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高转移肝癌细胞HCCLM6的酪氨酸磷酸化蛋白质组学研究
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作者 李素贞 徐锋 徐平 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第2期106-111,共6页
目的探讨肝癌细胞系HCCLM6细胞的酪氨酸磷酸化(pTyr)肽段富集方法,建立快速、高效和高特异性的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术。方法通过基于SH2超亲体材料酪氨酸磷酸化肽段亲和纯化技术,并结合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)实现HCC... 目的探讨肝癌细胞系HCCLM6细胞的酪氨酸磷酸化(pTyr)肽段富集方法,建立快速、高效和高特异性的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术。方法通过基于SH2超亲体材料酪氨酸磷酸化肽段亲和纯化技术,并结合液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)实现HCCLM6细胞中酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集;通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HCCLM6细胞蛋白的提取质量;LC-MS/MS检测富集得到的酪氨酸磷酸化肽段;采用MaxQuant软件实现对质谱数据的分析。结果实现了对HCCLM6细胞酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集,建立了稳定高效的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术,共鉴定到1105个酪氨酸磷酸化蛋白,2666个酪氨酸磷酸化肽段,1884个酪氨酸磷酸化位点;酪氨酸磷酸化蛋白主要富集在黏附、细胞内吞、紧密连接等与转移相关的生物学进程;所鉴定的多种酪氨酸磷酸化蛋白质有效补充了已报道的酪氨酸磷酸化数据库,可为肝癌转移机制相关研究提供新的治疗靶点。结论建立了稳定高效的酪氨酸磷酸化蛋白质组学实验技术,实现了对HCCLM6细胞酪氨酸磷酸化肽段的大规模富集。 展开更多
关键词 酪氨酸磷酸化蛋白质组 肝癌 肿瘤转移 色谱法 高压液相 紧密连接部
脱敏煎通过TGF-β1介导的p38MAPK信号途径对大鼠睾丸支持细胞紧密连接的调节作用 预览
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作者 翁碧霞 娄江涛 +1 位作者 周俊 魏任雄 《浙江中医药大学学报》 CAS 2019年第7期634-639,共6页
[目的]探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径在睾丸支持细胞紧密连接中的作用以及脱敏煎含药血清对该信号途径的影响。[方法]体... [目的]探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径在睾丸支持细胞紧密连接中的作用以及脱敏煎含药血清对该信号途径的影响。[方法]体外分离培养大鼠睾丸支持细胞,分为空白对照组、阴性对照组、p38MAPK抑制剂组、TGF-β1刺激组、TGF-β1+p38MAPK抑制剂组和TGF-β1+脱敏煎组共6组。建立支持细胞原代双室培养模型,应用跨膜上皮电阻测定法检测细胞两侧跨膜上皮电阻值(trans-epithelial electrical resistance,TER);分别采用Real-time PCR和Western blot检测支持细胞闭合蛋白(Occludin)、p38MAPK的mRNA和蛋白表达量。[结果]与空白对照组比较,阴性对照组TER、Occludin和p38MAPK mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);与空白对照组及阴性对照组比较,p38MAPK抑制剂组TER、Occludin和p38MAPK mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);而TGF-β1刺激组TER和Occludin mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01),p38MAPK mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01)。与TGF-β1刺激组比较,TGF-β1+p38MAPK抑制剂组与TGF-β1+脱敏煎组细胞TER明显升高(P<0.01),Occludin mRNA和蛋白相对表达量明显升高(P<0.01),p38MAPK mRNA和蛋白相对表达量明显降低(P<0.05或0.01)。[结论]TGF-β1可通过p38MAPK信号途径抑制Occludin蛋白表达,进而影响血睾屏障(blood-testis barrier,BTB)开闭,脱敏煎能够有效抑制p38MAPK表达,促进Occludin蛋白的表达。 展开更多
