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复方芪芎颗粒对佐剂性关节炎大鼠的抗炎消肿作用及TIR域信号通路影响
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作者 陈利锋 陈建华 +4 位作者 卢绮萍 陈芳 丰瑞兵 杨晨曦 朱诗聪 《中医药导报》 2019年第10期32-36,共5页
目的:探究复方芪芎颗粒对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠滑膜组织的抗炎消肿作用及对TLR4、MyD88及SIGIRR之间信号传导机制的影响。方法:将实验大鼠随机分组并造模,共分为6组,除正常组外,其余5组大鼠予弗氏完全佐剂注射进行... 目的:探究复方芪芎颗粒对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠滑膜组织的抗炎消肿作用及对TLR4、MyD88及SIGIRR之间信号传导机制的影响。方法:将实验大鼠随机分组并造模,共分为6组,除正常组外,其余5组大鼠予弗氏完全佐剂注射进行造模并给予雷公藤苷或不同剂量浓度复方芪芎颗粒药物灌胃,对比造模前、给药前、干预4周后各组大鼠一般情况变化及致炎侧的足趾周径变化,评估大鼠各关节的炎症指数(arthritisindex,AI),检测各组大鼠滑膜组织中TLR4、MyD88及SIGIRR蛋白的表达程度。结果:给药后4周,雷公藤组大鼠足趾周径低于模型组、正常组,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。给药后复方芪芎颗粒组大鼠足趾周径下降,高剂量组显著下降。给药4周后,复方芪芎颗粒低、中、高剂量组、雷公藤组大鼠AI均低于模型组(P<0.01);复方芪芎颗粒高、中剂量组大鼠AI均低于复方芪芎颗粒低剂量组与雷公藤组(P<0.05)。复方芪芎颗粒中、高剂量组、雷公藤组大鼠TLR4、MyD88蛋白表达均低于模型组(P<0.01),S IGIRR蛋白表达高于模型组(P<0.01)。复方芪芎颗粒高剂量组大鼠TLR4、MyD88蛋白表达低于雷公藤组(P<0.05),SIGIRR蛋白表达高于雷公藤组(P<0.05)。结论:复方芪芎颗粒对佐剂性关节炎大鼠有抗炎消肿作用,其作用机制与抑制异常激活TLR4、MyD88的表达及上调SIGIRR蛋白的表达相关。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 复方芪芎颗粒 TLR4 MYD88 SIGIRR 信号通路 大鼠
复方芪芎颗粒对关节炎大鼠的抗炎镇痛作用及机制研究
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作者 陈建华 陈利锋 +3 位作者 卢绮萍 陈芳 杨晨曦 朱诗聪 《湖北中医药大学学报》 2019年第2期25-30,共6页
目的探究复方芪芎颗粒对佐剂型关节炎(AA)大鼠滑膜组织中TRAF-6、MyD88及SIGIRR蛋白表达及信号传导机制的影响。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、复方芪芎颗粒小剂量组、复方芪芎颗粒中剂量组、复方芪芎颗粒大剂量组、雷... 目的探究复方芪芎颗粒对佐剂型关节炎(AA)大鼠滑膜组织中TRAF-6、MyD88及SIGIRR蛋白表达及信号传导机制的影响。方法将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、复方芪芎颗粒小剂量组、复方芪芎颗粒中剂量组、复方芪芎颗粒大剂量组、雷公藤组。除正常组外,其余大鼠给予弗氏完全佐剂标准注射建立AA模型。各给药组分别给予小、中、大剂量复方芪芎颗粒水溶液和雷公藤多苷片水溶液灌胃,正常组和模型组给以蒸馏水,给药(4周)前后观测各组大鼠一般情况及致炎侧后足直径变化、关节炎症指数评分(AI),检测大鼠滑膜组织中TRAF-6、MyD88、SIGIRR蛋白水平。结果与正常组比较,模型组致炎侧后足直径及其肿胀度均增加(P<0.05),TRAF-6、MyD88蛋白表达均高于正常组(P<0.05),SIGIRR蛋白表达低于正常组(P<0.05);与模型组比较,复方芪芎颗粒中、大剂量组、雷公藤组各检测指标均有明显改善(P<0.05,P<0.01);与雷公藤组比较,复方芪芎颗粒大剂量组改善明显(P<0.01)。结论复方芪芎颗粒抑制受累关节炎症浸润及减轻疼痛,其抑制异常激活TRAF-6、MyD88蛋白的表达与治疗类风湿性关节炎作用机制密切相关。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 复方芪芎颗粒 肿瘤坏死因子受体相关因子6 骨髓分化因子 单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白
SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞TLR4致炎信号通路的负调控作用
