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Survivin shRNA对食管癌细胞c-myc、核因子-κB基因表达的影响
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作者 封敏 玛依热·吐尔洪 +2 位作者 董娟娟 木萨·艾尔肯 李秀梅 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期72-76,共5页
目的探讨Survivin对c-myc、核因子(NF)-κB基因的调控作用。方法 shRNA干扰沉默食管癌ECA109细胞系中Survivin基因表达,观察c-myc、NF-κB基因的表达变化,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果1.食管癌ECA109细胞系中,Survivin shRNA干... 目的探讨Survivin对c-myc、核因子(NF)-κB基因的调控作用。方法 shRNA干扰沉默食管癌ECA109细胞系中Survivin基因表达,观察c-myc、NF-κB基因的表达变化,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果1.食管癌ECA109细胞系中,Survivin shRNA干扰下调Survivin表达后,c-myc mRNA及蛋白的表达水平明显降低;2.Survivin表达后,NF-κB mRNA及NF-κB总蛋白无明显变化,但其蛋白活化表达水平明显降低,NF-κB上游调控核因子κB抑制物激酶(IKK)α、IKKβmRNA表达下调;3.Survivin表达下调导致G2期延长,G2期细胞比例增加,细胞增殖阻滞。结论 Survivin在转录及蛋白水平对c-myc具有正向调控作用,Survivin表达下调抑制了IKKα、IKKβmRNA的表达及NF-κB的磷酸化。 展开更多
关键词 SURVIVIN SHRNA C-MYC 核因子-ΚB 核因子κB抑制物激酶α 核因子κB抑制物激酶β 免疫印迹法 流式细胞术
甲磺酸伊马替尼调控Telocytes对下颌下腺唾液分泌功能的影响
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作者 彭丽娟 黄悦 +3 位作者 严会文 高杰 胡蓉 苏敏 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期91-97,共7页
目的探讨甲磺酸伊马替尼调控Telocytes(TCs)对下颌下腺唾液分泌功能的影响。方法采用免疫荧光染色技术对TCs免疫标记物(C-kit/CD117、CD34)进行双标记染色,进而对小鼠下颌下腺内TCs进行定位。采用透射电子显微镜(TEM)显示小鼠下颌下腺内... 目的探讨甲磺酸伊马替尼调控Telocytes(TCs)对下颌下腺唾液分泌功能的影响。方法采用免疫荧光染色技术对TCs免疫标记物(C-kit/CD117、CD34)进行双标记染色,进而对小鼠下颌下腺内TCs进行定位。采用透射电子显微镜(TEM)显示小鼠下颌下腺内TCs的超微结构及其与周围细胞之间的关系。建立甲磺酸伊马替尼干预模型,实验小鼠分5组:正常组(共24只),用药1周、2周、3周、4周组(共24只),药物以80 mg/(kg·d)每日灌胃,免疫荧光显示,用药前后下颌下腺内TCs的变化;免疫印迹法(Western blotting)观察用药前后CD117、CD34及下颌下腺内α唾液淀粉酶(α-Amy)蛋白表达水平的变化。结果免疫荧光染色显示,TCs广泛分布于下颌下腺结缔组织内,胞体较小有突起(Tps),Tps相互连接成网络样结构,包绕着腺泡及导管,随甲磺酸伊马替尼干预时间延长,用药组Tps构成的网络样结构变稀疏。超微结构显示,Tps呈念珠状,与邻近组织紧密相连,周围可见胞外囊泡。随用药时间的增加Tps减少,TCs胞内囊泡增多,胞内细胞器减少。免疫印迹法显示,用药后CD117、CD34、α-Amy蛋白表达水平相应减少且互为正相关。结论小鼠下颌下腺内存在TCs,甲磺酸伊马替尼对TCs的干预可能会通过影响TCs的结构、免疫表型和细胞间通讯降低下颌下腺唾液分泌功能。 展开更多
关键词 唾液分泌 特络细胞 下颌下腺 甲磺酸伊马替尼 透射电子显微术 免疫印迹法 小鼠
肺癌患者血浆外泌体蛋白质组分析
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作者 钟荣斌 李捷 +9 位作者 易绍琼 王帅 吴晓洁 靳海荣 王领会 王启伟 郗永义 朱力 林艳丽 王友亮 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期58-62,133共6页
目的:探究肺癌患者与肺部良性结节病人血浆外泌体中蛋白质组的差异。方法:收集肺癌与肺部良性结节病人的术前血浆,随机选取肺腺癌病人血浆15例、肺鳞癌病人血浆10例作为实验组,肺部良性结节病人血浆5例作为对照组,采用超速离心法分离得... 目的:探究肺癌患者与肺部良性结节病人血浆外泌体中蛋白质组的差异。方法:收集肺癌与肺部良性结节病人的术前血浆,随机选取肺腺癌病人血浆15例、肺鳞癌病人血浆10例作为实验组,肺部良性结节病人血浆5例作为对照组,采用超速离心法分离得到外泌体,定量质谱鉴定分析肺癌病人与肺部良性结节病人血浆外泌体蛋白质表达的差异性,SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检验提取到的蛋白质。结果:共检测到血浆外泌体蛋白质253个,并初步确定其中18个在肺癌病人血浆外泌体中表达上调,8个在肺癌病人血浆外泌体中表达下调,免疫印迹法验证了上调蛋白质中的补体蛋白C4a。结论:鉴定出26个外泌体差异表达蛋白质,为肺癌早期诊断提供了新的候选分子。 展开更多
关键词 肺癌 血浆外泌体 蛋白质组 质谱 蛋白质免疫印迹法
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SerPinA1在肾癌中的表达及意义 预览
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作者 杨天时 于新 +2 位作者 王晶莹 谢风 何成彦 《中国实验诊断学》 2019年第1期141-143,共3页
