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基于THP-1-HIF-1α-HER-Luciferase细胞模型的抗动脉粥样硬化药物筛选 预览
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作者 钱俞君 秦春霞 +2 位作者 孙莉莉 丁华敏 李铁军 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期33-38,共6页
目的·基于THP-1-HIF-1α-HER-Luciferase高通量筛选模型,对化合物的抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)活性进行筛选,并对有效化合物的抗AS功能进行验证。方法·利用不同浓度(1、10和100μg/mL)的200种化合物预处理THP-1-HIF-... 目的·基于THP-1-HIF-1α-HER-Luciferase高通量筛选模型,对化合物的抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)活性进行筛选,并对有效化合物的抗AS功能进行验证。方法·利用不同浓度(1、10和100μg/mL)的200种化合物预处理THP-1-HIF-1α-HERLuciferase细胞2h,再低氧培养24h,收集细胞并检测荧光素酶活性,通过荧光素酶活性的变化评价化合物抗AS活性。利用有效化合物预处理单核巨噬细胞THP-1和U937,再经氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,OX-LDL)诱导24h,通过油红染色观察泡沫细胞形成,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α)的mRNA含量,蛋白印迹法(Western blotting)检测HIF-1α的蛋白表达,并分析有效化合物的抗AS活性。结果·200种化合物中,有11种化合物能够有效抑制由低氧引起的THP-1-HIF-1α-HER-Luciferase细胞内荧光素酶活性升高(均P<0.05);其中,化合物C14抑制作用最为显著。THP-1和U937细胞由OX-LDL诱导24h可出现泡沫化,化合物C14对其预处理2h则能够明显抑制由OX-LDL引起的单核细胞泡沫化。qPCR和Western blotting检测显示,OX-LDL诱导THP-1和U937细胞24h可明显增强胞内HIF-1αmRNA含量及其蛋白的表达(P<0.05),而C14预处理则能梯度依赖地抑制由OX-LDL诱导的胞内HIF-1αmRNA含量及其蛋白表达的增强(P<0.05)。结论·抗AS化合物的高通量筛选模型THP-1-HIF-1α-HER-Luciferase具有较高的可靠性,化合物C14具有良好的抗AS活性特征。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子1Α THP-1细胞 U937细胞 泡沫细胞 动脉粥样硬化
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可溶性CD40配体对白血病THP-1细胞生物学影响及机制研究
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作者 封忠昕 陈琦 +6 位作者 王季石 袁钟 闵迅 张振东 付书南 葛晓军 邱顺华 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2019年第10期690-694,共5页
目的急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia, AMoL)具有易浸润、易复发、预后差和死亡率高等特点。可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)在肿瘤细胞抗原递呈等方面发挥重要作用。本研究分析不同浓度的sCD40L对人白血病TH... 目的急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia, AMoL)具有易浸润、易复发、预后差和死亡率高等特点。可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)在肿瘤细胞抗原递呈等方面发挥重要作用。本研究分析不同浓度的sCD40L对人白血病THP-1细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及对PI3K/AKT信号传导通路表达影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法不同浓度2、4和6 Mg/mL的sCD40L作用THP-1细胞24 h,采用CCK-8法检测sCD40L对THP-1细胞增殖抑制作用,流式细胞术Annexin V FITC/PI法检测细胞凋亡的影响,迁移实验Transwell法检测3组不同浓度sCD40L单用或者联合PI3K抑制剂LY294002对THP-1细胞迁移能力的影响,蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号传导通路中关键蛋白PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果 CCK 8法检测2 Mg/mL的sCD40L A 值为 0. 317+0. 029,细胞增殖抑制率为(23. 62 土 2. 17)%细胞凋亡率为(14. 32 ± 2. 01)%;4 Mg/mL 的sCD40L A 值为 0. 253±0. 021,细胞增殖抑制率为(37. 24 ± 3. 68)%,细胞凋亡率为(50. 40 ± 6. 17)%;6 Mg/mL 的sCD40L作用THP-1细胞24 h后A值为0. 196±0. 017 ,细胞增殖抑制率为(52. 13 ±4. 96)%,细胞凋亡率为(67. 53±7. 26)%;对照组A值为0. 58 + 0. 05 ,增值抑制率为(11. 63 士 1. 07)%,细胞凋亡率为(& 79±0. 92)%;增值抑制率之间比较,差异有统计学意义,F=83. 184,P = 0. 001;细胞凋亡率之间比较,差异有统计学意义,F=100. 759, PV0. 001;Transwell法结果显示,单独使用sCD40L干预,随着sCD40L浓度增加,细胞迁移能力逐渐降低,同时加入PI3K抑制剂LY294002后,细胞迁移能力降低,与对照组比较,差异有统计学意义,F=90. 033,P<0. 001;蛋白质印迹法结果显示,随着sCD40L浓度增加,PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、MMP-2和MMP-9蛋白表达随之降低,加入PI3K抑制剂LY294002后,AKT(F=5. 394, P = 0. 004)、PI3K(F = 5. 689, P = 0. 004)、p-AKT(F= 7. 621, P = 0. 001). p-PI3K( F =& 787,P<0. 001)、MMP-2(F=6. 827,P = 0. 002)和MMP-9(F=11. 展开更多
