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利用实时荧光定量PCR法检测食品中鹌鹑源性成分 预览
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作者 罗建兴 海小 +3 位作者 刘国强 郭梁 徐伟良 李春冬 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第3期177-183,共7页
为建立基于TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在食品中的鹌鹑源性成分的定量检测方法,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727-2010)合成引物及探针。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行鹌鹑源性成分特异性检... 为建立基于TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在食品中的鹌鹑源性成分的定量检测方法,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727-2010)合成引物及探针。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行鹌鹑源性成分特异性检测,然后对鹌鹑源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工制品中检测方法的适用性。研究结果表明:建立的方法特异性强,除鹌鹑肉外,牛、羊、猪、马、驴、狗、兔子、鸡、鸭、鸽子、火鸡、鱼12种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,鹌鹑组分DNA的检出限可达10 fg/mL,灵敏度可达0.001%;方法的适用性较广,可以用于加工制品中鹌鹑源性成分的检测。 展开更多
关键词 TaqMan实时荧光PCR 食品 鹌鹑源性成分 特异性 灵敏度
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中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法的建立 预览
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作者 陈光哲 郑红霞 祝长青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期399-403,共5页
为给中华鲟提供及时而有效的保护,本研究根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因序列设计并筛选了引物与探针组合,建立了中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法,并对所建立的实时荧光PCR方法进行方法学评价。结果显示,建立的方法能够对中华鲟及... 为给中华鲟提供及时而有效的保护,本研究根据NCBI上已公布的中华鲟D-loop基因序列设计并筛选了引物与探针组合,建立了中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法,并对所建立的实时荧光PCR方法进行方法学评价。结果显示,建立的方法能够对中华鲟及其产品进行快速而准确的检测,且特异性好,检测灵敏度高,能够达到0.001ng的中华鲟DNA和100个拷贝的重组质粒DNA。该方法在应用于全国多个地区采集的鲟鱼样品的检测时,结果表明只有7个从相关科研单位得到的已经鉴定的中华鲟标本,经检测才是真正的中华鲟,而许多餐馆中号称的“中华鲟”经检测并非真正的中华鲟,只是其他的一些鲟鱼品种。因此本研究建立的中华鲟TaqMan实时荧光PCR检测方法特异性强、灵敏度高,且具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 中华鲟 TaqMan实时荧光PCR 特异性 灵敏度
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喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立 预览
3
作者 孙涛 孔德英 +1 位作者 滕少娜 邓朝晖 《贵州农业科学》 CAS 2017年第2期5-9,共5页
为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果... 为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pgDNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。 展开更多
关键词 喀斯特炭疽菌 检疫 鉴定 TaqMan实时荧光PCR
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应用TaqMan MGB探针快速检测新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧 被引量:2
4
作者 徐浪 林伟 +7 位作者 黄蓬英 张伟锋 卢小雨 汪莹 郑耘 焦懿 娄定风 余道坚 《植物检疫》 北大核心 2016年第4期38-41,共4页
新菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley))是我国进境植物检疫性有害生物,新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧(D.brevipes)经常从进口菲律宾和东南亚水果中截获,用形态学方法对二者进行鉴定较难,且耗时较长。为了对这两种粉蚧进... 新菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley))是我国进境植物检疫性有害生物,新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧(D.brevipes)经常从进口菲律宾和东南亚水果中截获,用形态学方法对二者进行鉴定较难,且耗时较长。为了对这两种粉蚧进行快速准确鉴定,本研究利用mtDNA COI基因设计了两组特异性引物和MGB探针,应用TaqMan实时荧光PCR方法实现了对新菠萝灰粉蚧和菠萝灰粉蚧进行快速准确鉴定的目的。该方法耗时短,重复性好,适合在口岸检疫中推广应用。 展开更多
关键词 新菠萝灰粉蚧 菠萝灰粉蚧 TaqMan实时荧光PCR MGB探针
食品及调味品中罂粟成分的实时荧光PCR检测方法 预览 被引量:3
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作者 高琴 宗凯 +1 位作者 杨捷琳 潘良文 《中国调味品》 CAS 北大核心 2016年第12期113-117,共5页
针对食品及调味品非法添加罂粟成分的检测需求,针对罂粟小檗碱桥酶基因设计了TaqMan特异性引物和探针,并建立了食品及调味品样品前处理和DNA提取方法,建立了食品及调味品中罂粟成分TaqMan实时荧光PCR检测方法,方法检出限为0.01%,灵敏度... 针对食品及调味品非法添加罂粟成分的检测需求,针对罂粟小檗碱桥酶基因设计了TaqMan特异性引物和探针,并建立了食品及调味品样品前处理和DNA提取方法,建立了食品及调味品中罂粟成分TaqMan实时荧光PCR检测方法,方法检出限为0.01%,灵敏度为10pg。与普通PCR法和SYBR Green等荧光染料法相比,TaqMan探针法具有更好的特异性,检出限更低,结果判读直观无污染。方法的建立可作为食品及调味品中非法添加罂粟成分的检测鉴定方法,也可为其他与罂粟相关的方法研究提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 罂粟 食品 调味品 TaqMan实时荧光PCR
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2013年苏州地区肉及其制品掺假情况调查 被引量:17
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作者 金萍 丁洪流 +2 位作者 李培 范丽丽 傅春玲 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2014年第2期168-172,共5页
目的了解苏州地区肉及其制品的掺假情况,通过对肉类种源与标签明示肉源进行比对,鉴别掺假食品,为加强食品标签管理提供依据。方法运用自建的动物源性食品种源判定Taqman实时荧光PER检测体系对苏州地区的肉及其制品进行种源判定,与... 目的了解苏州地区肉及其制品的掺假情况,通过对肉类种源与标签明示肉源进行比对,鉴别掺假食品,为加强食品标签管理提供依据。方法运用自建的动物源性食品种源判定Taqman实时荧光PER检测体系对苏州地区的肉及其制品进行种源判定,与标签明示肉源进行比对,鉴别掺假食品。结果本次调查共检验涉及32个生产单位的90份样品,总不符合率为25.6%(23/90)。检测的44份牛肉及其制品中有12份与标签不符,8份用猪肉部分替代牛肉,1份以鸭肉部分代替牛肉进行销售;此外有3份不合有牛肉成分,存在猪、鸡、鸭源性肉类之外的肉类成分。共检测羊肉及其制品16份,有2份用鸭肉代替羊肉出售,3份羊肉样品中掺入了部分猪成分,其中1份样品还存在单个样品掺杂两种外源肉类的现象(猪源性和鸭源性)。检测猪肉及其制品19份,其中2份样品含有标签未注明的鸡肉成分。在所检测的11份混合肉类样品中有4份成分与标签不符,主要是以廉价的鸡肉取代/部分取代相对高价的牛肉和猪肉。结论肉制品掺假情况明显,用猪肉、鸭肉部分代替牛肉和羊肉仍是主要的掺假手段,牛肉掺假样品主要是熟制牛肉制品,而火锅食用羊肉卷样品则是羊肉掺假高危品,开展肉制品掺假检测对规范肉制品市场具有积极意义。此外,3份未知种源成分的牛肉样品提示在现有检测基础上还需扩大检测范围,防患于未然。 展开更多
关键词 Taqman实时荧光PCR 肉制品 掺假 检测 苏州地区 食品安全
实时荧光PCR法检测奶制品中常见谷物成分 被引量:1
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作者 刘小艳 傅春玲 +2 位作者 李培 丁洪流 金萍 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2014年第2期123-127,共5页
