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一种强力霉素诱导型白念珠菌基因敲除与筛选标记再循环工具包
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作者 常鹏 尹华 +1 位作者 王文娟 陈江野 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期68-78,共11页
【目的】在白念珠菌中建立一个快捷方便经济的基因敲除与筛选标记再循环的DNA操作系统。【方法】通过ExoIII介导的不依赖于连接酶的克隆策略,在异源筛选标记基因CmLEU2、CdHIS1和CdARG4基因的两侧分别插入了loxP位点,成为筛选标记基因... 【目的】在白念珠菌中建立一个快捷方便经济的基因敲除与筛选标记再循环的DNA操作系统。【方法】通过ExoIII介导的不依赖于连接酶的克隆策略,在异源筛选标记基因CmLEU2、CdHIS1和CdARG4基因的两侧分别插入了loxP位点,成为筛选标记基因盒扩增的模板。全基因合成了经过白念珠菌密码子优化的rTetR元件,并组装成Tet-on启动子。将密码子优化的重组酶Cre基因置于该启动子控制下。然后将他们插入筛选标记基因CdHIS1和CdARG4的CDS区域,形成筛选标记基因再循环载体。【结果】构建了3个用于白念珠菌基因敲除的侧翼含有loxP位点的筛选标记基因载体,以及2个含有Tet-on启动子控制的Cre酶的载体用于筛选标记基因的再循环。【结论】成功构建了一个白念珠菌中可诱导的基因敲除和筛选标记再循环的载体系统并成功应用于多个基因缺失株构建。这个系统有助于快速构建白念珠菌的单基因和多基因敲除菌株。 展开更多
关键词 白念珠菌 基因敲除 TET-ON 筛选标记再循环 CRE LOXP
IBDV感染对法氏囊RNA m~6A和DNA 5mC修饰以及相关催化酶基因表达的影响
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作者 张艳红 吴庆茹 +7 位作者 师梦梦 王建 李光辉 袁梦琪 朱昱波 侯丽敏 杜新府 郭锋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期936-942,共7页
传染性法氏囊病毒(IBDV)感染造成病鸡法氏囊严重损伤,引起免疫抑制,然其具体机制仍不明晰。本研究旨在探讨IBDV感染对法氏囊表遗传修饰及其相关酶表达的影响。试验采用21日龄商品肉鸡,给予IBDV处理,感染后3,5 d收集法氏囊组织。应用基于... 传染性法氏囊病毒(IBDV)感染造成病鸡法氏囊严重损伤,引起免疫抑制,然其具体机制仍不明晰。本研究旨在探讨IBDV感染对法氏囊表遗传修饰及其相关酶表达的影响。试验采用21日龄商品肉鸡,给予IBDV处理,感染后3,5 d收集法氏囊组织。应用基于ELISA试剂盒检测总5mC和m~6A,Real-time PCR检测相关催化酶基因表达。结果显示,感染后5 d,总m~6A水平及其甲基转移酶METTL3和METTL14 mRNA表达均显著降低(P<0.01);去甲基化酶FTO的表达在感染后3,5 d均显著降低(P<0.05)。总5mC水平在感染后3 d明显升高(P<0.05),其去甲基化酶Tet1 mRNA表达明显降低(P<0.01);感染后5 d,甲基转移酶DNMT1 mRNA表达显著降低(P<0.01),而DNMT3a的表达明显升高(P<0.01);结果表明IBDV能够影响法氏囊5mC和m~6A谱及相关酶的表达,这可能是IBDV影响宿主免疫功能的途径之一。 展开更多
关键词 IBDV 5mC m~6A 甲基化 DNMT TET METTL FTO
鸡源葡萄球菌携带cfr与tet(M)基因于同一质粒的检测 预览
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作者 程于梦 杨梦艳 +1 位作者 于润浩 李德喜 《江西农业学报》 CAS 2019年第5期114-117,共4页
为了解鸡源葡萄球菌中多药耐药基因cfr的流行及耐药情况,采用提取细菌基因组DNA、PCR检测、药物敏感性检测、质粒提取、电转化试验、全质粒测序及分析等方法进行了研究。分离并鉴定出了1株多药耐药表型葡萄球菌,其含有cfr与tet(M)基因,... 为了解鸡源葡萄球菌中多药耐药基因cfr的流行及耐药情况,采用提取细菌基因组DNA、PCR检测、药物敏感性检测、质粒提取、电转化试验、全质粒测序及分析等方法进行了研究。分离并鉴定出了1株多药耐药表型葡萄球菌,其含有cfr与tet(M)基因,且cfr与tet(M)耐药基因位于同一质粒上。 展开更多
关键词 CFR tet(M) 多药耐药基因 葡萄球菌 检测
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Targeted energy transfer of a parallel nonlinear energy sink 预览
