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缺氧诱导因子1α对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制
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作者 胡德林 余又新 +8 位作者 梁荣 周舜英 段声梁 蒋智永 孟承颖 蒋薇 王欢 孙业祥 方林森 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期209-217,共9页
目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字... 目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组,每组3孔。阴性对照组和HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒和含HIF-1α干扰序列1、干扰序列2、干扰序列3的GV248重组质粒,空白对照组细胞仅加入脂质体2000。转染24h后,采用实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法(检测方法下同)分别检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白的表达,选取干扰效率最高的序列。(2)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组和HIF-1α低表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组和HIF-1α低表达组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒及实验(1)中筛选的低表达HIF-1α重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(3)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α高表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组、HIF-1α高表达组细胞经脂质体2000分别转染GV230空质粒和HIF-1α高表达重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(4)取实验(1)中3组、实验(2)中3组细胞,检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平。对数据行单因素方差分析、t检验。结果培养4d,细胞呈梭形,成功培养出大鼠血管内皮细胞。(1)HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的干扰效率分别为47.66%、45.79%、62. 展开更多
关键词 缺氧诱导因子 α亚基 血管 通透性 内皮细胞 肌球蛋白轻链激酶 磷酸化肌球蛋白轻链 带状闭合蛋白1
乌司他丁调控P38 MAPK信号通路降低大鼠肺缺血再灌注损伤血气屏障通透性的作用及机制研究 预览
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作者 王甜甜 林飞 +6 位作者 潘灵辉 钱卫 何义 肖靖远 梁芳特 刘豪 熊瑶 《广西医科大学学报》 CAS 2019年第3期332-336,共5页
目的:研究乌司他丁对肺缺血再灌注损伤(LIRI)大鼠的保护作用及作用机制。方法:将24只SD大鼠随机分为4组,即正常通气组、生理盐水组、LIRI组和乌司他丁+LIRI组,每组6只。采用苏木精—伊红(HE)染色法评价缺血再灌注后肺组织的损伤程度,通... 目的:研究乌司他丁对肺缺血再灌注损伤(LIRI)大鼠的保护作用及作用机制。方法:将24只SD大鼠随机分为4组,即正常通气组、生理盐水组、LIRI组和乌司他丁+LIRI组,每组6只。采用苏木精—伊红(HE)染色法评价缺血再灌注后肺组织的损伤程度,通过检测肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白浓度、伊文思蓝漏出量及肺组织中紧密连接蛋白-1(ZO-1)表达评估肺血气屏障通透性,Western blotting法检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)的表达。结果:与正常通气组和生理盐水组比较,LIRI组肺组织形态学和微结构发生明显改变,肺损伤评分明显升高(P<0.05),肺血气屏障通透性明显增强(P<0.05),p-p38 MAPK的表达水平显著增高(P<0.05)。给予乌司他丁预处理后,肺组织形态学和微结构发生明显改善,肺损伤评分明显降低,肺血气屏障通透性明显减弱,p-p38 MAPK表达水平明显下降(P<0.05)。正常通气组与生理盐水组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:乌司他丁可减轻LIRI,降低肺血气屏障通透性,其机制可能与抑制p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 乌司他丁 肺缺血再灌注损伤 肺血气屏障通透性 p38 MAPK信号通路 紧密连接蛋白-1
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脑血疏口服液对脑出血模型大鼠脑组织ZO-1和AQP4表达的影响 预览
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作者 王晓峰 田超 +5 位作者 张岩 袁梦晨 张涵莱 王丽琴 安娜 高永红 《中国医药导报》 CAS 2019年第16期8-12,共5页