关键词 可溶性CD40配体 THP-1细胞 细胞增殖 细胞凋亡 侵袭 迁移 PI3K/AKT信号通路
Apelin-13对巨噬细胞极化的影响
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作者 孙梦娜 徐予 +4 位作者 陈昌 郝家亮 岳凤阳 张春丽 孙志阔 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第5期435-438,共4页
目的探讨合成型Apelin-13对人脐带源间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell, HUCMSC)与单核巨噬细胞THP-1共培养体系中巨噬细胞极化的影响。方法单核巨噬系细胞THP-1,复苏培养后用佛波酯(phorbol ester, PM... 目的探讨合成型Apelin-13对人脐带源间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell, HUCMSC)与单核巨噬细胞THP-1共培养体系中巨噬细胞极化的影响。方法单核巨噬系细胞THP-1,复苏培养后用佛波酯(phorbol ester, PMA)+脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)+重组人干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)诱导为M1型巨噬细胞,分为空白对照组和低、中、高浓度组,与HUCMSC共培养后分别用质量浓度为0、100、500、1 000μg/L的Apelin-13进行干预。干预48 h,应用倒置显微镜观察细胞形态;收集M1型巨噬细胞及共培养体系中上层小室内的贴壁巨噬细胞,应用流式细胞术检测细胞膜蛋白CD86及CD206表达;采用ELISA法检测上清液中白细胞介素(interleukin, IL)-4、IL-6、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)表达。结果 Apelin-13干预48 h,THP-1细胞形态由棒状、放射状、树枝状转变为圆形、类圆形,黏附性增强,细胞内颗粒增多,且随Apelin-13浓度增高细胞形态变化明显;低、中、高浓度组细胞表面膜蛋白CD86阳性表达率[(5.633±0.153)%、(3.040±0.529)%、(2.860±0.531)%]低于空白对照组[(16.710±0.103)%],CD206阳性表达率[(93.633±0.351)%、(94.100±0.266)%、(97.402±0.265)%]高于空白对照组[(73.220±1.307)%](P<0.05);中、高浓度组CD86阳性表达率低于低浓度组(P<0.05),中浓度组与高浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05);高浓度组CD206阳性表达率高于低、中浓度组(P<0.05),低浓度组与中浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05)。低、中、高浓度组IL-6(1.006±0.007、0.682±0.004、0.346±0.004)、IL-1β(1.468±0.033、0.919±0.014、0.908±0.018)、TNF-α(0.880±0.004、0.285±0.005、0.278±0.005)吸光度(optical density, OD)值低于空白对照组(1.417±0.005、1.907±0.004、1.301±0.006)(P<0.05),IL-4(0.101±0.004、0.155±0.003、0.248±0.005)、IL-10(0.117±0.004、0.15 展开更多
关键词 巨噬细胞极化 人脐带源间充质干细胞 APELIN-13 THP-1细胞
二磷酸氯喹对THP-1细胞增殖及凋亡的影响
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作者 洪珊 杨佳佳 +3 位作者 文送娇 林垚 叶超 孙强明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期386-389,共4页
目的探讨不同浓度二磷酸氯喹对急性单核细胞性白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法分别用10、20、40、80、100μmol/L氯喹处理THP-1细胞,分别于处理12、24、48和72 h收集细胞,MTS法检测细胞增殖情况,同时采用Hoechst33342荧光染色法... 目的探讨不同浓度二磷酸氯喹对急性单核细胞性白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法分别用10、20、40、80、100μmol/L氯喹处理THP-1细胞,分别于处理12、24、48和72 h收集细胞,MTS法检测细胞增殖情况,同时采用Hoechst33342荧光染色法及流式细胞仪检测二磷酸氯喹对THP-1细胞凋亡的影响。结果处理细胞12、24 h时,10、20、40、80、100μmol/L二磷酸氯喹对细胞增殖无明显影响,各组间差异无统计学意义(P>0.05);处理细胞48、72 h时,各浓度二磷酸氯喹对细胞增殖均有抑制作用,细胞活力均明显下降,各组间差异有统计学意义(P<0.01),并具有剂量依赖性。不同浓度二磷酸氯喹对THP-1细胞凋亡均具有诱导作用,且随着浓度的增加,细胞凋亡愈加明显。结论二磷酸氯喹在体外可抑制THP-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其作用具有剂量依赖性。 展开更多