关键词 脱敏煎 TGF-Β1 睾丸支持细胞 紧密连接 OCCLUDIN P38丝裂原活化蛋白激酶
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老年SD大鼠前列腺导管内尿路上皮屏障的病理学特点
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作者 安凌悦 张珩 +2 位作者 罗光恒 田野 孙兆林 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期1262-1266,共5页
目的观察老年雄性SD大鼠前列腺导管内尿路上皮屏障的病理学特点。方法取10只老年雄性SD大鼠,予水合氯醛麻醉后取膀胱、前列腺部尿道及前列腺组织行病理连续切片,完成HE染色镜检和免疫组织化学染色法分别检测组织内细胞角蛋白7(CK7)、细... 目的观察老年雄性SD大鼠前列腺导管内尿路上皮屏障的病理学特点。方法取10只老年雄性SD大鼠,予水合氯醛麻醉后取膀胱、前列腺部尿道及前列腺组织行病理连续切片,完成HE染色镜检和免疫组织化学染色法分别检测组织内细胞角蛋白7(CK7)、细胞角蛋白20(CK20)、尿斑蛋白Ⅲ(UPⅢ)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)及闭锁蛋白(Occludin)的表达情况;各抗体免疫组化结果行平均吸光度(IA)值分析。结果HE染色观察到在膀胱、前列腺部尿道和前列腺导管近端存在尿路上皮伞状细胞。免疫组织化学染色示膀胱、前列腺部尿道及前列腺导管中CK7、UPⅢ、ZO-1及Occludin均呈阳性,CK20呈阴性;CK7和UPⅢ在前列腺导管近端呈阳性,导管腺泡腔底部呈阴性;ZO-1和Occludin在前列腺导管中呈阳性。IOD/Area显示CK7和UPⅢ在膀胱、前列腺部尿道、前列腺导管近端、中段和腺泡腔底部的表达分别为0.16、0.13、0.06、0.05、0.00和0.17、0.16、0.08、0.05、0.00(P<0.05);ZO-1和Occludin在膀胱(0.14和0.13)表达高于其他部位(0.11~0.12和0.09~0.10,P<0.05);ZO-1和Occludin从前列腺导管近端到中段和腺泡腔底部表达无明显差异(0.12~0.11和0.09~0.09,P>0.05);CK20的IA值极低(0.00~0.01,P>0.05)。结论老年雄性SD大鼠前列腺导管内存在部分尿路上皮屏障,随着前列腺导管逐渐延伸至腺泡腔,尿路上皮屏障逐渐消失。该结果为进一步研究前列腺切除术后尿路上皮屏障的修复奠定基础。 展开更多
关键词 前列腺切除术 前列腺导管 尿路上皮屏障 紧密连接蛋白 尿斑蛋白
硫糖铝对幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜损伤的保护作用及其对胃肠菌群的影响
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作者 刘芸 滕贵根 +2 位作者 王蔚虹 吴婷 胡伏莲 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期1546-1552,共7页
目的探讨硫糖铝混悬凝胶(SC)对幽门螺杆菌(H.pylori)感染所致小鼠胃黏膜损伤和胃肠菌群的影响。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组(NC组)、H.pylori组(HP组)和硫糖铝组(HP+SC组)。HP组和HP+SC组以H.pylori悉尼菌株(SS1)灌胃,HP+SC组同时... 目的探讨硫糖铝混悬凝胶(SC)对幽门螺杆菌(H.pylori)感染所致小鼠胃黏膜损伤和胃肠菌群的影响。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组(NC组)、H.pylori组(HP组)和硫糖铝组(HP+SC组)。HP组和HP+SC组以H.pylori悉尼菌株(SS1)灌胃,HP+SC组同时予SC灌胃14 d。小鼠处死后取胃黏膜行苏木精-伊红(HE)染色并行胃黏膜损伤评分(EDS),免疫组织化学法(IHC)或改良吉姆萨染色阳性认为H.pylori阳性。IHC检测紧密连接蛋白及炎症因子并行免疫组化评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测炎症因子,透射电镜观察胃黏膜超微结构。取胃黏膜和肠内容物行16S核糖体RNA(16S rRNA)测序。结果HP组小鼠H.pylori定植率为91.67%,HP+SC组定植率为50.00%。HP组小鼠胃黏膜EDS高于NC组[(3.42±0.19)比(1.17±0.17),P<0.05],HP+SC组EDS(2.42±0.29)低于HP组(P<0.05)。HP组白细胞介素(IL)-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达水平及IHC评分高于NC组(均P<0.05)。