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鸭生长迟缓病毒抗体检测方法的建立 预览
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作者 池秋燕 宿鑫 +6 位作者 李雪松 硕盾 滕巧泱 杨健美 刘芹防 陈鸿军 李泽君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期6-11,共6页
近年来,从鸭群中分离到一种造成鸭生长迟缓的新病毒,命名为鸭生长迟缓病毒(Duck growth retardation virus)。本研究以鸭生长迟缓病毒Anhui2株为抗原免疫小鼠,筛选获得2株能够稳定分泌抗该病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1-5和3-6G),在... 近年来,从鸭群中分离到一种造成鸭生长迟缓的新病毒,命名为鸭生长迟缓病毒(Duck growth retardation virus)。本研究以鸭生长迟缓病毒Anhui2株为抗原免疫小鼠,筛选获得2株能够稳定分泌抗该病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1-5和3-6G),在此基础上,利用特异性单抗1-5和鸭生长迟缓病毒Anhui2毒株抗原建立了检测该病毒抗体的阻断ELISA方法,并确定了抗原和抗体的最适条件。对316份阴性血清检测结果进行统计学分析,确定建立的阻断ELISA方法的判定标准:当阻断率PI≥26.0%时判为抗体阳性,PI≤17.9%时判定抗体阴性,17.9%<PI<26.0%时判为可疑,需重复检测1次,如果仍低于26.0%,则判为抗体阴性。该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于鸭生长迟缓病毒病流行病学调查和疾病诊断。 展开更多
关键词 鸭生长迟缓病毒 单克隆抗体 中和 阻断ELISA
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小鼠角膜γδT细胞去除效率的双光子活体动态监测 预览
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作者 刘素素 张红敏 +3 位作者 柳慧 贺司宇 岳娟 王丽娅 《眼科新进展》 北大核心 2018年第6期523-527,共5页
目的比较抗体中和后角膜与耳部皮肤γδT细胞的去除效率,探寻一种能够活体动态监测角膜γδT细胞数量变化的替代方法。方法应用双光子激光扫描显微镜对抗体中和前后小鼠耳部皮肤γδT细胞数量进行监测,同时于抗体中和后6 h、12 h、24 h... 目的比较抗体中和后角膜与耳部皮肤γδT细胞的去除效率,探寻一种能够活体动态监测角膜γδT细胞数量变化的替代方法。方法应用双光子激光扫描显微镜对抗体中和前后小鼠耳部皮肤γδT细胞数量进行监测,同时于抗体中和后6 h、12 h、24 h对小鼠角膜进行取材染色,计数角膜中的γδT细胞,比较两者去除效率是否一致。结果正常小鼠角膜的γδT细胞常分布于角膜缘上皮及浅基质层,上皮层的γδT细胞形态不规则,常伴有突起,基质层γδT细胞多呈圆形或椭圆形,细胞数量为(27±4)个。抗体中和后,小鼠角膜γδT细胞数量逐渐减少,6 h、12 h和24 h细胞数量均明显少于去除前(P=0.03、0.00、0.00),去除效率分别为48%、78%、96%。正常小鼠耳部皮肤γδT细胞呈树突状,均匀分布于皮肤表皮层,细胞数量为(60±9)个,抗体中和后6 h、12 h和24 h,耳部皮肤γδT细胞数量与去除前相比亦明显减少(P=0.00、0.00、0.00),去除效率分别为43%、72%、95%。结论抗体中和后角膜与耳部皮肤γδT细胞数量均逐渐下降,两者去除效率随时间变化一致,监测小鼠耳部皮肤γδT细胞是动态监测角膜γδT细胞数量变化的理想替代方法。 展开更多
关键词 ΓΔT细胞 抗体中和 角膜 皮肤 双光子显微镜
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两株H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗病毒活性研究 预览 被引量:1
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作者 梁文花 贾云慧 +5 位作者 许程志 吴运谱 陈艳 杨焕良 乔传玲 陈化兰 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1460-1466,共7页
