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MiR-200c调节人结肠癌SW480细胞迁移与侵袭的分子机制研究
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作者 何平 宋辉 +3 位作者 梁杰雄 邵天松 张钊 李洋 《实用肿瘤杂志》 CAS 2019年第3期210-214,共5页
目的探究miR-200c对人结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的影响及其相关机制。方法将SW480细胞分为类似物转染组(转染miR-200c类似物)、抑制物转染组(转染miR-200c核酸抑制剂)、类似物阴性对照组(转染miR-200c类似物的无义序列)、抑制物阴性对... 目的探究miR-200c对人结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的影响及其相关机制。方法将SW480细胞分为类似物转染组(转染miR-200c类似物)、抑制物转染组(转染miR-200c核酸抑制剂)、类似物阴性对照组(转染miR-200c类似物的无义序列)、抑制物阴性对照组[加入miR-200c核酸抑制剂的载体(不含miR-200c核酸抑制剂)]以及空白组(不进行任何处理)。实时定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测12 h和24 h转染效率。细胞划痕实验和transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。Western blot法检测转染后β-catenin和E-cadherin的表达。结果细胞划痕实验显示,类似物转染组12 h和24 h后伤痕宽度均高于类似物阴性对照组(均P<0.05),抑制物转染组均低于抑制物阴性对照组(均P<0.05)。Transwell实验显示,与类似物阴性对照组和抑制物阴性对照组比较,类似物转染组24 h和48 h通过8μm孔径的细胞数减少,抑制物转染组增多(均P<0.05)。类似物转染组β-catenin和E-cadherin的表达均升高,抑制物转染组各蛋白表达均下降(均P<0.05)。结论 miR-200c可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制SW480细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 结肠肿瘤/病理学 微RNAs 细胞运动 肿瘤侵润 Wnt蛋白质类/代谢 β连环素/代谢 信号传导 肿瘤细胞 培养的
miR-375对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能的抑制作用及其机制 预览
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作者 朱江 任梅 许治国 《中华实验眼科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期695-702,共8页
背景研究表明miR-375抑制肿瘤细胞的增生、凋亡、迁移和黏附,并对肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)含量的变化进行调控,进而影响血管的生成,但miR-375是否于预视网膜新生血管的形成鲜见报道。目的探讨miR-375对缺氧诱导的人视网... 背景研究表明miR-375抑制肿瘤细胞的增生、凋亡、迁移和黏附,并对肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)含量的变化进行调控,进而影响血管的生成,但miR-375是否于预视网膜新生血管的形成鲜见报道。目的探讨miR-375对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRCECs)功能的影响及其可能的作用机制。方法用IMDM完全培养液培养HRCECs,并将细胞分为正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2+miR-375拟似剂组、CoCl2+miR-375拟似剂对照组、CoCl2+miR-375抑制剂组和CoCl2+miR-375抑制剂对照组,待细胞生长至对数生长期后用200μmol/LCoCl2处理HRCECs以制备缺氧细胞模型;制备终浓度为50nmol/L的miRNA-脂质体复合物和小干扰RNA(siRNA)-脂质体复合物将miR-375和卷曲蛋白4(FZD4)siRNA转染各组细胞48h。采用MTT法检测各组细胞的增生情况(A值)并计算增生倍数;采用Transwell小室法检测各组迁移的细胞数目;采用ELISA法检测细胞培养液中VEGF和血管内皮钙黏蛋白(VE—cadherin)含量;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR.375mRNA和FZD4mRNA的相对表达量变化;采用Westernblot法分析细胞中Wnt通路相关蛋白的相对表达量变化;采用Matrigel小管形成实验检测细胞的体外形成血管的长度。将培养的细胞分为正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2+mock组和CoCl2+FZD4siRNA组,采用荧光素酶报告基因法探测miR-375靶基因FZD4的表达。结果miR-375处理组miR-375mRNA相对表达量明显高于正常对照组,miR-375拟似剂组细胞中miR-375mRNA相对表达量明显高于miR-375拟似剂对照组,miR-375抑制剂组细胞中miR-375mRNA相对表达量明显低于miR-375抑制剂对照组,差异均有统计学意义(t=-19.237、8.764,均P〈0.01),提示miR-375的转染效率较高。正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2+miR-375拟似剂组、CoCl2+miR-375拟似剂对照组、CoCl2+miR-375抑制剂� 展开更多
