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SK4在甲状腺乳头状癌中的表达及其功能机制研究
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作者 陈冠桦 李益波 +3 位作者 伍慧慧 俞盛健 麻怀露 梁勇 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第11期1867-1875,共9页
采用Real-time PCR、Western blot及免疫组化检测中电导钙激活钾离子通道蛋白(intermediate-conductance calcium-activated potassium channel protein, SK4/Kca3.1/KCNN4)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)组织及... 采用Real-time PCR、Western blot及免疫组化检测中电导钙激活钾离子通道蛋白(intermediate-conductance calcium-activated potassium channel protein, SK4/Kca3.1/KCNN4)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)组织及细胞株中的表达情况,同时,对比研究SK4蛋白表达与PTC临床病理特征的关系。通过SK4特异性抑制剂(TRAM-34)下调SK4的表达后,采用CCK-8、平板克隆实验及Transwell实验分别检测SK4对PTC细胞株CGTHW-3增殖、集落形成及迁移能力的影响并分析其可能的分子机制。Real-time PCR、Western blot结果显示, SK4在PTC组织中的mRNA及蛋白表达量均明显高于癌旁组织(P<0.01)。免疫组化结果显示, SK4的阳性率明显高于正常甲状腺组织(P<0.01),而SK4蛋白表达阳性率与PTC患者性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理特征之间并无显著统计学意义(P>0.05)。TRAM-34可通过阻断SK4通道抑制CGTHW-3细胞的增殖、集落形成能力及迁移能力。以上结果提示, SK4通道在PTC组织及细胞中高表达,参与调控PTC细胞的增殖及迁移过程,可能与PTC发病的分子机制有关。SK4有可能成为PTC新的治疗靶点。 展开更多
关键词 钾离子通道 甲状腺乳头状癌 SK4 TRAM-34
TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响 预览
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作者 姜天华 黄志刚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期104-109,共6页
目的:探讨KCa3.1通道抑制剂TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响。方法:取对数生长期HL-60细胞,给予实验组分别加入终浓度25、50、75、100 nmol/L TRAM-34的培养液,给予对照组加入含10%胎牛血清RPM11640培养液,同步培养24... 目的:探讨KCa3.1通道抑制剂TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响。方法:取对数生长期HL-60细胞,给予实验组分别加入终浓度25、50、75、100 nmol/L TRAM-34的培养液,给予对照组加入含10%胎牛血清RPM11640培养液,同步培养24、48和72 h后加入MTT溶液以检测TRAM-34对HL-60细胞的增殖抑制率;在TRAM-34处理后的每个浓度收集细胞1×10^6个,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin VFITC)/碘化丙啶(PI)双染或PI单染流式细胞术分别检测TRAM-34处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况,采用Transwell检测TRAM-34各浓度24、48 h处理后的穿膜细胞数,采用实时定量PCR检测TRAM-34对CDK6、P53及MMP-2 mRNA水平的影响。结果:与对照组相比(0 nmol/L),除低浓度(25 nmol/L)TRAM-34处理24 h对HL-60细胞增殖无影响外,其余浓度和作用时间的增殖抑制率、凋亡率、G_0/G_1期细胞比例及p53 mRNA水平均升高,S期细胞比例、穿膜细胞数及CDK6、MMP-2 mRNA水平均降低,而且以上差异均有统计学意义(P〈0.05)。TRAM-34对HL-60以上指标的作用效果随浓度的升高和作用时间的延长而增强,各浓度间的差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:TRAM-34可抑制HL-60细胞的增殖及侵袭能力,同时可诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,且TRAM-34作用的时间和浓度均对HL-60细胞恶性行为有影响。 展开更多
关键词 KCa3.1通道抑制剂 TRAM-34 白血病细胞株 HL-60细胞 细胞增殖 细胞侵袭
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KCa3.1通道抑制剂TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生的影响 预览 被引量:1
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作者 付荣国 陈钊 +8 位作者 张涛 马立群 杜燕 吴喜利 田李芳 侯静静 刘晓丹 安鹏 姚纲练 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期200-203,221共5页