目的观察脑血疏口服液对大鼠脑出血模型脑组织血脑屏障紧密连接蛋白1(ZO-1)、水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法采用尾状核注射胶原蛋白酶Ⅶ建立脑出血模型。采用随机数字表法将8周龄SPF级健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、脑血疏... 目的观察脑血疏口服液对大鼠脑出血模型脑组织血脑屏障紧密连接蛋白1(ZO-1)、水通道蛋白4(AQP4)表达的影响。方法采用尾状核注射胶原蛋白酶Ⅶ建立脑出血模型。采用随机数字表法将8周龄SPF级健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、脑血疏组,每组8只。脑血疏组按照0.27 m L/(100 g·d)进行灌胃给药,假手术组及模型组分别给予等量生理盐水。造模后7 d,HE染色法观察大鼠血肿周围组织病理形态学改变,透射电镜法观察超微结构。Western blot检测各组血肿周围脑组织ZO-1、AQP4的表达变化。结果与假手术组比较,脑出血7 d模型组HE染色出血灶大片坏死,血肿周围细胞肿胀变性,核结构不清晰;透射电镜中可见脑血管与周围组织间隙增宽,且星形胶质细胞足突水肿明显;模型组大鼠脑组织中ZO-1蛋白表达量降低,AQP4蛋白表达量增加(P <0.05)。与模型组比较,脑血疏组病理形态结构明显改善,ZO-1蛋白表达量明显升高,AQP4蛋白表达量显著降低(P <0.05)。结论脑血疏口服液能够有效促进大鼠脑出血后ZO-1蛋白的表达,抑制AQP4蛋白的表达,降低血脑屏障的通透性,减轻脑水肿,对脑出血后脑组织发挥保护作用。 展开更多
关键词 脑血疏口服液 脑出血 紧密连接蛋白1 水通道蛋白4
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联合应用缓激肽与罂粟碱开放血肿瘤屏障作用
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作者 徐畅 刘坤 《中国公共卫生》 CSCD 北大核心 2018年第8期1117-1119,共3页
目的探讨缓激肽与罂粟碱(papaverine,PA)联合应用对血肿瘤屏障通透性和紧密连接(tight junctions,TJ)相关蛋白之闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达的影响。方法应用大鼠胶质瘤模型,伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验检测血肿瘤屏障通透... 目的探讨缓激肽与罂粟碱(papaverine,PA)联合应用对血肿瘤屏障通透性和紧密连接(tight junctions,TJ)相关蛋白之闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达的影响。方法应用大鼠胶质瘤模型,伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验检测血肿瘤屏障通透性,免疫组织化学法测定ZO-1蛋白表达,RT-PCR法测定ZO-1 m RNA表达。结果与对照组大鼠脑肿瘤组织中EB含量[(0.182±0.026)μg/g]比较,缓激肽、罂粟碱、缓激肽+罂粟碱组(联合组)大鼠脑肿瘤组织中EB含量[分别为(0.487±0.031)、(0.503±0.029)和(0.875±0.040)μg/g]均明显升高(P〈0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中EB含量进一步增加(P〈0.01)。与对照组(0.379±0.011)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1蛋白表达[分别为(0.259±0.008)、(0.252±0.010)和(0.135±0.015)]均明显下降(P〈0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1蛋白表达进一步降低(P〈0.01)。与对照组(0.876±0.062)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠肿瘤组织中ZO-1 m RNA表达[分别为(0.735±0.036)、(0.695±0.050)和(0.420±0.047)]均明显降低(P〈0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1 m RNA表达进一步降低(P〈0.01)。结论缓激肽与罂粟碱联合应用对血肿瘤屏障的开放作用具有协同效应,此作用与紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平下调有关。 展开更多
关键词 缓激肽 罂粟碱 血肿瘤屏障 闭锁小带蛋白1(ZO-1)
紧密连接相关蛋白在肺癌脑转移瘤中的表达及临床意义 预览 被引量:1
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作者 鄢少聪 应学明 《癌症进展》 2018年第4期475-479,共5页
目的探讨血脑屏障(BBB)紧密连接相关蛋白claudin 5、occludin及ZO-1在肺癌脑转移瘤中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测肺癌脑转移瘤组织及正常脑组织中claudin 5、occludin、ZO-1蛋白的表达,并分析紧密连接蛋白表达水... 目的探讨血脑屏障(BBB)紧密连接相关蛋白claudin 5、occludin及ZO-1在肺癌脑转移瘤中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测肺癌脑转移瘤组织及正常脑组织中claudin 5、occludin、ZO-1蛋白的表达,并分析紧密连接蛋白表达水平与肺癌脑转移瘤患者临床特征及生存期的关系。结果肺癌脑转移瘤组织中claudin 5、occludin、ZO-1的高表达率均低于正常脑组织(P〈0.05);claudin 5、occludin、ZO-1蛋白的表达与肺癌脑转移瘤患者的年龄、病灶个数有关(P〈0.05);三种蛋白高表达组患者的中位总生存时间均长于其低表达组患者(P〈0.05)。结论紧密连接相关蛋白claudin 5、occludin、ZO-1表达下调可能在脑转移瘤的发生中起到一定的作用。 展开更多