4
作者 Yimin WEI Sha WEI +3 位作者 Qianlong ZHANG Xinjian DONG Zhike PENG Wenming ZHANG 《应用数学和力学:英文版》 SCIE EI CSCD 2019年第5期621-630,共10页
A parallel nonlinear energy sink (NES) is proposed and analyzed. The parallel NES is composed of a vibro-impact (VI) NES and a cubic NES. The dynamical equation is given, and the essential analytical investigation is ... A parallel nonlinear energy sink (NES) is proposed and analyzed. The parallel NES is composed of a vibro-impact (VI) NES and a cubic NES. The dynamical equation is given, and the essential analytical investigation is carried out to deal with the cubic nonlinearity and impact nonlinearity. Multiple time-scale expansion is introduced, and the zeroth order is derived to give a rough outline of the system. The underlying Hamilton dynamic equation is given, and then the optimal stiffness is expressed. The clearance is regarded as a critical factor for the VI. Based on the periodical impact treatment by analytical investigation, the relationships of the cubic stiffness, the clearance, and the zeroth-order attenuation amplitude of the linear primary oscillator (LPO) are obtained. A cubic NES under the optimal condition is compared with the parallel NES. Harmonic signals, harmonic signals with noises, and the excitation generated by a second-order filter are considered as the potential excitation forces on the system. The targeted energy transfer (TET) in the designed parallel NES is shown to be more efficient. 展开更多
关键词 TARGETED ENERGY transfer (TET) NONLINEAR ENERGY sink (NES) NONLINEAR VIBRATION ABSORBER impact VIBRATION reduction
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干细胞中的DNA甲基化
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作者 程郢 张国强 陈大华 《生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期345-353,共9页
DNA甲基化是表观遗传机制中一种重要的调控方式,它通过调控基因的表达影响一系列的生物学过程。干细胞作为具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,其分化和再生过程必然受到精确的表观调控。DNA甲基化在干细胞的维持、分化调... DNA甲基化是表观遗传机制中一种重要的调控方式,它通过调控基因的表达影响一系列的生物学过程。干细胞作为具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,其分化和再生过程必然受到精确的表观调控。DNA甲基化在干细胞的维持、分化调控等方面都发挥着重要作用。现对胚胎干细胞、多能干细胞以及成体干细胞中DNA甲基化及羟甲基化的最新研究进展进行简要综述,回顾并展望DNA甲基化在干细胞中的潜在生物学功能及调控机制,同时为未来在临床诊断治疗及药物研发等方面提供一定的参考。 展开更多