目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂A1(serPinA1)在肾癌组织中的表达水平及其临床意义。方法应用二维色谱与质谱联用技术筛选丝氨酸蛋白酶抑制剂A1的表达差异,应用免疫组化技术验证丝氨酸蛋白酶抑制剂A1的差异表达。结果根据质谱鉴定结果,将丝... 目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂A1(serPinA1)在肾癌组织中的表达水平及其临床意义。方法应用二维色谱与质谱联用技术筛选丝氨酸蛋白酶抑制剂A1的表达差异,应用免疫组化技术验证丝氨酸蛋白酶抑制剂A1的差异表达。结果根据质谱鉴定结果,将丝氨酸蛋白酶抑制剂A1在癌组织与癌旁组织中的表达进行比较,其明显高表达于癌组织,且已在免疫印迹中得到证实。结论丝氨酸蛋白酶抑制剂对肾癌的诊断及治疗有重要价值。 展开更多
关键词 serPinA1蛋白 肾癌 二维色谱法 免疫印迹法
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miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子基因表达的靶向调控作用
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作者 余丹纯 聂玉强 +1 位作者 黄耀星 孙小娟 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2019年第1期48-51,共4页
目的探讨miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM)基因表达的靶向调控作用。方法运用生物信息学方法预测靶向调控ALCAM的miRNA;应用SYBR Green荧光定量PCR检测各个人胃癌细胞株中ALCA... 目的探讨miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM)基因表达的靶向调控作用。方法运用生物信息学方法预测靶向调控ALCAM的miRNA;应用SYBR Green荧光定量PCR检测各个人胃癌细胞株中ALCAM mRNA的表达情况,确定实验细胞株;通过PCR扩增合成含有miR-9结合位点的ALCAM mRNA 3′端非编码区(ALCAM 3′UTR)片段和在miR-9结合位点进行突变的ALCAM-mut mRNA 3′UTR,测序鉴定后将其克隆至报告基因载体psiCHECK-2质粒,分别命名为psiCHECK-2-ALCAM和psiCHECK-2-ALCAM-mut;分组转染重组质粒和miRNA,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达,SYBR Green荧光定量PCR和Western blotting检测ALCAM mRNA及蛋白表达水平。结果生物信息学分析筛选发现miR-9可能靶向调控ALCAM;ALCAM mRNA在各胃癌细胞株中的表达量明显高于人正常胃黏膜GES-1细胞株,且SGC-7901细胞株ALCAM mRNA的表达量最高(P<0.05),确定为实验细胞株;测序验证ALCAM 3′UTR和ALCAM-mut 3′UTR经PCR扩增合成成功;psiCHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-9 mimics细胞组的相对荧光素酶活性较psiCHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-NC、miR-9 inhibitor细胞组或空白对照组明显降低(P<0.05),且该组细胞ALCAM mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05);而psiCHECK-2-ALCAM-mut质粒共转染miR-NC、miR-9 mimics或miR-9 inhibitor细胞组的相对荧光素酶活性与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在SGC-7901中,miR-9通过与ALCAM mRNA 3′UTR结合而负性调控ALCAM基因的表达。 展开更多
关键词 胃癌 双荧光素酶报告基因系统 逆转录聚合酶链反应 蛋白质印迹法 MIR-9 活化白细胞黏附分子
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卵巢癌组织中miR-144-3p和SGK3表达水平及其临床意义研究 预览
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作者 张明铭 黄晶 白华 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2019年第1期141-146,共6页
目的检测卵巢癌组织中miR-144-3p与血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-inducibleprotein kinase 3,SGK3)的表达水平,并探究其临床意义。方法收集2010年1月至2013年5月本院手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12... 目的检测卵巢癌组织中miR-144-3p与血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-inducibleprotein kinase 3,SGK3)的表达水平,并探究其临床意义。方法收集2010年1月至2013年5月本院手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12例卵巢良性肿瘤组织及12例正常卵巢组织为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测卵巢癌组织中miR-144-3p的表达水平,采用蛋白质印迹法检测卵巢癌组织中SGK3的表达水平,分析卵巢癌组织中miR-144-3p、SGK3表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。