关键词 肺癌脑转移瘤 免疫组织化学 CLAUDIN 5 OCCLUDIN ZO-1
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百草枯对人肺泡上皮屏障的影响及机制研究
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作者 刘艳琴 史红阳 +1 位作者 邓文静 李芳侠 《国际呼吸杂志》 2018年第23期1787-1791,共5页
目的用体外人肺泡上皮屏障模型,研究百草枯对人肺泡上皮屏障的影响,并初步探讨其潜在的机制。方法通过噻唑蓝(MTT)试验和细胞计数研究百草枯对H441细胞增殖的影响,使用跨上皮电阻率(TERR)测量和荧光素标记的葡聚糖(FITC‐Dextran)通透... 目的用体外人肺泡上皮屏障模型,研究百草枯对人肺泡上皮屏障的影响,并初步探讨其潜在的机制。方法通过噻唑蓝(MTT)试验和细胞计数研究百草枯对H441细胞增殖的影响,使用跨上皮电阻率(TERR)测量和荧光素标记的葡聚糖(FITC‐Dextran)通透性试验研究上皮屏障的通透性,使用蛋白质印迹法(WB)研究百草枯对H441细胞中钙黏附连接蛋白E((E‐cadherin)和紧密连接蛋白‐1(ZO‐1)表达的影响。结果处理24h后,从200μM浓度开始,百草枯可显著抑制细胞的增殖(P<0.05)。H441单层细胞可形成上皮屏障,表现为随着培养时间的延长,TERR值逐渐升高(P<0.05),而FITC‐Dextran通透性逐渐降低(P<0.05),且从第9天开始趋于平稳(P>0.05)。待H441单层细胞上皮屏障完全建立后,百草枯可显著破坏H411单层细胞的上皮屏障,表现为TERR值的降低(P<0.05)和FITC‐Dextran通透性的升高(P<0.05)。百草枯处理24h后,细胞中E‐cadherin和ZO‐1的表达均显著降低(P<0.05)。结论百草枯通过抑制E‐cadherin和ZO‐1的表达,破坏体外人肺泡上皮屏障模型H441单层细胞的上皮屏障,为百草枯引起急性肺损伤的机制提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 百草枯 急性肺损伤 肺泡上皮屏障 钙黏附蛋白E 紧密连接蛋白‐1
普通肝素改善高迁移率族蛋白1介导的血管内皮细胞屏障通透性增加的实验研究
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作者 胡博 栾正刚 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期29-33,共5页
目的 观察普通肝素(UFH)对高迁移率族蛋白1(HMGB 1)介导的人脐静脉内皮细胞屏障通透性损伤的保护作用,探讨UFH对HMGB 1介导的胞质紧密粘连蛋白-1(ZO-1)表达缺失的保护机制。方法 将人脐静脉内皮细胞进行体外培养,人脐静脉内皮细... 目的 观察普通肝素(UFH)对高迁移率族蛋白1(HMGB 1)介导的人脐静脉内皮细胞屏障通透性损伤的保护作用,探讨UFH对HMGB 1介导的胞质紧密粘连蛋白-1(ZO-1)表达缺失的保护机制。方法 将人脐静脉内皮细胞进行体外培养,人脐静脉内皮细胞株传代培养后分为4组(n=5):空白对照组(加入等量PBS)、HMGB 1处理组(100 ng/ml)、UFH对照组(UFH 10 U/ml)、HMGB 1及UFH处理组(100 ng/ml HMGB 1+UFH 10 U/ml)。MTT法测定内皮细胞存活率,用Transwell小室法测定单层内皮屏障通透性,用免疫荧光染色法测定ZO-1的表达分布,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测ZO-1蛋白及核因子-κB(NF-κB)的表达。结果 HMGB 1(100 ng/ml)对内皮细胞活性无抑制作用(P〉0.05)。UFH预处理后可减少HMGB1所致的内皮细胞通透性增加(P〈0.05)。UFH预处理后可降低HMGB 1所致内皮细胞ZO-1密闭环的减少和破坏,使ZO-1荧光强度增强,ZO-1蛋白表达增加,并使NF-κB的核易位减少。结论 UFH可保护HMGB 1介导的内皮细胞ZO-1的表达缺失,进而改善内皮细胞屏障通透性,其机制与减少NF-κB核易位相关。 展开更多
关键词 脓毒症 高迁移率族蛋白1 普通肝素 胞质紧密粘连蛋白-1 核因子-ΚB
真人养脏汤对溃疡性结肠炎大鼠肠道黏膜屏障功能的保护作用 预览 被引量:3
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作者 王慧 毛晶磊 +3 位作者 吴艳敏 王琪 罗晓庆 官杰 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期2053-2059,共7页