关键词 甲基化 去甲基化 羟甲基化 干细胞 TET
可诱导表达小反刍兽疫病毒P蛋白细胞系的建立 预览
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作者 李霆 李茜 +7 位作者 王娜 崔贝贝 仇松寅 张永宁 吴晓东 吴绍强 韩雪清 林祥梅 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1173-1176,共4页
为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)磷蛋白(P)的生化功能,本研究通过PCR将PPRV p全长基因扩增后克隆至真核表达载体pcDNA4/TO中,构建了重组质粒pcDNA4/TO-PPRVP。将该质粒转染至已稳定转入pcDNA6/TR质粒的T-REx293细胞中,并用博来霉素和稻瘟菌... 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)磷蛋白(P)的生化功能,本研究通过PCR将PPRV p全长基因扩增后克隆至真核表达载体pcDNA4/TO中,构建了重组质粒pcDNA4/TO-PPRVP。将该质粒转染至已稳定转入pcDNA6/TR质粒的T-REx293细胞中,并用博来霉素和稻瘟菌素筛选存活克隆。将强力霉素添加至存活细胞克隆中诱导P蛋白表达,Western blot及间接免疫荧光试验鉴定出可诱导表达 P蛋白的细胞克隆,扩增阳性克隆获得能够稳定表达P蛋白的细胞系。Western blot显示该细胞系表达的P蛋白能够与山羊PPRV 阳性血清反应,并能够有效抑制聚肌胞苷酸诱导的STAT1磷酸化,表明该细胞系表达的重组PPRV P蛋白具有与野生型P蛋白类似的生物活性。本研究利用Tet on系统建立了表达 PPRV P蛋白的真核细胞系,为深入研究 PPRV 的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 P蛋白 TET on 细胞系
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探讨平板运动试验在冠心病中的应用价值 预览
7
作者 伍丽贞 韩伟华 《心电图杂志(电子版)》 2018年第2期139-141,共3页
目的探究平板运动试验(TET)在分析冠心病(CHD)中的应用价值。方法选取我院2015年2月-2017年11月收治的80例疑似CHD患者临床资料进行分析,均行冠状动脉造影(CAG)、TET检查,并将CAG诊断结果视作金标准,观察TET诊断效能。结果 80例疑... 目的探究平板运动试验(TET)在分析冠心病(CHD)中的应用价值。方法选取我院2015年2月-2017年11月收治的80例疑似CHD患者临床资料进行分析,均行冠状动脉造影(CAG)、TET检查,并将CAG诊断结果视作金标准,观察TET诊断效能。结果 80例疑似CHD患者经CAG检查确诊60例为CHD,阳性率为75.00%;TET诊断阳性53例,阳性率为66.25%;将CAG检查结果视作"金标准",TET诊断特异性为80.00%,灵敏性为88.33%,准确性为86.25%;60例CAG确诊为CHD患者以单支病变例数最多,TET诊断多支、双支病变准确性较单支病变高。结论 CHD患者可经TET进行诊断,具有较高特异度、灵敏度,且对多支、双支血管病变的诊断准确率更高,可指导临床治疗方案的制定,从而促进患者生活质量改善。 展开更多
关键词 TET CHD CAG 应用价值
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心电图平板运动试验Duke评分在冠心病诊断及预后判断中的应用价值 预览
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作者 马红 《上海医药》 CAS 2018年第9期34-36,共3页
目的:探讨心电图平板运动试验(treadmill exercise testing,TET)Duke评分(Duketreadmillscore,DTS)在冠心病诊断及预后判断中的应用价值.方法:选取136例疑似冠心病患者为研究对象,所有患者均行TET及冠脉造影检查,分析结果.结果:... 目的:探讨心电图平板运动试验(treadmill exercise testing,TET)Duke评分(Duketreadmillscore,DTS)在冠心病诊断及预后判断中的应用价值.方法:选取136例疑似冠心病患者为研究对象,所有患者均行TET及冠脉造影检查,分析结果.结果:冠脉造影检出阳性79例,阴性57例,TET单独诊断在男性组中的敏感度、特异度、准确度及阳性预测值显著高于女性组;DTS单独诊断在男性组中的特异度显著高于女性组;TET联合DTS诊断敏感度、特异度及准确度显著高于TET、DTS单独诊断;高危组Duke评分显著高于低、中危组,组间两两比较差异显著.结论:TETDuke评分可有效地对冠心病的严重程度进行初步判断,这对临床治疗及预后判断具有重要意义. 展开更多
