋白磷酸化
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