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骨髓间充质干细胞成脂成骨平衡调控研究进展
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作者 占秀文 杨磊 +2 位作者 郑美蓉 汪鑫平 许晓源 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期400-404,共5页
骨质疏松症(OP)是一种全身性的骨代谢疾病,主要表现为骨量减少、骨质脆性增加、骨骼微结构退化。随着对骨质疏松症发病机制的深入研究,骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化失衡(成骨分化减少,成脂分化增多)是引发骨质疏松症的关键。我们总结了B... 骨质疏松症(OP)是一种全身性的骨代谢疾病,主要表现为骨量减少、骨质脆性增加、骨骼微结构退化。随着对骨质疏松症发病机制的深入研究,骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化失衡(成骨分化减少,成脂分化增多)是引发骨质疏松症的关键。我们总结了BMSCs成脂成骨分化相关的信号通路,充分理解这些信号通路,有利于更好的阐明骨质疏松症的发病机制,为临床医生有效地治疗骨质疏松症提供帮助。 展开更多
关键词 平衡调控 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 信号通路
微小RNA-608在人骨髓间充质干细胞成骨与成脂肪分化动态平衡中的作用
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作者 王海涛 王义生 +3 位作者 殷力 张翼 李劲峰 李月白 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1448-1451,共4页
目的检测微小RNA(miRNA,miR)-608在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制.方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测hBMSCs向成骨细... 目的检测微小RNA(miRNA,miR)-608在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞和成脂肪细胞分化过程中的表达变化以及对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的调控作用机制.方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测hBMSCs向成骨细胞以及成脂肪细胞分化过程中miR-608的表达变化.细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测miR-608对hBMSCs增殖的影响.利用生物信息学软件分析miR-608的靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测miR-608与靶基因的结合.利用蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-608对靶基因蛋白水平的表达变化.利用茜素红染色和油红O染色检测miR-608对hBMSCs向成骨细胞和成脂肪细胞分化的功能的影响.应用SPSS 17.0统计软件分析,数据以均值±标准差(Mean±SD)表示.两样本均数比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 FQ-PCR检测显示在hBMSCs向成骨细胞分化第3天miR-608表达量下降,与对照组(1.00±0.11)比较,成骨诱导分化组(0.20±0.09)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=9.479,P<0.01).FQ-PCR检测发现在hBMSCs向成脂肪细胞分化第3天表达量升高,与对照组(1.00±0.09)比较,成骨诱导分化组(4.36±0.55)中miR-608的表达显著性降低,差异有统计学意义(t=10.442,P<0.05).CCK-8和克隆形成实验检测发现miR-608抑制hBMSCs的增殖.生物信息学软件分析miR-608与Runt相关基因2(Runx2)以及音猬因子(SHH)3'端非编码区(3'UTR)区有结合位点.双荧光素酶报告基因检测可见与miR-608 mimics NC组(1.00±0.22)比较,miR-608 mimcs组(0.21±0.11)荧光素酶活性显著降低,差异有统计学意义(t=5.542,P<0.05).Western blot检测发现miR-608可以抑制Runx2和SHH蛋白水平的表达.茜素红染色检测显示较miR-608 mimics NC组(1.00±0.14)比较,miR-608 mimcs组(0.32±0.12)茜素红染色显著降低,差异有统计学意义(t=6.387,P<0.05).油红O染色检测发现与miR-608 mimic 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂肪分化 微小RNA
不同培养方法对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响 预览