关键词 二磷酸氯喹 THP-1细胞 细胞增殖 细胞凋亡
细胞间隧道纳米管介导的线粒体转运诱导急性单核细胞白血病细胞抵抗凋亡的研究 预览
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作者 徐前飞 刘亚蒙 +6 位作者 周震 田志祥 王丽红 胡艳 李静 刘晓颖 葛健 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第9期1377-1382,共6页
目的观察人类急性单核细胞白血病(AML-M5)细胞系THP-1与骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)之间隧道纳米管(TNTs)结构的形成;探讨TNTs中线粒体转运对THP-1细胞凋亡的影响及线粒体在TNTs中转运的分子机制。方法使用特异性荧光染料分别对线粒体、... 目的观察人类急性单核细胞白血病(AML-M5)细胞系THP-1与骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)之间隧道纳米管(TNTs)结构的形成;探讨TNTs中线粒体转运对THP-1细胞凋亡的影响及线粒体在TNTs中转运的分子机制。方法使用特异性荧光染料分别对线粒体、细胞骨架蛋白F-Actin和细胞核进行荧光标记,共聚焦显微镜观察BM-MSCs与THP-1细胞间TNTs的形成及TNTs中线粒体的传递。BM-MSCs与THP-1细胞共培养5 d后运用流式细胞术检测THP-1细胞凋亡;共培养体系分为4组:直接共培养(SC组)、Transwell透膜共培养(TC组)、直接共培养体系中加入细胞松弛素(TNTs抑制剂)Latrunculin B(LC组)、无BM-MSCs而仅有培养液(MC组);Western blot检测细胞器转运相关马达蛋白(KIF5B)表达水平。结果 BM-MSCs与THP-1细胞间可观察到TNTs形成,BM-MSCs中线粒体通过TNTs单向传递到THP-1细胞,并未观察到线粒体逆向传递。Annexin V-FITC/PI检测THP-1细胞凋亡结果显示,SC组跟LC组凋亡率较MC组明显减低( P <0.01),LC组高于SC组( P <0.01),TC组较SC组和LC组明显升高( P <0.01),TC组与MC组凋亡率无明显差异( P >0.05)。BM-MSCs中 KIF5B表达水平明显高于THP-1细胞( P <0.001),Rotenone处理BM-MSCs后显著抑制KIF5B的表达( P <0.01)。结论 BM-MSCs线粒体通过TNTs向THP-1细胞单向传递,THP-1细胞摄取BM-MSCs线粒体后可能诱导凋亡抵抗;细胞间线粒体转运可能与马达蛋白KIF5B相关。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 人骨髓间充质干细胞 THP-1细胞 凋亡
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以细胞表面标志物为研究指标的光致敏体外评价方法
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作者 赵华琛 刘丽 李波 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期408-417,共10页
目的:建立一种以细胞表面标志物作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法:应用THP-1细胞,分别与光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂、阴性受试物等10余种受试物进行孵育,紫外照射和非照射条件下分别检测细胞表面标志物CD54和C... 目的:建立一种以细胞表面标志物作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法:应用THP-1细胞,分别与光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂、阴性受试物等10余种受试物进行孵育,紫外照射和非照射条件下分别检测细胞表面标志物CD54和CD86的表达变化,确定合适的辐照强度、受试物剂量和光照后检测时间点,并确定评价光致敏的敏感指标和初步判定标准。结果:光致敏剂与THP-1细胞孵育并经紫外照射后,表达CD54的THP-1细胞百分比及平均荧光强度MFI比非照射组显著增加,相对荧光强度RFI在1. 4以上。光致敏剂未引起CD86表达的明显变化。其他受试物模型在照射前后CD54的MFI未见显著变化或变化程度明显低于光致敏剂。皮肤致敏剂引起的细胞表面标志物变化特点与光致敏剂明显不同。结论:THP-1细胞表面标志物CD54对于评价化合物光致敏性具有良好的灵敏度和特异性,本研究建立了一种应用细胞表面标志物进行光致敏性评价的体外方法,初步确定了评价指标和判定标准。 展开更多
关键词 光致敏 THP-1细胞 细胞表面标志物 平均/相对荧光强度
人β防御素2抗氧化型低密度脂蛋白诱导的单核细胞泡沫化的作用机制研究
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作者 沈桢巍 雷撼 李鹏 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2019年第5期287-291,共5页