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作者 周秋格 刘畅 +2 位作者 赖金伦 郭爱珍 胡长敏 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期404-410,共7页
旨在探究SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)TLR4信号通路的负调控作用。构建SIGIRR—pEGFP真核表达载体,脂质体法转染HEK293T及BMECs,荧光显微镜观察及Westernblot验证融合蛋白SIGIRR—pEGFP的表达;LPS刺激转染后BMECs,检测TLR4及... 旨在探究SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)TLR4信号通路的负调控作用。构建SIGIRR—pEGFP真核表达载体,脂质体法转染HEK293T及BMECs,荧光显微镜观察及Westernblot验证融合蛋白SIGIRR—pEGFP的表达;LPS刺激转染后BMECs,检测TLR4及其信号通路分子IRAK1、IRAK4和TRAF6的变化,以及下游炎性因子IL-6、IL-8、IL-18和TNF-a的表达量。结果显示,成功构建SIGIRR-pEGFP真核表达载体,荧光检测重组质粒转染到HEK293T和BMECs中;Westernblot鉴定融合蛋白SIGIRR—pEGFP表达正确;重组质粒转染BMECs后,SIGIRR表达量较转染空载质粒组及空白未转染组显著升高(P〈0.01);炎性因子IL-6、IL-8、IL-10、TNFa、TLR4及下游信号分子IRAK1、IRAK4、TRAF6表达量显著降低(P〈0.01),转染空载质粒组与空白未转染组相比仅IRAKl表达量有差异(P〈0.05)。结果表明,本试验通过研究牛SIGIRR在BMECs中的作用,证实sIGIRR基因具有炎性负调控LPS-TLR4信号通路的作用,具有潜力成为临床治疗奶牛乳腺炎的新靶标。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺炎 乳腺上皮细胞 SIGIRR TLR4信号通路 负性调控
SIGIRR过表达抑制树突状细胞成熟并诱导同种移植免疫耐受的研究
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作者 薛志诚 卢新军 +2 位作者 章旭之 邓荣海 马毅 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期398-401,共4页
目的 观察过表达SIGIRR基因抑制树突状细胞(DCs)成熟活化、诱导移植免疫耐受的效果.方法 体外培养扩增骨髓来源DCs,并借助带绿色荧光蛋白(GFP)荧光的腺病毒载体将SIGIRR基因转入DCs,分别应用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)... 目的 观察过表达SIGIRR基因抑制树突状细胞(DCs)成熟活化、诱导移植免疫耐受的效果.方法 体外培养扩增骨髓来源DCs,并借助带绿色荧光蛋白(GFP)荧光的腺病毒载体将SIGIRR基因转入DCs,分别应用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SIGIRR基因修饰的未成熟DCs(imDCs)在脂多糖刺激前后细胞表型及功能变化;建立小鼠同种异体胰岛移植模型,术前连续3d受体分别给予尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、imDCs、DC-GFP及DC-SIGIRR,观察各组小鼠胰岛移植物活性及其生存时间,同时在术后第7天取移植物做苏木素-伊红(HE)及免疫荧光检查,比较各组移植物排斥反应强度.结果 过表达SIGIRR的DCs经脂多糖刺激后仍稳定在未成熟状态:低表达人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、CD40、CD80、CD86,分泌低水平白细胞介素(IL)-12[(547.80±84.67)pg/ml,P=0.026]及高水平IL-10[(410.40±36.11)pg/ml,P=0.031],与其他两组差异有统计学意义.术后糖耐量试验提示比较其他对照组,SIGIRR组血糖峰值更小[(19.0±1.0)mmol/L,P=0.041],胰岛移植物生存时间显著优于其他各组[(14.3±3.6)d,P=0.036].术后免疫组织化学提示SIGIRR组胰岛移植物活性优于其他对照组.结论 SIGIRR基因有效抑制未成熟DCs在脂多糖等外源刺激因子作用下的成熟和活化,抑制抗原提呈功能,在一定程度上延长移植物存活时间,诱导移植免疫耐受形成. 展开更多
关键词 SIGIRR 基因转染 树突状细胞 胰岛移植 移植排斥