结果卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平均显著低于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织(P均<0.05)。卵巢癌组织中SGK3表达水平均显著高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织(P均<0.05)。卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平与SGK3表达水平呈显著负相关(P<0.05)。卵巢癌组织中miR-144-3p、SGK3表达水平与患者的肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移情况及分化程度均有关(P均<0.05),与患者的年龄、有无腹水及组织学类型均无关(P均>0.05)。入选患者的中位生存期为40个月,术后1、3、5年的累计生存率分别为76.56%、53.13%、25.00%。miR-144-3p低表达患者术后1、3、5年的累计生存率分别为67.57%、37.84%、10.81%;miR-144-3p高表达患者术后1、3、5年的累计生存率分别为88.89%、74.07%、44.44%;miR-144-3p低表达和高表达患者的生存率比较差异具有显著性(P=0.001)。SGK3高表达患者术后1、3、5年的累计生存率分别为68.29%、39.02%、9.76%;SGK3低表达患者术后1、3、5年的累计生存率分别为91.30%、78.26%、52.17%;SGK3低表达和高表达患者的生存率比较差异具有显著性(P<0.001)。结论miR-144-3p、SGK3表达异常与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,有望成为临床治疗及评估预后的新靶点。 展开更多
关键词 上皮性卵巢癌 miR-144-3p 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3 实时荧光定量聚合酶链反应 蛋白质印迹
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HIV抗体不确定样本3种初筛结果与确证结果对比分析 预览
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作者 康晓珍 魏寿忠 林桂花 《当代医学》 2019年第10期74-76,共3页
目的通过化学发光法(CIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金快速检测法(RT)3种初筛试验分析免疫印迹试验(WB)HIV抗体不确定样本,探讨4种方法检测结果的关系。方法对WB试验HIV抗体不确定的样本31例,观察WB试验结果的条带分布情况及CIA、... 目的通过化学发光法(CIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金快速检测法(RT)3种初筛试验分析免疫印迹试验(WB)HIV抗体不确定样本,探讨4种方法检测结果的关系。方法对WB试验HIV抗体不确定的样本31例,观察WB试验结果的条带分布情况及CIA、ELISA、RT3种初筛试验检测结果,计算CIA、ELISA的S/c.o值与WB试验结果的符合率,分析初筛试验与WB试验条带分布的关系。结果WB试验结果的条带分布为:gp160(77.42%)、gp120(22.58%)、P24(22.58%)、p17(9.68%)、p51(3.23%)。CIA、ELISA、RT3种初筛试验与WB试验的符合率分别为87.10%、90.32%、70.97%。3种初筛试验结果与WB试验条带分布无相关性(x^2=0.859)。CIA、ELISA的S/c.o值均较低,分别为(11.14±11.03)、(5.88±3.82)。结论对于HIV抗体不确定样本,初筛试验大多为弱阳性反应并存在一定比例的漏检情况,初筛试验结果与WB试验条带分布无相关性,需引起临床重视。 展开更多
关键词 HIV抗体不确定 蛋白免疫印迹法 化学发光法 酶联免疫吸附试验 胶体金快速检测法
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粒细胞集落刺激因子改善阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆功能及抗炎作用机制
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作者 苏翔 张臻 +4 位作者 杨霖璟 裘益辉 宋成龙 陈娟燕 宋水江 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-34,共6页
目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知障碍的改善作用及其对脑内炎症反应的影响。方法 45只雄性SD大鼠,随机分为3组,包括假手术组、模型组、G-CSF组,每组15只。采用β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)复制AD大鼠模型,... 目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对阿尔茨海默病(AD)大鼠认知障碍的改善作用及其对脑内炎症反应的影响。方法 45只雄性SD大鼠,随机分为3组,包括假手术组、模型组、G-CSF组,每组15只。采用β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)复制AD大鼠模型,并给予G-CSF治疗。观察并比较大鼠的学习记忆功能及脑组织病理学变化。采用Western blotting检测核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化p-38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白的表达,采用Real-time PCR检测i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1βmRNA水平。