目的:观察真人养脏汤(ZRYZ)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜屏障功能的保护作用以及紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭锁蛋白(occludin)的表达变化,探讨其可能作用机制... 目的:观察真人养脏汤(ZRYZ)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜屏障功能的保护作用以及紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭锁蛋白(occludin)的表达变化,探讨其可能作用机制。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶(SASP)阳性对照组、ZRYZ高剂量组和ZRYZ低剂量组。除正常组外,其它各组用TNBS/50%乙醇混合溶液局部灌肠法复制溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后阳性对照组给予SASP混悬液灌胃;ZRYZ高剂量组和ZRYZ低剂量组分别按生药30.4 g/kg和15.2 g/kg剂量灌胃;正常组与模型组等量生理盐水灌胃,共21 d。给药结束后,考察大鼠疾病活动指数(DAI)变化,进行大体损伤评分,测定肠道黏膜通透性(以尿中乳果糖/甘露醇的比值表示,即L/M值),测定结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性,计数结肠组织杯状细胞数量,测定血清二胺氧化酶(DAO)及D-乳酸(D-LA)水平,检测ZO-1和occludin的表达。结果:与正常组相比,模型组DAI、大体损伤评分、L/M值、结肠组织MPO活性以及血清D-LA和DAO水平明显升高(P〈0.05),结肠组织杯状细胞数量以及ZO-1和occludin表达明显降低(P〈0.05);与模型组相比,ZRYZ高剂量组和ZRYZ低剂量组DAI、大体损伤评分、L/M值、结肠组织MPO活性以及血清DAO和D-LA水平明显降低(P〈0.05),结肠组织杯状细胞数量以及ZO-1和occludin表达明显升高(P〈0.05)。结论:真人养脏汤可通过降低肠道黏膜通透性,保护溃疡性结肠炎大鼠肠道上皮细胞黏膜屏障功能,其机制可能与升高ZO-1和occludin表达有关。 展开更多
关键词 真人养脏汤 溃疡性结肠炎 黏膜屏障 闭锁小带蛋白1 闭锁蛋白
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玻璃体内注射色素上皮源性因子对大鼠早期糖尿病视网膜病变的保护作用 预览 被引量:2
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作者 江新利 苗慧鹏 +2 位作者 周忠友 赵平 刘岩 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第3期210-215,共6页
目的观察玻璃体内注射色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对SD糖尿病大鼠视网膜PEDF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、炎性相关因子细胞间黏附分子-1(intercellular cell adh... 目的观察玻璃体内注射色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对SD糖尿病大鼠视网膜PEDF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、炎性相关因子细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)以及细胞通透性相关因子紧密连接蛋白-1(zonu-la occludens-1,ZO-1)和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)表达的影响,探讨PEDF对早期糖尿病视网膜病变的保护作用。方法选取6~8周龄SD大鼠60只,随机分为4组:正常对照组(CON组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病生理盐水注射组(DM+NS组)和糖尿病PEDF注射组(DM+PEDF组)。链脲佐菌素诱导建立糖尿病模型后第1周、2周、3周时,DM+PEDF组大鼠玻璃体内注射PEDF,而DM+NS组注射同样体积的生理盐水。第4周时处死大鼠,摘出眼球,进行视网膜组织病理学及电镜观察。并采用免疫组织化学方法检测视网膜PEDF、VEGF、ICAM-1、MCP-1以及ZO-1、Akt的表达情况。结果糖尿病大鼠均造模成功。4周糖尿病病程尚不能导致明显的视网膜新生血管形成。在透射电镜下,DM组大鼠视网膜可见神经节细胞水肿,线粒体肿胀变大,基质肿胀明显,可见大部分或全部的嵴消失,部分双侧膜融合,粗面内质网扩张,而玻璃体内PEDF注射可以明显地改善这一病理改变。DM组大鼠PEDF主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层以及内丛状层、光感受器基质以及色素上皮层、脉络膜等部位;VEGF主要表达于神经节细胞层,ICAM-1主要表达在光感受器层,MCP-1主要表达在视网膜内层细胞,包括节细胞层和内核层,ZO-1蛋白主要表达于内核层的细胞以及神经节细胞,Akt主要表达于内丛状层以及脉络膜的细胞浆中。同CON组相比,DM组、DM+NS组视网膜中PEDF、VEGF表达差异均无统计学意义(均为P〉0.05) 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 色素上皮源性因子 血管内皮生长因子 细胞间黏附分子-1 单核细胞趋化蛋白-1 紧密连接蛋白-1 蛋白激酶B
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参苓白术颗粒对功能性腹泻大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达的作用 被引量:1
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作者 李晶 王垂杰 +2 位作者 李玉锋 孟高达 曹晓娇 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期102-107,共6页