为了制备抗欧亚类禽型(Eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行检测,利用SIV A/swine/Henan/11/2005(HN11)增殖、纯化的全病毒蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免... 为了制备抗欧亚类禽型(Eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行检测,利用SIV A/swine/Henan/11/2005(HN11)增殖、纯化的全病毒蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,采用间接ELISA和HI检测方法进行筛选。结果获得了两株能稳定分泌抗HA蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2B6和4C7;两株MAbs的腹水ELISA和HI效价均分别高于1∶107和5log2;两株MAbs能够在IFA试验中与病毒HA蛋白发生反应,而在Western blot试验中不能检测到病毒HA蛋白;病毒中和试验结果显示这两株MAbs对EA H1N1SIV具有病毒中和活性;MAbs的抗病毒活性又进一步通过小鼠的感染试验进行了评估,结果表明接种了MAbs的小鼠获得了有效抵抗同源及异源H1N1SIV感染的保护效果。研究证实制备的两株MAbs具有较高的病毒中和活性和较强的抗病毒感染能力,可以将其进一步应用于抗EA H1N1SIV的感染及开展病毒抗原性变异的分子基础研究。 展开更多
关键词 猪流感病毒 HA蛋白 单克隆抗体 中和活性
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H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 邢晓伟 陈惠娴 +1 位作者 李桂梅 单虎 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期540-546,共7页
A型流感病毒(Influenza A viruses, IAVs)可以感染禽类和包括人类(Homo sapiens)在内的多种哺乳动物,造成重大经济损失,严重威胁人类健康。接种流感疫苗是预防流感发生的最有效手段,然而不同免疫策略对疫苗接种效果的影响仍未知... A型流感病毒(Influenza A viruses, IAVs)可以感染禽类和包括人类(Homo sapiens)在内的多种哺乳动物,造成重大经济损失,严重威胁人类健康。接种流感疫苗是预防流感发生的最有效手段,然而不同免疫策略对疫苗接种效果的影响仍未知。为探讨不同免疫策略对流感病毒免疫小鼠(Mus musculus)后抗体产生的影响,本研究选取两株血清学交叉反应性较弱的H9N2亚型禽流感病毒(A/chicken/Hubei/YK524/2015, A/chicken/Shandong/LX830/2014, 分别简称为YK524和LX830)作为研究对象,比较了同源免疫与异源免疫以及病毒灭活与否对抗体产生的影响。首先将病毒通过蔗糖梯度离心纯化,免疫6~7周龄雌性BALB/C小鼠,定期采集血清测定血凝抑制效价(haemagglutinin inhibition titer, HIT)。结果显示,活病毒抗原较灭活病毒抗原刺激小鼠产生的抗体水平更高,具备良好的交叉反应性。说明活病毒更易于刺激机体产生具有广泛交叉反应性的抗体。另一方面,异源免疫可刺激机体产生更多交叉反应性抗体。本研究进一步选择抗体效价较高的两只小鼠,利用杂交瘤技术制备抗流感病毒单克隆抗体。采用间接免疫荧光法筛选抗体分泌克隆。将阳性克隆经过3轮亚克隆,最终获得3株持续分泌抗体的细胞株,分别命名为H9-1、H9-2和H9-3。在对抗体进行鉴定中,发现3株抗体均对LX830及另外1株H9N2亚型禽流感病毒A/Mink/Shandong/wm/2014(Mink/SD/14)具有血凝抑制活性及中和活性,H9-1与H9-2抗体的血凝抑制效价和中和抗体活性均高于H9-3。推测这3株抗体的抗原识别表位位于血凝素(haemagglutinin, HA)球部受体结合部位。3株抗体均不可与YK524发生特异性结合,也不具备血凝抑制活性及中和活性,推测可能与YK524的血凝素基因上关键位点的差异有关。本研究探讨了可刺激机体产生更广谱抗体应答的途径,为流� 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2 单克隆抗体 血凝抑制试验 中和活性
Generation of antibodies against disintegrin and cysteine-rich domains by DNA immunization: An approach to neutralize snake venom-induced haemorrhage
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作者 Sidgi Syed Anwer Abdo Hasson 《亚太热带生物医学杂志:英文版》 CAS 2017年第3期198-207,共10页
Objective: To explore whether a DNA immunization approach targeting the major haemorrhage molecule of a prothrombin activator-like metalloproteinase from Echis ocellatus(E. ocellatus) venom could be conceived to inspi... Objective: To explore whether a DNA immunization approach targeting the major haemorrhage molecule of a prothrombin activator-like