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作者 郝宇卉 李美宁 +2 位作者 张凯丽 杨丽红 刘志贞 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第3期8-14,共7页
目的比较组织块贴壁法及胶原酶消化法所得脂肪干细胞的成骨分化能力。方法分别采用组织块贴壁法及胶原酶消化法原代培养小鼠脂肪干细胞,观察细胞形态及细胞增殖情况,并进行细胞鉴定,比较两者成骨分化能力。结果两种方法所得脂肪干细胞... 目的比较组织块贴壁法及胶原酶消化法所得脂肪干细胞的成骨分化能力。方法分别采用组织块贴壁法及胶原酶消化法原代培养小鼠脂肪干细胞,观察细胞形态及细胞增殖情况,并进行细胞鉴定,比较两者成骨分化能力。结果两种方法所得脂肪干细胞在形态学上无差异,培养至第3代,细胞生长状态良好,生物学特性稳定,CD44、Sca-1表达率 >90%,CD31表达率<10%,具有较好的成脂、成骨分化能力;组织块贴壁法培养所得脂肪干细胞增殖率高于胶原酶消化法(P<0.05);组织块贴壁法培养所得脂肪干细胞矿化结节、ALP活性及钙离子浓度高于胶原酶消化法(P<0.05)。结论组织块贴壁法相对胶原酶消化法在脂肪干细胞培养及成骨诱导分化过程中更具优势。 展开更多
关键词 脂肪干细胞/干细胞 组织块贴壁法/细胞培养技术 胶原酶消化法/细胞培养技术 成脂分化 成骨分化 小鼠
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维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的特征 预览
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作者 龙燕鸣 谢梦生 +2 位作者 薛文利 黄加洁 李晓捷 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2637-2643,共7页
背景:应用维甲酸直接体外干预骨髓间充质干细胞的研究较多,而维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的相关研究尚未见报道。目的:建立维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型,观察模型大鼠骨髓间充质干细胞的体外特征。方法:将SD大鼠随机分... 背景:应用维甲酸直接体外干预骨髓间充质干细胞的研究较多,而维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的相关研究尚未见报道。目的:建立维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型,观察模型大鼠骨髓间充质干细胞的体外特征。方法:将SD大鼠随机分为2组,实验组用维甲酸70mg/(kg·d)连续灌胃2周快速建立骨质疏松模型,对照组灌胃等体积生理盐水。采用全骨髓贴壁法体外培养两组大鼠骨髓间充质干细胞,观察两组细胞体外特征,包括细胞形态、生长曲线、成骨诱导后体外矿化能力和碱性磷酸酶分泌能力、成脂诱导后向脂肪细胞分化能力。结果与结论:①两组骨髓间充质干细胞各时期形态基本一致,第9天时实验组增殖能力强于对照组;②实验组碱性磷酸酶活力弱于对照组(P <0.05),茜素红染色、碱性磷酸酶染色亦支持碱性磷酸酶活力检测结果;③实验组脂滴数量和油红O吸光度值高于对照组(P <0.05);④结果表明,维甲酸灌胃法成功构建大鼠骨质疏松模型,其骨髓间充质干细胞成骨能力降低,成脂能力增强。 展开更多
关键词 维甲酸 骨质疏松模型 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 大鼠 广西自然科学基金
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长链非编码RNA在骨髓间充质干细胞成骨成脂分化中的作用及机制研究进展
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作者 任远中 姜雅萍 +3 位作者 丁珊珊 李涛 余永波 王英振 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1518-1523,共6页
随着高通量基因测序技术的不断发展和表观遗传学的深入研究,越来越多的研究表明长链非编码RNA (lncRNA)参与骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨和成脂分化,是骨科研究领域热点.本文就lncRNA调控BMSCs成骨和成脂分化中作用及机制的研究进展... 随着高通量基因测序技术的不断发展和表观遗传学的深入研究,越来越多的研究表明长链非编码RNA (lncRNA)参与骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨和成脂分化,是骨科研究领域热点.本文就lncRNA调控BMSCs成骨和成脂分化中作用及机制的研究进展予以综述. 展开更多
关键词 长链非编码RNA 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化
BADGE联合锂盐通过抑制PPARγ预防家兔激素性股骨头坏死
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作者 王耀清 潘振宇 陈帆 《武汉大学学报:医学版》 CAS 2019年第4期517-523,共7页