结果模型组大鼠神经细胞数量明显减少,细胞核固缩明显,核仁不清。G-CSF组大鼠脑组织神经细胞核固缩现象均有显著改善。假手术组、模型组、G-CSF组逃避潜伏期分别为(35.68±6.73) s、(57.92±7.35) s及(40.27±8.91) s;目标象限游泳时间分别为54.72%±4.22%、36.73%±3.21%及44.68%±4.01%;穿过平台次数分别为(8.7±2.1)次、(3.9±1.6)次及(6.5±1.7)次;与模型组相比,假手术组、G-CSF组的逃避潜伏期均显著缩短,目标象限游泳时间显著增加,穿过平台次数显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组、模型组、G-CSF组NF-κB p65蛋白表达水平为0.144±0.033、0.502±0.035及0.473±0.061;pp38 MAPK蛋白水平为0.194±0.021、0.511±0.039及0.266±0.048,与模型组相比,假手术组、G-CSF组NF-κB p65、pp38MAPK蛋白水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,假手术组、G-CSF组i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的蛋白和mRNA水平显著降低(P<0.05)。结论 G-CSF具有良好的抑制AD模型大鼠脑神经细胞凋亡,改善大鼠学习记忆功能障碍的作用,其作用可能通过抑制p38MAPK和NF-κB p65的信号通路的过度激活,下调i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β等炎性因子的表达,抑制脑内神经炎症状态而实现。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 阿尔茨海默病 核因子κB P65 p-38丝裂原活化蛋白激酶 免疫印迹法 大鼠
天麻素通过蛋白激酶B/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制H9c2心肌细胞凋亡
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作者 张玲 杨萍 +4 位作者 姜永良 普俞维 谢立秋 孙林 陆地 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-48,共9页
目的采用血清剥夺/复灌的大鼠H9c2心肌细胞模拟心肌缺血/再灌注损伤(I/R),从细胞层面探讨天麻素(gastrodin)抗H9c2心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞随机分为对照组、血清剥夺(0.5~6 h)处理组、血清剥夺/复灌(2/4 h... 目的采用血清剥夺/复灌的大鼠H9c2心肌细胞模拟心肌缺血/再灌注损伤(I/R),从细胞层面探讨天麻素(gastrodin)抗H9c2心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法体外培养H9c2心肌细胞随机分为对照组、血清剥夺(0.5~6 h)处理组、血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组、天麻素(10、20和40μmol/L)处理组、天麻素(20μmol/L)+渥曼青霉素(wortmannin)(1μmol/L)处理组、wortmannin (1μmol/L)处理组。采用免疫印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt以及凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡;通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Caspase-3、Bcl-2和Bax的mRNA表达变化;采用免疫荧光双标记法检测细胞内p-Akt蛋白水平表达的变化。结果血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理诱导细胞凋亡水平增加;加入不同浓度天麻素处理,与血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理组比较,凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值上调(P<0.05),基因转录水平检测的Caspase-3和Bax表达量降低,Bcl-2表达量上调((P<0.05),流式细胞术凋亡检测结果也同样显示,天麻素能抑制血清剥夺/复灌(2/4 h)诱导的细胞凋亡(P<0.05);同时,血清剥夺(0.5~6 h)和血清剥夺/复灌(2/4 h)处理能抑制Akt/p38MAPK信号通路;加入不同浓度的天麻素(10、20和40μmol/L)处理后,p-Akt的表达水平增多,p-p38MAPK蛋白表达减少(P <0.05)。加入Akt的特异性抑制剂wortmannin(1μmol/L)处理后,天麻素对上述因子的调控作用被反转(P<0.05)。结论在H9c2心肌细胞中,天麻素通过激活Akt/p38MAPK信号通路,抑制血清剥夺/复灌诱导的细胞凋亡,从而发挥抗心肌I/R损伤的保护作用。 展开更多
关键词 天麻素 心肌缺血/再灌注损伤 P38丝裂原活化蛋白激酶 免疫印迹法 免疫荧光双标记法 流式细胞术 大鼠
刺梨黄酮对阿霉素所致心肌细胞毒性的保护作用
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作者 院慧芳 张永春 +2 位作者 蔡新华 徐萍 陈辉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-55,共7页