metalloproteinase from Echis ocellatus(E. ocellatus) venom could be conceived to inspire antibodies with more prominent specificity and equal adequacy to current conventional antivenoms systems.Methods: The isolated DNA Eo MP-6 was used as the template for PCR amplification using the Eo DC-2-specific forward and reverse primers. A PCR product of approximately700 bp was obtained and cloned into p Sec Tag-B expression vector where anti-Eo DC-2antibodies were generated and analysed for their efficacy to neutralise local haemorrhage in vitro and in vivo.Results: Our results suggest that the generated anti-Eo DC-2 showed a remarkable efficacy by(a) interfering with the interaction of the recombinant disintegrin 'Eo DC-2' isolated from the E. ocellatus as well as other viper species to the a2b1-integrins on platelets;(b) complete inhibition of the catalytic site of the metalloproteinase molecules in vitro using an adaptation antibody zymography assay. Furthermore, it has a polyspecific potential and constitutively expressed significant inhibition by cross-reaction and neutralised venom-induced local haemorrhage exerted by different viper species in vivo. The potential characteristic of Eo DC-2 against one part(the non-catalytic domain) as opposed to the whole molecule to neutralise its haemorrhagic activity is of crucial importance as it represents a novel approach with greater immunological specificity and fewer hazards, if any, than conventional systems of antivenom production, by exposure large animals that usually being used for the current antivenom production to a less injurious than expression of the whole molecule containing the catalytic metalloprotease domain. Hence, we report for the first time that our preliminary results hold a promising future for antivenom development.Conclusions: Antibodies generated against the E. ocellatus venom prothrombin activatorlike metalloprotease an 展开更多
羊口疮病毒119蛋白表达、纯化和多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 陈慧芹 罗树红 +4 位作者 梁婉菲 陈瑜 梁振明 高其庆 郝文波 《生物技术》 北大核心 2017年第2期112-116,173共6页