关键词 冠心病 冠脉造影 TET DUKE评分
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强力霉素诱导型Cas9基因编辑小鼠胚胎干细胞系的构建 预览
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作者 姚玉琛 朱少华 +3 位作者 曹佳妮 张琳 杨月伟 赵同标 《发育医学电子杂志》 2018年第3期160-165,共6页
目的建立强力霉素(doxmycin,Dox)诱导型Cas9基因编辑小鼠胚胎干细胞系,以满足不同条件下基因编辑的实验需求。方法根据四环素(tetracycline,Tet)-on诱导表达调控系统的原理,分别构建含有调控元件反义Tet转录激活因子(reverse tetra... 目的建立强力霉素(doxmycin,Dox)诱导型Cas9基因编辑小鼠胚胎干细胞系,以满足不同条件下基因编辑的实验需求。方法根据四环素(tetracycline,Tet)-on诱导表达调控系统的原理,分别构建含有调控元件反义Tet转录激活因子(reverse tetracy-cline transcriptional activator,rt TA)的表达质粒p CDH-CAG-rt TA-IRES-m Cherry和含有Tet应答元件(Tet-responsive element,TRE)及Cas9的表达质粒p Tight-Cas9-IRES-GFP-Tight-Puro,其中红色荧光蛋白m Cherry通过内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)与rt TA表达,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)通过IRES与Cas9相连,分别指示rt TA与Cas9的表达,Puro抗性基因作为药物筛选标记。将上述两种质粒包装为慢病毒,分步转入小鼠胚胎干细胞中,建立Dox诱导Cas9表达的小鼠胚胎干细胞系。结果首先通过瞬时转染方法在293T细胞中验证其可诱导性,然后结合报告荧光与药物筛选获得同时整合有调控元件rt TA与应答元件TRE及Cas9的小鼠胚胎干细胞系,该细胞系加入Dox后出现有GFP报告荧光表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,rt-q PCR)结果同时表明Cas9可以被成功诱导表达。结论本研究成功构建了Dox诱导Cas9表达的小鼠胚胎干细胞系,该细胞系在基因编辑方法上更加灵活可控,具有很高的潜在应用价值。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 四环素诱导 条件性敲除 小鼠ES细胞系
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TET积极聆听案例之“你说,我听”
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作者 谭玉媚 《学园》 2018年第10期51-51,61共2页
探讨老师学会聆听学生,有助于帮助学生缓解情绪,让师生关系更加融洽和谐,协助学生找回自己的力量,让学生觉得'我能行'。
关键词 班主任 积极聆听 TET
Tet-On调控NICD稳定表达的骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤 预览 被引量:1
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作者 习小庆 胡红林 +4 位作者 邹丛 方周青 匡仁锐 叶真逢 黄雅为 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第25期4035-4040,共6页
背景:肾缺血再灌注损伤是诱发急性肾损伤的主要原因。骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤一直是研究的热点。目的:探讨Tet-On系统调控NICD稳定表达的骨髓间充质干细胞(NICD-Tet-BMSCs)对肾缺血再灌注损伤的修复作用。方法:采用密度... 背景:肾缺血再灌注损伤是诱发急性肾损伤的主要原因。骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤一直是研究的热点。目的:探讨Tet-On系统调控NICD稳定表达的骨髓间充质干细胞(NICD-Tet-BMSCs)对肾缺血再灌注损伤的修复作用。方法:采用密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,体外构建Tet-On系统强力霉素调控NICD稳定表达的骨髓间充质干细胞,然后将此细胞移植至肾缺血再灌注损伤大鼠体内,术后检测血清肌酐水平、肾组织中骨髓间充质干细胞分布以及血管内皮生长因子和肿瘤坏死因子α表达变化。