SIGIRR对IL-1R/TLRs信号通路的负性调控作用研究进展 预览 被引量:1
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作者 周秋格 刘畅 +4 位作者 刘玉辉 赖金伦 陈颖钰 郭爱珍 胡长敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2640-2647,共8页
单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)是TIR超家族成员,最新研究表明它可负性调节IL-1R/TLRs受体介导的固有免疫应答,且在感染性疾病、肿瘤及自体免疫病诱导的炎症反应调节上所起的重要作用已经被阐明。作者主要综述了SIGIRR基因... 单免疫球蛋白白介素1受体相关蛋白(SIGIRR)是TIR超家族成员,最新研究表明它可负性调节IL-1R/TLRs受体介导的固有免疫应答,且在感染性疾病、肿瘤及自体免疫病诱导的炎症反应调节上所起的重要作用已经被阐明。作者主要综述了SIGIRR基因和蛋白表达模式在人、小鼠、牛等物种间的差异性,因其结构特异性所具有的对IL-1R/TLRs炎性信号通路的负性调控和具体的调控机理,以及在不同炎性相关疾病的发生和发展中抑制炎性反应的机制,进而为临床的炎性相关疾病治疗提供理论借鉴,同时也拓宽了SIGIRR基因在动物疾病治疗中的应用范围。 展开更多
关键词 SIGIRR TLRS 信号通路 负性调控
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加味千金苇茎汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织SIGIRR蛋白及其mRNA表达的影响 被引量:4
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作者 张海英 杨爱东 +2 位作者 闫玲玲 吴中华 符胜光 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2015年第2期19-22,共4页
目的:探讨加味千金苇茎汤对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺组织单免疫球蛋白IL-1相关蛋白(single immunoglobulin IL-1 related protein,SIGIRR)及其m RNA表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠... 目的:探讨加味千金苇茎汤对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺组织单免疫球蛋白IL-1相关蛋白(single immunoglobulin IL-1 related protein,SIGIRR)及其m RNA表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和加味千金苇茎汤组(每组8只)。采用脂多糖气管滴注联合烟熏方法建立COPD大鼠模型,采用免疫组化ABC法和实时荧光定量聚合酶链反应检测SIGIRR蛋白及其m RNA表达,观察加味小青龙汤对上述指标以及肺组织病理形态学变化的影响。结果:与正常组比较,模型组肺组织SIGIRR蛋白表达明显降低(P〈0.05);与模型组比较,地塞米松组和加味千金苇茎汤组肺组织SIGIRR蛋白及其m RNA的表达明显升高(P〈0.01)。病理观察显示,模型组肺内细支气管上皮空泡变性坏死脱落,管壁结构破坏,大量炎细胞浸润,腔内炎性充满渗出物,地塞米松组和加味千金苇茎汤组仅见轻度肺间质炎症。结论:加味千金苇茎汤能够减轻慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织的损伤,对COPD模型肺组织有保护作用,其机制可能与其能够上调SIGIRR蛋白表达有关。 展开更多
关键词 千金苇茎汤 慢性阻塞性肺疾病 SIGIRR
稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究 预览 被引量:2
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作者 蒋克国 王德光 +7 位作者 周海胜 查晓军 张桂霞 金福泉 季爽 潘海峰 叶冬青 郝丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期129-135,共7页