HP+SC组IL-8 mRNA表达水平[(0.90±0.21)比(1.72±0.23)]及IHC评分[(4.50±0.22)分比(5.83±0.31)分]均低于HP组(均P<0.05),而IL-10、TNF-α mRNA表达水平及IHC评分差异均无统计学意义(均P>0.05)。HP组闭锁小带蛋白(ZO-1)及咬合蛋白IHC评分低于NC组(均P<0.05),HP+SC组咬合蛋白IHC评分高于HP组[(3.50±0.43)分比(2.33±0.21)分,P<0.05],两组ZO-1的IHC评分差异无统计学意义(P>0.05)。HP组较NC组胃菌群多样性降低,肠道菌群多样性差异无统计学意义,HP+SC组较HP组胃菌群及肠道菌群差异无统计学意义。结论SC降低H.pylori定植率,改善H.pylori所致胃黏膜损伤,降低H.pylori所致IL-8表达,增强咬合蛋白,但对H.pylori所致胃肠菌群改变无明显影响。 展开更多
关键词 螺杆菌感染 胃炎 炎症 紧密连接部 核糖体
紧密连接相关蛋白:胆汁淤积性肝损伤治疗的新靶点 预览
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作者 王雪 杨婷婷 +1 位作者 江振洲 张陆勇 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期143-151,共9页
胆汁淤积性肝损伤的发生伴随着肝细胞极性的改变和胆汁酸稳态失衡。紧密连接(tight junctions,TJs)结构是存在于上皮细胞之间、维持细胞极性的一种特殊屏障结构,其在维持机体胆汁酸稳态中发挥着重要作用。本文以胆汁淤积性肝损伤为研究... 胆汁淤积性肝损伤的发生伴随着肝细胞极性的改变和胆汁酸稳态失衡。紧密连接(tight junctions,TJs)结构是存在于上皮细胞之间、维持细胞极性的一种特殊屏障结构,其在维持机体胆汁酸稳态中发挥着重要作用。本文以胆汁淤积性肝损伤为研究基础,从肝脏和肠道紧密连接结构出发,探讨该结构在胆汁淤积性肝脏疾病中的作用及其分子调控机制,系统介绍以紧密连接相关蛋白为靶点的胆汁淤积性肝脏疾病治疗药物的最新进展,以期寻找与紧密连接结构相关蛋白为靶点的潜在治疗药物。 展开更多
关键词 胆汁淤积性肝病 紧密连接结构 屏障功能 胆汁酸稳态 新药靶点
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PM2.5对正常人鼻黏膜上皮细胞防御功能的影响
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作者 羡慕 马思远 +2 位作者 王阳 王成硕 张罗 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2019年第7期386-390,共5页
目的通过体外实验评估PM2.5刺激对正常人鼻黏膜紧密连接功能的影响。方法选取因非炎性疾病(如鼻中隔偏曲、泡状中鼻甲、阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征、脑脊液鼻漏等)而拟行相关手术的成年患者。鼻黏膜标本来自全麻鼻内镜手术中所得... 目的通过体外实验评估PM2.5刺激对正常人鼻黏膜紧密连接功能的影响。方法选取因非炎性疾病(如鼻中隔偏曲、泡状中鼻甲、阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征、脑脊液鼻漏等)而拟行相关手术的成年患者。鼻黏膜标本来自全麻鼻内镜手术中所得到的中下鼻甲、钩突或筛窦黏膜。通过鼻黏膜上皮细胞气液交界培养,在培养基中分别加入不同浓度的PM2.5,测量比较培养细胞跨上皮电阻(trans-epithelium electrical resistant,TER)和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)渗透性与对照组的差异,以反映细胞间连接紧密程度的改变。通过荧光定量PCR,观察PM2.5对培养细胞紧密连接分子mRNA表达量的影响;通过免疫荧光标记,在共聚焦激光显微镜下观察PM2.5对培养细胞紧密连接蛋白表达情况的影响。结果加入PM2.5后,随着刺激时间延长,反映培养鼻黏膜上皮细胞之间紧密连接完整性的TER与对照组相比明显降低,并且PM2.5刺激的浓度越高,TER下降的越明显。而反映上皮渗透性的FITC通过率与PM2.5刺激的浓度呈正相关,PM2.5浓度越高,通过培养上皮的FITC越多。与对照组相比,100 μg/ml PM2.5间断刺激3天后,培养鼻黏膜上皮细胞的claudin-1 mRNA表达量显著下降;培养鼻黏膜上皮细胞的紧密连接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1的分布连续性和荧光强度均显著减低。结论PM2.5刺激可通过破坏鼻黏膜上皮细胞膜上紧密连接分子的表达,进而影响正常人鼻黏膜的屏障功能。 展开更多
关键词 颗粒物 紧密连接部 鼻黏膜 气液交界培养
细胞角蛋白8在促肾上腺皮质激素释放因子诱导的肠上皮通透性改变中的作用 预览
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作者 胡玥 陈超英 +1 位作者 张梦 吕宾 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期900-906,共7页