目的明确人β防御素2(human β-defensin-2,hBD2)基因氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,OX-LDL)诱导的人单核巨噬细胞(human leukemic monocyte ,THP-1)泡沫化的作用和机制.方法用OX-LDL诱导THP-1细胞建立单核细胞... 目的明确人β防御素2(human β-defensin-2,hBD2)基因氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,OX-LDL)诱导的人单核巨噬细胞(human leukemic monocyte ,THP-1)泡沫化的作用和机制.方法用OX-LDL诱导THP-1细胞建立单核细胞泡沫化模型并通过油红O染色进行模型鉴定.通过慢病毒系统在THP-1细胞中过表达hBD2基因,并检测hBD2过表达对OX-LDL诱导的THP-1细胞泡沫化的影响.酶联免疫吸附试验测定各组细胞上清液炎症因子肿瘤坏死因子( tumor necrosis factor, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-1β和IL-6含量.组间差异比较采用t检验.结果重组病毒感染后72 h,细胞的基因转染效率接近100%.细胞对照组hBD2蛋白水平为0.122 ±0.024,对照病毒感染组为0.123 ±0.022,hBD-2感染组为0.981 ±0.183,细胞对照与hBD-2感染组比较差异有统计学意义(t=-3.175,P=0.007);病毒感染后72 h,细胞对照组hBD2基因mRNA相对表达量为0.131 ± 0.021,对照病毒感染组为0.128 ±0.022, hBD-2感染组为1.001 ±0.105,细胞对照组与hBD-2感染组比较差异有统计学意义(t=-7.213,P=0.003).油红O染色结果表明,OX-LDL诱导THP-1细胞72 h,能够明显引起细胞内脂质堆积,hBD2过表达则可以有效抑制OX-LDL诱导引起的THP-1细胞内脂质堆积. THP-1组和THP-1+Lv-hBD2+OX-LDL诱导组hBD2 mRNA相对表达量均显著高于THP-1+OX-LDL诱导组,差异有统计学意义(t值分别为3.237和-6.021,P值分别为0.004和0.003),THP-1组和THP-1+Lv-hBD2+OX-LDL诱导组hBD2蛋白水平均显著高于THP-1+OX-LDL诱导组,差异均有统计学意义(t值分别为0.314和-4.061,P值分别为0.006和0.007),THP-1细胞经OX-LDL诱导72 h,细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6 含量明显上升,与THP-1 组比较差异均有统计学意义( t 值分别为-3.825、-2.017和-3.551, P值分别为0.007、 0.004和0.005);THP-1+Lv-hBD2+OX-LDL组细胞中TNF-α、 IL-1β和IL-6含量明显降低,与THP-1+OX-LDL组比较差异均有统计学意义(t值分别为4.132、 3. 展开更多
关键词 人Β防御素2 THP-1细胞 单核细胞泡沫化 低密度脂蛋白
沉默STAT1对肠道病毒71型感染THP-1细胞的初步探讨 预览
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作者 李园园 史伟峰 +1 位作者 江涛 许德英 《河南科技大学学报:医学版》 2019年第3期165-169,共5页
目的探讨EV71感染对THP-1细胞内转录因子STAT1、ISGs及STAT1基因敲减对ISGs和EV71复制变化的影响。方法采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测EV71感染人单核巨噬细胞(THP-1)后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS1、MXA的mRNA水平和IFN-β... 目的探讨EV71感染对THP-1细胞内转录因子STAT1、ISGs及STAT1基因敲减对ISGs和EV71复制变化的影响。方法采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测EV71感染人单核巨噬细胞(THP-1)后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS1、MXA的mRNA水平和IFN-β的产生,并采用Westernblot分析转录因子STAT1磷酸化水平,利用慢病毒介导的特异性STAT1短发卡RNA干扰THP-1细胞STAT1的表达,观察STAT1基因沉默对4种干扰素刺激基因及EV71/VP1表达水平的影响。结果EV71感染THP-1细胞后,IFN-βmRNA的相对表达量上调,并刺激了MXA、OAS1、ISG56mRNA的表达和STAT1的磷酸化水平。慢病毒介导的shRNA-STAT1基因沉默后,与con-shRNA-STAT1组比,STAT1总蛋白及其磷酸化水平表达下降,MXA、OAS1、ISG56mRNA的表达量及EV71/VP1蛋白的表达水平降低。结论STAT1基因沉默抑制EV71感染THP-1细胞内STAT1的磷酸化和ISGs的转录,并抑制EV71的感染。 展开更多
关键词 肠道病毒71 THP-1细胞 转录因子STAT1
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丹皮酚通过抑制p38 MAPK/N-SMase2通路减少脂多糖诱导的THP-1细胞外泌体分泌
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作者 谢先梅 李超 +1 位作者 孙颖 戴敏 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2019年第1期11-17,共7页
目的探讨丹皮酚抑制脂多糖诱导后THP-1细胞分泌外泌体的作用及机制。方法超速离心法提取外泌体,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,Western blot检测标志蛋白Alix、TSG101、CD9和CD63,动态光散射检测外泌体粒径。CCK-8检测细胞存活率,BCA法... 目的探讨丹皮酚抑制脂多糖诱导后THP-1细胞分泌外泌体的作用及机制。方法超速离心法提取外泌体,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,Western blot检测标志蛋白Alix、TSG101、CD9和CD63,动态光散射检测外泌体粒径。CCK-8检测细胞存活率,BCA法检测外泌体蛋白量,Western blot检测N-SMase2、p-p38 MAPK蛋白水平。结果超速离心法获得的微囊泡结构物具有完整清晰茶托样膜,直径众数为130 nm,含标志性蛋白Alix、TSG101、CD9和CD63,鉴定为外泌体。丹皮酚(120、60及30μmol/L)可降低脂多糖(1 mg/L)诱导的THP-1细胞分泌外泌体,减少N-SMase2蛋白表达,抑制p38 MAPK磷酸化。结论丹皮酚抑制THP-1细胞外泌体分泌,该作用与抑制p38 MAPK/N-SMase2通路有关。 展开更多