目的探讨刺梨黄酮(FRRT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的影响及机制。方法利用1~3 d新生大鼠(每次26只)原代分离培养心肌细胞和H9C2心肌细胞系,5μmol/L DOX孵育心肌细胞,建立心肌细胞毒性模型,并用FRRT干预,透射电子显微镜观察各组H9C... 目的探讨刺梨黄酮(FRRT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的影响及机制。方法利用1~3 d新生大鼠(每次26只)原代分离培养心肌细胞和H9C2心肌细胞系,5μmol/L DOX孵育心肌细胞,建立心肌细胞毒性模型,并用FRRT干预,透射电子显微镜观察各组H9C2心肌细胞株超微结构。利用免疫荧光技术和Western blotting检测Bax、P53和Bcl-2蛋白的表达,并对Western blotting检测结果进行半定量分析。结果透射电子显微镜观察显示,DOX组细胞内呈现大量的自噬泡和脂褐素,细胞状态差;FRRT干预后,心肌细胞未见脂褐素的结构,有少量自噬泡。免疫荧光检测显示,DOX组Bax和P53呈阳性表达,Bcl-2呈弱阳性表达;FRRT+DOX组Bax和P53表达不明显,Bcl-2呈强阳性表达。Western blotting检测结果显示,5μmol/L DOX孵育心肌细胞18 h时,Bax蛋白表达水平达到最高,组间比较,差异有统计学意义(*P<0.01)。Bax蛋白在DOX组表达增加,FRRT+DOX组表达减少,组间比较,差异具有统计学意义(*P<0.05);P53蛋白在DOX组表达增加,FRRT+DOX组表达减少,组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);Bcl-2蛋白在DOX组表达减少,FRRT+DOX组表达增加,组间比较,差异具有统计学意义(*P<0.05,**P<0.01)。结论 FRRT通过下调DOX引起的心肌细胞凋亡作用,进而发挥对心肌细胞的保护作用。 展开更多
关键词 心肌细胞 刺梨黄酮 阿霉素 免疫荧光 免疫印迹法 大鼠
MicroRNA-940在乳腺癌中的表达变化及作用机制
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作者 薛世航 陆振一 +1 位作者 张同成 朱从伦 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期56-62,共7页
目的探讨microRNA-940(miR-940)在乳腺癌组织和细胞中的表达以及对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其相关分子机制。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测2016年1月~2017年1月我院手术切除的78例患者的乳腺癌组织、癌... 目的探讨microRNA-940(miR-940)在乳腺癌组织和细胞中的表达以及对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其相关分子机制。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测2016年1月~2017年1月我院手术切除的78例患者的乳腺癌组织、癌旁组织和人乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-231、BT-549及人正常乳腺细胞系MCF-10 A中miR-940的表达情况。在乳腺癌细胞系MDA-MB-231中利用脂质体LipofectaminsTM2000转染miR-940模拟物上调miR-940的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活性的改变,小室侵袭及迁移实验(transwell)检测细胞侵袭、迁移能力的改变。生物学信息法预测miR-940的可能作用靶基因,双荧光素酶报告实验检测miR-940与CXC趋化因子受体2 (CXCR2)的3’UTR区结合情况,Western blotting检测miR-940对CXCR2蛋白表达的影响。结果 miR-940在乳腺癌组织和细胞中表达明显降低(P<0.01),并且miR-940的表达与TNM分期和淋巴结转移密切相关(P<0.01)。上调MDA-MB-231细胞miR-940表达后,细胞的增殖活性明显下降(P<0.01),侵袭及迁移能力明显下降(P<0.01)。双荧光素酶报告显示,miR-940可与CXCR2的3’UTR区特定序列结合显著抑制荧光素酶活性(P<0.01),上调miR-940后细胞中CXCR2蛋白的表达均明显下降(P<0.01)。结论miR-940在乳腺癌中的表达降低,miR-940可以通过靶向CXCR2抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。 展开更多
关键词 MicroRNA-940 乳腺癌 CXC趋化因子受体2 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法
含微乳头结构肺腺癌CT重建征象特征及上皮间质转化相关基因表达
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作者 周吉航 续力云 +3 位作者 陆畅畅 黄燕燕 王昕晨 乐涵波 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期63-71,共9页
目的探讨含微乳头结构(MPP)肺腺癌具有的CT重建征象特征,上皮间质转化(EMT)相关分子表达情况以及它们之间的关系。方法选取含MPP侵袭性肺腺癌(IAC) 37例、不含MPP 80例及其对应的癌旁组织,比较临床病理特征、CT重建征象;应用Real-time ... 目的探讨含微乳头结构(MPP)肺腺癌具有的CT重建征象特征,上皮间质转化(EMT)相关分子表达情况以及它们之间的关系。方法选取含MPP侵袭性肺腺癌(IAC) 37例、不含MPP 80例及其对应的癌旁组织,比较临床病理特征、CT重建征象;应用Real-time PCR及Western blotting检测EMT有关标识分子表达变化情况。结果含MPP组淋巴结转移比例较高、毛刺、胸膜凹陷征、实性及分叶比例较高(均P<0.001)。含MPP组E-钙黏蛋白(cadherin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达均下调(P<0.05),N-cadherins、波形蛋白(vimentin)、Snail及转化生长因子(TGF)-β表达均上调(P<0.05)。有毛刺组E-cadherin及β-catenin表达下调者所占比例较高,而vimentin表达上调者所占比例较高(均P<0.05);实性结节组E-cadherin表达下调者所占比例较高,而N-cadherin及vimentin表达上调者所占比例较高(均P<0.05)。结论含MPP浸润性肺腺癌具有特征性CT重建征象,发生了EMT改变。其CT重建征象与EMT相关分子表达存在联系。 展开更多