目的:研究双酚A二缩水甘油醚(BADGE)单独或与锂盐结合治疗对家兔骨髓间充质干细胞成脂分化和激素性股骨头坏死(ONFH)的预防作用及其可能机制。方法:分离家兔骨髓间充质干细胞并诱导成脂分化,油红O染色验证BADGE联合锂盐对成脂分化的抑... 目的:研究双酚A二缩水甘油醚(BADGE)单独或与锂盐结合治疗对家兔骨髓间充质干细胞成脂分化和激素性股骨头坏死(ONFH)的预防作用及其可能机制。方法:分离家兔骨髓间充质干细胞并诱导成脂分化,油红O染色验证BADGE联合锂盐对成脂分化的抑制作用。将兔随机分为4组,除对照组外,将甲强龙(MPS)造模的家兔分为3组:一组行BADGE联合锂盐(BL)治疗,另一组行BADGE单独治疗(B),最后一组行空白治疗(M)。2周采血检测血脂,4周后提取双侧股骨头做病理、μ-CT、荧光定量PCR检测。结果:BADGE处理抑制了兔骨髓间充质干细胞(BMSC)成脂分化,并抑制脂肪分化主要调节因子PPARγ和C/EBPα的表达,并且这些生物活性与锂盐结合得到进一步增强。在体内研究中,结果显示BADGE治疗可降低激素性ONFH发生率,减少骨髓肥胖,并且改善了骨密度及骨质量,而且这些效果在与锂盐联合得到增强。BADGE单独治疗或与锂盐结合增加了RUNX2和β-catenin的表达,并抑制了PPARγ和C/EBPα的表达,同时降低了血清总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(FFA)水平。结论:通过抑制PPARγ,BADGE单独或与锂盐联合治疗有效预防了激素性股骨头坏死。 展开更多
关键词 成脂分化 股骨头坏死 PPARΓ 激素
转录因子E2F1对脂肪间充质干细胞增殖及成脂分化的调控作用
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作者 仪臻 杨长春 +2 位作者 肖辉 吴毅平 吴敏 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期235-237,共3页
目的 探讨转录因子E2F1对脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖、分化的影响及其可能的作用机制。方法 选取6~8周龄野生型(WT)和E2F1基因敲除(E2F1-/-)小鼠,分离获取WT和E2F1-/-原代ADSCs,培养至第4代(P4),观察比较两组细胞形态及鉴定细胞表面... 目的 探讨转录因子E2F1对脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖、分化的影响及其可能的作用机制。方法 选取6~8周龄野生型(WT)和E2F1基因敲除(E2F1-/-)小鼠,分离获取WT和E2F1-/-原代ADSCs,培养至第4代(P4),观察比较两组细胞形态及鉴定细胞表面标志物。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞的增殖能力,并经14 d成脂诱导分化后行油红O染色,观察脂滴的形态及数目。Western blot检测两组细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)蛋白水平的表达。结果 成功获得稳定传代的ADSCs,体外观察两组细胞形态比较差异无统计学意义,细胞表面标志物CD29、CD44、CD90为阳性,而CD31为阴性。细胞计数试剂盒(CCK-8)结果显示,WT ADSCs较E2F1-/-ADSCs增殖能力强(1.85±0.03比1.32±0.20,t=16.641,P<0.05)。成脂诱导结果表明,WT ADSCs组脂滴较大较圆,且脂滴数目多于E2F1-/-ADSCs组(1 890±128比1 109±116,t=18.505,P<0.05)。Western blot结果表明,WT ADSCs组PPAR-γ蛋白表达水平较E2F1-/-ADSCs组高(0.81±0.02比0.44±0.01,t=3.040,P<0.05)。结论 转录因子E2F1通过促进PPAR-γ的表达从而增强ADSCs的增殖及成脂分化作用。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 E2F1 细胞增殖 成脂分化 过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ
一种自发胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞模型构建 预览
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作者 张凯艺 朱文娟 +2 位作者 谢宁 叶华琼 杨述林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1475-1485,共11页