结果与结论:①NICD蛋白在NICD-Tet-BMSCs中稳定表达并受强力霉素调控;②与肾缺血再灌注损伤组相比,NICD-Tet-BMSCs组大鼠术后血清肌酐水平明显降低(P<0.05);③外源性骨髓间充质干细胞在NICD-Tet-BMSCs组大鼠肾组织中增殖持续时间更长;④NICD-Tet-BMSCs组肾组织中血管内皮生长因子蛋白表达升高,肿瘤坏死因子α蛋白表达降低,差异有显著性意义(P<0.05);⑤体外能够成功构建Tet-On系统调控NICD稳定表达的大鼠骨髓间充质干细胞,此细胞可促进大鼠肾缺血再灌注损伤的修复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 NICD TET-ON 强力霉素 肾缺血再灌注损伤 肌酐 血管内皮生长因子 肿瘤坏死因子α 国家自然科学基金 骨髓 间质干细胞 再灌注损伤 组织工程
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哺乳动物DNA甲基化修饰的动态调控机制
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作者 徐彦辉 《生命科学》 CSCD 2017年第10期934-938,共5页
DNA甲基化是生命体最主要的表观遗传修饰之一。哺乳动物DNA甲基化主要发生在胞嘧啶第五位碳原子上,称为5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5m C)。哺乳动物DNA甲基化由从头DNA甲基转移酶DNMT3A/3B在胚胎发育早期建立,甲基化模式的维持由... DNA甲基化是生命体最主要的表观遗传修饰之一。哺乳动物DNA甲基化主要发生在胞嘧啶第五位碳原子上,称为5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5m C)。哺乳动物DNA甲基化由从头DNA甲基转移酶DNMT3A/3B在胚胎发育早期建立,甲基化模式的维持由DNA甲基转移酶DNMT1实现。TET家族蛋白氧化5-甲基胞嘧啶起始DNA的去甲基化过程。这些DNA甲基化修饰酶精确调节DNA甲基化的动态过程,在整个生命发育过程中发挥重要作用,其失调也与多种疾病发生密切相关。现结合国内外同行研究进展,介绍课题组近年来对DNA甲基化修饰酶的结构与功能研究。 展开更多
关键词 DNA甲基化 DNA甲基转移酶 TET
熊果酸和粉防己碱对肿瘤相关信号通路的互补抑制及其协同抗肿瘤增殖作用研究 预览
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作者 石荣珍 李世发 高建莉 《浙江中医药大学学报》 CAS 2017年第8期652-657,共6页
[目的]通过分析中药活性成分对肿瘤相关的多条信号通路抑制作用的差异,研究对信号通路抑制作用存在互补现象的两个化合物熊果酸(ursolic acid,UA)和粉防己碱(tetrandrine,Tet)协同抗肿瘤增殖的作用及其最优配比。[方法]运用多信号... [目的]通过分析中药活性成分对肿瘤相关的多条信号通路抑制作用的差异,研究对信号通路抑制作用存在互补现象的两个化合物熊果酸(ursolic acid,UA)和粉防己碱(tetrandrine,Tet)协同抗肿瘤增殖的作用及其最优配比。[方法]运用多信号通路报告基因技术,研究5个具有抗肿瘤活性的化合物千金藤碱(cepharanthine,Cep)、Tet、18α-甘草酸(18α-glycyrrhetinic acid,18α-Gly)、UA、木犀草素(luteolin,Lut)对肿瘤相关的MAPK/ERK、MAPK/JNK、NF-κB、Wnt、Notch、Cell Cycle、Myc/Max以及Hypoxia信号通路活化程度的影响;采用MTT法和结晶紫法研究由Cep、Tet、18α-Gly、UA、Lut组成的15个不同化合物组合对人肿瘤细胞MDA-MB-231、SW480、MG63、PC3、DU145、HCT116、143B、MDA-MB-468的抗增殖作用;运用两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)法筛选存在协同增效作用的化合物组合;采用等效线法和合用指数(combination index,CI)法筛选该组合协同抗肿瘤细胞增殖的最优配比。[结果]信号通路报告基因实验发现化合物组合UA+Tet对与肿瘤相关的8条信号通路活化的抑制作用存在互补,提示UA和Tet之间可能具有协同抗肿瘤细胞增殖作用。CDI法验证后发现UA和Tet具有协同抗肿瘤细胞增殖作用。等效线法、CI法分析得出UA与Tet最佳浓度比为9:1。[结论]UA、Tet对8条肿瘤相关信号通路具有抑制互补作用,用MTT、结晶紫等不同方法证实二者协同抗增殖作用,并筛选出UA和Tet的最优配比,这为研发抗癌复方提供了新的思路。 展开更多