目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制。方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将... 目的:探讨细胞角蛋白8(CK8)在促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)诱导的肠上皮细胞间通透性改变中的作用及机制。方法:培养人结肠腺癌HT29细胞株建立肠上皮屏障模型,采用免疫荧光法检测HT29细胞表面CRF受体1(CRFR1)及CRFR2的表达情况,并将其分为对照组和CRF组,CRF组以100 nmol/L CRF处理细胞72 h。采用Transwell小室检测2组细胞FITC标记的dextran透过率,透射电镜观察2组细胞紧密连接结构变化,并用Western blot法检测2组细胞CK8及紧密连接相关蛋白(ZO-1和occludin)的表达,免疫荧光检测CK8表达微结构变化,ELISA检测加药5 min、10 min、30 min、1 h及2 h后蛋白激酶C(PKC)活性。采用sh-CK8慢病毒构建CK8低表达HT29细胞,检测给予CRF处理后相应蛋白表达量、FITC标记的dextran透过率及PKC活性的改变。结果:HT29细胞表面存在CRFR1及CRFR2受体,而CRF处理后,FITC标记的dextran透过率高于对照组(P<0.05),透射电镜观察可见对照组细胞紧密连接通道关闭,CRF处理后紧密连接开放。同时,CRF可引起HT29细胞CK8的荧光强度增高,呈颗粒样浓聚,其蛋白表达明显增加(P<0.05),而occludin和ZO-1表达下调(P<0.05)。此外,CRF处理1 h时,PKC的活性下降(P<0.05)。sh-CK8慢病毒转染HT29细胞后成功建立低表达CK8细胞株,与阴性对照组相比,CRF刺激后肠上皮细胞通透性并未明显降低,occludin蛋白表达仍下调(P<0.05),而ZO-1则无明显改变。同时,与阴性对照组相比,CK8低表达后,CRF刺激并未引起PKC活性的下降。结论:CK8可能通过抑制PKC活性参与CRF诱导的肠上皮通透性的增加,同时可能存在其它信号通路共同参与。 展开更多
关键词 肠易激综合征 细胞角蛋白8 促肾上腺皮质激素释放因子 紧密连接 蛋白激酶C
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血管内皮通透性的细胞及信号转导调控机制 预览
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作者 王雪岩 刘瑞霞 +1 位作者 郭易楠(综述) 阴赪宏(审校) 《微循环学杂志》 2018年第4期61-66,共6页
血管内皮通透性在体内多种疾病的生理及病理过程中扮演重要角色。目前关于血管内皮通透性的调控机制已有较为深入和全面的研究,细胞层面主要为内皮细胞间的紧密连接、黏附连接、内皮-基底膜间的黏附连接,基底膜完整性以及内皮细胞骨架... 血管内皮通透性在体内多种疾病的生理及病理过程中扮演重要角色。目前关于血管内皮通透性的调控机制已有较为深入和全面的研究,细胞层面主要为内皮细胞间的紧密连接、黏附连接、内皮-基底膜间的黏附连接,基底膜完整性以及内皮细胞骨架蛋白共同调控血管内皮细胞通透性;信号转导中环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA、蛋白激酶C(PKC)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38/MAPK)、碳酯酶C(PLC)、Rho GTP等信号通路及其组成的级联反应在血管内皮通透性调控中发挥重要作用,各因素之间既相互独立又相互渗透。本文就近年来血管内皮通透性的细胞和信号转导调控机制研究进展予以综述。以期为广大研究者对血管内皮通透性研究提供一个基本认识,进而在基础和临床实践中进行更为深入的研究。 展开更多
关键词 血管内皮通透性 紧密连接 黏附连接 信号转导
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MicroRNA-21靶调控NCM460细胞ROCK1基因上调occludin表达 预览
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作者 李超 刘敏 刘志华 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期729-734,共6页