目的:观察参苓白术颗粒对功能性腹泻模型大鼠肠黏膜紧密连接蛋白的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高乳糖+小平台站立法建立功能性腹泻脾虚证大鼠模型,将90只大鼠随机分为正常组,模型组(高乳糖+小平板),匹维溴铵组,参苓白术颗... 目的:观察参苓白术颗粒对功能性腹泻模型大鼠肠黏膜紧密连接蛋白的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高乳糖+小平台站立法建立功能性腹泻脾虚证大鼠模型,将90只大鼠随机分为正常组,模型组(高乳糖+小平板),匹维溴铵组,参苓白术颗粒高、中、低剂量组,每组15只,参苓白术颗粒高、中、低剂量分别为3.212,1.606,0.803 g·kg-1,匹维溴铵给药剂量为0.012 5 g·kg-1;正常组与模型组灌服生理盐水,每天灌胃3次,共14 d。观察大鼠一般情况,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中二胺氧化酶(DAO)水平、结肠黏膜肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1),封闭蛋白-1(Claudin-1),咬合蛋白(Occludin)mRNA表达,免疫组化法检测ZO-1,Occludin蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组血清中DAO水平、结肠黏膜TNF-α含量明显升高(P〈0.01),ZO-1,Claudin-1,Occludin mRNA表达明显降低(P〈0.01),ZO-1,Occludin蛋白表达明显降低(P〈0.05);与模型组比较,参苓白术颗粒能够降低血清中DAO水平、结肠黏膜TNF-α含量(P〈0.01),上调功能性腹泻模型大鼠结肠黏膜ZO-1,Claudin-1,Occludin mRNA表达(P〈0.01),上调ZO-1,Occludin蛋白表达(P〈0.05,P〈0.01)。结论:参苓白术颗粒能够调节功能性腹泻大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白表达,调节肠黏膜机械屏障,这可能是从脾论治功能性腹泻的机制之一。 展开更多
关键词 参苓白术颗粒 功能性腹泻大鼠 紧密连接蛋白-1 咬合蛋白 封闭蛋白-1
缺氧人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达变化及其与屏障功能的关系 被引量:1
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作者 张健 王裴 +1 位作者 何雯 王凤君 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期249-253,共5页
目的研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分,分别行缺氧处理0h(即刻)及1、2、6、12、24h,采用生物电阻测定仪... 目的研究缺氧对人肠上皮细胞Slingshot蛋白表达的影响及其与屏障功能变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caco-2单层细胞培养模型。取细胞按照随机数字表法分为6部分,分别行缺氧处理0h(即刻)及1、2、6、12、24h,采用生物电阻测定仪测定细胞的跨上皮电阻(TER)。另取细胞同前行缺氧处理,采用蛋白质印迹法检测带状闭合蛋白1(ZO-1)、咬合蛋白、闭合蛋白1及Slingshot-1、Slingshot-2、Slingshot-3的蛋白表达。另取细胞同前行缺氧处理,采用荧光法检测纤维状肌动蛋白及球状肌动蛋白含量。3项检测中,各时相点样本数分别为10、10、18。对数据行单因素方差分析、Dunnett检验。结果(1)与缺氧0h比较,缺氧1—24h细胞的TER值均明显降低(P值均小于0.01)。(2)与缺氧0h(均为1.00)比较,缺氧1~24h细胞的ZO-1、咬合蛋白及闭合蛋白1表达量普遍降低,于缺氧12h或24h达到最低值(分别为0.69±0.20、0.47±0.15、0.474-0.22,P〈0.05或P〈0.01)。与缺氧0h比较,缺氧1~24h细胞的Slingshot-1、Slingshot-3蛋白表达量无明显变化(P值均大于0.05);缺氧1~24h,细胞的Slingshot-2蛋白表达量呈先降低后上升的趋势,其中缺氧24h(1.544-0.57)明显高于缺氧0h(1.00,P〈0.05)。(3)与缺氧0h比较,缺氧1、6、12、24h细胞的纤维状肌动蛋白含量明显减少,缺氧6~24h细胞的球状肌动蛋白含量明显增加,P〈0.05或P〈0.01;其余时相点2项指标无明显变化(P值均大于0.05)。结论缺氧通过诱导人肠上皮细胞Slingshot-2表达,引起丝切蛋白去磷酸化而活化以及纤维状肌动蛋白解聚,从而影响细胞间紧密连接,导致细胞屏障功能受损。 展开更多
关键词 缺氧 肌动蛋白类 肠上皮细胞 Slingshot 带状闭合蛋白1 咬合蛋白 闭合蛋白1
氢硫酸钠抑制脂多糖引起的A549细胞损伤
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作者 牛占丛 杨圣俊 +3 位作者 段国辰 刘军肖 陈红光 王彦霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期484-487,共4页
目的观察氢硫酸钠(Na HS)对脂多糖(LPS)诱导的A549肺癌细胞损伤的影响并探讨其可能机制。方法 A549细胞分为对照组、LPS处理组、Na HS处理组和LPS联合Na HS处理组。处理24 h后,采用ELISA测定培养液中C反应蛋白(CRP)的含量;MTT法... 目的观察氢硫酸钠(Na HS)对脂多糖(LPS)诱导的A549肺癌细胞损伤的影响并探讨其可能机制。方法 A549细胞分为对照组、LPS处理组、Na HS处理组和LPS联合Na HS处理组。处理24 h后,采用ELISA测定培养液中C反应蛋白(CRP)的含量;MTT法与乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤情况;测定A549细胞单层模型的跨上皮电阻(TER)值;免疫荧光染色法测定A549细胞中闭锁小带蛋白1(ZO-1)的分布情况。结果对照组与Na HS处理组比较,CRP的水平、TER值、细胞活力和ZO-1表达与分布情况无显著性差异;与对照组相比,LPS处理组中的CRP水平明显升高、TER值显著减少、细胞活力下降、细胞膜ZO-1表达减少且边界不清;与LPS处理组相比,LPS联合Na HS处理组中的CRP水平明显降低、TER值增加、细胞活力增加,ZO-1在细胞膜处的表达增强且分布情况部分恢复。结论 Na HS通过增强A549细胞活力、降低CRP水平、增加TER值并增加ZO-1表达抑制LPS诱导的肺损伤。 展开更多
