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蜱传脑炎病毒跨过血脑屏障的体外实验
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作者 康晓平 李裕昌 +3 位作者 吴晓燕 魏婧靖 郝淮杰 姜涛 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期578-586,共9页
【目的】构建蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)跨血脑屏障研究的体外细胞模型,研究2种不同细胞的TBEV培养物在病毒跨过血脑屏障中的主要差异,从而为进一步TBEV跨血脑屏障的分子机制研究奠定基础。【方法】利用人脑微... 【目的】构建蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)跨血脑屏障研究的体外细胞模型,研究2种不同细胞的TBEV培养物在病毒跨过血脑屏障中的主要差异,从而为进一步TBEV跨血脑屏障的分子机制研究奠定基础。【方法】利用人脑微血管内皮细胞(Human brain microvascular endothelial cells,hCMEC/D3)构建体外血脑屏障的细胞模型。用BHK-21细胞中培养的蜱传脑炎病毒感染人脑微血管内皮细胞,检测TBEV在hCMEC/D3中的复制增殖情况;将TBEV加入体外血脑屏障模型的上层微孔中,用实时荧光定量PCR和噬斑测定的方法检测跨过血脑屏障的病毒量;将感染TBEV的人单核细胞加入血脑屏障模型的上层微孔中,观察渗漏进下层孔中的淋巴细胞,并用实时荧光定量PCR和噬斑测定的方法检测跨过血脑屏障的病毒量。利用伊文思蓝标记的白蛋白确定血脑屏障细胞的渗透率变化。【结果】实时荧光定量PCR和病毒滴度测定结果表明,TBEV不能在hCMEC/D3细胞中复制增殖,也不能直接跨过血脑屏障;然而,人单核细胞THP-1感染TBEV后,尽管单核细胞不能直接携带TBEV跨过血脑屏障,但THP-1中产生的病毒却能跨过血脑屏障模型进入下层孔中,并引起血脑屏障渗透率的增高。【结论】单核细胞有助于TBEV跨过血脑屏障。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 血脑屏障 单核细胞
表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型构建与鉴定
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作者 乔卿华 吕欣 +5 位作者 姚敏 党品香 徐志凯 鄂玲玲 尹文 汪爱勤 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期70-74,共5页
目的建立能够表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型,为评价TBEV感染时RdRp酶的活性提供研究平台。方法将线性化的pRP.ExBi-EFla-NS5-IRES-eGFP质粒显微注射入FVB/N小鼠受精卵雄原核,移入假孕母鼠输卵管内,构建并筛选转基因首... 目的建立能够表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型,为评价TBEV感染时RdRp酶的活性提供研究平台。方法将线性化的pRP.ExBi-EFla-NS5-IRES-eGFP质粒显微注射入FVB/N小鼠受精卵雄原核,移入假孕母鼠输卵管内,构建并筛选转基因首建鼠;首建鼠传代并筛选出遗传性状稳定的纯合子转基因小鼠;检测TBEVNS5基因的表达。结果成功筛选出5只转基因首建鼠并传代至F5代,PCR、RT-PCR及WesterIlblot检测结果表明,转基因小鼠成功表达了TBEVNS5基因。结论成功构建了表达森林脑炎病毒NS5蛋白的转基因小鼠模型。 展开更多
关键词 森林脑炎病毒 NS5蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶
新疆中哈边境地区分离到远东型和西伯利亚型蜱传脑炎病毒 预览 被引量:1
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作者 张桂林 孙响 +3 位作者 刘然 郑重 刘晓明 伊小平 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期312-315,共4页