[目的]克隆表达羊口疮病毒ORFV119蛋白,以纯化重组蛋白为免疫原制备鼠多克隆抗体,并鉴定抗体的特性。[方法]PCR扩增ORFV119基因,克隆入原核表达载体p ET-28a(+)中构建重组质粒p ET28a-119。经双酶切和测序正确后,转化感受态大肠杆菌B... [目的]克隆表达羊口疮病毒ORFV119蛋白,以纯化重组蛋白为免疫原制备鼠多克隆抗体,并鉴定抗体的特性。[方法]PCR扩增ORFV119基因,克隆入原核表达载体p ET-28a(+)中构建重组质粒p ET28a-119。经双酶切和测序正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,之后目的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备ORFV119多克隆抗体并对其通过中和实验进行鉴定。[结果]成功构建重组质粒p ET28a-119,在大肠杆菌BL21中ORFV119融合蛋白以部分可溶形式表达。可溶性目的蛋白纯化后作为免疫原制备鼠多克隆抗体,抗体效价达1∶12 800,中和实验显示该多抗具有保护作用,可减轻宿主细胞在病毒感染时的病变效应(中和效价66 ND50/m L)。[结论]成功诱导表达、纯化ORFV119蛋白并制备其多克隆抗体,为深入研究ORFV感染、发病机理及羊口疮疾病的临床诊断奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORFV119 纯化 多克隆抗体 中和实验
抗HPV11病毒样颗粒单克隆抗体的性质鉴定及初步应用 预览
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作者 李敏 林知捷 +3 位作者 魏旻希 李少伟 夏宁邵 赵勤俭 《中国生化药物杂志》 CAS 2016年第4期9-14,共6页
目的分析和鉴定抗HPV11病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)鼠源单克隆抗体的性质,筛选性质和生物学活性较优的抗体,并初步应用于抗原或疫苗的质量分析。方法分别利用间接ELISA法和Western blot对HPV11的22株单克隆抗体的亚类、与HPV... 目的分析和鉴定抗HPV11病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)鼠源单克隆抗体的性质,筛选性质和生物学活性较优的抗体,并初步应用于抗原或疫苗的质量分析。方法分别利用间接ELISA法和Western blot对HPV11的22株单克隆抗体的亚类、与HPV11 VLP的结合能力和构象敏感性进行检测;采用血凝抑制实验对单克隆抗体的血凝抑制活性进行分析;运用基于假病毒的抗体中和实验对单克隆抗体的中和活性进行鉴定,选出中和活性高的单抗进行两两配对,采用双抗夹心ELISA法捕获单抗并筛选合适的配对双抗。结果对22株单抗的性质进行了详细和完整的鉴定,并根据构象敏感性进行排序,筛选出6株型别特异、结合活性强且中和活性高的单抗(2A2、4A1-3、16G7、14A6、9C12和19C7);成功建立了基于单抗的双抗夹心(14A6∶Ag∶9C12-HRP)ELISA定量分析方法。结论获得了较全面的HPV11 VLP单抗性质信息,建立了重组HPV11抗原质量分析的双抗夹心ELISA法,为HPV11抗原的生命周期管理或尖锐湿疣疫苗的研发、工艺优化、产品放行和稳定性研究等提供了技术支持。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 单克隆抗体 假病毒 中和活性 质量分析
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猪伪狂犬病毒gB、gC和gD蛋白多抗制备及交叉中和抗体效价测定 预览 被引量:2
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作者 刘飞 童武 +3 位作者 梁超 杨莘 郑浩 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期73-76,共4页
为研究猪伪狂犬病毒(PRv)主要免疫原性基因的抗原变异情况,本研究构建了PRV变异株JS-2012和弱毒疫苗株Bartha—K61的gB、gc和gD基因重组真核表达质粒。通过基因枪途径免疫新西兰大白兔,对制备的兔源多克隆抗体进行交叉中和抗体效价... 为研究猪伪狂犬病毒(PRv)主要免疫原性基因的抗原变异情况,本研究构建了PRV变异株JS-2012和弱毒疫苗株Bartha—K61的gB、gc和gD基因重组真核表达质粒。通过基因枪途径免疫新西兰大白兔,对制备的兔源多克隆抗体进行交叉中和抗体效价的i/n,4定。结果显示,JS.2012和Bartha.K61株的gC蛋白和gD蛋白多抗对PRVJS.2012变异株、SC经典强毒株和Bartha.K61弱毒疫苗株的交叉中和效价均无显著差异;而两个病毒株的2B蛋白多抗对JS.2012和sc株的中和效价较低,分别为1:29.0~56.7和1:56.2~137.0,对Bartha—K61株以及其他毒力基因缺失弱毒疫苗株的中和效价较高,分别为1:75.0--490.0和1:198.6~986.9,差异显著,推测该结果可能与PRV毒力基因缺失有关。本研究为进一步鉴定PRV流行株的抗原变异奠定基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 多克隆抗体 中和抗体效价
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心包积液-肝坏死综合征高免卵黄抗体的研制 预览 被引量:2
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作者 李新正 黄安群 +4 位作者 陈理盾 姬向波 肖曙光 靳双星 黄炎坤 《湖北农业科学》 2016年第8期2053-2054,2057共3页