关键词 急性肺损伤 脂多糖 氢硫酸钠(Na HS) 肺上皮细胞 闭锁小带蛋白1
卡巴胆碱对脓毒症大鼠肠屏障功能的保护作用 被引量:1
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作者 张颖 杜朝晖 +1 位作者 周青 李建国 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期618-619,共2页
目的观察卡巴胆碱对脓毒症大鼠肠屏障功能的保护作用。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、脓毒症组、卡巴胆碱组、α-银环蛇毒素(α-BGT)组。腹腔注射脂多糖(LPS)后6h取距回盲瓣10cm处回肠组织,用于紧密连接蛋白-1(ZO-1... 目的观察卡巴胆碱对脓毒症大鼠肠屏障功能的保护作用。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、脓毒症组、卡巴胆碱组、α-银环蛇毒素(α-BGT)组。腹腔注射脂多糖(LPS)后6h取距回盲瓣10cm处回肠组织,用于紧密连接蛋白-1(ZO-1)、核转录因子-KB(NF—KB)、核转录因子抑制蛋白(IKB)和病理学检查。结果与脓毒症大鼠比较,卡巴胆碱组回肠组织ZO-1移位减少、含量增加(0.75±0.12,P〈0.05),NF—KB含量减少(0.56±0.09,P〈0.05),回肠组织病理学损伤明显减轻(1.25±0.05,P〈0.05)。经α-BGT拮抗后,卡巴胆碱保护效应被抵消。结论卡巴胆碱对脓毒症大鼠肠屏障功能有保护作用,其机制可能与激活胆碱能抗炎通路有关。 展开更多
关键词 卡巴胆碱 脂多糖 核转录因子-ΚB 紧密连接蛋白-1 胆碱能抗炎通路
正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响 被引量:4
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作者 陈建永 徐虹 +3 位作者 施琳琳 徐建军 蒋霞 刘敏 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第12期2991-2994,I0031共5页
目的:探讨正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和正肝汤组,每组各30只。制备四氯化碳肝硬化大鼠模型,正肝汤组大鼠予正肝汤(1.5 g/100 g·d)灌胃干预。对肝组织进... 目的:探讨正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和正肝汤组,每组各30只。制备四氯化碳肝硬化大鼠模型,正肝汤组大鼠予正肝汤(1.5 g/100 g·d)灌胃干预。对肝组织进行苏木素-伊红染色,透射电镜观察小肠组织的超微结构,免疫印迹法检测小肠组织中OCLN和ZO-1的蛋白表达。结果:与正常组相比较,模型组大鼠的肝组织中胶原纤维广泛增生,纤维间隔相互连接,徦小叶形成,电镜见小肠黏膜上皮细胞表面微绒毛稀疏,减少、变短,排列不规则,部分断裂扭曲,脱落明显。正肝汤组大鼠的肠黏膜损伤较模型组明显减轻。正常组大鼠小肠组织中OCLN和ZO-1的表达量分别是模型组2.94和3.91倍,均P〈0.01,差异显著。正肝汤组的小肠组织中OCLN和ZO-1的表达量分别是模型组1.74和1.91倍,与模型组相比均P〈0.05,有统计学差异。结论:正肝汤能显著减轻肝硬化大鼠的肠黏膜损伤,并上调小肠组织中OCLN和ZO-1的蛋白表达。 展开更多
关键词 正肝汤 肝硬化 紧密联接 闭合蛋白 胞质紧密粘连蛋白-1
缺氧条件下人肠上皮细胞丝切蛋白活化及其与带状闭合蛋白1分布的关系 被引量:2
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作者 何雯 王裴 +1 位作者 张健 王凤君 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期116-121,共6页
目的研究缺氧对肠上皮细胞丝切蛋白活化的影响及丝切蛋白活化与紧密连接蛋白带状闭合蛋白(ZO-1)分布变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caeo-2单层细胞培养模型,取部分细胞按照随机数字表法分为对照组(不处理)、缺氧组(置于缺... 目的研究缺氧对肠上皮细胞丝切蛋白活化的影响及丝切蛋白活化与紧密连接蛋白带状闭合蛋白(ZO-1)分布变化的关系。方法建立人肠上皮细胞株Caeo-2单层细胞培养模型,取部分细胞按照随机数字表法分为对照组(不处理)、缺氧组(置于缺氧环境下)和常氧组(置于常氧环境下),取对照组细胞(样小数为9)及其他2组培养1、2、6、12、24h的细胞(各时相点样本数均为9)采用蛋白质印迹法检测丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的表达。另取细胞,按照随机数字表法分为缺氧组和对照组(处理同前),取对照组细胞和缺氧组缺氧1、2、6、12、24h的细胞采用激光扫描共聚焦显微镜观察纤维状肌动蛋白的形态与分布,荧光法检测纤维状肌动蛋白与球状肌动蛋白含量的比值,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞形态及ZO-1的分布;该3个实验中对照组样本数依次为3、6、3,缺氧组各时相点样本数依次为3、6、3。