关键词 微乳头结构 上皮间质转化 肺腺癌 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法
HSP70在牦牛肠道中的分布与变化规律
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作者 廖博 崔燕 +4 位作者 杨雪 何俊峰 宋亮丽 杨晓晴 刘鹏刚 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1735-1742,共8页
为了探索HSP70在牦牛肠道组织中的分布与变化规律,选择6头份健康成年(3~6岁)牦牛的肠道组织,采用免疫组织化学(IHC)、蛋白免疫印迹(WB)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HSP70在牦牛十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠组织... 为了探索HSP70在牦牛肠道组织中的分布与变化规律,选择6头份健康成年(3~6岁)牦牛的肠道组织,采用免疫组织化学(IHC)、蛋白免疫印迹(WB)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HSP70在牦牛十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠组织中的分布与变化规律。免疫组织化学结果显示,HSP70在牦牛小肠的黏膜层、黏膜下层和肌层中均有表达,其中小肠黏膜上皮的柱状细胞呈强阳性表达,杯状细胞未见表达;小肠腺的肠腺细胞和肌层的平滑肌细胞也呈阳性表达,阳性反应主要分布于阳性细胞的细胞质和细胞核。HSP70在大肠中的定位表达与小肠相似,在大肠壁黏膜层、黏膜下层和肌层三层结构中也均有表达,其阳性反应主要位于黏膜上皮和固有层内散在分布的结缔组织细胞中,而固有层内大肠腺细胞仅在细胞核有表达,细胞质呈阴性。蛋白免疫印迹和免疫组化积分光密度值分析得出,从小肠的前端到大肠末端,HSP70的表达呈先增高后降低的趋势,其中在盲肠中的表达量达到峰值,且盲肠和结肠中HSP70的相对蛋白表达量极显著高于其他肠段(P〈0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,HSP70mRNA在盲肠中的相对转录量最高,分别是十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠的2、1.68、1.06、1.43和1.52倍。本试验显示牦牛肠道中HSP70呈广泛性阳性反应,HSP70基因和HSP70蛋白在牦牛小肠和大肠中具有不同的表达模式,揭示了HSP70在牦牛小肠和大肠中所发挥生物学作用的异同,为HSP70在反刍动物组织中的表达和功能研究提供了资料。 展开更多
关键词 牦牛 肠道 HSP70 免疫组织化学 蛋白免疫印迹法 实时荧光定量PCR
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稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体GluA1亚基单克隆细胞株的构建
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作者 李炯 张吉凤 +3 位作者 赵波 蔡振彬 朱肖楠 郭国庆 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期591-597,共7页
目的构建稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体GluA1亚基的细胞株。方法PCR扩增GluA1目的基因,并将其装载至慢病毒表达载体PLV. 0-绿色荧光蛋白(GFP),采用4质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒。嘌呤霉素抗性筛选细... 目的构建稳定表达α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体GluA1亚基的细胞株。方法PCR扩增GluA1目的基因,并将其装载至慢病毒表达载体PLV. 0-绿色荧光蛋白(GFP),采用4质粒系统转染HEK293T细胞包装慢病毒。嘌呤霉素抗性筛选细胞,挑选单克隆细胞株用Real-time PCR、Western blotting、免疫荧光和全细胞膜片钳鉴定GluA1的表达与功能。结果菌落PCR鉴定扩增产物与GluA1分子量(2724 bp)一致,经测序插入慢病毒载体序列与GluA1序列一致;慢病毒感染并抗性筛选的HEK293T细胞经Real-time PCR、Western blotting和免疫荧光实验证明,GluA1在过表达GluA1组的HEK293T细胞正确表达,空载体组不表达。单克隆挑选的稳定细胞株免疫荧光染色显示,各细胞膜表面GluA1蛋白表达相对一致。单克隆细胞在电压钳模式下,细胞外液加10 mmol/L谷氨酸诱导,空载体组检测不到电信号,而过表达GluA1组可记录5~40 p A电信号。结论成功构建了稳定表达AMPA受体GluA1亚基的HEK293T细胞株。 展开更多
关键词 GluA1亚基 慢病毒 单克隆 细胞株 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法
不良心理应激对人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤生长及表皮生长因子受体、磷酸化蛋白激酶B、血管内皮生长因子蛋白表达的影响
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作者 金玲燕 王弯弯 +1 位作者 张红 陈琦 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期617-623,共7页