采取心包积液-肝坏死综合征病鸡的肝脏匀浆冻融,接种SPF鸡胚,制备尿囊液灭活水苗,用两种免疫程序对产蛋鸡进行免疫,用琼脂扩散试验检测其卵黄抗体水平,制备高免卵黄抗体。经中和试验和临床试验,结果显示高免卵黄抗体对该病的预防和治疗... 采取心包积液-肝坏死综合征病鸡的肝脏匀浆冻融,接种SPF鸡胚,制备尿囊液灭活水苗,用两种免疫程序对产蛋鸡进行免疫,用琼脂扩散试验检测其卵黄抗体水平,制备高免卵黄抗体。经中和试验和临床试验,结果显示高免卵黄抗体对该病的预防和治疗效果明显。 展开更多
关键词 心包积液-肝坏死综合征 组织灭活水苗 卵黄抗体 回归试验 中和试验
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脊髓灰质炎中和抗体与ELISA-IgG抗体结果比较分析
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作者 陈慧 袁芳 +1 位作者 马江涛 马学旻 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第20期2936-2937,共2页
目的用中和实验验证酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊灰抗体结果的真实性、可靠性,为今后检测方法的选择提供借鉴。方法对462份ELISA法检测脊灰IgG抗体后的血清,用中和试验法测定其中和抗体加以证实,比较2种实验方法检测脊灰抗体结果的... 目的用中和实验验证酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊灰抗体结果的真实性、可靠性,为今后检测方法的选择提供借鉴。方法对462份ELISA法检测脊灰IgG抗体后的血清,用中和试验法测定其中和抗体加以证实,比较2种实验方法检测脊灰抗体结果的符合性。结果脊灰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体阳性率分别为98.70%(456/462)、98.48%(455/462)和97.19%(449/462),总阳性率为99.78%(461/462),ELISA-IgG抗体阳性率为89.39%(413/462)。2种方法总阳性率的检出差异有统计学意义(P〈0.05);2种检测方法的符合率为89.18%(412/462),ELISA法与中和试验相比其敏感性为89.37%(412/461)。结论脊灰ELISA试剂盒本身的质量、稳定性等问题值得关注。在脊灰免疫水平监测中,中和试验虽然繁琐但结果可信,其中和抗体更能真实反映人群免疫水平。 展开更多
关键词 脊灰抗体 中和试验 酶联免疫吸附实验 比较
日本脑炎病毒EIII结构域蛋白的表达及多克隆抗体的制备与鉴定 预览 被引量:1
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作者 沈强 魏建超 +5 位作者 史子学 常维山 赵凡凡 蒋春英 王水明 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第5期7-12,共6页
使用原核表达系统融合表达乙型脑炎病毒EIII结构域蛋白,经过纯化后多次免疫BALB/c小鼠,制备了鼠抗JEVE蛋白的多克隆抗体。Western blot结果表明该抗体与重组蛋白能够发生明显反应,与浓缩的JEv反应显出1条分子量大小约为53kDa的目的... 使用原核表达系统融合表达乙型脑炎病毒EIII结构域蛋白,经过纯化后多次免疫BALB/c小鼠,制备了鼠抗JEVE蛋白的多克隆抗体。Western blot结果表明该抗体与重组蛋白能够发生明显反应,与浓缩的JEv反应显出1条分子量大小约为53kDa的目的条带(JEVE蛋白);间接免疫荧光(indirect immunofluorescence,IFA)显示,多克隆抗体与BHK一21细胞内的JEV作用,在细胞质内产生绿色荧光,而对照组无特异性荧光;空斑减少中和试验测定多抗血清的中和抗体效价(PRNT50)为1:160。以上结果暗示制备的多克隆抗体能与重组蛋白和JEVE蛋白都能发生良好反应,并且该多抗有较高水平的JEV中和抗体效价. 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 原核表达 多克隆抗体 中和抗体
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特异性抗体效价检测技术概述 被引量:8
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作者 张佩 吴恩应 +1 位作者 陈玉琴 郭采平 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第17期3377-3381,共5页
特异性抗体效价是生物制品活性(浓度)的重要标志,通常采用生物学方法来测定,并以抗体与其相应抗原反应产生的、可观察到的标准免疫反应来表示。抗原抗体间除发生特畀性反应外,还会产生交叉反应,从而使特异性抗体效价的检测出现偏... 特异性抗体效价是生物制品活性(浓度)的重要标志,通常采用生物学方法来测定,并以抗体与其相应抗原反应产生的、可观察到的标准免疫反应来表示。抗原抗体间除发生特畀性反应外,还会产生交叉反应,从而使特异性抗体效价的检测出现偏差,这在实际应用中亟需避免。特异性抗体效价检测技术是疾病诊断、特异性免疫球蛋白制备和疫苗评价等领域的关键技术,在生物制品质量控制及医学临床实践中意义重大。本文对抗体效价检测的常规技术及其研究进展进行简要综述,并对这些技术的特异性、灵敏性、检测周期及应用情况等方面进行比较分析,以期对特异性抗体效价检测技术有一个系统全面的认知,有利于研究人员在实际应用中选择合适的技术,共同推动抗体检测技术的发展。 展开更多