目的建立Taqman实时荧光PCR法对奶制品中掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物源性成分的初筛检测体系。方法以常见掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物的叶绿体rbcL基因作为靶基因,通过BLAST软件比对,选择其同源保守区域... 目的建立Taqman实时荧光PCR法对奶制品中掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物源性成分的初筛检测体系。方法以常见掺加物大米、玉米、小麦、高粱、大麦等谷物的叶绿体rbcL基因作为靶基因,通过BLAST软件比对,选择其同源保守区域设计引物和探针。经通用性、特异性、灵敏性试验对探针和引物可行性进行验证,并通过模拟含谷物奶粉及市售奶类制品检测对其实际检测能力进行验证。结果所建立体系可扩增大米、玉米、小麦、高粱、大麦等常见的谷物掺加物的DNA提取物,与市售奶制品的主成分牛奶、羊奶以及其常见添加物香蕉、红枣、菠萝、草莓、西红柿、花生、大豆等动植物源性成分无交叉扩增(Ct〉35)。对小麦纯DNA提取物检出限为0.01ng。对分别掺加5种谷物成分的模拟奶制品检出限均可达0.5%,对市售的14份奶类食品中的谷类成分的检测结果均与食品标签相符。结论本研究建立的Taqman实时荧光PCR体系具有通用、相对特异、灵敏、实用等优点,可用于奶制品中掺加或掺杂掺假谷物源性成分的快速定性检测。 展开更多
关键词 Taqman实时荧光PCR RBCL基因 谷物源性成分 奶制品 掺杂掺假 食品安全
基于gyrB序列Taqman实时荧光PCR检测在MTC鉴定中的应用 预览 被引量:4
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作者 张诗蒙 尹小毛 +2 位作者 刘非 郑磊 王前 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期472-474,共3页
目的:初步分析基于gyrB序列的Taqman实时荧光PCR在MTC(结核分枝杆菌复合群)鉴定中的应用。方法:根据MTCgyrB序列设计引物和探针,应用荧光定量PCR对14株标准株及90株临床分离株进行临床研究,并与测序法结果进行比较。结果:14株标... 目的:初步分析基于gyrB序列的Taqman实时荧光PCR在MTC(结核分枝杆菌复合群)鉴定中的应用。方法:根据MTCgyrB序列设计引物和探针,应用荧光定量PCR对14株标准株及90株临床分离株进行临床研究,并与测序法结果进行比较。结果:14株标准株中,非洲分枝杆菌与结核分枝杆菌结果为阳性,其余结果为阴性;30株临床分离株与ITS测序比较,有1株NTM结果为阳性,1株MTC结果为阴性,其余菌株检测结果与测序结果符合,分析特异度高;将60株临床分离株的检测结果与测序结果进行比较,得到该方法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均为100%。结论:采用基于gyrB序列的Taqman荧光PCR可快速检测和鉴别MTC和NTM。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 gyrB基因 Taqman实时荧光PCR
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NDM-1基因TaqMAN实时荧光PCR检测方法的建立
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作者 吴兴海 张云霞 +4 位作者 姜英辉 邓明俊 孟怡 雷质文 蒋丹 《食品安全质量检测学报》 CAS 2011年第3期共5页
研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法.研究根据NDM-1序列,设计并合成了PCR检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光PCR检测.结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模... 研究初步建立了NDM-1基因的实时荧光PCR快速检测鉴定方法.研究根据NDM-1序列,设计并合成了PCR检测引物(ND-T-F和ND-T-R)和探针(ND-T-PROBE),对NDM-1质粒DNA和其他11个标准菌株进行了实时荧光PCR检测.结果表明,携有NDM-1基因的质粒DNA模板都出现了很强的特异信号,而其他对照病菌均未出现特异荧光信号,证明这套引物及探针具有NDM-1基因检测的特异性.灵敏度测定结果,此体系可检出10 fg/μL质粒DNA模板.研究表明,TaqMAN实时荧光PCR方法是一种特异、灵敏、快速的NDM-1基因检测方法. 展开更多
关键词 NDM-1 TaqMAN实时荧光PCR 检测
大洋臀纹粉蚧和南洋臀纹粉蚧TaqMan实时荧光PCR检测方法 预览 被引量:12
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作者 徐浪 余道坚 +2 位作者 焦懿 王银竹 陈志粦 《植物检疫》 北大核心 2010年第2期 24-28,共5页
臀纹粉蚧属有多个种类是重要的农业害虫,大洋臀纹粉蚧(Planococcus minor(Maskell))和南洋臀纹粉蚧(Planococcus lilacius CockereD)是我国有重要检疫意义的有害生物。这两种臀纹粉蚧经常从进口泰国和东南亚水果口岸检疫中截获... 臀纹粉蚧属有多个种类是重要的农业害虫,大洋臀纹粉蚧(Planococcus minor(Maskell))和南洋臀纹粉蚧(Planococcus lilacius CockereD)是我国有重要检疫意义的有害生物。这两种臀纹粉蚧经常从进口泰国和东南亚水果口岸检疫中截获,但形态学方法很难进行准确鉴定。本研究首次利用mtDNACOI基因设计了两条特异性探针,应用TaqMan实时荧光PCR方法对大洋臀纹粉蚧和南洋臀纹粉蚧进行了快速准确鉴定。 展开更多