本研究旨在突变3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4(GluT4)的基因序列,造成GluT4功能障碍,从而获得一种稳定、自发胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。利用CRISPR/Cas9技术对3T3-L1细胞的GluT4编码区进行定向切割,通过流式细胞术和基因测序筛选稳定突变... 本研究旨在突变3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4(GluT4)的基因序列,造成GluT4功能障碍,从而获得一种稳定、自发胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。利用CRISPR/Cas9技术对3T3-L1细胞的GluT4编码区进行定向切割,通过流式细胞术和基因测序筛选稳定突变的细胞株;使用CCK-8法检测所筛选细胞株的增殖活力;对细胞进行成脂诱导分化,油红O染色以判断细胞成脂分化能力;以胰岛素刺激下葡萄糖摄入量确定细胞对胰岛素的抵抗程度;qPCR和Western blot检测胰岛素抵抗细胞成脂分化过程中关键基因的表达。结果表明:第九外显子处13 bp的缺失导致3T3-L1细胞GluT4蛋白功能障碍,这一突变不影响细胞的增殖活力;成脂诱导分化过程中,该细胞株表现出严重且稳定的自发胰岛素抵抗,葡萄糖摄取受阻,与成脂分化和脂质合成相关的基因表达显著或极显著下调(P<0.05或P<0.01)。综上所述,GluT4功能障碍阻碍了脂肪细胞响应胰岛素的葡萄糖摄取,从而造成脂肪细胞产生自发的胰岛素抵抗;本研究从多个角度对该胰岛素抵抗脂肪细胞模型进行检测分析,验证了其稳定性和有效性,为脂肪营养代谢和胰岛素抵抗相关研究提供了新材料。 展开更多
关键词 葡萄糖转运蛋白4 胰岛素抵抗 3T3-L1细胞 成脂分化
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木犀草素对3T3-L1细胞成脂分化不同阶段的影响 预览
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作者 张秋霞 刘健 《合肥工业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第3期427-432,共6页
为了研究木犀草素对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中各个阶段的作用,文章探讨相关的分子机制,在细胞分化的不同阶段添加20μmol/L木犀草素处理,通过油红O染色和定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测其对3T3-L1前脂肪... 为了研究木犀草素对3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中各个阶段的作用,文章探讨相关的分子机制,在细胞分化的不同阶段添加20μmol/L木犀草素处理,通过油红O染色和定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测其对3T3-L1前脂肪细胞脂肪化过程的细节作用。3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程共需8d,结果表明,木犀草素从细胞分化开始处理8d可以显著降低其脂滴生成及脂肪化相关基因PPARγ、C/EBPα、Ap2和Fas等的表达,处理2、4、6 d对脂滴生成抑制效果不明显,但可以显著抑制脂肪化相关因子表达,说明木犀草素在3T3-L1细胞的前期分化和后期成熟过程都发挥了重要作用。 展开更多
关键词 木犀草素 3T3-L1细胞 成脂分化 脂滴生成 基因表达
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PPAR-gamma信号通路对Hem-MSCs体外成脂分化的影响 预览
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作者 徐媛 郭遥 +3 位作者 袁斯明 王慜 陈海妮 沈卫民 《组织工程与重建外科》 2019年第1期1-4,9共5页
目的 研究PPAR-gamma信号通路对血管瘤来源的间充质干细胞(Hemangioma derivedmesenchymalstemcells,Hem-MSCs)成脂分化的影响。方法 本研究以不同的条件培养基培养Hem-MSCs,实验分5组:普通培养基组(A组)、普通培养基+罗格列酮组(B组)... 目的 研究PPAR-gamma信号通路对血管瘤来源的间充质干细胞(Hemangioma derivedmesenchymalstemcells,Hem-MSCs)成脂分化的影响。方法 本研究以不同的条件培养基培养Hem-MSCs,实验分5组:普通培养基组(A组)、普通培养基+罗格列酮组(B组)、成脂诱导分化培养基组(C组)、成脂诱导分化培养基+罗格列酮组(D组)及成脂诱导分化培养基+罗格列酮+GW9662拮抗剂组(E组)。光镜下观察各组Hem-MSCs的成脂分化过程,以油红O染色观察被诱导细胞中脂滴的面积和数量;采用Western-blot分析各组Hem-MSCs培养2周后的perilipin A表达量,以量化各组细胞脂肪分化程度;以实时定量PCR分析各组成脂分化相关基因(如CEBPA、LPL、PLIN1、PPARG等)在Hem-MSCs成脂诱导分化过程中不同时间点的表达情况。结果 油红O染色显示,成脂诱导分化培养基+罗格列酮组可促进Hem-MSCs的成脂分化过程;Western-blot证实罗格列酮能明显促进成脂诱导分化时perilipin A蛋白的表达;实时定量PCR进一步证实,在诱导分化的第1周及第2周时,罗格列酮对Hem-MSCs的成脂分化相关基因(CEBPA、LPL、PLIN1、PPARG等)的表达均有促进作用;而PPAR-gamma信号通路的拮抗剂GW9662能够阻断上述作用。结论 激活PPAR-gamma信号通路可促进Hem-MSCs在体外的成脂分化能力。 展开更多
关键词 婴幼儿血管瘤 血管瘤来源的间充质干细胞 成脂分化 PPAR-gamma信号通路 罗格列酮