目的:探讨微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,qPCR检测miR-21表达水... 目的:探讨微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对人正常结肠上皮细胞系NCM460中紧密连接相关蛋白——闭合蛋白(occludin)表达的影响,并分析其可能的靶基因。方法:利用miR-21过表达慢病毒建立miR-21过表达NCM460细胞系,qPCR检测miR-21表达水平,Western blot检测occludin表达情况。生物信息学方法预测miR-21的靶基因,根据评分和文献检索选择相应靶基因ROCK1进行进一步研究,利用miR-21 mimic和inhibitor转染NCM460细胞,同时检测miR-21以及ROCK1的表达水平;采用双萤光素酶报告基因实验验证ROCK1是miR-21的靶基因。结果:在NCM460细胞中过表达miR-21后可上调紧密连接相关蛋白occludin的表达。生物信息学分析预测ROCK1可能为miR-21的靶基因。在NCM460细胞中过表达miR-21可下调ROCK1的mRNA和蛋白水平,抑制miR-21可上调ROCK1的mRNA和蛋白水平。萤光素酶报告基因验证ROCK1为miR-21的靶基因。结论:在NCM460细胞中,miR-21能上调肠屏障功能相关蛋白occludin的表达。ROCK1是miR-21的靶基因,miR-21可能通过靶调控ROCK1促进occludin的表达。 展开更多
关键词 微小RNA-21 NCM460细胞 紧密连接 闭合蛋白 ROCK1基因
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微乳对葛根素在MDCK-MDR1细胞的转运影响及机制研究 被引量:1
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作者 杨冰 张紫薇 +4 位作者 赵博 吴娅丽 谭丽 李鹏跃 杜守颖 《中草药》 CSCD 北大核心 2018年第12期2890-2896,共7页
目的探讨微乳制剂对葛根素在血脑屏障(BBB)细胞模型MDCK-MDR1的转运影响以及机制。方法采用MTT法评价葛根素微乳与溶液的细胞毒性浓度范围,确定适宜给药质量浓度,考察葛根素溶液及微乳在MDCK-MDR1单层的双侧转运特性,通过免疫组化染... 目的探讨微乳制剂对葛根素在血脑屏障(BBB)细胞模型MDCK-MDR1的转运影响以及机制。方法采用MTT法评价葛根素微乳与溶液的细胞毒性浓度范围,确定适宜给药质量浓度,考察葛根素溶液及微乳在MDCK-MDR1单层的双侧转运特性,通过免疫组化染色研究细胞紧密连接蛋白的表达,荧光光漂白恢复法测定细胞膜流动性的变化以及阴离子探针结合流式细胞技术研究细胞膜电位的改变,进而阐明微乳对葛根素转运影响的作用机制。结果葛根素溶液质量浓度50-300μg/m L,微乳稀释500倍以上对MDCK-MDR1无显著毒性。溶液中葛根素在MDCK-MDR1单层的吸收方向转运表观渗透系数(Papp)为1.04×10^-6 cm/s,外排方向转运Papp值为1.05×10^-6 cm/s,微乳中葛根素双侧转运Papp值均较溶液中葛根素显著增加(P〈0.05)。微乳作用可以减少MDCK-MDR1紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1、F-actin的表达,促进细胞膜流动,降低细胞膜电位。结论微乳制剂可以促进葛根素在BBB细胞模型MDCK-MDR1的双侧转运,其作用机制与打开细胞间紧密连接,增加细胞膜流动性,使细胞去极化,降低膜电位进而增大葛根素细胞旁路渗透有关。 展开更多
关键词 葛根素 微乳 MDCK-MDR1 表观渗透系数 紧密连接 细胞膜流动性 细胞膜电位
氯离子通道-2与炎症性肠病关系的研究进展 预览
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作者 耿丽 王许平 +4 位作者 王丹丹 杨贝贝 杜晓博 高闯 冯百岁 《胃肠病学》 2018年第11期701-704,共4页
炎症性肠病(IBD)是一组病因不明、反复发作的肠道慢性炎性疾病,主要包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。近年来越来越多的研究表明电压门控氯离子通道-2(ClC-2)可调节紧密连接复合体的结构,参与IBD的发生和发展。本文就ClC-2与IBD关... 炎症性肠病(IBD)是一组病因不明、反复发作的肠道慢性炎性疾病,主要包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。近年来越来越多的研究表明电压门控氯离子通道-2(ClC-2)可调节紧密连接复合体的结构,参与IBD的发生和发展。本文就ClC-2与IBD关系的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 炎症性肠病 氯离子通道 紧密连接部
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蜡样芽孢杆菌对胆汁淤积大鼠的肝损伤和肠黏膜通透性的影响 预览
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作者 李永春 王菊平 +1 位作者 李小芹 郑俊霞 《重庆医学》 2018年第32期4098-4101,共4页