关键词 丹皮酚 外泌体 中性鞘磷脂酶2 P38丝裂原活化蛋白激酶 THP-1细胞
CCL2通过白血病细胞THP-1自分泌多种炎性趋化因子调控其迁移和侵袭
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作者 洪丹 颜青 +4 位作者 杨进 潘健 岑建农 陈苏宁 胡绍燕 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期16-20,共5页
目的:探讨细胞因子CC配体2(CCL-2)对急性白血病细胞THP-1迁移和侵袭的影响及机制。方法:采用慢病毒包装的方法将表达质粒PLVX-CCL2转染THP-1细胞,用RT-PCR检测CCL-2 RNA水平的表达,Western blot及ELISA法验证蛋白水平的变化,应用Tra... 目的:探讨细胞因子CC配体2(CCL-2)对急性白血病细胞THP-1迁移和侵袭的影响及机制。方法:采用慢病毒包装的方法将表达质粒PLVX-CCL2转染THP-1细胞,用RT-PCR检测CCL-2 RNA水平的表达,Western blot及ELISA法验证蛋白水平的变化,应用Transwell迁移和侵袭实验方法分别检测CCL2重组蛋白及THP-1自身高表达CCL2对THP-1细胞迁移和侵袭能力的影响,应用迁移相关细胞因子的PCR array法探讨可能的机制。结果:RT-PCR和Western blot方法证实成功构建过表达CCL2的THP-1-CCL2细胞。ELISA法检测显示,THP-1-CCL2培养上清中CCL2蛋白水平显著增高;高表达CCL2的转染组细胞在Trans-Matrigel实验中,其上室CCL2蛋白浓度显著高于下室(P〈0.001),同时穿膜能力下降,但迁移能力没有明显改变,与对照组比较,分别为(1.702±0.537 vs0.520±0.255)(P=0.026)和(9.293±0.302 vs 9.187±0.526)(P=0.77),增加Trans-Matrigel下室的CCL2浓度,可以增强THP-1细胞的迁移能力和侵袭能力。迁移RT2 profiler PCR array显示,CCL2重组蛋白处理THP-1细胞后,与对照组相比CCL2、EPX、SPP1、CX3CL1和CXCL13的表达上调(〉2倍)。结论:CCL2通过白血病细胞THP-1的自分泌多种炎性趋化因子而调控其迁移和侵袭。 展开更多
关键词 细胞因子CC配体2 THP-1细胞 趋化因子 细胞迁移 细胞侵袭
STAT3信号通路在人急性单核细胞白血病细胞向树突状细胞分化中的作用及机制探讨 预览
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作者 施引 朱肖肖 +8 位作者 张振 郭强 赵霖 魏然 孙琳琳 尹训强 张云虹 姜国胜 李霞 《山东医药》 2018年第10期1-4,共4页
目的探讨信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路在人急性单核细胞白血病细胞向树突状细胞(DC)分化中的作用与机制。方法将人急性单核细胞白血病细胞THP-1随机分为两组,观察组以粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)联合白细胞介... 目的探讨信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路在人急性单核细胞白血病细胞向树突状细胞(DC)分化中的作用与机制。方法将人急性单核细胞白血病细胞THP-1随机分为两组,观察组以粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)联合白细胞介素4(IL-4)诱导其向DC分化,用脂多糖(LPS)诱导THP-1来源DC成熟;对照组不做处理。培养第7天,收集两组细胞;倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测DC表面标志性分子CD11c及DC表面功能分子(共刺激分子CD80、组织相容性抗原HLA-DR、趋化因子CCR7),q-PCR法检测STAT3及E2-2 mRNA,Western blotting法检测STAT3总蛋白及磷酸化(p-STAT3)。结果对照组细胞呈圆形,形态均匀;细胞因子诱导后观察组细胞可见明显的树突状突起,呈现DC形态学变化。与对照组比较,观察组DC表面标志性分子CD11c及DC表面功能分子均表达增加(P均〈0.05),细胞STAT3、E2-2 mRNA及STAT3蛋白、pSTAT3蛋白相对表达量均增加(P均〈0.05)。结论 GM-CSF联合IL-4诱导THP-1细胞向DC分化过程中,STAT3信号通路活化DC分化特异性核转录因子E2-2,进而诱导THP-1向DC分化。 展开更多
关键词 急性单核细胞白血病 THP-1细胞 树突状细胞 信号转导与转录激活因子3 信号通路 E2-2基因
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内毒素耐受对共培养的中性粒细胞和单核细胞分泌TNF-α和IL-8的影响 预览
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作者 方媛春 祝祥清 +2 位作者 顾建雨 尹兰兰 孙颖 《口腔医学》 CAS 2018年第3期193-196,共4页