关键词 大洋臀纹粉蚧 南洋臀纹粉蚧 TaqMan实时荧光PCR MGB探针
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实时荧光PCR快速检测鼠疫耶尔森菌方法的建立 预览 被引量:1
11
作者 陈金超 高敏 +5 位作者 鲁立 王丽 徐立风 刘涤瑕 董凤珍 唐德羽 《现代中西医结合杂志》 CAS 2010年第2期 156-158,共3页
目的建立一种能快速检测鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法。方法以鼠疫耶尔森菌pla毒力基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,探针的5’端标记荧光报告基团FAM,3’端标记荧光淬灭基团TAMRA;建立一种能快速检测样本中鼠疫耶... 目的建立一种能快速检测鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法。方法以鼠疫耶尔森菌pla毒力基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,探针的5’端标记荧光报告基团FAM,3’端标记荧光淬灭基团TAMRA;建立一种能快速检测样本中鼠疫耶尔森菌的实时荧光PCR方法,并对方法的特异性和灵敏度进行评价。结果该实时荧光PCR方法只对鼠疫耶尔森菌进行特异扩增,同种属的小肠结肠炎耶尔森菌以及伤寒杆菌、肺炎衣原体、嗜肺军团杆菌其他症状相似病原体均无扩增;该方法在65 min内即可完成检测,操作方便快速,对菌悬液最低可检测至10个菌体。结论本研究建立的实时荧光PCR检测鼠疫耶尔森菌方法不仅能实现对鼠疫杆菌的快速检测,还可为鼠疫耶尔森菌引发疫情的监控和溯源提供参考。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 TaqMan实时荧光PCR 快速检测 pla基因
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TaqMan——实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌 预览 被引量:6
12
作者 叶盛 樊学军 +2 位作者 裴晓方 李永儒 邱晋 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第22期 4444-4445,4449,共3页
[目的]建立TaqMan——实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)的方法,用于食物中毒快速诊断和食品中VP的污染状况调查。[方法]根据GenBank公布的VP tdh基因序列,设计引物和探针,建立TaqMan——实时荧光PCR... [目的]建立TaqMan——实时荧光PCR快速检测副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,VP)的方法,用于食物中毒快速诊断和食品中VP的污染状况调查。[方法]根据GenBank公布的VP tdh基因序列,设计引物和探针,建立TaqMan——实时荧光PCR快速检测体系,应用于食品中VP检测。[结果]TaqMan--实时荧光PCR快速检测体系灵敏度为1.3×10^4cfu/ml(33cfu/PCR反应体系),特异性好,无交叉反应。[结论]TaqMan--实时荧光PCR检测体系灵敏度高,特异性强,能提高VP的检出率和准确性,可应用于VP食品污染状况调查和食物中毒的快速诊断。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 TaqMan实时荧光PCR 快速检测
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基于TaqMan实时荧光PCR检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分 预览 被引量:3
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作者 海小 刘国强 +1 位作者 罗建兴 郭梁 《肉类研究》 北大核心 2018年第4期62-67,共6页
根据出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法?第4部分:驴成分检测?实时荧光PCR法》合成引物和探针,利用Taq Man实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测鲜肉及加工... 根据出入境检验检疫行业标准SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法?第4部分:驴成分检测?实时荧光PCR法》合成引物和探针,利用Taq Man实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测鲜肉及加工肉制品中的驴源性成分。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行驴源性成分特异性检测,然后对驴源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工肉制品中检测方法的适用性。结果表明:本研究建立的方法特异性强,除驴肉外,牛、羊、猪、马、骆驼、鹿、狗、兔、鸡、鸭、鸽子、鹌鹑12种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,驴组分DNA的检出限可达100 fg/μL,灵敏度可达0.01%;方法的适用性较广,可以用于加工肉制品中驴源性成分的检测。 展开更多