对数据行重复测量方差分析、配对t检验、LSD-t检验。结果与对照组比较,常氧组细胞培养1~24h丝切蛋白发磷酸化丝切蛋白表达量均无明显变化(t值分别为-0.385~1.701、0.040~1.538,P值均大于0.05)。与对照组比较,缺氧纰细胞培养1~24h丝切蛋白表达量也无明显变化(t值为1.032~2.390,P值均大于0.05);但磷酸化丝切蛋白表达量均明显降低(t值为4.563~22.678,P值均小于0.01),其中培养24h降至最低值。常氧组、缺氧组细胞各时相点丝切蛋白表达量相近(t值为-0.904~1.433,P值均大于0.05);缺氧组细胞培养l、2、6、12、24h时磷酸化丝切蛋白表达量分别为0.87±0.08、0.78±0.05、0.89±0.07、0.68±0.07、0.57±0.06,均低于常氧绀(0.90±0.07、0.97±0.06、1.00±0.06、1.00±0.05、0.99±0.05,t值为3.193~16.434,P值均小� 展开更多
关键词 缺氧 肌动蛋白类 肠上皮细胞 丝切蛋白 带状闭合蛋白1
闭锁小带蛋白-1在脑外伤后皮质中的表达变化 预览 被引量:2
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作者 王涛 孟颖 +3 位作者 邹冬华 李正东 陈忆九 陶陆阳 《法医学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期85-87,92共4页
目的:观察闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)在脑外伤后皮质中不同时段的表达变化。方法建立小鼠脑外伤模型,分为脑外伤后1h、3h、6h、12h、24h、3d、7d组,同时设立假手术组及正常对照组。脑皮质中伊文思蓝(Evans blue,E... 目的:观察闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)在脑外伤后皮质中不同时段的表达变化。方法建立小鼠脑外伤模型,分为脑外伤后1h、3h、6h、12h、24h、3d、7d组,同时设立假手术组及正常对照组。脑皮质中伊文思蓝(Evans blue,EB)含量检测评估血脑屏障通透性,Western印迹法和免疫组织化学染色法检测损伤皮质区ZO-1的表达。结果脑外伤后1 h皮质中EB含量开始增加,伤后1-3 d达高峰,伤后7 d接近正常。 Western印迹法显示,ZO-1在损伤1 h后表达下调,损伤1-3 d达到最低值,损伤7 d后明显回升,但仍低于假手术组和正常对照组。免疫组织化学染色显示,正常脑皮质血管中ZO-1呈强阳性表达,损伤后表达逐渐减弱,损伤3 d后阳性表达几乎消失,之后逐渐恢复。结论 ZO-1在脑外伤后皮质区呈先降低后升高的表达规律,与脑外伤后血脑屏障通透性变化规律呈负相关,为推断脑外伤损伤时间提供了新指标。 展开更多
关键词 法医病理学 脑损伤 闭锁小带蛋白-1 小鼠
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非酒精性脂肪肝大鼠肠道黏膜屏障功能的实验研究 预览 被引量:5
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作者 刘涛 徐秋玲 赵岩 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第11期1124-1127,共4页
目的肠道黏膜屏障功能紊乱与非酒精性脂肪肝(non-alcohol fatty liver disease,NAFLD)的发生关系密切,文中旨在通过动物模型的方法探讨NAFLD大鼠肠道黏膜屏障功能。方法 SD大鼠16只按随机数字表法分为正常组和NAFLD组,每组8只。正常... 目的肠道黏膜屏障功能紊乱与非酒精性脂肪肝(non-alcohol fatty liver disease,NAFLD)的发生关系密切,文中旨在通过动物模型的方法探讨NAFLD大鼠肠道黏膜屏障功能。方法 SD大鼠16只按随机数字表法分为正常组和NAFLD组,每组8只。正常组由普通饲料喂养,每100克普通饲料提供326 k Cal热量。NAFLD组大鼠由高脂饲料喂养,每100克高脂饲料提供453 k Cal热量建立NAFLD模型。采用HE染色检测肝病理,Elisa法和鲎试剂法分别检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)、内毒素,实时定量PCR法检测小肠闭锁小带蛋白ZO-1和连接蛋白Occluding的表达。结果 NAFLD组大鼠肝呈现典型的脂质沉积,血浆内毒素和血清TNF-α、IL-1较正常组显著增高,小肠ZO-1和Occluding表达较正常组显著降低(P〈0.05)。结论 NAFLD大鼠存在肠道黏膜屏障功能下降。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 小肠黏膜屏障 闭锁小带蛋白 连接蛋白
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ZO-1和Claudin-1在胆管癌中的表达及其意义 被引量:4
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作者 郭兴军 王敏 +3 位作者 江建新 石程剑 胡均 黄焕军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1739-1741,共3页