目的通过观察不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤的体积、重量和瘤体组织中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况的差异,探讨其对卵巢癌生长的影响及可能的分子机制。方法购... 目的通过观察不良心理应激人卵巢癌荷瘤裸鼠皮下移植瘤的体积、重量和瘤体组织中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况的差异,探讨其对卵巢癌生长的影响及可能的分子机制。方法购置4~6周龄的雌性BALB/c裸鼠,称重,随机分两组,每组12只。A组:荷瘤组皮下移植人卵巢癌组织瘤块,不给予应激; B组:荷瘤+应激组皮下移植人卵巢癌组织瘤块,给予应激。定期测量皮下移植瘤的体积,结束应激实验后的第2天,处死全部组别(A组、B组)裸鼠,剥离肿瘤予以称重,利用免疫组织化学及Western blotting方法对A、B两组皮下移植瘤组织中的EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达情况进行检测。结果荷瘤+应激组皮下移植瘤体积及其重量显著高于荷瘤组(P 〈0. 01);免疫组织化学实验提示,荷瘤+应激组中皮下移植瘤组织中的EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达水平高于荷瘤组(P 〈0. 05); Wester blotting提示,荷瘤+应激组皮下移植瘤组织中EGFR、p-Akt、VEGF蛋白表达水平显著高于荷瘤组(P 〈0. 01)。结论不良心理应激可能通过EGFR及其介导的下游PI3K/Akt信号通路来促进卵巢癌的发生、发展。 展开更多
关键词 不良心理应激 卵巢癌 表皮生长因子受体 磷酸化蛋白激酶B 血管内皮生长因子 免疫印迹法 小鼠
MicroRNA-145通过丝裂原活化蛋白激酶和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶通路调控肺癌A549细胞系转移及侵袭
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作者 夏迎晨 甄杰 +2 位作者 叶飞 郭惠明 张丽娟 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期630-635,共6页
目的探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路的作用。方法将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物(mimics)组和neg... 目的探讨microRNA-145(miR-145)对非小细胞肺癌A549细胞转移、侵袭及对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路的作用。方法将非小细胞肺癌A549细胞分成miR-145模拟物(mimics)组和negative-mimics组(miR-NC)以及antago miR-145组(抑制剂组)和antago miR control组(antago-NC),采用Transwell迁移实验及基质胶侵袭实验等检测miR-145对人非小细胞肺癌A549迁移、侵袭能力的影响; Western blotting方法分析miR-145对MAPK和PI3K/AKT通路的影响。此外,采用细胞外调节蛋白激酶(ERK)及AKT的通路抑制剂分别作用于A549细胞系,检测A549细胞迁移、侵袭能力的改变。结果 miR-145 mimics组穿过细胞数(90. 67±10. 33)明显少于miR-NC组(175. 33±23. 67),miR-145 mimics组穿过基质胶的细胞数(153. 33±22. 33)少于miR-NC组(77. 33±13. 67),P 〈0. 05; antago-NC组通过小室的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量明显少于antago miR-145组(P 〈0. 05),结果说明,miR-145具有抑制非小细胞肺癌A549细胞迁移、侵袭的能力; miR-145 mimics转染可分别抑制A549细胞中90%、78%以及73%的ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,antago miR-145转染可促进A549细胞中ERK1/2、AKT的ser-473位点和thr-308位点的磷酸化,增加115%、125%以及129%,而当抑制MAPK通路及PI3K/AKT通路的激活后,A549细胞的转移及侵袭能力下降。结论 miR-145通过MAPK和PI3K/AKT通路调控肺癌A549细胞转移及侵袭。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 A549 MIR-145 转移 侵袭 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法
二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用
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作者 李浩明 彭敏 +4 位作者 杨清清 于婷婷 秦建兵 韩笑 金国华 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期419-423,共5页
目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋亡细胞的比... 目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋亡细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞;流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase-3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 二十二碳六烯酸 胶质瘤 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 免疫印迹法 大鼠