目的:建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与 GV248-GFP-Puro 慢病毒载体连接产生重组体( GV248-GFP-Puro-shSIGIRR... 目的:建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与 GV248-GFP-Puro 慢病毒载体连接产生重组体( GV248-GFP-Puro-shSIGIRR)。将测序验证正确的重组体与包装质粒(pMDL、pRev、pVSVG)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒并感染HKC细胞。实时荧光定量PCR( qRT-PCR)和Western blot法分析检测HKC细胞中SIGIRR干涉效率。应用白细胞介素-1β( IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC细胞及对照细胞, Western blot法检测其下游核转录因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常 T细胞表达和分泌的活化调节蛋白( RANTES) mRNA水平。结果成功构建重组慢病毒载体GV248-GFP-Puro-shSIGIRR。 qRT-PCR 和 Western blot 法均证实在HKC细胞中成功敲低SIGIRR的表达。此外, IL-1β刺激后,与对照细胞相比,敲低SIGIRR的HKC细胞( HKC/shSIGIRR)的p65磷酸化水平上调, MCP-1和 RANTES mR-NA表达水平升高。结论 HKC的炎症反应中,SIGIRR蛋白对Toll样受体/白介素1受体(TLR/IL-1R)通路起“刹车”作用。该研究为狼疮性肾炎的治疗提供了新的潜在的靶点。 展开更多
关键词 狼疮性肾炎 人肾小管上皮细胞 SIGIRR 慢病毒载体 NF-ΚB 趋化因子
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骨癌痛大鼠髓内SIGIRR的表达变化 被引量:3
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作者 张斌 白亢亢 +3 位作者 卞尧尧 濮文渊 陈轶尘 周春祥 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期402-406,共5页
目的本研究针对目前日益增长的骨癌痛病患的疼痛问题进行试验探讨。建立癌痛动物模型寻找有效缓解疼痛的方法,进一步探讨骨癌痛大鼠模型中髓内细胞蛋白SIGIRR的表达水平的变化。方法建立SD大鼠胫骨癌痛模型,随机分为空白组(10只)和... 目的本研究针对目前日益增长的骨癌痛病患的疼痛问题进行试验探讨。建立癌痛动物模型寻找有效缓解疼痛的方法,进一步探讨骨癌痛大鼠模型中髓内细胞蛋白SIGIRR的表达水平的变化。方法建立SD大鼠胫骨癌痛模型,随机分为空白组(10只)和骨癌痛模型组(10只)。通过大鼠痛行为学测试、影像学、组织学方法对大鼠胫骨癌痛的模型进行验证。运用RT-PCR和Western blot检测髓内蛋白细胞LTR4和SIGIRR表达变化。结果Walker256大鼠乳腺癌细胞制备大鼠胫骨癌痛的模型骨癌造模成功。模型组的体质量不增或者降低(P〈0.01)、SAPS显著增加(P〈0.01)、PWTL差异不大(P〉0.05)。RT-PCR检测的TLR4结果显示,骨癌痛模型组比空白组表达明显增加。Western blot检测骨癌痛模型组比空白组髓内蛋白细胞SIGIRR明显下降。结论骨癌痛大鼠髓内蛋白细胞SIGIRR表达的降低可能与骨癌痛的发生机制相关。 展开更多
关键词 骨癌痛 SIGIRR TLR4 固有免疫
MRL/lpr鼠部分病理指标动态变化及SIGIRR表达与狼疮肾炎相关性研究 预览
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作者 金小康 李卫东 《中国比较医学杂志》 2013年第11期31-35,I0004,I0005共7页
目的观察MRL/lpr鼠病理指标动态变化,研究MRL/lpr小鼠肾组织单个免疫球蛋白区白介1相关受体(single IgIL-1-related receptor,SIGIRR)的表达是否随病理分级加剧而变化,以提示TLR4/NF-κB通路是否参与了狼疮肾炎(iupus nephriti... 目的观察MRL/lpr鼠病理指标动态变化,研究MRL/lpr小鼠肾组织单个免疫球蛋白区白介1相关受体(single IgIL-1-related receptor,SIGIRR)的表达是否随病理分级加剧而变化,以提示TLR4/NF-κB通路是否参与了狼疮肾炎(iupus nephritis,LN)的发生发展。方法对照组C57BL/6小鼠和模型组MRL/lpr小鼠各12只,分别检测12、15、18、21周龄时小鼠胸腺指数、脾指数、尿蛋白,血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、抗核抗体(antinuclear antibodies,ANA);对肾组织切片进行苏木素依红(hematoxylin and eosin,HE)和马松(Masson)染色,观察模型鼠狼疮肾炎发病情况,采用免疫印迹(westernblot)和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法观察不同周龄小鼠肾脏SIGIRR的表达情况。