关键词 协同作用 信号通路互补 UA TET 抗肿瘤 药物组合 报告基因 最佳配比
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氯化钾溶液刺激星形胶质细胞对Tets基因表达的影响 预览
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作者 郝凌云 王沁玥 +1 位作者 孙梦兰 潘志强 《世界复合医学》 2017年第3期8-11,共4页
目的观察氯化钾(KCl)溶液刺激人脑星形胶质母细胞瘤细胞(U87),不同浓度KCl对Tets基因mRNA表达的影响。方法2017年2—4月,徐州医科大学麻醉重点实验室,U87细胞用不同浓度KCl刺激,Trizol法提取总RNA,以Real-time PCR方法检测结果为观... 目的观察氯化钾(KCl)溶液刺激人脑星形胶质母细胞瘤细胞(U87),不同浓度KCl对Tets基因mRNA表达的影响。方法2017年2—4月,徐州医科大学麻醉重点实验室,U87细胞用不同浓度KCl刺激,Trizol法提取总RNA,以Real-time PCR方法检测结果为观察指标检测Tets mRNA表达的变化。依据KCl浓度将细胞分为5组:对照组(0组),不同浓度KCl组(0.001、0.025、0.05、0.1 mmol/mL,分别标记为0.001,0.025,0.05,0.1组)。结果经KCl刺激后,3个Tet mRNA在各组星形胶质细胞均有表达,但表达差异并不一致。其中Tet1 mRNA的表达总体升高,在0.05组达到高峰[0.05 vs.0,(6.854±0.980 9)vs.(1.000 0±0.000 0),(P〈0.001)],此后回落;Tet2 mRNA的表达在各组间没有显著的变化(P〉0.05);Tet3 mRNA的表达在0.001组有一个小幅升高,但是差异无统计学意义[0.001 vs.0,(1.358±0.439 8)vs.(1.000±0.000 0),(P〉0.05)],此后在0.05组显著升高[0.05 vs.0,(2.621±0.160 8)vs.(1.000±0.000 0)P〈0.01],此后回落。结论 KCl刺激可使人脑星形胶质母细胞瘤细胞中Tet1和Tet3mRNA的表达增高,其表达与KCl的浓度有关。 展开更多
关键词 氯化钾 星形胶质细胞 TET
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人GJB6基因Tet—onHaCaT细胞稳定株的构建与鉴定
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作者 路雨婷 王震英 +2 位作者 宋亚丽 姬灿灿 张莉 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期265-270,共6页
目的以Tet—on慢病毒为载体建立稳定表达GJB6基因及其突变体的HaCaT细胞株,为后续研究有汗性外胚层发育不良的发病机制奠定实验基础。方法利用PCR技术扩增人GJB6基因野生型与突变型(A88V)基因,重组Tet—Oil慢病毒质粒,经基因测序... 目的以Tet—on慢病毒为载体建立稳定表达GJB6基因及其突变体的HaCaT细胞株,为后续研究有汗性外胚层发育不良的发病机制奠定实验基础。方法利用PCR技术扩增人GJB6基因野生型与突变型(A88V)基因,重组Tet—Oil慢病毒质粒,经基因测序及酶切技术对其鉴定,再将重组慢病毒转染入HaCaT细胞,经嘌呤霉索筛选出稳定表达编码缝隙连接蛋白Cx30的GJB6基因的细胞株。细胞株加四环素诱导后,通过RT—PCR检测GJB6基因的mRNA表达量,同时通过Western印迹检测Cx30与FLAG标签肽的表达,从而对稳定表达GJB6基因的HaCaT细胞株进行鉴定。用CCK8法检测GJB6基因野生型与突变型经四环素诱导表达后对细胞增殖的影响。结果经酶切、测序鉴定,重组慢病毒质粒构建成功。RT—PCR检测到稳定转染的HaCaT细胞中GJB6基因mRNA表达量明显增加,感染野生型Tet—on慢病毒的HaCaT细胞组(wT组)加四环素GJB6基因表达丰度是wT组不加四环素的113.369倍(P〈0.05),感染突变型(A88V)Tet—on慢病毒的HacaT细胞组(MU组)加四环素GJB6基因表达丰度是MU组不加四环素的3.249倍(P〈0.05);Western印迹可检测到经四环素处理的WT组和MU组稳定表达Cx30与FLAG,而未经四环素处理的细胞和感染阴性对照病毒的HaCaT细胞组(NC组)未检测到Cx30与FLAG目的条带。NC组加与不加入四环素在4、8、12、24、36、48h时的A值差异均无统计学意义(P〉0.05);wT组加与不加入四环素在4、8、12、24、36h时的A值差异均有统计学意义(P〈0.05);MU组加与不加入四环素在4、8、12、24、36、48h时的A值差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论成功构建出稳定表达GJB6基因野生型及其突变体A88V的HaCaT细胞株。 展开更多