2012—2016年郴州市无偿献血人群HIV抗体不确定结果的分析 预览
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作者 曾永会 黎俊宏 《传染病信息》 2018年第2期154-156,共3页
目的 分析2012—2016年郴州市无偿献血人群血液标本HIV抗体筛查(包括初筛和复检)呈阳性并经蛋白质印迹实验确证后为不确定结果的血清学特点,为临床安全输血、用血提供依据。方法 对2012年1月1日—2016年12月31日郴州市中心血站筛查为HI... 目的 分析2012—2016年郴州市无偿献血人群血液标本HIV抗体筛查(包括初筛和复检)呈阳性并经蛋白质印迹实验确证后为不确定结果的血清学特点,为临床安全输血、用血提供依据。方法 对2012年1月1日—2016年12月31日郴州市中心血站筛查为HIV抗体阳性反应的233例血液标本进行蛋白质印迹确证实验,分析不确定标本的带型。结果 233例标本经过确证实验发现有43例(18.45%)为阳性,107例(45.92%)为阴性,83例(35.62%)为不确定。在不确定标本中,男54例(65.06%),女29例(34.94%);<20、20~39、40~59岁年龄组不确定标本结果分别为2、54和27例。不确定带型中出现单一和组合条带共9种,单一带型中以p24最多,为53例(63.86%),组合条带中以p17和p24居多,为10例(12.05%)。其中11例在4周之后完成了随访复检,结果有4例不确定样品转为阳性(其中2例的带型为p24,1例为p24和gp160,1例为p24和p66),其余7例条带无进展。结论 血站送检的标本经确证后阳性率较低;阴性和不确定标本,可进行核酸检测,或4周后随访加以确证。 展开更多
关键词 无偿献血人群 蛋白质印迹 不确定结果
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干预脑脂质结合蛋白表达对神经干细胞分化作用的影响
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作者 于婷婷 李浩明 +2 位作者 金国华 韩笑 秦建兵 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期424-430,共7页
目的探讨脑脂结合蛋白(BLBP)在大鼠海马神经干细胞(NSCs)向神经元分化中的作用。方法构建BLBP过表达腺病毒和干扰慢病毒载体,并从大鼠胚胎海马组织中分离培养神经干细胞,采用Nestin免疫荧光鉴定NSCs;将体外培养的NSCs分为4组:腺病... 目的探讨脑脂结合蛋白(BLBP)在大鼠海马神经干细胞(NSCs)向神经元分化中的作用。方法构建BLBP过表达腺病毒和干扰慢病毒载体,并从大鼠胚胎海马组织中分离培养神经干细胞,采用Nestin免疫荧光鉴定NSCs;将体外培养的NSCs分为4组:腺病毒阴性对照组(Ad-NC组),BLBP过表达腺病毒组(Ad-BLBP组),慢病毒阴性对照组(LV-NC-RNAi组)和BLBP干扰慢病毒感染组(LV-BLBP-RNAi组)。Real-time PCR和Western blotting检测各组细胞中BLBP表达;病毒感染4 d后免疫荧光检测分化细胞中βⅢ微管蛋白(Tuj1)阳性神经元数量。结果 Ad-BLBP组较Ad-NC组NSCs分化为神经元的数量少,突起短而少;LV-BLBP-RNAi组较LV-NC-RNAi组NSCs分化为神经元的数量明显增多,突起多而长。结论下调BLBP的表达能够促进体外培养的NSCs向神经元分化。 展开更多
关键词 脑脂质结合蛋白 神经干细胞 分化 神经元 免疫印迹法 大鼠
抗EGFRvⅢ单链抗体的原核表达条件的优化及纯化
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作者 杨友辉 刘香香 +4 位作者 吴琼 刘亭 何彬 李勇军 兰燕宇 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第7期3207-3213,共7页
为了构建抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,优化抗EGFRvⅢ单链抗体在大肠杆菌中的表达条件,并建立纯化方法。构建抗EGFRvⅢ单链抗体的pET-22b(+)重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,研究不同温度、不同浓度诱导剂对目的蛋白表达效... 为了构建抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,优化抗EGFRvⅢ单链抗体在大肠杆菌中的表达条件,并建立纯化方法。构建抗EGFRvⅢ单链抗体的pET-22b(+)重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,研究不同温度、不同浓度诱导剂对目的蛋白表达效率的影响。用Ni^2+亲和层析纯化蛋白,并通过免疫印迹对其进行鉴定。抗EGFRvⅢ单链抗体重组质粒经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,菌落PCR和测序验证,结果显示重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明BL21表达的目的蛋白相对分子量为29kD左右,与理论分子量一致,免疫印迹结果表明在29kD左右出现一条特异性条带,与SDS-PAGE结果一致。15℃和0.6μmol/L的诱导剂为抗EGFRvⅢ单链抗体的最佳诱导条件。本研究成功构建了抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,并获得了大肠杆菌表达单链抗体的最佳诱导条件。 展开更多
关键词 条件优化 单链抗体 免疫印迹 亲和层析 原核表达
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