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I型马立克病毒UL24蛋白的原核表达及其亚细胞定位的研究
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作者 张言坤 吴佳燕 +3 位作者 韩妮 周忠文 苏帅 崔治中 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期67-74,共8页
为研究Ⅰ型马立克病毒(MDV)UL24蛋白的亚细胞定位,以MDV GX0101为模板,PCR扩增UL24基因全长,分别克隆到原核表达载体pGEX-6P-1、pET-32a(+)和真核表达载体pEGFP-C1中。将原核表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中表... 为研究Ⅰ型马立克病毒(MDV)UL24蛋白的亚细胞定位,以MDV GX0101为模板,PCR扩增UL24基因全长,分别克隆到原核表达载体pGEX-6P-1、pET-32a(+)和真核表达载体pEGFP-C1中。将原核表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中表达,并进行纯化和鉴定。用纯化蛋白免疫Balb/c小鼠,制备并鉴定抗UL24蛋白的多克隆抗体。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测感染GX0101的鸡胚成纤维细胞(CEF)中的UL24蛋白。同时,将真核表达重组质粒pEGFP-C1-UL24转染CEF细胞,通过激光共聚焦显微镜观察UL24蛋白在CEF中的亚细胞定位。结果显示Ⅰ型MDV的UL24基因在原核表达载体中能够正确表达,免疫小鼠后获得抗UL24蛋白的多克隆抗体。该抗体可特异性识别MDV UL24蛋白,且MDV UL24蛋白在CEF的细胞质和细胞核中定位,以上研究结果为进一步研究MDV UL24基因的功能奠定基础。 展开更多
关键词 I型马立克病毒(MDV) UL24基因 多克隆抗体 鉴定 亚细胞定位
鸭肠炎病毒UL24/C基因酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定 预览
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作者 高兴红 贾仁勇 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期481-485,共5页
为构建DEV UL24/C蛋白的酵母双杂交的诱饵载体,本研究以DEV CHv株基因组DNA为模板,经一步法克隆构建pGBKT7-UL24/C诱饵质粒,质粒转化酵母菌株后进行自激活活性检测、免疫印迹检测和毒性检测。结果显示,诱饵质粒pGBKT7-UL24/C插入片段大... 为构建DEV UL24/C蛋白的酵母双杂交的诱饵载体,本研究以DEV CHv株基因组DNA为模板,经一步法克隆构建pGBKT7-UL24/C诱饵质粒,质粒转化酵母菌株后进行自激活活性检测、免疫印迹检测和毒性检测。结果显示,诱饵质粒pGBKT7-UL24/C插入片段大小为510bp,且未发生基因突变;pGBKT7-UL24/C质粒转化Y2HGold菌株后的自激活检测显示诱饵菌株无自激活活性,免疫印迹检测表明该诱饵菌株成功表达DEV UL24/C蛋白,毒性检测表明该诱饵蛋白对宿主菌Y2HGold无毒性作用。综上表明,未研究正确构建了UL24/C基因酵母双杂交诱饵载体Y2HGold(pGBKT7-UL24/C),为筛选与DEV UL24蛋白相互作用蛋白、探究DEV UL24蛋白功能及分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 UL24基因 酵母双杂交 诱饵载体
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疱疹病毒UL24基因及其编码蛋白的研究进展 被引量:1
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作者 余霞 黄娟 +1 位作者 高兴红 贾仁勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期761-764,共4页
对疱疹病毒UL24基因的序列特点、编码蛋白的特点、基本功能以及UL24基因编码蛋白与疱疹病毒调节蛋白ICP27、细胞周期蛋白B/Cdc2复合体、UL12蛋白和胸腺激酶的相互作用进行了总结。旨在阐明UL24蛋白在病毒毒力、病毒复制、核仁素的散布... 对疱疹病毒UL24基因的序列特点、编码蛋白的特点、基本功能以及UL24基因编码蛋白与疱疹病毒调节蛋白ICP27、细胞周期蛋白B/Cdc2复合体、UL12蛋白和胸腺激酶的相互作用进行了总结。旨在阐明UL24蛋白在病毒毒力、病毒复制、核仁素的散布和细胞膜融合方面发挥着重要作用;疱疹病毒UL24基因属于晚期基因,是疱疹病毒基因组特定长区中的一个核心基因。 展开更多
关键词 疱疹病毒 UL24基因 编码蛋白
鸭瘟病毒UL24基因的分子特征分析 预览
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作者 贾仁勇 程安春 +5 位作者 汪铭书 葛菡 朱德康 信洪一 齐雪峰 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期 110-118,共9页
根据本实验室获得的鸭瘟病毒的一段基因序列设计引物,利用PCR扩增UL24基因并克隆到pMD18-T载体,阳性重组质粒进行酶切鉴定、测序验证与生物信息学分析。结果显示,获得的UL24基因全长1230bp,编码409个氨基酸;与其他26株疱疹病毒科中... 根据本实验室获得的鸭瘟病毒的一段基因序列设计引物,利用PCR扩增UL24基因并克隆到pMD18-T载体,阳性重组质粒进行酶切鉴定、测序验证与生物信息学分析。结果显示,获得的UL24基因全长1230bp,编码409个氨基酸;与其他26株疱疹病毒科中α-疱疹病毒亚科的UL24基因的相似性较β和γ亚科高,其中与α亚科禽疱疹病毒属中的GaHV-3相似性最大(34.7%);遗传进化树显示,该基因编码的蛋白与火鸡疱疹病毒的UL24蛋白的亲缘性最近。该蛋白是一种保守但不含信号肽的外膜蛋白,具有5个潜在的N-糖基化位点和19个磷酸化位点;编码的氨基酸Ala,Apn,Glu,Phe,Leu,Arg,Thr,Val具有一定的偏嗜性。二级结构分析显示,α螺旋和无规卷曲含量高,均达46.94%,而口折叠仅占6.11%;同源建模比对,未发现与之匹配的三级结构;预测的抗原表位主要位于肽链第36~48、241~323、344~379位区段。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 UL24基因 分子特征 生物信息学分析
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伪狂犬病病毒UL24基因的原核表达及抗UL24蛋白抗体的制备 预览 被引量:1
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作者 于春梅 李鹏 +5 位作者 郑其升 李斐 苏鑫铭 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2007年第9期 10-14,共5页
为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒pUL24-GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modified UL24)。将mUL24片段... 为了给伪狂犬病病毒(PrV)UL24蛋白的细胞定位和功能研究提供参考依据,据GenBank公布的PrVUL24基因序列(登录号NC006151)设计1对引物,以质粒pUL24-GFP为模板,用PCR方法扩增出部分缺失的基因片段mUL24(modified UL24)。将mUL24片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建融合表达载体pET-UL24。阳性质粒转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白(His)6-UL24以包涵体的形式获得表达。用纯化后的pET-UL24融合蛋白免疫家兔,ELISA分析表明,在血清效价达到1∶2 560以上,Western-blot分析制备的抗体可以和pET-UL24表达产物发生反应,具有良好的免疫特异性。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 UL24基因 原核表达 抗体制备
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