关键词 特异性抗体 抗体效价 病毒感染力 中和反应 中和效价
HIV-1B’亚型及CRF07_BC重组毒株感染者中和反应特征分析 被引量:7
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作者 胡新韬 洪坤学 +5 位作者 赵春红 郝晓培 郑扬 任莉 阮玉华 邵一鸣 《中国热带医学》 CAS 2011年第4期391-394,共4页
目的探讨我国主要流行的HIV~1B’和CRF07-BC重组毒株感染者中和反应特征。方法采用基于Env假病毒的以表达CD4及CCR5/CXCR4的TZM-bl细胞系为靶细胞的中和抗体测定方法,测定40例感染时间在3年左右的HIV—CRF07-BC重组毒株感染者及31例... 目的探讨我国主要流行的HIV~1B’和CRF07-BC重组毒株感染者中和反应特征。方法采用基于Env假病毒的以表达CD4及CCR5/CXCR4的TZM-bl细胞系为靶细胞的中和抗体测定方法,测定40例感染时间在3年左右的HIV—CRF07-BC重组毒株感染者及31例感染时间在10年以上的HIV-1B’亚型毒株感染者血浆对11株包括B(4株)、CRF07BC(3株)、CRF01-AE(3株)及中和敏感毒株(1株)Env假病毒的中和反应,并分析感染者血浆的中和宽度和中和强度。结果B’亚型毒株感染者在中和宽度及亚型交叉中和强度方面均高于感染时间相对较短的CRF07BC重组毒株感染者,B’亚型感染者对CRF01-AE亚型病毒的中和活性显著高于CRF07-BC重组型感染者:而CRF07-BC重组型感染者对同亚型病毒的中和强度则显著高于B’亚型感染者。结论HIV-1感染者中和抗体宽度以及对异源病毒的中和活性与感染时间正相关,适度的病毒抗原刺激有助于广谱中和活性的产生。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 抗体 中和 假病毒
IgM抗体检测对肠道病毒71型感染者诊断价值的探讨 被引量:5
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作者 吴斌 李亮 +6 位作者 汤奋扬 祁贤 祖荣强 崔仑标 朱凤才 周明浩 汪华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 934-937,共4页
目的探讨IgM抗体检测对肠道病毒71型(EV71)感染哲的诊断价值,并与核酸检测和中和试验方法进行比较分析。方法采用EV71IgM抗体酶免检测试剂盒(EV71-IgM试剂)、EV71核酸检测试剂龠(EV71.PCR试剂)和I{l和试验方法,检测115例EV71... 目的探讨IgM抗体检测对肠道病毒71型(EV71)感染哲的诊断价值,并与核酸检测和中和试验方法进行比较分析。方法采用EV71IgM抗体酶免检测试剂盒(EV71-IgM试剂)、EV71核酸检测试剂龠(EV71.PCR试剂)和I{l和试验方法,检测115例EV71感染者的EV71RNA、中和抗体和IgM抗体的水平,并进行比较性研究分析。结果对115例EV71感染者,EV71-lgM试剂对患者卣’份m清的检出率为80.9%(93/115,95%CI:72.5~87.6),对228份健康儿童血清,EV71-tgM试剂的枪出牢为2.6%。问时,对病发1~2d采集的54份血清检出率为70.4%(38/54),显示了较好的早期诊断价ffEi。EV71-PCR试剂对患者咽拭子标本的检出率为82.6%(95/115,95%CI:74.4-89.0),与EV71-IgM试剂棚比,差异无统计学意义。此外,EV71-IgM试剂与EV71-PCR试剂具有很好的H补性,两种方法联合使川呵提高检测灵敏度约10个百分点达到92.2%。结论EV71-IgM试剂具有良好的早期诊断价值,与EV71-PCR试剂联用可提高诊断率。 展开更多
关键词 肠道病毒71 IGM抗体 中和试验 实时荧光PCR
鸭肝炎病毒现场分离株单克隆抗体的研制 预览 被引量:3
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作者 周珍辉 陈万荣 +7 位作者 周育森 向双云 曹金元 李玉冰 杨久仙 曹授俊 田璐 张浩 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期 78-81,共4页