结果MRL/lpr小鼠12、15、18、21周龄时与同龄C57BL/6鼠相比其尿蛋白水平随周龄增加而升高,血清尿素氮以及抗核抗体和对照组相比无明显差异,HE、Masson染色显示模型鼠从12周开始即表现出肾小球肾炎,血管周围炎细胞浸润,之后逐渐间质纤维化,肾小球系膜和基底膜增厚,甚至出现肾小球纤维化和硬化。Westernblot和IHC结果显示,21周龄时MRL/lpr小鼠肾组织SIGIRR蛋白表达增加,与同龄C57BL/6相比有显著性差异。结论SIGIRR蛋白表达随MRL/lpr小鼠狼疮肾炎加重而增加,其可能与TLR4/NF-κB(Toll-like receptor 4/nuclear factor-kappa B,Toll样受体4/核因子κB)通路相关。 展开更多
关键词 MRL lpr小鼠 狼疮肾炎 单个免疫球蛋白区白介素1受体相关分子
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SIGIRR与TLRs信号通路 预览 被引量:5
10
作者 陈旭昕(综述) 钱桂生(审校) 《四川医学》 CAS 2011年第3期 428-430,共3页
Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是固有免疫系统中的主要病原模式受体之一,TLRs通路的激活在全身性炎症反应和天然防御免疫中起着重要作用[1]。但是过度的TLR应答会引发抗炎与致炎间的失衡导致机体损伤。
关键词 SIGIRR TLRS 炎症 负性调控
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SIGIRR在固有免疫中的负性调节作用 预览 被引量:1
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作者 黄勋(综述) 姜涛(审校) 《现代医药卫生》 2011年第5期710-712,共3页
单一免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR,或TIR8)是Toll-IL-1受体(TIR)超家族的成员之一。它广泛分布于被覆上皮组织的器官,如肾脏、肺、结肠等,并且可以负性调节白细胞介素1受体(IL-1R)、Toll样受体(TLRs)介导的固有免... 单一免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR,或TIR8)是Toll-IL-1受体(TIR)超家族的成员之一。它广泛分布于被覆上皮组织的器官,如肾脏、肺、结肠等,并且可以负性调节白细胞介素1受体(IL-1R)、Toll样受体(TLRs)介导的固有免疫应答。固有免疫是机体防御病原体的第一道防线,对适应性免疫也起到调节作用。固有免疫反应过度可导致炎症因子瀑布样释放,从而造成对机体的损害。 展开更多
关键词 负性调节作用 固有免疫应答 SIGIRR 白细胞介素1受体 Toll样受体 受体相关蛋白 IL-1受体 免疫反应过度
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SIGIRR在人肺癌组织中表达的临床意义 预览
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作者 管春燕 赵云峰 +1 位作者 张梅 吴学玲 《老年医学与保健》 CAS 2010年第3期 148-149,152,共3页
目的研究肺癌组织中SIGIRR蛋白的表达及其临床意义。方法用western blot蛋白定量方法检测48例人肺癌组织中SIGIRR蛋白的表达及其与淋巴结转移、组织分化程度、临床TNM分期、性别及病理类型的关系。结果肺癌组织中SIGIRR蛋白表达水平较... 目的研究肺癌组织中SIGIRR蛋白的表达及其临床意义。方法用western blot蛋白定量方法检测48例人肺癌组织中SIGIRR蛋白的表达及其与淋巴结转移、组织分化程度、临床TNM分期、性别及病理类型的关系。结果肺癌组织中SIGIRR蛋白表达水平较正常肺组织明显增加(0.248±0.052坩0.125±0.005,P〈O.01),且其表达水平与淋巴结转移、组织分化程度及临床TNM分期密切相关(P〈O.05),而与患者性别和病理类型无关(P〉0.05)。结论人肺癌组织中SIGIRR蛋白表达水平增高,在人肺癌淋巴结转移、组织分化方面可能起一定的抑制作用。 展开更多
关键词 SIGIRR 肺癌 临床特征
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SIGIRR对H292细胞Toll样受体4、5、9致炎作用的影响及机制研究 被引量:2
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作者 张椿 钱桂生 +1 位作者 赵云峰 吴学玲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期243-246,共4页