目的研究新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区蜱传脑炎疫源地病原的基因型及生物学特征。方法采用布旗法采集蜱,活蜱保存或液氮冻存;采用BALB/c小鼠与BHK-21细胞进行蜱传脑炎病毒分离培养;采用RT-PCR扩增蜱传脑炎病毒远东型FE和西... 目的研究新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区蜱传脑炎疫源地病原的基因型及生物学特征。方法采用布旗法采集蜱,活蜱保存或液氮冻存;采用BALB/c小鼠与BHK-21细胞进行蜱传脑炎病毒分离培养;采用RT-PCR扩增蜱传脑炎病毒远东型FE和西伯利亚型S特异基因片段并测定其序列。结果从新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区全沟硬蜱和森林革蜱中分离出16株蜱传脑炎病毒株,通过对扩增基因序列比对分析,明确其中13株为远东型,3株为西伯利亚型。结论从新疆中哈边境阿拉套山夏尔西里自然保护区分离到远东型和西伯利亚型蜱传脑炎病毒,该地区为两种亚型病毒共存的蜱传脑炎自然疫源地。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 远东型 西伯利亚型 疫源地 中哈边境
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蜱传脑炎病毒E抗原蛋白的原核表达及鉴足 预览
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作者 温中华 李建民 陈薇 《生物技术通讯》 CAS 2017年第4期495-498,共4页
目的:构建蜱传脑炎病毒(TBEV)结构蛋白E的原核表达载体,表达重组蛋白。方法:PCR扩增E蛋白全长基因片段,插入原核表达载体pET-32a并转化大肠杆菌进行诱导表达,镍柱纯化、复性。结果:E蛋白在大肠杆菌中获得表达,表达量达60mg/L... 目的:构建蜱传脑炎病毒(TBEV)结构蛋白E的原核表达载体,表达重组蛋白。方法:PCR扩增E蛋白全长基因片段,插入原核表达载体pET-32a并转化大肠杆菌进行诱导表达,镍柱纯化、复性。结果:E蛋白在大肠杆菌中获得表达,表达量达60mg/L;重组E蛋白能与人抗TBEV多克隆抗体产生特异反应;用重组E抗原免疫家兔后,能检测到较高的抗体水平。结论:原核表达的E抗原蛋白具有抗体结合活性,可用于制备ELISA诊断试剂。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 E蛋白 原核表达
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新疆北部林区工作人员蜱传疾病的血清学调查研究 预览 被引量:4
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作者 孙响 张桂林 +4 位作者 郑重 刘晓明 刘然 邱尔臣 赵焱 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 北大核心 2016年第3期158-163,共6页
为了解新疆北部林区工作人员嗜吞噬细胞无形体病、森林脑炎、莱姆病3种蜱传疾病感染情况,采集新疆北部林区工作人员血清标本215份,采取间接免疫荧光法检测血清中嗜吞噬细胞无形体、森林脑炎病毒、伯氏疏螺旋体特异性IgG抗体。经检测... 为了解新疆北部林区工作人员嗜吞噬细胞无形体病、森林脑炎、莱姆病3种蜱传疾病感染情况,采集新疆北部林区工作人员血清标本215份,采取间接免疫荧光法检测血清中嗜吞噬细胞无形体、森林脑炎病毒、伯氏疏螺旋体特异性IgG抗体。经检测嗜吞噬细胞无形体IgG抗体阳性率为40.47%(87/215),森林脑炎病毒IgG抗体阳性率为20.00%(43/215),莱姆病伯氏疏螺旋体IgG抗体阳性率为10.70%(23/215)。共检测出29例复合感染,复合感染率为13.49%(29/215)。其中嗜吞噬细胞无形体和森林脑炎病毒复合感染率6.05%(13/215),嗜吞噬细胞无形体和莱姆病伯氏疏螺旋体复合感染率3.72%(8/215),森林脑炎病毒和莱姆病伯氏疏螺旋体复合感染率1.40%(3/215),三种病原体复合感染率2.33%(5/215)。新疆北部林区工作人员中存在嗜吞噬细胞无形体病、森林脑炎、莱姆病及其复合感染流行。 展开更多
关键词 嗜吞噬细胞无形体 森林脑炎病毒 伯氏疏螺旋体 蜱传疾病 复合感染 血清学 新疆地区
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我国新疆首次检出西伯利亚型蜱传脑炎病毒 被引量:1
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作者 刘然 张桂林 +4 位作者 刘晓明 李裕昌 郑重 孙响 杨银辉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期26-31,共6页