目的 观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的耐受对共培养的中性粒细胞和人单核细胞株THP-1细胞表达抗炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和趋化因子白介素-8(Inter leukin-8,IL-8)水平的影响。方法 采... 目的 观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的耐受对共培养的中性粒细胞和人单核细胞株THP-1细胞表达抗炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和趋化因子白介素-8(Inter leukin-8,IL-8)水平的影响。方法 采用1μg/m L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1μg/m L大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS分别刺激共培养的中性粒细胞和THP-1细胞24 h,洗脱后,再次刺激24 h,诱导细胞产生耐受。采用ELISA技术检测细胞条件培养液中TNF-α和IL-8表达水平的变化。结果 P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌TNF-α和IL-8的水平均较刺激前明显增高(P〈0.05);P.gingivalis LPS和E.coli LPS重复刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌的TNF-α水平较单次刺激后明显降低(P〈0.05),但IL-8水平较单次刺激后明显增高(P〈0.05)。结论 共培养的中性粒细胞和单核细胞产生的内毒素耐受可能抑制TNF-α表达,促进IL-8表达,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。 展开更多
关键词 内毒素耐受 共培养 中性粒细胞 THP-1细胞
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P-STAT6/Tim-3在THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞中的作用及机制研究 预览
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作者 李连军 金讯波 +3 位作者 王晓庆 索宁 崔萌 王慕文 《泌尿外科杂志(电子版)》 2018年第3期41-46,34共7页
目的研究P-STAT6/Tim-3在THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞中的作用及机制。方法将THP-1细胞采用相应细胞因子分别诱导为M0、M1、M2巨噬细胞,记录细胞形态改变;采用Western blotting鉴定M0、M1及M2表型,检测不同浓度STAT6抑制剂AS1517499对M... 目的研究P-STAT6/Tim-3在THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞中的作用及机制。方法将THP-1细胞采用相应细胞因子分别诱导为M0、M1、M2巨噬细胞,记录细胞形态改变;采用Western blotting鉴定M0、M1及M2表型,检测不同浓度STAT6抑制剂AS1517499对M1、M2极化的影响,检测STAT6、P-STAT6、Tim-3在巨噬细胞M1、M2极化中的表达;CCK-8实验检测不同浓度AS1517499对THP-1细胞的毒性作用。采用SPSS 17. 0软件分析实验数据。结果 THP-1细胞发生M1、M2极化后细胞形态由小圆形变为长梭形及多边形。采用Western blotting结果表明CD80、i NOS在M1组高表达,CD163、Arg-1、P-STAT6及Tim-3在M2组高表达。不同浓度AS1517499使CD163、Arg-1、P-STAT6及Tim-3表达相应降低;药物浓度为10nmol/l、100nmol/l时,对THP-1细胞活力无明显影响;浓度为300nmol/l时,细胞活力出现明显下降;AS1517499的合适药物浓度是100nmol/l。结论外源性细胞因子可通过激活巨噬细胞P-STAT6/Tim-3诱导巨噬细胞发生M2极化;AS1517499可以通过阻断巨噬细胞P-STAT6/Tim-3,抑制THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞。 展开更多
关键词 THP-1细胞 肿瘤相关巨噬细胞 P-STAT6 TIM-3 AS1517499
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稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系的构建 预览
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作者 雷蕾 黄珊 +6 位作者 于明航 刘志强 刘师伟 李婷 赵秀娟 李泽兴 王玺 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第4期341-344,共4页
目的构建稳定表达GFP-LC3的人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。方法采用pCDH-CMV-GFPLC3-EF1α-puro转染293T细胞构建慢病毒质粒系统,获取的慢病毒感染THP-1细胞,用嘌呤霉素(Puromycin)筛选稳定表达GFP-LC3蛋白的细胞系。通过Westernblo... 目的构建稳定表达GFP-LC3的人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。方法采用pCDH-CMV-GFPLC3-EF1α-puro转染293T细胞构建慢病毒质粒系统,获取的慢病毒感染THP-1细胞,用嘌呤霉素(Puromycin)筛选稳定表达GFP-LC3蛋白的细胞系。通过Westernblot和流式细胞术检测THP-1细胞中GFP-LC3蛋白的表达,并利用该稳定表达细胞系观察饥饿和雷帕霉素诱导时细胞发生的自噬变化。结果筛选得到稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光。Westernblot和流式细胞术检测证实了GFP-LC3融合蛋白的表达。激光共聚焦法和Westernblot均证实饥饿和雷帕霉素可以诱导自噬的发生,且GFP-LC3融合蛋白可以反映内源LC3蛋白的变化,包括蛋白聚集和发生剪切修饰。结论应用慢病毒质粒系统成功构建了高效稳定表达GFPLC3蛋白的THP-1细胞系,从而为后续利用GFP-LC3融合蛋白研究自噬变化提供了细胞模型。 展开更多
关键词 自噬 GFP-LC3 THP-1细胞 稳定细胞 雷帕霉素
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人源化抗Siglec-9抗体Fab片段的制备及鉴定 预览