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骨碎补水煎液经Wnt/β-catenin通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响
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作者 李琰 李志航 +4 位作者 陈云刚 任维龙 薛海鹏 徐展望 谭国庆 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第2期279-284,I0006-I0008共7页
目的:观察骨碎补水煎液经Wnt/β-Catenin信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向脂肪细胞分化的调节作用及大鼠体质量、骨密度、股骨骨髓脂肪细胞变化的影响。方法:24只6月龄雌性SD大鼠随机分为SHAM(假手术)、OVX(去势)... 目的:观察骨碎补水煎液经Wnt/β-Catenin信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向脂肪细胞分化的调节作用及大鼠体质量、骨密度、股骨骨髓脂肪细胞变化的影响。方法:24只6月龄雌性SD大鼠随机分为SHAM(假手术)、OVX(去势)、OVXDF(去势灌服骨碎补水煎液)3组并手术造模。适应性饲养4周后,灌胃12周,检测比较各组大鼠BMSCs成脂能力、Wnt通路和成脂分化相关mRNA表达水平及大鼠体质量、骨密度、股骨骨髓脂肪细胞等指标。结果:OVXDF组大鼠的体质量及其BMSCs成脂能力、PPARγ、LPL mRNA表达水平均低于OVX组,且高于SHAM组(P<0.05)。相反,其骨密度与BMSCs中Wnt10b、β-catenin、LRP5mRNA表达水平均高于OVX组,但低于SHAM组(P<0.05)。股骨骨髓切片显示,OVX组脂肪空泡数量、直径、面积比较SHAM组分别增高96.18%、58.44%、391.06%,差异有统计学意义;OVXDF组比OVX组分别降低28.79%、22.52%、53.47%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:灌服骨碎补水煎液可以抑制去卵巢大鼠BMSCs成脂分化,提高去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度,缓解大鼠去卵巢后的体质量增加,同时能够减轻去卵巢骨质疏松大鼠股骨骨髓腔内脂肪细胞数量及体积,起到抗骨质疏松的作用,其机制可能与激活Wnt/β-catenin经典信号通路,抑制PPARγ、LPL mRNA的表达相关。 展开更多
关键词 骨碎补 骨髓间充质干细胞 成脂分化 Wnt经典通路 去卵巢大鼠 骨髓脂肪细胞 HE染色 石蜡切片
人脂肪组织来源血管周干细胞成骨、成脂、成软骨分化能力研究
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作者 张蕾 孟芝竹 张斌 《中国实用口腔科杂志》 CAS 2018年第7期420-425,共6页
目的研究从人脂肪组织中提取的血管周干细胞(human perivascular stem cells,hPSCs)的特点,并探讨其成骨、成脂及成软骨分化的能力。方法采用流式荧光细胞分选技术(FACS)在12例行吸脂手术患者的脂肪标本中分选出人基质血管成分(hum... 目的研究从人脂肪组织中提取的血管周干细胞(human perivascular stem cells,hPSCs)的特点,并探讨其成骨、成脂及成软骨分化的能力。方法采用流式荧光细胞分选技术(FACS)在12例行吸脂手术患者的脂肪标本中分选出人基质血管成分(human stromal vascular fraction,hSVF)和由周皮细胞(CD34^-、CD146^+、CD45^-)与外膜细胞(CD34^+、CD146^-、CD45^-)组成的hPSCs进行培养,比较其克隆增殖能力,然后将2种细胞进行成骨、成脂和成软骨诱导,诱导结束后分别进行茜素红染色、油红O染色和阿尔新蓝染色,并检测成骨诱导后的成骨相关基因mRNA表达。结果 hSVF和hPSCs均以纺锤形成纤维样细胞生长,hPSCs呈现出更快的融合趋势,且细胞形态更均一。hPSCs细胞相比于hSVF具有更强的克隆增殖能力(P〈0.05)。hPSCs细胞在成骨及成软骨方向比hSVF具有更强优势,而hSVF在成脂方向比hPSCs具有更强优势。成骨诱导后,hPSCs的成骨基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的相对表达量要明显高于hSVF(P〈0.05)。结论 hPSCs细胞具有干细胞的多项分化潜能,且其在成骨方向具有很强优势,可成为骨组织工程学中理想的种子细胞来源。 展开更多
关键词 人血管周干细胞 人基质血管成分 成骨分化 成脂分化 成软骨分化
锌对人骨髓间充质干细胞体外增殖和成脂分化的影响 预览
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作者 朱晓宇 石军 《广西医学》 CAS 2018年第8期928-933,共6页