对新疆地区蜱传病毒类群进行调查,本研究利用Illumia深度测序技术对新疆全沟硬蜱体内的病毒小RNA分子进行筛查,从提取的蜱小RNA组份中共测得32 631条病毒特异性读序,77条读序与蜱传黄病毒基因组序列匹配,核苷酸数合计约占病毒基因组的3.... 对新疆地区蜱传病毒类群进行调查,本研究利用Illumia深度测序技术对新疆全沟硬蜱体内的病毒小RNA分子进行筛查,从提取的蜱小RNA组份中共测得32 631条病毒特异性读序,77条读序与蜱传黄病毒基因组序列匹配,核苷酸数合计约占病毒基因组的3.8%~2.4%,其中32条读序与国内尚未发现的西伯利亚型蜱传脑炎病毒一致。为对上述结果进行确证,利用RT-PCR对此型病毒核酸进行检测,从蜱总RNA中分别扩增获得病毒包膜基因与基因组3′末端片段,测序比对表明上述片段序列与西伯利亚南部检出病毒高度近似,核苷酸与氨基酸似然率分别为97.2%~95.5%与99.4%~98.3%。综上所述,本研究利用基于深度测序的病毒筛查方法,首次从我国新疆蜱传脑炎疫源地检出西伯利亚型病毒,为下一步针对病毒的分离与流行病学调查提供了重要线索。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 西伯利亚型 深度测序 小RNA 新疆
蜱传脑炎病毒prM-E蛋白的真核表达及其在荧光素酶免疫共沉淀技术中的应用? 预览
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作者 冉鑫 康晓平 +5 位作者 李裕昌 吴晓燕 霍耐凡 贾佳 曹雪峰 杨银辉 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 北大核心 2016年第1期39-44,共6页
为了探索一种新型的血清学技术的荧光素酶免疫共沉淀技术(LIPS),本研究利用真核表达系统制备了蜱传脑炎病毒结构蛋白prM-E与荧光素酶融合蛋白,并评价了其在LIPS系统中的检测效果。首先以蜱传脑炎病毒RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增p... 为了探索一种新型的血清学技术的荧光素酶免疫共沉淀技术(LIPS),本研究利用真核表达系统制备了蜱传脑炎病毒结构蛋白prM-E与荧光素酶融合蛋白,并评价了其在LIPS系统中的检测效果。首先以蜱传脑炎病毒RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增prM-E抗原基因,连接到pNLF1-secN质粒上构建真核表达载体pNLF-prM-E,使prM-E蛋白与荧光素酶串联融合表达,并将该质粒转染到Cos7细胞中。结果显示,转染重组质粒pNLF-prM-E的细胞上清中可检测到荧光素酶的高表达;进而用间接免疫荧光试验( IFA)检测到转染的细胞与蜱传脑炎病毒抗体特异性结合;在此基础上,用LIPS方法对蜱传脑炎病毒感染患者血清进行检测,从20份患者血清中检出19份阳性,7份对照血清均为阴性。结果表明该重组抗原具有良好的特异性和灵敏性,可以用于LIPS系统中的候选检测抗原。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 prM-E蛋白 真核表达 诊断抗原
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蜱传脑炎病毒包膜糖蛋白胞外区的真核表达优化及其在血清学检测中的效果评价 预览
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作者 霍耐凡 康晓平 +7 位作者 户义 李裕昌 李靖 张雨 冉鑫 贾佳 曹雪峰 杨银辉 《生物技术通讯》 CAS 2016年第3期344-347,411共5页
目的:优化蜱传脑炎病毒包膜糖蛋白胞外区的密码子,提高其在真核系统中的表达量,为蜱传脑炎病毒感染血清的检测提供更为有效的检测抗原.方法:对蜱传脑炎病毒MDJ01株E蛋白胞外区进行真核密码子优化,获得优化的胞外区蛋白基因序列OPT-EC... 目的:优化蜱传脑炎病毒包膜糖蛋白胞外区的密码子,提高其在真核系统中的表达量,为蜱传脑炎病毒感染血清的检测提供更为有效的检测抗原.方法:对蜱传脑炎病毒MDJ01株E蛋白胞外区进行真核密码子优化,获得优化的胞外区蛋白基因序列OPT-EC;将抗原基因与海肾萤光素酶基因Rluc融合构建重组质粒pcDNA3.1-Rluc-OPT-EC、pcDNA3.1-Rluc-EC,用重组质粒转染COS7细胞获得融合抗原Rluc-OPT-EC和Rluc-EC,并将融合抗原用于临床感染血清样本的免疫共沉淀检测以评价抗原的灵敏性和特异性.结果:真核密码子优化显著提高了Rluc-OPT-EC的表达量;OPT-EC的检测灵敏度可达86%以上,其对乙型脑炎病毒(JEV)感染血清、黄热病度(YFV)感染血清、禽流感病毒(AIV)感染血清和正常人血清的检测特异度高于90%,但是在西尼罗病毒(WNV)感染血清和登革病毒(DV)感染血清的检测中发生了交叉反应.结论:优化后的E蛋白胞外区蛋白作为TBEV感染的检测抗原,能够有效地区分JEV、YFV感染,但不能区分WNV和DV感染. 展开更多