目的 探讨ZO-1及Claudin-1在胆管癌中的表达并分析其与胆管癌侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测Claudin-1和ZO-1在胆管癌、肝转移灶和正常胆管组织中的表达;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测胆管癌细胞株... 目的 探讨ZO-1及Claudin-1在胆管癌中的表达并分析其与胆管癌侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测Claudin-1和ZO-1在胆管癌、肝转移灶和正常胆管组织中的表达;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测胆管癌细胞株中Claudin-1及ZO-1基因表达水平.结果 Claudin-1与ZO-1在正常胆管组织中的表达量分别是胆管癌组织中的12.94倍和5.19倍(P<0.01),分别是胆管癌肝转移组织中的125.62倍和60.31倍(P<0.01);Claudin-1与ZO-1在胆管癌组织中的表达与胆管癌是否发生局部或者远处转移密切相关(P<0.05).在3种胆管癌细胞株中,Claudin-1和ZO-1在QBC939和RBE中高表达;在TFK-1中低表达.结论 Claudin-1与ZO-1在胆管癌中的表达与胆管癌的侵袭转移能力密切相关. 展开更多
关键词 胆管癌 ZO-1 CLAUDIN-1
镉对大鼠血睾屏障的损伤及黄芪甲苷的保护作用 被引量:1
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作者 宁巍 廖晓岗 +2 位作者 王毅 姚志勇 毛胜艳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期704-709,共6页
目的:观察黄芪甲苷和SB203580对镉致大鼠血睾屏障破坏及相关蛋白表达改变的保护效应,探讨黄芪甲苷的保护机制。方法21只成年雄性SD大鼠随机分为7组:单纯镉组[0.1%氯化镉腹腔内注射,1mg/(kg·d)],镉+黄芪甲苷组[镉剂量同... 目的:观察黄芪甲苷和SB203580对镉致大鼠血睾屏障破坏及相关蛋白表达改变的保护效应,探讨黄芪甲苷的保护机制。方法21只成年雄性SD大鼠随机分为7组:单纯镉组[0.1%氯化镉腹腔内注射,1mg/(kg·d)],镉+黄芪甲苷组[镉剂量同上,同时注射黄芪甲苷,10mg/(kg·d)],镉+SB203580组[镉剂量同上,同时注射SB203580,100μg/(kg·d)],以上各组又分为连续处理5d和10d两个时间组,对照组腹腔内注射等量生理盐水。各实验和对照组动物均为3只。取睾丸做光学显微镜、电子显微镜观察以及免疫组织化学染色和Western blotting检测。结果 HE染色观察对照组支持细胞核染色较浅且不规则,镉组支持细胞内有空泡形成,镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组未见明显形态异常。免疫组织化学染色观察对照组闭锁小带-1蛋白( ZO-1)、紧密连接蛋白-11( claudin-11)阳性产物在生精上皮靠近基底部表达。镉组ZO-1、claudin-11阳性产物表达均显著降低( P<0.05),镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组阳性产物表达低于对照组但明显高于镉组(P<0.05)。超微结构观察对照组血睾屏障紧密连接形态完整,呈连续的电子密度较深致密线,镉组血睾屏障紧密连接及支持细胞均见不同程度破坏,镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组破坏程度较相应处理时间镉组为轻。 Western blotting 结果显示,镉组磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)水平明显增强(P<0.05),镉+黄芪甲苷组与镉+SB203580组p-p38MAPK水平虽高于对照组,但较镉组明显减弱( P<0.05)。结论镉致大鼠血睾屏障ZO-1、claudin-11表达降低,紧密连接超微结构损伤,黄芪甲苷具有保护作用,其保护机制与抑制p38MAPK磷酸化有关。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 闭锁小带-1蛋白 紧密连接蛋白-11 免疫组织化学 免疫印迹法 大鼠
慢性血吸虫病患者结肠腺咬合蛋白与紧密连接蛋白-1的表达变化
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作者 冯林森 李靖娟 +5 位作者 张爱芬 吴皎 吴泽生 张东葵 段艳萍 王金德 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期612-615,共4页
目的探讨慢性血吸虫病患者结肠腺咬合蛋白(occludin)与紧密连接蛋白-1(ZO—1)的表达及其临床意义。方法选取50例慢性血吸虫病患者及9例正常结肠黏膜标本,采用免疫组织化学(SABC)染色法,检测occludin与ZO-1在结肠腺上皮细胞的表... 目的探讨慢性血吸虫病患者结肠腺咬合蛋白(occludin)与紧密连接蛋白-1(ZO—1)的表达及其临床意义。方法选取50例慢性血吸虫病患者及9例正常结肠黏膜标本,采用免疫组织化学(SABC)染色法,检测occludin与ZO-1在结肠腺上皮细胞的表达情况。结果与对照组比较,慢性血吸虫病组结肠腺结构不完整、腺体萎缩;慢性血吸虫病组结肠腺上皮细胞occludin与ZO-1阳性颗粒平均灰度值(159.26±6.57、166.07±5.44)明显高于对照组(155.53±5.90、162.16±5.14,P〈0.05),阳性单位值(37.27±2.63、34.69±2.19)明显低于对照组(38.85±2.42、36.37±2.11,P〈0.05);慢性血吸虫病组结肠腺occludin与ZO-1表达量的减少与性别及年龄无关(P〉0.05)。结论血吸虫感染可以损伤结肠腺上皮细胞间的紧密连接蛋白,从而破坏患者结肠黏膜屏障的完整性。 展开更多
关键词 慢性血吸虫病 结肠腺 咬合蛋白 紧密连接蛋白-1
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