关键词 TaqMan实时荧光PCR技术 鲜肉及加工肉制品 驴源性成分 特异性 灵敏度
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双重TaqMan实时荧光PCR检测肠出血性大肠埃希菌可行性研究
14
作者 蔺鸿 徐耀芳 郑虹 《预防医学情报杂志》 CAS 2013年第8期670-673,共4页
目的对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)双重TaqMan实时荧光PCR方法应用于实际的可行性进行分析。方法分别用传统培养方法、普通PCR方法、双重TaqMan实时荧光PCR方法对模拟样品进行检测,比较3种方法灵敏度;检测295份临床腹泻患者标本,比... 目的对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)双重TaqMan实时荧光PCR方法应用于实际的可行性进行分析。方法分别用传统培养方法、普通PCR方法、双重TaqMan实时荧光PCR方法对模拟样品进行检测,比较3种方法灵敏度;检测295份临床腹泻患者标本,比较三种方法检出率。结果双重TaqMan实时荧光PCR方法的EHEC检出限为10^2-10^8cfu/ml,明显优于传统培养方法(检出限为10^3-10^8cfu/m1)和普通PCR方法(检出限为10^3~10^7cfu/m1),且检出率为0.34%。结论双重TaqMan实时荧光PCR方法可快速、灵敏、特异的检出肠出血性大肠埃希菌。 展开更多
关键词 肠出血性大肠埃希菌(EHEC) 双重TaqMan实时荧光PCR 普通PCR方法
TaqMan实时荧光定量PCR技术在口腔微生物定量分析中的应用研究进展 预览 被引量:1
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作者 胡孝丽(综述) 王铎(审校) 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2006年第11期 652-654,共3页
实时荧光聚合酶链反应技术已逐渐应用于人类口腔微生物的定量分析,本文对TaqMan实时荧光PCR技术在牙龈卟啉单胞菌、口腔密螺旋体和致龋微生物检测方面的研究进展作一综述。
关键词 TaqMan实时荧光PCR技术 定量 口腔细菌
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伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法的建立 预览 被引量:1
16
作者 兰德松 顾贵波 侯振中 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第7期1804-1812,共9页
为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方... 为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法,对引物和探针浓度、退火温度等进行了优化,对方法进行敏感性、特异性、重复性试验,并进行临床样品检测。结果显示,建立的针对gD、gE基因的TaqMan实时荧光定量PCR方法线性相关系数(R2)分别为0.996和0.980,均呈良好的线性关系;检测限分别为39.4和12.1拷贝/μL;与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验结果显示,针对gD基因的批内和批间变异系数分别为1.43%~1.86%、1.10%~2.07%,针对gE基因的批内和批间变异系数分别为0.98%~1.41%、1.12%~1.86%。应用建立的TaqMan实时荧光定量PCR与普通PCR分别对11份临床疑似感染样品进行检测,阳性率分别为36.4%和27.3%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株的早期鉴别诊断和定量检测的有效手段。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(PRV) 野毒株 gE基因缺失疫苗株 TaqMan实时荧光定量PCR 鉴别
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绵羊肺炎支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 韩瑞鑫 申捷 申之义 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第8期965-970,共6页