关键词 包膜糖蛋白胞外区 真核密码子优化 蜱传脑炎病毒 血清学诊断
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蜱传脑炎研究进展 被引量:4
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作者 杨艳 杜彦丹 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1435-1438,共4页
蜱传脑炎又名森林脑炎是由蜱传脑炎病毒引起,经蜱传播的以中枢神经系统病变为主要特征的急性传染性疾病,病死率高达10%-20%,是近年来病毒学专家研究的重点和难点。本文从流行病学特点、发病机制及临床表现、转归、诊断、治疗等对蜱... 蜱传脑炎又名森林脑炎是由蜱传脑炎病毒引起,经蜱传播的以中枢神经系统病变为主要特征的急性传染性疾病,病死率高达10%-20%,是近年来病毒学专家研究的重点和难点。本文从流行病学特点、发病机制及临床表现、转归、诊断、治疗等对蜱传脑炎进行综合性论述,为该病的预防和治疗策略的制定提供相应的理论依据。 展开更多
关键词 蜱传脑炎 流行病学 病毒感染
新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地调查 预览 被引量:1
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作者 孙响 张桂林 +4 位作者 刘然 刘晓明 杨靓靓 郑重 赵焱 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1189-1192,共4页
目的调查新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒。方法通过家畜体表捡法采集寄生蜱;利用间接免疫荧光法检测当地健康人群血清中蜱传脑炎病毒IgG抗体;通过将蜱研磨液接种实验小鼠进行病原动物分离;通过接种BHK-21细胞... 目的调查新疆阿勒泰山地蜱传脑炎疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒。方法通过家畜体表捡法采集寄生蜱;利用间接免疫荧光法检测当地健康人群血清中蜱传脑炎病毒IgG抗体;通过将蜱研磨液接种实验小鼠进行病原动物分离;通过接种BHK-21细胞对蜱传脑炎病毒进行分离培养;利用RT-PCR方法对病毒E蛋白基因片段进行扩增和测序,通过序列分析明确病毒系统进化特征。结果新疆阿勒泰山地白哈巴地区分布有2种蜱,森林革蜱为优势种(55.6%),其次为边缘革蜱(44.4%);当地人群蜱传脑炎IgG抗体阳性率5.31%(6/113);通过动物试验和细胞分离培养,从森林革蜱中分离出一株森林脑炎病毒;对病毒E蛋白基因序列的系统进化分析表明,蜱传脑炎病毒阿勒泰分离株属于远东亚型。结论首次从病原学上证实新疆阿勒泰山地存在蜱传脑炎疫源地,媒介为森林革蜱,病毒流行株为远东亚型。 展开更多
关键词 蜱传脑炎 蜱传脑炎病毒 疫源地 阿勒泰
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儿童蜱传脑炎研究进展 被引量:1
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作者 刘琦(综述) 陈益平(审校) 《国际儿科学杂志》 2015年第4期434-438,共5页
蜱传脑炎是儿童中枢神经系统感染性疾病。儿童病情较轻,极少数可能出现永久性损伤,遗留神经系统后遗症。该文介绍蜱传脑炎的流行病学和临床特征,并总结生物学和病毒学方面,以更好地了解病毒的生命周期和传播。在我国蜱传脑炎病毒是... 蜱传脑炎是儿童中枢神经系统感染性疾病。儿童病情较轻,极少数可能出现永久性损伤,遗留神经系统后遗症。该文介绍蜱传脑炎的流行病学和临床特征,并总结生物学和病毒学方面,以更好地了解病毒的生命周期和传播。在我国蜱传脑炎病毒是通过全沟硬蜱传播的一种黄病毒,可引起急性脑膜脑炎。血清学诊断通常是简单直接的。该病无特效治疗存在,免疫是主要预防措施。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 致病性 病原学 流行病学 免疫学 接种疫苗
森林脑炎病毒Vero细胞适应株的全基因组序列分析
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作者 孙宏亮 王伟 +6 位作者 刘双军 麻红梅 张朔 邢坤鹏 李野 王涛 宋宗明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期553-556,共4页