目的 观察SIGIRR(sigh Ig IL-IR-related molecule)对人气道上皮细胞株H292中Toll样受体(TLR)4、5、9致炎作用的影响,并初步了解其作用机制.方法 运用脂质体转染的方法,将SIGIRR-EGFP融和蛋白真核表达载体稳定转染H292细胞,通过免疫细... 目的 观察SIGIRR(sigh Ig IL-IR-related molecule)对人气道上皮细胞株H292中Toll样受体(TLR)4、5、9致炎作用的影响,并初步了解其作用机制.方法 运用脂质体转染的方法,将SIGIRR-EGFP融和蛋白真核表达载体稳定转染H292细胞,通过免疫细胞化学技术观察H292细胞中SIGIRR的过表达情况;经LPS、Flagellin、CpG DNA 2006处理后,ELISA检测重组质粒(SIGIRR-EGFP)、空质粒(pEGFP-N1)转染以及未转染的H292细胞分泌致炎因子TNF-a和IL-6水平;通过免疫共沉淀的方法了解SIGIRR与MyD88之间的关系.结果 激光共聚焦显微镜显示重组融合蛋白SIGIRR-EGFP与H292内源SIGIRR共定位于细胞膜上;经LPS、Flagellin、CpG DNA 2006刺激后,重组质粒转染的H292细胞分泌的IL-6和TNF-a水平显著低于空质粒转染和未转染的H292细胞(P<0.01);免疫共沉淀提示H292细胞受到刺激后,SIGIRR与MyD88有较强相互作用,可与TLR4、5、9竞争结合MyD88分子.结论 SIGIRR对H292细胞TLR4、5、9致炎通路的负性调节作用,可能是通过减少MyD88分子与TLR4、5、9的结合,从而削弱了炎症信号的细胞内转导. 展开更多
关键词 SIGIRR MYD88 TOLL样受体 致炎因子 免疫共沉淀
SIGIRR-EGFP真核表达载体构建及在H292细胞中的亚细胞定位研究 被引量:5
14
作者 张椿 钱桂生 +1 位作者 赵云峰 吴学玲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期共4页
目的通过增强型绿色荧光蛋白示踪技术,观察SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)在人气道上皮细胞株H292中的分布特点及对上皮细胞天然免疫功能的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气... 目的通过增强型绿色荧光蛋白示踪技术,观察SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)在人气道上皮细胞株H292中的分布特点及对上皮细胞天然免疫功能的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292,再利用激光共聚焦显微镜对其进行亚细胞定位研究。经LPS刺激后,ELISA检测转染前后上皮细胞TNF-α分泌水平的差异。结果构建的融和蛋白表达载体SIGIRR-EGFP经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后,电泳显示其条带大小为4.7 kb和1.23 kb左右,经测序证实SIGIRR的序列与GenBank公布的人cDNA序列完全一致。激光共聚焦显示pEGFP-N1空载体转染表达的绿色荧光蛋白在H292细胞中均匀分布,而重组载体SIGIRR-EGFP表达的融和蛋白在H292细胞核周(膜)和细胞膜边缘上有连续分布现象。经LPS刺激后,pEGFP-N1转染的细胞和未转染细胞TNF-α水平无显著性差异(P>0.05),而SIGIRR-EGFP转染细胞与pEGFP-N1转染细胞相比,显著降低了TNF-α的产生(P<0.01)。结论成功构建... 展开更多
关键词 SIGIRR 绿色荧光蛋白 激光共聚焦
SIGIRR对CpG诱导的人气道H292细胞TLR9表达的影响 预览
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作者 吴学玲 张椿 +2 位作者 王兴盛 钱桂生 赵云峰 《老年医学与保健》 CAS 2009年第2期 86-88,共3页