本研究旨在建立一种灵敏性高、特异性强的检测绵羊肺炎支原体的TaqMan实时荧光定量PCR方法。根据GenBank上已发表的绵羊肺炎支原体HSP70基因序列设计引物和探针,构建标准阳性质粒,建立实时荧光定量PCR方法。试验结果显示,该方法标准曲... 本研究旨在建立一种灵敏性高、特异性强的检测绵羊肺炎支原体的TaqMan实时荧光定量PCR方法。根据GenBank上已发表的绵羊肺炎支原体HSP70基因序列设计引物和探针,构建标准阳性质粒,建立实时荧光定量PCR方法。试验结果显示,该方法标准曲线的线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=1.000,斜率S=-3.334,扩增效率E=99.5%;敏感性高,可以检测出的最低样品浓度为1×101copies/L,是普通PCR的100倍;特异性强,能有效区分巴氏杆菌等9种病原;重复性好,组内、组间的Ct值变异系数均小于2%。运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法可简便、准确地鉴定绵羊肺炎支原体。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 HSP70基因 TaqMan实时荧光定量PCR
金属硫蛋白基因多态性与昆明地区汉族2型糖尿病的相关性研究 被引量:1
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作者 颜穗珺 郭伟昌 +5 位作者 周晓伟 李佳丽 乐小婧 董雪娥 宋滇平 李会芳 《中国糖尿病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期529-533,共5页
目的 探讨金属硫蛋白(MT)1A基因rs8052394多态性与昆明地区汉族T2DM的相关性。方法 采用Taqman实时荧光定量PCR技术对257例T2DM患者(T2DM组)和108名健康对照(NC)组MT1A基因型进行检测。结果 T2DM组MT1A基因rs8052394A/A基因型频率... 目的 探讨金属硫蛋白(MT)1A基因rs8052394多态性与昆明地区汉族T2DM的相关性。方法 采用Taqman实时荧光定量PCR技术对257例T2DM患者(T2DM组)和108名健康对照(NC)组MT1A基因型进行检测。结果 T2DM组MT1A基因rs8052394A/A基因型频率及A等位基因频率高于NC组(χ^2=20.519、29.213,P〈0.01)。Logistic回归分析显示,MT1A rs8052394A/A基因型携带者相对于A/G和G/G基因型携带者患T2DM的危险性增加。结论 昆明地区汉族人群MT1A基因rs8052394多态性可能与T2DM的发生有关,A等位基因可能增加T2DM的发病风险。 展开更多
关键词 金属硫蛋白1A基因 多态性 糖尿病 2型 Taqman实时荧光定量PCR
I型牛疱疹病毒gE基因TaqMan探针荧光定量PCR检测方法建立 预览
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作者 张晓锋 翁永刚 +5 位作者 陈冈 李守富 郭海 叶结平 范红结 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 北大核心 2018年第5期82-85,共4页
以I型牛疱疹病毒(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)的gE基因序列,针对1607~1704 bp区域分别设计1对引物及相应的TaqMan探针,在建立和优化反应体系后,对经10倍系列稀释的病毒进行扩增来检测其灵敏度和特异性。结果表明,建立的荧光定量PCR可... 以I型牛疱疹病毒(Bovine herpesvirus-1,BHV-1)的gE基因序列,针对1607~1704 bp区域分别设计1对引物及相应的TaqMan探针,在建立和优化反应体系后,对经10倍系列稀释的病毒进行扩增来检测其灵敏度和特异性。结果表明,建立的荧光定量PCR可用于检测BHV-1,其灵敏度为10 copies/μL,且与其他病毒无交叉反应,可用于BHV-1临床检测。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒 TaqMan实时荧光定量PCR GE基因
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TaqMan实时荧光定量PCR法检测紫河车掺伪的研究 被引量:3
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作者 吴迪 郭青 《中药材》 北大核心 2017年第1期38-41,共4页
目的:建立快速准确的检测出紫河车中的常见掺伪物种的方法。方法:采用Taq-man实时荧光定量PCR法,以常见掺伪动物猪、牛、羊的特异性基因作为引物,对紫河车及掺伪样品进行定性研究。结果:该法可准确鉴别紫河车掺伪品中的猪、牛、羊物... 目的:建立快速准确的检测出紫河车中的常见掺伪物种的方法。方法:采用Taq-man实时荧光定量PCR法,以常见掺伪动物猪、牛、羊的特异性基因作为引物,对紫河车及掺伪样品进行定性研究。结果:该法可准确鉴别紫河车掺伪品中的猪、牛、羊物种,3个物种间以及与人之间均无交叉反应,3个掺伪物种的最小检出浓度分别为3.313、3.375、3.281μg/g。结论:所建立的方法具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、准确度高和检测快速的优点,可用于紫河车中猪、牛、羊掺伪的定性鉴别。 展开更多
关键词 紫河车 猪、牛、羊 TaqMan实时荧光定量PCR 掺伪 定性鉴别
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