目的对森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)森"张"株在Vero细胞上的适应株(以下称SZV株)进行全基因组测序,并与TBEV远东亚型的其他毒株、欧洲亚型毒株进行比较。方法设计TBEV的特异性引物,提取SZV株病毒总RNA,以其... 目的对森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)森"张"株在Vero细胞上的适应株(以下称SZV株)进行全基因组测序,并与TBEV远东亚型的其他毒株、欧洲亚型毒株进行比较。方法设计TBEV的特异性引物,提取SZV株病毒总RNA,以其为模板,采用RT-PCR方法分段扩增序列并测序,应用Vector NTI 9.0软件进行拼接,并与森"张"株、Gen Bank中报道的TBEV远东亚型Oshima 5-10株、Sofjin-HO株及欧洲亚型263株、Neudoerfl株的全长基因序列进行比对分析。结果 SZV株的全基因组由10 782个核苷酸组成,仅编码1个开放阅读框,长度为10 245个核苷酸,共编码3 414个氨基酸。SZV株与TBEV远东亚型的Oshima5-10株和Sofjin-HO株ORF区编码的氨基酸序列同源性分别为95.0%和94.6%,与TBEV欧洲亚型的典型毒株263株和Neudoerfl株ORF区编码的氨基酸序列同源性分别为91.1%和91.0%。结论对TBEV Vero细胞适应株SZV进行了全基因组序列测定及分析,为研制基于Vero细胞基质的森林脑炎疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 森林脑炎病毒 VERO细胞 序列分析
新疆夏尔希里自然保护区蜱传脑炎疫源地调查 被引量:11
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作者 张桂林 刘然 +8 位作者 孙响 郑旸 刘晓明 赵焱 党荣理 刘栓奎 夏晶 郑重 杨银辉 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期438-442,共5页
目的调查新疆北部夏尔希里地区蜱传脑炎(TBE)疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒(TBEv)。方法利用间接免疫荧光法对2011年春夏季出现的2例疑似病毒性脑炎患者及当地健康人群检测TBEV特异性IgG抗体。调查当地蜱种群特征;通过蜱研磨... 目的调查新疆北部夏尔希里地区蜱传脑炎(TBE)疫源地特征,分离鉴定蜱传脑炎病毒(TBEv)。方法利用间接免疫荧光法对2011年春夏季出现的2例疑似病毒性脑炎患者及当地健康人群检测TBEV特异性IgG抗体。调查当地蜱种群特征;通过蜱研磨液接种实验小鼠与细胞分离培养TBEV;利用RT-PCR扩增检测病毒NS1基因片段,通过序列分析明确新分离毒株的系统进化特征。结果在夏尔希里自然保护区TBE疫源地采集全沟硬蜱和森林革蜱共1760只,全沟硬蜱为优势蜱种(87.5%)。2例疑似病毒性脑炎患者确诊为TBEV感染。当地健康人群中病毒IgG血清阳性率为35.4%(23/65)。BALB/c小鼠接种蜱研磨液后,发病与死亡发生率分别为72.9%(70/96)和55.7%(44/79)。从病死小鼠脑组织中扩增获得TBEV特异性条带。基于病毒NS1基因序列的系统进化分析表明,TBEV新分离株属于远东亚型,与中国东北地区分离株、俄罗斯分离株的同源性分别为99%和98%。结论首次发现新疆夏尔希里自然保护区存在TBE疫源地,病毒流行株属于远东亚型,全沟硬蜱和森林革蜱是病毒传播的重要媒介。 展开更多
关键词 蜱传脑炎 蜱传脑炎病毒 疫源地
蜱传森林脑炎病毒非结构蛋白1原核表达载体的构建 预览 被引量:1
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作者 宋天一 李菁华 +2 位作者 张哲 史红艳 孙延波 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期620-624,共5页
目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。... 目的:构建蜱传森林脑炎病毒(TBEV)非结构蛋白1(NS1)的原核表达载体,以期获得其高纯度的表达,为制备多克隆抗体及其功能的研究奠定实验基础。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因重组技术构建原核表达载体pEASYTM-E1-NS1。将重组后质粒pEASYTM-E1-NS1转化至BL21细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后进行镍离子亲和纯化,利用Bradford法测定蛋白浓度。采用SDS-PAGE和Western blotting法分析融合蛋白的表达水平。结果:含TBEV NS1的原核表达载体pEASYTM-E1-NS1经诱导后,可获得以包涵体形式存在的融合蛋白,通过亲和纯化得到较高纯度的蛋白质。SDS-PAGE和Western blotting,在相对分子质量约40 000处有特异性蛋白条带。结论:成功构建重组pEASYTM-E1-NS1原核表达载体,获得高纯度的重组TBEV NS1的融合蛋白。 展开更多