目的探讨锌对人骨髓间充质干细胞(h BM-MSC)体外增殖和成脂分化的影响。方法用密度梯度离心和贴壁培养的方法分离纯化h BM-MSC,对照组加入不含锌的低糖杜氏改良格尔(DMEM)完全培养基,其余5个锌处理组加入锌浓度分别为0.001 mmol/L、... 目的探讨锌对人骨髓间充质干细胞(h BM-MSC)体外增殖和成脂分化的影响。方法用密度梯度离心和贴壁培养的方法分离纯化h BM-MSC,对照组加入不含锌的低糖杜氏改良格尔(DMEM)完全培养基,其余5个锌处理组加入锌浓度分别为0.001 mmol/L、0.004 mmol/L、0.016 mmol/L、0.064 mmol/L、0.256 mmol/L的含锌低糖DMEM完全培养基,用细胞计数试验(CCK-8)法检测细胞活性以确定适宜h BM-MSC培养的锌浓度。用含有适宜浓度硫酸锌的成脂诱导培养基体外诱导h BM-MSC成脂分化,21 d后行油红O染色观察细胞内的脂滴,检测吸光度值评价成脂分化效率,并采用实时荧光定量PCR检测各组细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA表达水平。结果 0.256 mmol/L锌处理组的细胞活性低于对照组(P〈0.05),0.004 mmol/L锌处理组和0.016 mmol/L锌处理组的细胞活性均高于对照组(P〈0.05),适宜h BM-MSC培养的锌浓度为0.001~0.064 mmol/L。0.001、0.004、0.016和0.064 mmol/L锌处理组油红O染色阳性的细胞数依次增多,各锌处理组细胞中的脂滴明显大于且多于对照组,成脂分化率以及PPAR-γ、C/EBPα、FABP4 mRNA表达水平均高于对照组(均P〈0.05)。结论一定浓度的锌能促进h BM-MSCs的增殖和成脂分化,这可能与锌作用于成脂基因有关。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 增殖 成脂分化 成脂基因
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miR-99a-5p对人骨髓间充质干细胞分化能力的影响
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作者 徐慧 汪健 +5 位作者 叶勖 明静 李素君 王祥 何彩霞 王兴兵 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期563-568,共6页
目的:探讨micro RNA-99a-5p(mi R-99a-5p)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响。方法:贴壁培养BM-MSC,用mi R-99a-5p类似物或抑制物转染细胞,实时定量PCR检测转染效率。通过分化实验检测mi R-99a-5p对BM-M SC成脂和成骨... 目的:探讨micro RNA-99a-5p(mi R-99a-5p)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响。方法:贴壁培养BM-MSC,用mi R-99a-5p类似物或抑制物转染细胞,实时定量PCR检测转染效率。通过分化实验检测mi R-99a-5p对BM-M SC成脂和成骨分化能力的影响。结果:与对照组相比,转染mi R-99a-5p类似物能显著上调mi R-99a-5p表达水平(P〈0.001),反之转染mi R-99a-5p抑制物则下调其表达水平(P〈0.001)。在成骨分化实验中,茜素红染色后镜下观察显示:过表达mi R-99a-5p能促进成骨分化,下调mi R-99a-5p的表达则抑制其成骨分化。分光光度计半定量检测也得到相同的结果。在成脂分化试验中,转染mi R-99a-5p类似物或抑制物对BM-MSC成脂分化无明显影响。结论:过表达mi R-99a-5p可促进BM-MSC成骨分化,但对其成脂分化无明显影响。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 miR-99a-5p 成骨分化 成脂分化
Ligand density-dependent influence of arginine-glycine- aspartate functionalized gold nanoparticles on osteogenic and adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells
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作者 Jingchao Li Ying Chen +1 位作者 Naoki Kawazoe Guoping Chen 《纳米研究:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2018年第3期1247-1261,共15页
细胞外的矩阵(ECM ) 在调整房间功能和命运起一个很重要的作用。制作 biomimetic 模型在干细胞区别调查 ECM 的角色是高度合乎需要的。在这研究, arginine-glycine-aspartate (RGD ) 与悦耳的表面 ligand 修改了金 nanoparticles (Au N... 细胞外的矩阵(ECM ) 在调整房间功能和命运起一个很重要的作用。制作 biomimetic 模型在干细胞区别调查 ECM 的角色是高度合乎需要的。在这研究, arginine-glycine-aspartate (RGD ) 与悦耳的表面 ligand 修改了金 nanoparticles (Au NP ) 密度被准备模仿 ECM 微型环境。他们 osteogenic 和人的间充质的干细胞(MSC ) 的 adipogenic 区别上的效果被调查。biomimetic Au NP 被 MSC 以一种 ligand 密度依赖者方式收起。有高 RGD 密度的 biomimetic NP 在碱的磷酸酶(高山) 上有禁止的效果活动,钙免职,和 MSC 的 osteogenic 标记基因表示。当 RGD 密度是低的时,当 RGD 密度高时,他们油微滴形成和 adipogenic 标记基因表示上的效果是否定的,当他们的效果是提升的时。biomimetic Au NP 主要通过影响焦点的粘附和细胞骨架调整了 MSC 的 osteogenic 和 adipogenic 区别。这研究在能在为织物工程和生物医学的应用制作功能的 biomaterials 提供有意义的策略的干细胞区别上加亮 biomimetic NP 的角色。 展开更多