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作者 褚萨萨 尤娜 +3 位作者 张馨 杨志国 朱进 汪茂荣 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期877-881,共5页
目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ... 目的:构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR连接,酶切后与原核表达载体p ETDUET-1重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21中,通过蛋白纯化系统AKTA和His-trap Lambda Fab纯化。使用SDS-PAGE、ELISA以及Western blot鉴定和分析。采用实时荧光定量PCR初步检测抗Siglec-9抗体Fab段对炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量的影响。结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9抗体Fab段原核表达系统,经SDS-PAGE、Western blot、ELISA检测证实抗Siglec-9抗体Fab段与Siglec-9抗原特异性结合。抗Siglec-9抗体Fab段可抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的mRNA表达量。结论:人源化抗Siglec-9抗体Fab段进行了原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠定基础。 展开更多
关键词 Siglec-9 FAB片段 抗Siglec-9抗体 THP-1细胞 炎性细胞因子
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可溶性CD40配体对白血病THP-1细胞的影响及机制 预览 被引量:1
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作者 封忠昕 陈琦 +6 位作者 闵迅 龚玉萍 袁钟 黄锐 陈迪 王虹 冯进 《中国老年学杂志》 北大核心 2018年第14期3472-3474,共3页
目的分析可溶性CD40配体(sCD40L)对人白血病急性单核细胞白血病细胞(THP)-1细胞凋亡、周期的作用及B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、半胱天冬酶(caspase)-3表达的影响。方法流式细胞术(FCM)检测白血病HL-60细胞凋亡、周期,以逆转... 目的分析可溶性CD40配体(sCD40L)对人白血病急性单核细胞白血病细胞(THP)-1细胞凋亡、周期的作用及B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、半胱天冬酶(caspase)-3表达的影响。方法流式细胞术(FCM)检测白血病HL-60细胞凋亡、周期,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测sCD40L处理THP-1细胞后Bcl-2及caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果sCD40L处理THP-1细胞48 h后,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低,caspase-3 mRNA和蛋白表达显著增高(P〈0.05)。诱导细胞的凋亡,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论 sCD40L在体外能够诱导细胞凋亡,阻滞THP-1细胞在G0/G1期,其可能机制是通过下调Bcl-2及激活caspase-3而实现。 展开更多
关键词 可溶性CD40配体 THP-1细胞 细胞凋亡 细胞周期 B细胞淋巴瘤/白血病-2 半胱天冬酶-3
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离体检测方法预测三氯乙烯致敏性
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作者 曾丽海 郑杰蔚 +6 位作者 谢植伟 钟怡洲 李国樑 梁博萱 殷霄 赖关朝 黄振烈 《中国职业医学》 北大核心 2018年第3期279-284,共6页
目的采用人急性单核细胞白血病细胞系的THP-1细胞预测三氯乙烯(TCE)的致敏性及最佳的致敏剂量。方法离体培养THP-1细胞,以不同浓度2,4-二硝基氯苯(DNCB)、十二烷基硫酸钠(SDS)、叔丁基对苯二酚(tBHQ)和TCE与THP-1细胞共孵育24 h... 目的采用人急性单核细胞白血病细胞系的THP-1细胞预测三氯乙烯(TCE)的致敏性及最佳的致敏剂量。方法离体培养THP-1细胞,以不同浓度2,4-二硝基氯苯(DNCB)、十二烷基硫酸钠(SDS)、叔丁基对苯二酚(tBHQ)和TCE与THP-1细胞共孵育24 h,采用流式细胞仪检测细胞表面标志物分化抗原(CD)86和CD54的表达,确定致敏检测的最佳剂量范围,并以相对荧光强度(RFI,CD86)≥150和RFI(CD54)≥200为标准,预测TCE的致敏性及最佳致敏剂量。结果采用THP-1细胞评价致敏性的合适浓度范围可能为细胞相对存活率在75.0%-100.0%时的浓度,DNCB在浓度为20.83、25.00和30.00μmol/L时,tBHQ在浓度为5.80μmol/L时,TCE在浓度为8.33、10.00和12.00 mmol/L时,均具有致敏性;SDS为非致敏物。TCE浓度为8.33 mmol/L时,CD86和CD54表达量最大,为最佳致敏剂量。结论 TCE的最佳致敏剂量为8.33 mmol/L,可为后续TCE致敏毒性通路的研究提供剂量设计的依据。 展开更多
关键词 三氯乙烯 皮肤致敏 THP-1细胞 离体实验 分化抗原
基于皮肤模型与THP-1细胞共培养建立皮肤致敏体外检测方法的初步研究 预览