关键词 微小RNA/生理 视网膜 血管内皮细胞 病理性新生血管形成 信号转导/生理 Wnt相关蛋白/代谢 细胞增生/药物作用 基因表达调控
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Wnt抑制分子Dkk3、SFRP1和SFRP4在子宫内膜癌中的表达分析 被引量:2
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作者 韩翠香 晋雅凌 白治英 《实用肿瘤杂志》 CAS 2016年第6期541-545,共5页
目的研究Dickkopf相关蛋白3(Dickkopf-related protein 3,Dkk3)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)和SFRP4在子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)发生、发展中的作用及病理相关性。方法收集EC标... 目的研究Dickkopf相关蛋白3(Dickkopf-related protein 3,Dkk3)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)和SFRP4在子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)发生、发展中的作用及病理相关性。方法收集EC标本58例,子宫内膜正常组织30例。用RT-PCR、Western blot法检测组织中Dkk3、SFRP1和SFRP4的表达变化。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜癌组织和正常组织比较,Dkk3、SFRP1和SFPRP4的mRNA及蛋白表达水平降低,并随着组织分期程度的升高而降低(均P〈0.05)。结论 Dkk3、SFRP1和SFRP4与EC的分期呈负相关,可考虑作为EC的分期标志。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤/病理学 肿瘤分期 Wnt蛋白质类/代谢 甲基化 基因 肿瘤抑制 胞间信号肽类和蛋白质类 膜蛋白质类 逆转录聚合酶链反应
姜黄素对人胚胎干细胞向视网膜色素上皮样细胞定向诱导效率的促进作用 预览 被引量:2
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作者 殷秋菊 吴一湘 +3 位作者 于莉 刘勋 杨春波 李筱荣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期774-780,共7页
背景 来源于多能干细胞的视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)和视网膜色素变性(RP)是近年研究热点,但RPE体外分化诱导效率低下、成本高等一直是难以克服的障碍.研究表明,姜黄素(curcumin)可促进人胚胎干... 背景 来源于多能干细胞的视网膜色素上皮(RPE)细胞移植治疗年龄相关性黄斑变性(AMD)和视网膜色素变性(RP)是近年研究热点,但RPE体外分化诱导效率低下、成本高等一直是难以克服的障碍.研究表明,姜黄素(curcumin)可促进人胚胎干细胞(ESCs)的定向诱导分化,但其对人ESCs向RPE样细胞的定向分化的作用机制尚不清楚. 目的 研究体外培养的人ESCs向视网膜色素上皮(RPE)样细胞的诱导分化过程,探讨curcumin对人ESCs向RPE细胞定向诱导效率的影响及其机制. 方法 将人ESCs株进行体外培养,将处于对数生长期的ESCs传代至基质膜(Matrigel)包被的6孔板中,以mTeSRTM1培养基培养至过渡融合状态后更换为含质量分数87% KnockOutTM DMEM、质量分数10%血清替代物(SR)、质量分数1%非必需氨基酸和质量分数1%谷氨酰胺及青链霉素双抗的分化诱导体系,同时加入终浓度为1 μmol/L的curcumin处理24 h,对照组培养基中未加入curcumin.分别于诱导培养3周及5周时提取细胞RNA及蛋白,采用荧光定量逆转录PCR(RT-PCR)法检测诱导RPE(iRPE)细胞中干细胞标志物、RPE相关标志物及Wnt/β-catenin信号通路相关因子mRNA的相对表达水平;采用Western blot法及免疫荧光染色检测人ESCs、iRPE细胞及人RPE细胞中相关标志物蛋白的表达水平;通过细胞吞噬实验检测iRPE细胞的吞噬功能. 结果 Curcumin组诱导后3周时即可见iRPE细胞色素化,随着时间延长色素化程度更高,而对照组细胞在诱导后5周时开始出现细胞色素化.RT-PCR结果显示,curcumin诱导后3周及5周,curcumin组iRPE细胞中ESCs标志物NANOG mRNA的相对表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(t=13.086,P=0.022;t=34.186,P=0.004),而RPE标志物Pax6、RX、CRALBP及RPE65 mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01).Western blot检测显示,CRALBP、RPE65和MITF蛋白� 展开更多
关键词 姜黄素 胚样小体/药物作用 干细胞 细胞分化/药物作用 基因表达/药物作用 眼色素上皮 Wnt蛋白/代谢
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