目的 探讨蜡样芽孢杆菌(Bc)对肝内胆汁淤积大鼠的肝损伤和肠黏膜通透性的影响。方法 将40只大鼠分为对照组、模型组及Bc低、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余大鼠均单次灌胃α-荼基异硫氰酸盐(ANIT)建立胆汁淤积模型。Bc低、高剂量... 目的 探讨蜡样芽孢杆菌(Bc)对肝内胆汁淤积大鼠的肝损伤和肠黏膜通透性的影响。方法 将40只大鼠分为对照组、模型组及Bc低、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余大鼠均单次灌胃α-荼基异硫氰酸盐(ANIT)建立胆汁淤积模型。Bc低、高剂量组于造模次日开始灌胃Bc(1.0×10 8、2.0×10 8 CFU/kg),对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续5 d。检测各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、二胺氧化酶(DAO)、总胆红素(T-BIL)和乳酸(LA)的水平;观察各组大鼠肝组织病理学变化,免疫组织化学分析各组大鼠小肠组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST、DAO、T-BIL及LA水平明显升高,小肠组织中Occludin和ZO-1表达明显减少(P<0.05)。与模型组比较,Bc低、高剂量组大鼠血清中AST、DAO和LA等水平明显降低(P<0.05);肝组织病理学明显改善,小肠组织中Occludin和ZO-1的蛋白表达增加(P<0.05)。结论 Bc对胆汁淤积大鼠肝损伤有一定保护作用,可改善其肠黏膜通透性,其机制可能与上调小肠组织中紧密连接蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 蜡样芽孢杆菌 胆汁淤积 肠黏膜屏障 紧密连接部
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肠上皮细胞紧密连接在肠易激综合征发病中的作用 预览 被引量:1
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作者 赵磊 林江 《胃肠病学》 2018年第3期181-184,共4页
肠易激综合征(IBS)是常见的功能性胃肠病,其病因和发病机制尚未完全明确。近年肠黏膜屏障在IBS发病中的作用备受关注。肠上皮细胞是肠黏膜屏障的重要组成部分,其功能与细胞间紧密连接(TJ)密切相关。研究证实IBS患者肠黏膜TJ结构... 肠易激综合征(IBS)是常见的功能性胃肠病,其病因和发病机制尚未完全明确。近年肠黏膜屏障在IBS发病中的作用备受关注。肠上皮细胞是肠黏膜屏障的重要组成部分,其功能与细胞间紧密连接(TJ)密切相关。研究证实IBS患者肠黏膜TJ结构异常,可能与IBS发病相关。本文就肠上皮细胞TJ在IBS发病中的作用作一综述。 展开更多
关键词 肠易激综合征 紧密连接部 肠黏膜 通透性
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血脑屏障体外模型研发 被引量:1
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作者 沙保勇 刘洁 +1 位作者 景晓红 高巍 《生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期310-318,共9页
血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)是介于血液和脑组织间的一种动态界面,严格调控血-脑间的物质运输,为神经功能的实现提供稳定的内环境。许多药物因无法通过血脑屏障达到有效剂量而被淘汰。现在,越来越多的研究转向血脑屏障体外模... 血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)是介于血液和脑组织间的一种动态界面,严格调控血-脑间的物质运输,为神经功能的实现提供稳定的内环境。许多药物因无法通过血脑屏障达到有效剂量而被淘汰。现在,越来越多的研究转向血脑屏障体外模型的研制。现从血脑屏障的结构、制备血脑屏障体外模型的预期目标、血脑屏障体外模型构成组分的来源以及血脑屏障体外模型装置等方面,综述了现有静态及动态培养BBB体外模型的发展及优缺点,以期为BBB体外模型的应用提供一定理论依据。 展开更多
关键词 血脑屏障 紧密连接 体外模型 微流控
皮肤屏障功能的改变与银屑病
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作者 潘云雷 方红 《中国皮肤性病学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期1442-1446,共5页
银屑病是常见的免疫介导的慢性炎症性皮肤病,涉及多方面的病理机制。皮肤在维持机体水电解质平衡及阻止外部有害物质侵入机体等方面起重要作用。而皮肤屏障的关键成分发生改变及功能受损是银屑病重要的病理机制。研究银屑病患者皮肤的... 银屑病是常见的免疫介导的慢性炎症性皮肤病,涉及多方面的病理机制。皮肤在维持机体水电解质平衡及阻止外部有害物质侵入机体等方面起重要作用。而皮肤屏障的关键成分发生改变及功能受损是银屑病重要的病理机制。研究银屑病患者皮肤的屏障功能有助于揭示其病理机制及优化银屑病的防治策略。 展开更多