关键词 蜱传森林脑炎病毒 非结构蛋白1 原核表达 融合蛋白
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TBEV对人神经细胞致病性的实验研究 被引量:1
15
作者 魏婧靖 李裕昌 +7 位作者 吴晓燕 司炳银 张雨 李靖 户义 祝庆余 杨银辉 康晓平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期415-418,共4页
目的确定蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK-N-SH,取不同时间点的细胞培养上清,分别采用real-timeRT-PCR方法及空斑测定的方法测定... 目的确定蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)对人神经母瘤细胞的感染性及复制增殖情况。方法将TBEV感染人神经母瘤细胞SK-N-SH,取不同时间点的细胞培养上清,分别采用real-timeRT-PCR方法及空斑测定的方法测定病毒滴度,以确定TBEV在SK-N-SH细胞中的复制增殖情况;同时进行细胞形态观察及免疫荧光检测,以确定TBEV感染后的SK-N-SH细胞形态变化。结果TBEV感染SK-N-SH细胞后,可进行大量复制增殖,感染后3d,病毒滴度达到峰值,可达2.92×10^7PFU/ml,感染细胞产生明显的形态改变,免疫荧光法可检测到细胞内的病毒粒子。结论TBEV可在人神经母瘤细胞SK-N-SH中大量复制增殖,并可造成细胞明显的形态改变,因此人神经母瘤细胞SK-N-SH可以作为TBEV培养良好的细胞模型。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 神经细胞 致病性
森林脑炎病毒E基因DomainⅢ段的克隆表达及鉴定 预览 被引量:3
16
作者 朱晓磊 林方 +3 位作者 康晓平 李裕昌 杨银辉 钱爱东 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期667-671,共5页
从森林脑炎病毒森张株的细胞培养液中提取总RNA,通过RT-PCR扩增E蛋白基因DomainⅢ段,克隆入原核表达载体GSTpET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行Western blot鉴定,并用针对不... 从森林脑炎病毒森张株的细胞培养液中提取总RNA,通过RT-PCR扩增E蛋白基因DomainⅢ段,克隆入原核表达载体GSTpET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后,进行Western blot鉴定,并用针对不同病毒的兔免疫血清验证其检测特异性。重组原核表达质粒GSTpET-30a-ED3经酶切证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约为41 kD,主要以包涵体的形式表达,并可与TBE阳性兔免疫血清特异性反应。结果表明:成功克隆了森林脑炎病毒森张株E蛋白基因DomainⅢ段,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,获得的ED3蛋白质具有良好的特异性。 展开更多
关键词 森林脑炎病毒 E基因 克隆表达
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5种脑炎人兽共患病病毒多重RT-PCR检测方法的建立 预览 被引量:8
17
作者 蔡绪禹 康晓平 +9 位作者 刘洪 李裕昌 孙恩成 王凌凤 杨涛 刘霓红 步志高 李文京 杨银辉 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期 118-121,共4页
为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特... 为建立同时检测流行性乙型脑炎病毒(JEV)、森林脑炎病毒(TBEV)、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)5种人兽共患脑炎病病毒的多重RT-PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列设计特异引物,通过优化引物组合及PCR反应条件,建立可同时检测5种病毒的方法,扩增片段长度分别为411 bp(JEV)、945 bp(TBEV)、193 bp(EEEV)、545 bp(WEEV)和769 bp(CHIKV);该方法具有良好的特异性,对病毒核酸最低检测拷贝数分别为7.1×103、3.6×103、2.2×103、5.6×103和5.1×103。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,为以上5种人兽共患脑炎病病毒提供快速检测手段。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 森林脑炎病毒 东方马脑炎病毒 西方马脑炎病毒 基孔肯雅病毒 多重RT-PCR