关键词 外胚层发育不良症 连接蛋白类 GJB6基因 HACAT细胞 Tet—on
胸腺上皮性肿瘤中TTF1、Ki-67的表达与WHO分型的关系及临床意义 预览
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作者 孙也淇 陈鹏 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2016年第3期229-234,共6页
目的 观察TTF1及Ki-67在胸腺上皮性肿瘤(Thymic epithelial tumors,TET)中的表达情况,探讨其与WHO分型的关系及二者的相关性。方法 收集59例TET标本,其中诊断一致的51例,不一致8例。应用免疫组化技术检测TTF1及Ki-67在诊断一致的 51例... 目的 观察TTF1及Ki-67在胸腺上皮性肿瘤(Thymic epithelial tumors,TET)中的表达情况,探讨其与WHO分型的关系及二者的相关性。方法 收集59例TET标本,其中诊断一致的51例,不一致8例。应用免疫组化技术检测TTF1及Ki-67在诊断一致的 51例TET及30例胸腺增生组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果 在诊断不一致的8例TET中,4例与AB型有关。在诊断一致的51例TET中,TTF1及Ki-67在TET中的表达均显著高于胸腺增生组(P<0.05)。TTF1仅在AB型胸腺瘤中表达(11/15),其表达与WHO分型有关。Ki-67标记指数从A型到胸腺癌逐渐增加,且在A型与胸腺癌的表达范围不重叠,其表达与WHO分型及MasaoKa分期均有关。同时TTF1及Ki-67在TET中的表达没有相关性。结论 TTF1是AB型胸腺瘤相对特异性的标记;Ki-67不仅对A型与胸腺癌中的区分有帮助,同时具有很好的指示预后的价值。 展开更多
关键词 TTF1 KI-67 TET WHO分型 MasaoKa分期
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Pin1在皮肤组织中的表达以及可诱导转基因小鼠模型的建立 预览
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作者 向建 陈鹏 +2 位作者 张莉 卢坤平 廖新化 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期333-338,共6页
目的观察Pin1在皮肤中的表达情况,构建Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型。方法将小鼠Pin1基因克隆到改造过的可与Myc标签蛋白融合的p TRE2载体中,并将线性化的DNA通过显微注射的方式构建TRE-Pin1小鼠。结果成功获得TRE-Pin1转基... 目的观察Pin1在皮肤中的表达情况,构建Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型。方法将小鼠Pin1基因克隆到改造过的可与Myc标签蛋白融合的p TRE2载体中,并将线性化的DNA通过显微注射的方式构建TRE-Pin1小鼠。结果成功获得TRE-Pin1转基因首建鼠,该小鼠与上皮特异的K14-rt TA转基因小鼠配繁,获得Pin1在皮肤上皮特异性可诱导表达的双转基因鼠;通过将多西霉素(又名强力霉素,Doxycycline)加入饮水的方式诱导Pin1基因的表达,并通过Western blot,免疫组织化学等方式证明了Pin1蛋白在皮肤上皮中能特异性地过表达。我们还发现内源的Pin1在皮肤中主要表达于上皮细胞。结论成功构建了Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型,为后续研究Pin1在皮肤中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 PIN1 多西霉素 转基因小鼠 Tet-on 皮肤
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不同急性早幼粒细胞白血病诊断性检验项目的周转时间及总消耗时间的比较 预览 被引量:1
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作者 肖作淼 肖德俊 +3 位作者 何程明 余路虎 石远苹 王小中 《实验与检验医学》 CAS 2016年第2期143-145,154共4页