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作者 陈健 柯逸晖 谈伟君 《日用化学工业》 CSCD 北大核心 2018年第5期288-292,共5页
建立了皮肤模型与THP-1细胞共培养方法,对石化产品进行了致敏性评价。不同浓度测试物与表皮模型作用15 min,去除受试物后孵育6 h,使用MTT法检测皮肤模型组织活率,利用流式细胞法检测THP-1细胞表面标志物CD86、CD54表达变化情况以及细胞... 建立了皮肤模型与THP-1细胞共培养方法,对石化产品进行了致敏性评价。不同浓度测试物与表皮模型作用15 min,去除受试物后孵育6 h,使用MTT法检测皮肤模型组织活率,利用流式细胞法检测THP-1细胞表面标志物CD86、CD54表达变化情况以及细胞活率。对上述参数进行统计学分析及是否存在剂量效应关系,判定测试物是否具有潜在致敏特性。对SLS、肉桂醛、柠檬醛的测试表明,该方法可以正确区分刺激物和致敏物;对4种未知润滑油添加剂的预测结果表明,HVI60、Cuvan826、ATM PAN为非致敏物,Irgamet30为致敏物,高浓度时可导致表皮组织和THP-1细胞活性降低及表面标志物CD86、CD54的特异性升高。 展开更多
关键词 皮肤致敏 皮肤模型 THP-1细胞 共培养
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烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶的影响
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作者 童建波 杜蕾蕾 +5 位作者 曾荣 王丽玮 刘宇甄 段志敏 陈青 李岷 《中华皮肤科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期653-657,共5页
目的探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子仪(TNF-α)和细胞内信号分子β38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活的影响。方法10^6、10^7CFU/ml烟曲霉悬液(10^6和10^7CFU/ml烟曲霉组)、100mg/L阳性刺激物... 目的探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子仪(TNF-α)和细胞内信号分子β38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活的影响。方法10^6、10^7CFU/ml烟曲霉悬液(10^6和10^7CFU/ml烟曲霉组)、100mg/L阳性刺激物β-葡聚糖(β-葡聚糖组)及培养基(空白对照组)分别与2×10^5/mlTHP-1细胞共孵育1、3、6h,实时荧光定量PCR分析各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平。10^7CFU/ml烟曲霉悬液(烟曲霉组)、β-葡聚糖(β-葡聚糖组)及培养基分别作用THP-1细胞24h,酶联免疫吸附法检测各组培养上清液中TNF-α含量。Western印迹法检测10^7CFU/ml烟曲霉体外作用THP-1细胞后15、30、60minβ38MAPK和磷酸化β38MAPK水平。采用20μmol/LSB203580预先与THP-1细胞共培养2h后,再用10^7CFU/ml烟曲霉、β-葡聚糖或培养基作用6h,检测各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平变化。结果10^6、10^7CFU/ml烟曲霉组、100mg/L β-葡聚糖组及空白对照组TNF-α mRNA表达水平差异有统计学意义(F=110.983,P〈0.001),且随培养时间延长,THP-1细胞TNF-α mRNA水平增高(F=701.680,P〈0.001)。1^7CFU/ml烟曲霉刺激THP-1细胞24h后,TNF-α蛋白水平(6236.30±437.12ng/L)较空白对照组(132.10±0.61ng/L)明显升高(P〈0.01)。10^7CFU/ml烟曲霉作用THP-1细胞30min后磷酸化β38MAPK蛋白水平明显升高,60rain时开始减弱。SB203580阻断的烟曲霉组TNF-α mRNA表达水平(3.83±0.62)较未阻断的烟曲霉组(187.23±21.62)明显降低。结论人THP-1细胞体外与烟曲霉作用后激活信号分子β38MAPK并分泌TNF-α,表明单核细胞可能参与抗烟曲霉感染固有免疫反应。 展开更多
关键词 烟曲霉菌 肿瘤坏死因子Α P38丝裂原活化蛋白激酶类 THP-1细胞
组胺上调THP-1细胞IL-37的表达
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作者 任姣姣 管小丹 +4 位作者 朱建冬 何素辉 吴坤 王森 陈章权 《热带医学杂志》 CAS 2018年第7期839-841,845共4页
目的探讨组胺对单核细胞THP-1的白介素-37(IL-37)表达的影响。方法分别用1、10、100μmol/L等不同浓度的组胺作用THP-1细胞1 h,用实时荧光定量PCR检测THP-1细胞中IL-37 m RNA表达水平的变化,然后分别用10和100μmol/L组胺作用THP-1细... 目的探讨组胺对单核细胞THP-1的白介素-37(IL-37)表达的影响。方法分别用1、10、100μmol/L等不同浓度的组胺作用THP-1细胞1 h,用实时荧光定量PCR检测THP-1细胞中IL-37 m RNA表达水平的变化,然后分别用10和100μmol/L组胺作用THP-1细胞20 h,用Western blot检测THP-1细胞中IL-37蛋白表达水平的变化。结果实时荧光定量PCR检测显示THP-1细胞分别经1、10和100μmol/L等不同浓度组胺刺激后,与对照组比较,THP-1细胞IL-37 m RNA表达水平分别升高约2.7倍、5.8倍、18.6倍,差异均有统计学意义(P〈0.05)。Western blot检测显示THP-1细胞分别经10和100μmol/L组胺作用后,其IL-37蛋白表达水平均明显上升。结论组胺诱导THP-1细胞IL-37的上调表达。 展开更多
关键词 IL-37 THP-1细胞 组胺
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