关键词 银屑病 皮肤屏障 紧密连接 角化包膜 抗菌肽
紧密连接相关蛋白对血脑屏障通透性影响的研究进展 预览 被引量:5
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作者 张楠 王思迪 +2 位作者 涂盼春 岳英芳 杨智航 《沈阳医学院学报》 2017年第1期72-75,共4页
血脑屏障作为机体中重要的组织结构,对于维持脑组织的安全及稳定具有十分重要的作用,紧密连接是血脑屏障的重要组成部分,其相关蛋白在维持紧密连接的稳定性和血脑屏障通透性方面同样至关重要。
关键词 紧密连接 血脑屏障 紧密连接相关蛋白
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Claudin-3在结直肠癌中的表达及意义 预览 被引量:3
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作者 李婧宜 谢芳 +7 位作者 徐晓平 马娟娟 周代超 廖妍 唐静 谢乾 白岚 南清振 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期63-67,共5页
目的:观察在结直肠癌组织中紧密连接蛋白claudin-3的表达,探讨claudin-3与结直肠癌发生、发展、转移及预后的关系。方法收集南方医院2010年10月~2013年1月间手术切除结直肠癌组织40例(癌组)及癌旁正常结直肠粘膜组织22例(癌旁正常... 目的:观察在结直肠癌组织中紧密连接蛋白claudin-3的表达,探讨claudin-3与结直肠癌发生、发展、转移及预后的关系。方法收集南方医院2010年10月~2013年1月间手术切除结直肠癌组织40例(癌组)及癌旁正常结直肠粘膜组织22例(癌旁正常组)。应用免疫组化法检测组织中claudin-3的表达水平。分析和比较癌组不同病理参数和不同存活情况病例间的claudin-3蛋白表达情况。结果 claudin-3蛋白的表达主要分布在细胞膜上。癌组阳性表达率为92.50%,显著高于癌旁正常组的59.09%(P〈0.05)。13例来自同一患者的癌组织和癌旁正常组织的claudin-3表达平均评分(染色强度评分+阳性细胞所占比例评分)分别为4.538和3.269(P=0.019)。在40例癌组患者中,高分化组、中分化组、低分化组claudin-3的强阳性表达率分别为21.43%、36.84%和85.71%,其中高分化组与低分化组间及低分化组与中分化组间的差异均有统计学意义(P〈0.05);淋巴结转移组claudin-3强阳性率为61.11%,显著高于无淋巴结转移组的22.72%(P〈0.05);在不同年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤最长径的分组间,claudin-3强阳性表达率差异均无统计学意义(P〉0.05)。随访癌组的40例患者,失访7例,术后生存期≤3年14例(死亡组),生存期〉3年19例(存活组),两组claudin-3表达平均评分分别为4.50和3.526(P〈0.05)。结论结直肠癌组织中claudin-3的表达显著升高, claudin-3的高强度表达可能促进了结直肠癌的发生及发展过程,并可能成为结直肠癌早期诊断及判断预后的分子生物学指标。 展开更多
关键词 结直肠癌 CLAUDIN-3 免疫组化 紧密连接 CLAUDIN-3
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乌司他丁对乙醇诱导的肠黏膜屏障损伤的保护作用 预览
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作者 王改 王志华 +7 位作者 段红年 徐欢 马江涛 刘鑫惠 刘佳琪 李宁 常春鹏 郝京霞 《国际消化病杂志》 CAS 2017年第2期100-103,共4页
目的探讨乌司他丁对乙醇诱导的肠黏膜屏障损伤的保护作用。方法培养Caco-2细胞至形成肠上皮细胞屏障模型,分为空白对照组、乙醇组(终体积浓度10%)和不同浓度乌司他丁治疗组(750 U/mL、1 500 U/mL、3 000 U/mL)。测定单层上皮的跨上... 目的探讨乌司他丁对乙醇诱导的肠黏膜屏障损伤的保护作用。方法培养Caco-2细胞至形成肠上皮细胞屏障模型,分为空白对照组、乙醇组(终体积浓度10%)和不同浓度乌司他丁治疗组(750 U/mL、1 500 U/mL、3 000 U/mL)。测定单层上皮的跨上皮细胞电阻(TEER)及荧光素钠透过率,免疫荧光法及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1在细胞单层的定位及表达量,透射电镜观察细胞紧密连接的超微结构。结果与对照组对比,乙醇组单层细胞的TEER降低(P〈0.001);荧光素钠透过率升高(P〈0.001);免疫荧光检测显示ZO-1蛋白表达断续不完整,荧光强度弱;Western blot检测显示ZO-1蛋白表达水平降低(P〈0.001);透射电镜结果示细胞刷状缘受损,排列紊乱,细胞间连接模糊。乌司他丁治疗组的上述指标均改善(P均〈0.05),其中3 000 U/mL乌司他丁组的改善最明显(P均〈0.05)。结论乌司他丁对乙醇诱导的肠单层上皮细胞屏障损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 乌司他丁 乙醇 肠黏膜屏障 紧密连接