目的比较急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)诊断性检验项目的周转时间(turn around time,TAT)及总消耗时间(the elapsed time,TET),为APL的早期诊治提供指导。方法分别比较20例初诊APL患者确诊过程中的外... 目的比较急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)诊断性检验项目的周转时间(turn around time,TAT)及总消耗时间(the elapsed time,TET),为APL的早期诊治提供指导。方法分别比较20例初诊APL患者确诊过程中的外周血形态及骨髓MICM(Morphology、Immunology、Cytogenetics、Molecular,MICM)分型检查的TAT,及每项实验和首次全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)治疗的TET(从入院开始计时)。结果 APL诊断性检验项目的 TAT/TET分别为:外周血形态外周血形态(2.6±2.6)h/(5.8±5.5)h,骨髓形态(初步)(2.4±0.5)h/(20.6±12.3)h,骨髓形态(正式)(26.9±19.9)h/(40.4±24.9)h,免疫分型(23.5±9.1)h/(62.1±32.2)h,染色体(259.9±82.8)h/(283.1±94.4)h、PML/RARa基因为(67.4±26.4)h/(98.5±39.6)h。分别与外周血形态的TAT及TET比较,除骨髓形态(初步)的TAT无统计学差异(P=0.246)外,其他项目的 TAT及TET均有显著性统计学差异(P〈0.01)。同时ATRA首次治疗的TET为(7.0±29.1)h,与外周血形态TET相比无统计学差异(P=0.778)。结论外周血形态能较快地为APL诊断提供方向,并有利于为骨髓形态的初步报告缩短TAT,两者联合能有效地为APL的及早ATRA救治提供实验依据,从而为降低早期死亡率(early death rate,EDR)创造条件。 展开更多
关键词 急性早幼粒细胞白血病 周转时间 总消耗时间 早期死亡率 维甲酸
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Tet-On系统调控p53稳定表达的H1299细胞系的建立与应用 预览
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作者 武专昌 王鑫 +9 位作者 魏建超 杨逸凡 赵秋华 邵东华 李玉明 齐鹏飞 刘珂 李蓓蓓 邱亚峰 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第6期76-82,共7页
应用Tet-on系统和H1299细胞,建立了p53诱导表达的H1299细胞系p53-Tet H1299,p53表达受强力霉素(doxycycline,Dox)调控,存在一定的剂量依赖性。诱导表达的p53蛋白有很好的核定位能力和转录活性,能显著上调p21、TLR3、Bax等多种p53转录... 应用Tet-on系统和H1299细胞,建立了p53诱导表达的H1299细胞系p53-Tet H1299,p53表达受强力霉素(doxycycline,Dox)调控,存在一定的剂量依赖性。诱导表达的p53蛋白有很好的核定位能力和转录活性,能显著上调p21、TLR3、Bax等多种p53转录激活的下游靶基因表达,同时还可显著抑制水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的复制,说明p53-Tet H1299可作为研究p53抗病毒作用的细胞模型。p53诱导表达细胞系的建立为进一步研究p53抗病毒作用机制、转录调控基因的筛选及其他生物学功能研究提供了很好的研究工具。 展开更多
关键词 P53 TET-ON H1299 DOX 抗病毒
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DNA双加氧酶TET在中枢神经系统的研究进展 预览
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作者 刘洁 米亚静 《海南医学》 CAS 2015年第14期2107-2109,共3页
DNA双加氧酶TET家族是新发现的一类表观遗传修饰蛋白,能够将DNA的5-甲基胞嘧啶氧化为5-羟甲基胞嘧啶,进而调控基因的表达。多项研究显示,TET1-3在中枢神经系统表达丰富,其潜在的生物功能也被广泛关注。本文从TET蛋白结构功能概述、TET... DNA双加氧酶TET家族是新发现的一类表观遗传修饰蛋白,能够将DNA的5-甲基胞嘧啶氧化为5-羟甲基胞嘧啶,进而调控基因的表达。多项研究显示,TET1-3在中枢神经系统表达丰富,其潜在的生物功能也被广泛关注。本文从TET蛋白结构功能概述、TET蛋白在中枢神经系统的表达及功能以及针对TET家族的基因敲除小鼠实验三方面作一综述。 展开更多
关键词 TET 表观遗传修饰 中枢神经系统 基因敲除
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