目的 观察TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生的影响,了解KCa 3.1在肾小球硬化中的作用.方法2ng/mL TGF-β1诱导系膜细胞增生后,采用流式细胞技术和MTT方法观察8、16、24nmol/L TRAM-34分别对细胞周期和细胞增殖的影响,并选用最佳抑制浓... 目的 观察TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生的影响,了解KCa 3.1在肾小球硬化中的作用.方法2ng/mL TGF-β1诱导系膜细胞增生后,采用流式细胞技术和MTT方法观察8、16、24nmol/L TRAM-34分别对细胞周期和细胞增殖的影响,并选用最佳抑制浓度TRAM-34干预15、30、60min后,用RT-PCR技术观察其对系膜细胞α-SMA和FSP-1转录水平的影响.结果 与空白对照组相比,2ng/mL TGF-β1诱导的系膜细胞阻滞于G0~G1期,表现为G0~G1期细胞百分比明显升高[(48.45±1.89)% vs.(70.29±1.84)%,P〈0.01],而S期细胞百分比相应下降[(38.54±1.13)% vs.(19.56±1.67)%;P〈0.01);各浓度TRAM-34组均可以改善阻滞于G0~G1期的系膜细胞增生,使细胞周期中G0~G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多,其中24nmol/L组降低最明显[TGF-β1组vs.TRAM-34组:G0~G1期为(70.29±1.84)% vs.(61.90±1.88)%;S期为(19.56±1.67)% vs.(25.52±1.62)%;P〈0.05).MTT实验结果也显示各浓度TRAM-34对TGF-β1诱导系膜细胞增生具有抑制作用,其中24nmol/L组抑制作用最显著,与8nmol/L和16nmol/L组比较,差异有统计学意义(P〈0.01).24nmol/L的TRAM-34可显著抑制系膜细胞α-SMA和FSP-1的表达.结论 TRAM-34能够改善TGF-β1诱导的系膜细胞阻滞,减少细胞的早衰、表型转化和纤维样增生. 展开更多
关键词 KCa3 1 TRAM-34 系膜细胞 增生 TGF-Β1 肾小球硬化
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Inhibitory Effects of Blockage of Intermediate Conductance Ca2+-Activated K+ Channels on Proliferation of Hepatocellular Carcinoma Cells 预览
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作者 杨筱嵬 刘谨文 +3 位作者 张汝超 殷 茜 沈文状 易继林 《华中科技大学学报:医学英德文版》 SCIE CAS 2013年第1期86-89,共4页
The roles of intermediate conductance Ca 2+ -activated K + channel (IKCa1) in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma (HCC) were investigated. Immunohistochemistry and Western blotting were used to detect the exp... The roles of intermediate conductance Ca 2+ -activated K + channel (IKCa1) in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma (HCC) were investigated. Immunohistochemistry and Western blotting were used to detect the expression of IKCa1 protein in 50 HCC and 20 para-carcinoma tissue samples. Real-time PCR was used to detect the transcription level of IKCa1 mRNA in 13 HCC and 11 para-carcinoma tissue samples. The MTT assay was used to measure the function of IKCa1 in human HCC cell line HepG2 in vitro. TRAM-34, a specific blocker of IKCa1, was used to intervene with the function of IKCa1. As compared with para-carcinoma tissue, an over-expression of IKCa1 protein was detected in HCC tissue samples (P<0.05). The mRNA expression level of IKCa1 in HCC tissues was 2.17 times higher than that in para-carcinoma tissues. The proliferation of HepG2 cells was suppressed by TRAM-34 (0.5, 1.0, 2.0 and 4.0 μmol/L) in vitro (P<0.05). Our results suggested that IKCa1 may play a role in the proliferation of human HCC, and IKCa1 blockers may represent a potential therapeutic strategy for HCC. 展开更多
关键词 人肝癌细胞株 钙激活钾通道 细胞增殖 mRNA表达水平 WESTERN印迹法 HepG2 堵塞 癌组织
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IKCa1通道阻滞剂TRAM-34对HUVEC增殖作用的影响 预览 被引量:2
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作者 郭洪宇 张雅芳 +3 位作者 林芳 遇春林 杨慧科 李晓冬 《解剖学研究》 CAS 2011年第6期 417-421,共5页
目的体外应用IKCa1通道阻滞剂TRAM-34干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC),探讨其抑制HUVEC增殖作用的影响。方法采用免疫荧光和RT-PCR法观察HUVEC细胞IKCa1的表达,常规MTT法分析不同浓度TRAM-34作用24、48、72 h后HUVEC细胞增殖的变化。结... 目的体外应用IKCa1通道阻滞剂TRAM-34干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC),探讨其抑制HUVEC增殖作用的影响。方法采用免疫荧光和RT-PCR法观察HUVEC细胞IKCa1的表达,常规MTT法分析不同浓度TRAM-34作用24、48、72 h后HUVEC细胞增殖的变化。结果免疫荧光和RT-PCR法均证实HUVEC细胞表达IKCa1。TRAM-34浓度低于10μmol/L时作用不明显,而高于10μmol/L时能明显抑制HUVEC增殖,并随药物浓度升高而抑制作用增强,呈显著浓度依赖性。TRAM-34抑制作用呈时间依赖性,处理细胞72 h作用明显强于48 h,而24 h无明显变化。结论 HUVEC细胞表达IKCa1。TRAM-34能显著抑制HUVEC细胞增殖,其抑制作用呈浓度和时间依赖性。 展开更多
关键词 IKCa1通道 TRAM-34 人脐静脉内皮细胞
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