关键词 密度依赖 干细胞 ar 标记基因 RGD 微型环境 细胞骨架
Molecular mechanism of quercitrin on osteogenic differentiation and adipogenic differentiation of rat bone marrow stromal stem cells (rBMSCs)
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作者 Zi-yi Guan Lan-ying Chen +2 位作者 Xue-liang Li Ya-ru Cui Rong-hua Liu 《中草药:英文版》 CAS 2018年第2期184-190,共7页
关键词 老鼠 机制 分子 干细胞 骨头 RT-PCR BMSC BMP-2
大鼠骨髓间充质干细胞向成骨与成脂分化过程中相关基因的表达变化 被引量:1
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作者 尹小丽 鲁艳芹 +1 位作者 刘保岩 韩金祥 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期355-361,共7页
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨与成脂分化过程中相关基因表达的变化。方法采用全贴壁法分离培养大鼠BMSCs,并观察其形态学特征的变化,MTT法检测其生长状况,并绘制生长曲线。分别采... 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨与成脂分化过程中相关基因表达的变化。方法采用全贴壁法分离培养大鼠BMSCs,并观察其形态学特征的变化,MTT法检测其生长状况,并绘制生长曲线。分别采用成骨和成脂诱导剂对第4代BMSCs进行诱导分化,应用碱性磷酸酶试剂盒、茜素红和油红O染色液检测其ALP活性、成骨和成脂分化能力;RT-QPCR检测诱导0、7、14和21 d的成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、碱性磷酸酶(ALP)及成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxidase proliferator activated receptor gamma,PPARγ)和脂肪酸结合蛋白(FABP4)的表达变化。结果全骨髓贴壁法能成功分离培养BMSCs,传代细胞生长增殖迅速,以长梭形细胞生长为主,细胞生长曲线呈S形。第4代BMSCs分别经成骨和成脂诱导剂诱导后,ALP、茜素红和油红O染色均呈阳性;诱导7、14和21 d后,Runx2、OCN、ALP、PPARγ和FABP4基因mRNA的表达量均显著高于0 d(P〈0.05);成骨分化过程中,Runx2和ALP在第7天时表达量最高,之后呈下降趋势,OCN的表达量呈稳定上升趋势;成脂分化过程中,PPARγ在第7天时表达量最高,FABP4始终高表达。结论 BMSCs具有易于体外分离培养、扩增和经诱导后具有多向分化潜能等特点,成骨和成脂分化相关基因的表达量随诱导时间延长而变化,呈明显的时序性表达差异,提示分别在成骨与成脂分化过程中起重要调控作用,为BMSCs在骨、细胞和基因等工程中的机制研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 基因表达
左归丸调控miR34a对BMSCs成骨分化能力的影响
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作者 张昊 余翔 +9 位作者 任辉 张玉卓 沈耿杨 陈少初 周建华 胡亚威 张弦 唐晶晶 梁德 江晓兵 《辽宁中医杂志》 2018年第6期1300-1304,I0001共6页
目的:探究左归丸调控miR34a对BMSCs成骨分化能力的影响。方法:培养BMSCs,分别用大鼠高、低剂量左归丸含药血清和对照血清干预BMSCs成骨分化过程。采用CCK8检测左归丸对BMSCs的增殖、毒性作用,AKP活性检测BMSCs成骨分化活性,ALP染色检... 目的:探究左归丸调控miR34a对BMSCs成骨分化能力的影响。方法:培养BMSCs,分别用大鼠高、低剂量左归丸含药血清和对照血清干预BMSCs成骨分化过程。采用CCK8检测左归丸对BMSCs的增殖、毒性作用,AKP活性检测BMSCs成骨分化活性,ALP染色检测细胞成骨分化能力,反转录-实时荧光定量技术(RT-q PCR)检测miR34a、Tgif2、Runx2、PPARγmRNA表达;Western-blotting检测Tgif2、RUNX2蛋白表达。结果:CCK8检测发现:随着时间的增加,从第1天到第7天,BMSCs增殖呈上升趋势,各组间增加程度无统计学差异;7~14 d,BMSCs增殖呈下降趋势。AKP活性检测示,干预BMSCs 3 d后,左高组AKP活性显著高于其余两组(P〈0.05);7 d时,左低、左高组AKP活性均显著高于对照组(P〈0.001)。