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蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的原核表达纯化及ELISA方法鉴定 预览 被引量:3
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作者 王丹 康晓平 +4 位作者 郝淮杰 郑玉玲 姜永强 杨银辉 陈福生 《生物技术通讯》 CAS 2011年第5期 636-639,666,共5页
目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆... 目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度。结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果。结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 TBE-E-D3抗原 原核表达 纯化 特异性
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蜱传脑炎病毒E基因的重组质粒构建及其在原核细胞的表达 预览 被引量:4
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作者 邵宾 陈斌 +2 位作者 谢菲 王林 黄会岭 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期 87-91,共5页
通过表达蜱传脑炎病毒E蛋白,为制备蜱传脑炎快速检测试纸条的奠定基础。根据GenBank数据库中已发表的蜱传脑炎病毒的基因序列,检索并合成蜱传脑炎病毒目的基因E,设计引物,PCR扩增,克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建重组质粒,在... 通过表达蜱传脑炎病毒E蛋白,为制备蜱传脑炎快速检测试纸条的奠定基础。根据GenBank数据库中已发表的蜱传脑炎病毒的基因序列,检索并合成蜱传脑炎病毒目的基因E,设计引物,PCR扩增,克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建重组质粒,在BL21细菌内表达蜱传脑炎病毒E蛋白。结果表明:经过PCR试验和双酶切试验鉴定,克隆测序正确,通过重组质粒,成功地表达出蜱传脑炎病毒E蛋白。 展开更多
关键词 蜱传脑炎病毒 重组质粒 E蛋白 原核表达
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森林脑炎病毒森张株5′端非编码区序列测定 预览 被引量:3
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作者 马新英 司炳银 +2 位作者 彭文明 高轩 祝庆余 《微生物学免疫学进展》 2003年第3期 9-12,共4页
为了解森林脑炎病毒森张株5′端非编码区序列与生物特性的关系,从而为疫苗研制打下基础,对其核苷酸序列进行测定.采用RACE法进行RT-PCR扩增,克隆法测序.结果表明:森张株5'-UTR长129nt,与Sofjin-HO、Oshima5-10、Vasilchenko、Neudoe... 为了解森林脑炎病毒森张株5′端非编码区序列与生物特性的关系,从而为疫苗研制打下基础,对其核苷酸序列进行测定.采用RACE法进行RT-PCR扩增,克隆法测序.结果表明:森张株5'-UTR长129nt,与Sofjin-HO、Oshima5-10、Vasilchenko、Neudoerfl、263、Hypr的同源性分别为92%、91%、89%、87%、87%、87%.森张株存在三处特异性变异C18→T、T30→C及49、50连续两个核苷酸缺失.本实验建立了一套相似5′端非编码区序列测定方法;三处特异性变异可能影响到森林脑炎病毒森张株的转录、翻译及核衣壳的形成. 展开更多
关键词 森林脑炎病毒 5′端非编码区 序列测定
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