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齐墩果酸通过VEGF-Src通路对蛛网膜下腔出血大鼠模型血管内皮紧密连接表达的影响 预览 被引量:1
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作者 韩雨薇 刘秀娟 +1 位作者 高阳 李晓明 《实用药物与临床》 CAS 2017年第8期863-867,共5页
目的探讨齐墩果酸对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用,阐释其可能的机制。方法 54只成年雄性SD大鼠分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸给药组),每组18只。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给药,24 h后进行神经... 目的探讨齐墩果酸对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用,阐释其可能的机制。方法 54只成年雄性SD大鼠分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸给药组),每组18只。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给药,24 h后进行神经功能损伤评分;检测脑水含量及脑伊文思蓝浸出;并利用Western blot方法检测脑组织Src、VEGF、ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达量。结果齐墩果酸高剂量给药可有效改善神经功能损伤(P〈0.01);降低脑组织含水量和脑血管通透性(P〈0.01);增加ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达,降低VEGF水平,抑制Src激活(P〈0.05)。结论齐墩果酸对SAH后早期脑损伤有显著的保护作用,可改善脑水肿,其作用机制可能与增加脑组织紧密连接蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 齐墩果酸 蛛网膜下腔出血 脑水肿 紧密连接
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乌司他丁对过氧化氢诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用 预览 被引量:2
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作者 王改 王志华 +7 位作者 段红年 徐欢 马江涛 刘鑫惠 刘佳琪 李宁 常春鹏 郝京霞 《胃肠病学》 2017年第4期224-228,共5页
肠上皮细胞间紧密连接的破坏及其所致的肠黏膜屏障功能受损在一系列胃肠道疾病的发生、发展中起重要作用。目的:探讨乌司他丁对过氧化氢(H2O2)诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用。方法:以Caco-2细胞体外培养制备肠单层上皮屏障模型,... 肠上皮细胞间紧密连接的破坏及其所致的肠黏膜屏障功能受损在一系列胃肠道疾病的发生、发展中起重要作用。目的:探讨乌司他丁对过氧化氢(H2O2)诱导的肠上皮屏障损伤的保护作用。方法:以Caco-2细胞体外培养制备肠单层上皮屏障模型,将其分为空白对照组(不予干预)、H202组(500μmol/LH2O2)和低浓度(500U/mL)、高浓度(3000U/mL)乌司他丁治疗组并予相应处理。检测丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性,以跨上皮细胞电阻(TEER)和荧光素钠透过率评估上皮屏障功能,蛋白质印迹法和免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达和定位,透射电镜观察紧密连接超微结构。结果:与空白对照组相比,H2O2组Caco-2细胞单层上皮MDA水平、荧光素钠透过率明显升高,SOD活性、TEER、ZO一1和occludin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P〈0.05)。透射电镜观察和免疫荧光法检测显示H2O2组细胞刷状缘受损,细胞间连接模糊,ZO-1、occludin蛋白分布断续不完整,荧光强度低。乌司他丁治疗组上述指标均较H2O2组显著改善(P〈0.05),高浓度组改善更为明显。结论:乌司他丁对H2O2诱导的肠单层上皮屏障损伤有一定保护作用,其机制可能与其抗氧化活性以及调节紧密连接蛋白表达和分布有关。 展开更多
关键词 乌司他丁 过氧化氢 肠黏膜屏障 上皮细胞 紧密连接部
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