干预3 d时,ALP染色结果示,左高组ALP染色阳性率高于其余两组;干预7 d时,左高、左低组ALP染色阳性率显著高于对照组。干预3 d时,左高、左低组miR34a mRNA表达较对照组上调,Tgif2、PPARγ2 mRNA表达较对照组下调;干预7 d后,左高组miR34a mRNA表达较对照组显著上调(P〈0.05);左低、左高组Tgif2 mRNA表达均较对照组显著下调(P〈0.05);左高组PPARγ2 mRNA表达较对照组显著下调(P〈0.01);干预3 d后,左高组Tgif2蛋白水平较对照组显著降低(P〈0.01);而左低组Runx2蛋白水平较对照组显著升高(P〈0.01);干预7 d后,左低、左高组Tgif2蛋白水平较对照组显著降低(P〈0.001),而左低、左高组Runx2蛋白水平较对照组显著升高(P〈0.05)。结论:左归丸具有促进BMSCs增殖及成骨分化的作用,其机制可能是通过上调miR34a,抑制其靶基因Tgif2表达,同时下调成脂相关因子PPRAγ和上调成骨核转录因子Runx2。 展开更多
关键词 左归丸 miR34a BMSCS 成骨分化 成脂分化
巴马汀对大鼠BMSC成骨成脂分化相关标志物的表达调控研究 预览
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作者 彭京平 庞荣清 张利 《西南国防医药》 CAS 2018年第12期1180-1183,共4页
目的研究巴马汀(PM)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨成脂分化相关标志物表达的影响和调控作用。方法原代分离、鉴定并诱导分化培养大鼠BMSC,分别设置空白对照组、PM低剂量组和PM高剂量组。Real-timePCR法检测BMSC中成骨相关基因Runx2... 目的研究巴马汀(PM)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨成脂分化相关标志物表达的影响和调控作用。方法原代分离、鉴定并诱导分化培养大鼠BMSC,分别设置空白对照组、PM低剂量组和PM高剂量组。Real-timePCR法检测BMSC中成骨相关基因Runx2、ALP、COLl、OCN及成脂相关基因PPARγ、Lpl的表达变化;Western法检测Runx2、ALP、COLl、OCN及PPARγ、Lpl蛋白表达变化。结果PM可剂量依赖性的上调成骨相关基因Runx2、ALP、COL1、OCN表达,抑制成脂相关基因PPARγ、Lpl的表达,而且PM对相关分子蛋白表达调控结果与基因表达调控一致。结论PM对大鼠BMSC具有潜在的促成骨、抑成脂的作用,可能成为预防和治疗骨质疏松的新靶点。 展开更多
关键词 巴马汀 骨髓 间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 基因
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罗格列酮与全反式维甲酸诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向骨分化研究 预览
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作者 王涵 邵英 +6 位作者 朱茄慧 廖云鹏 马妍 任文艳 周林云 吴柯 何百成 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1384-1391,共8页
目的 探讨罗格列酮(RSG)与全反式维甲酸(ATRA)对干细胞定向骨分化的影响,并初步解析这一作用的可能分子机制。方法 通过定量PCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测相关成骨与成脂分化标志物的变化情况;利用荧光素酶报告质粒,检测R... 目的 探讨罗格列酮(RSG)与全反式维甲酸(ATRA)对干细胞定向骨分化的影响,并初步解析这一作用的可能分子机制。方法 通过定量PCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测相关成骨与成脂分化标志物的变化情况;利用荧光素酶报告质粒,检测Runx2的转录水平以及BMP/Smad信号的激活情况。结果 在C2C12、C3H10T1/2和MEFs中,PPARγ以及RAR和RXR各亚型受体均有表达。单独使用RSG或ATRA均能增加MEFs细胞中碱性磷酸酶(ALP)的活性,且RSG能明显增加ATRA所诱导的ALP活性。RSG或ATRA单独应用不能诱导钙盐沉积,两者合用不但增加OPN和OCN的表达,而且还诱导钙盐沉积。RSG可诱导脂滴生成,ATRA不能诱导脂滴生成,且抑制RSG促进脂滴生成的作用。RSG在MEFs中促进C/EBPα表达,但ATRA能抑制RSG的这种作用。ATRA与RSG合用可促进MEFs中Runx2的蛋白表达。同时,ATRA与RSG合用增加了MEFs中BMP/Smad的转录和Smad1/5/8的磷酸化水平,同时也增加了Smad6的mRNA表达,但对Samd7的mRNA表达有抑制作用。结论 RSG与ATRA合用能诱导MEFs定向骨分化,该作用可能与ATRA抑制RSG诱导的成脂分化,并增加BMP/Smad信号转导活性有关。 展开更多
关键词 罗格列酮 全反式维甲酸 小鼠胚胎成纤维细胞 成脂分化 成骨分化 BMP/Smad信号
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