目的研究SIGIRR对未甲基化的胞嘧啶磷酸鸟苷(CpG)诱导的人气道上皮细胞株H292细胞钟形受体9(TLR9)表达的影响。方法本实验对象包括6组,分别为H292组、空质粒转染组(eH292组)、SIGIRR转染组(SH292组),以及给予CpG刺激后的H292... 目的研究SIGIRR对未甲基化的胞嘧啶磷酸鸟苷(CpG)诱导的人气道上皮细胞株H292细胞钟形受体9(TLR9)表达的影响。方法本实验对象包括6组,分别为H292组、空质粒转染组(eH292组)、SIGIRR转染组(SH292组),以及给予CpG刺激后的H292组(CH292组)、eH292组(CeH292组)和SH292组(CsH292组)。构建SIGIRR-EGFP融合蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292经CpG刺激后,Western blot检测人气道H292细胞TLR9的表达,ELISA检测人气道上皮细胞H292分泌IL-6的水平。结果CH292组、CeH292组和CsH292组细胞较H292组、eH292组、sH292组细胞TLR9蛋白表达量增加(P均〈0.01);CSH292组细胞产生的IL-6(3.41±0.08pg/ml)少于CH292组(4.27±0.07pg/ml)及CeH292组(5.04±0.05pg/ml)(P均〈0.05)、而TLR9蛋白表达量差异无统计学意义。结论CpG可诱导Hm细胞表达TLR9蛋白,SIGIRR上调表达可抑制CpG诱导的H292细胞IL-6的产生,对TLR9表达无影响, 展开更多
关键词 SIGIRR 受体 细胞表面 H292细胞
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小鼠SIGIRR基因重组腺病毒的构建及鉴定 预览 被引量:2
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作者 梁晓华 王艳 +4 位作者 田丰 黄勋 高坤祥 李小飞 姜涛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期1-8,共8页
拟构建小鼠SIGIRR基因重组腺病毒并进行鉴定,为SIGIRR在小鼠急性肺损伤预防及治疗方面的研究提供基础.利用AdEasyTM系统构建SIGIRR基因重组腺病毒,并检测SIGIRR mRNA及蛋白在感染细胞及组织中的表达.通过多次扩增后,大量制备高滴度腺病... 拟构建小鼠SIGIRR基因重组腺病毒并进行鉴定,为SIGIRR在小鼠急性肺损伤预防及治疗方面的研究提供基础.利用AdEasyTM系统构建SIGIRR基因重组腺病毒,并检测SIGIRR mRNA及蛋白在感染细胞及组织中的表达.通过多次扩增后,大量制备高滴度腺病毒.结果表明,本试验成功构建了携带小鼠源性SIGIRR基因的重组腺病毒表达载体Ad-mSIGIRR,病毒感染滴度为5×10^10 pfu/mL,滴度符合下一步试验要求.Western blot和免疫组化方法分别检测到mSIGIRR在体内的高效表达,且经气管滴注感染小鼠后,不会引起正常小鼠肺组织发生病理变化.明确了SIGIRR基因的重组腺病毒可以在小鼠活体内使mSIGIRR过表达,且经气管滴注5×109pfu的病毒感染小鼠后,不会引起正常小鼠肺组织发生病理变化. 展开更多
关键词 单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR 急性肺损伤 腺病毒载体 AdEasyTM Toll样受体(TLR)
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SIGIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响 预览 被引量:1
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作者 吴学玲 张椿 +1 位作者 赵云峰 钱桂生 《西部医学》 2009年第4期 530-532,共3页
目的通过上调SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SI-GIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H... 目的通过上调SIGIRR(single Ig IL-1R-related molecule)在人气道上皮细胞株H292中的表达,研究SI-GIRR对LPS诱导的H292细胞TLR4表达的影响。方法构建SIGIRR-EGFP融和蛋白的真核表达载体,运用脂质体转染的方法转染人气道上皮细胞株H292,经LPS刺激后,ELISA检测转染前后上皮细胞TNF-α分泌水平的差异,Westernblot(WB)检测TLR4表达的变化。结果构建的融和蛋白表达载体SIGIRR-EGFP经EcoRI和BamHI双酶切后,电泳显示其条带大小为4.7kb和1.23kb左右,经测序证实SIGIRR的序列与GenBank公布的人cDNA序列完全一致。SIGIRR-EGFP转染细胞与pEGFP-N1转染细胞和对照组细胞相比,TNF-α产生明显下降,而TLR4表达无明显变化。结论SIGIRR上调表达可抑制LPS诱导的H292细胞TNF-α的产生,对TLR4表达无影响,提示SIGIRR在该信号通路中起“刹车”作用可能是通过抑制其下游通路中某个或某些调节蛋白的表达完成的。 展开更多
关键词 SIGIRR 绿色荧光蛋白 TLR4 TNF-Α
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