为有效防治鸭肝炎,建立特异性强、敏感性高、简便快速的DHV检测方法,对分离的DHV进行纯化,并制备单克隆抗体。鸭胚尿囊液中的DHV经冻融、氯仿反复处理、PEG浓缩和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选及多... 为有效防治鸭肝炎,建立特异性强、敏感性高、简便快速的DHV检测方法,对分离的DHV进行纯化,并制备单克隆抗体。鸭胚尿囊液中的DHV经冻融、氯仿反复处理、PEG浓缩和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选及多次亚克隆,成功获得8株阳性杂交瘤细胞,分别命名为DHV-1、DHV-6、DHV-7、DHV-8、DHV-9、DHV-10、DHV-11和DHV-12,并制备出腹水。8株单抗腹水经ELISA法检测,DHV-7、DHV-8的效价为1∶2 000;DHV-6、DHV-10的效价为1∶8 000;DHV-1、DHV-9、DHV-11和DHV-12的效价为(1∶32 000)~(1∶512 000)。抗体亚类鉴定,DHV-6、DHV-7、DHV-8、DHV-10为IgG1;DHV-1、DHV-12为IgG2a;DHV-2、DHV-9、DHV-11为IgG2b。上述抗体均为k链。特异性鉴定表明,上述单克隆抗体只能与从尿囊液中纯化的DHV病毒包板反应,与非DHV抗原无反应。鸭胚中和试验及雏鸭保护试验结果表明,DHV-6、DHV-7、DHV-9、DHV-10具有较好的中和活性,并对雏鸭有不同程度的保护作用。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 单克隆抗体 间接ELISA法 中和试验
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东北地区大豆花叶病毒3号株系衣壳蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备 预览 被引量:6
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作者 王永志 苏颖 +7 位作者 米丽娟 张伟 宋淑云 高旭东 刘颖 张正坤 董英山 李启云 《吉林农业科学》 CSCD 2011年第6期 37-39,共3页
本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(cP)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了CP蛋白,通过亲和层析获得了纯化的CP蛋白;制备了9株CP蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够阻断病毒的感染。... 本研究克隆了东北大豆花叶病毒3号株系衣壳(cP)蛋白基因,在大肠杆菌中表达了CP蛋白,通过亲和层析获得了纯化的CP蛋白;制备了9株CP蛋白单克隆抗体,中和试验表明,6E7、2D3、1C2这3株单克隆抗体具有中和作用,能够阻断病毒的感染。本研究制备的单克隆抗体为大豆花叶病毒检测试剂盒的研制和大豆花叶病毒抗病育种研究打下基础。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 衣壳蛋白 单克隆抗体 中和活性
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抗金黄色葡萄球菌肠毒素B保护性中和单克隆抗体的筛选及鉴定
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作者 康延申 王华菁 +4 位作者 杨海鸥 谈文龙 张波 魏于全 戴建新 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期298-302,共5页
金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)属于热毒素超抗原家族。它通过激活T细胞,使T细胞大量增殖并释放大量炎症细胞因子,从而导致中毒性休克综合征及死亡。为了筛选获得抗SEB的中和保护性单克隆抗体,我们首先克隆了SEB基因,表达纯化获得GST-SE... 金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)属于热毒素超抗原家族。它通过激活T细胞,使T细胞大量增殖并释放大量炎症细胞因子,从而导致中毒性休克综合征及死亡。为了筛选获得抗SEB的中和保护性单克隆抗体,我们首先克隆了SEB基因,表达纯化获得GST-SEB融合蛋白;将之免疫BALB/c小鼠后,利用杂交瘤技术结合ELISA检测,筛选获得10株抗SEB单克隆抗体杂交瘤细胞株;ELISA和Western blot鉴定其分泌的抗体能与SEB特异结合;抗体亚型检测均为IgG1/k;体外实验证实,10株抗体中有6株(1A5、4A3、3E2、3C1、1D1、2G9)能够有效阻断SEB诱导的人外周血单核细胞(PBMC)的激活,具有中和保护作用。本研究为进一步获得抗SEB的人源化单克隆中和性抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体 金黄色葡萄球菌肠毒素B 中和保护
山西和河南省部分地区人群流行性乙型脑炎病毒中和抗体水平调查 被引量:4
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作者 付士红 尹遵栋 +15 位作者 高晓艳 王环宇 翟如芳 张彦平 孟维珊 邹文菁 吕志 唐晓燕 陈淑珍 汤伯明 姚海威 王泽义 常少英 梁少林 梁晓峰 梁国栋 《疾病监测》 CAS 2010年第2期99-102,共4页
目的调查山西和河南省部分地区健康人群血清中流行性乙型脑炎(乙脑)病毒中和抗体水平。方法对采集的血清标本按1:10,1:20,1:40,1:80四个稀释度稀释后进行乙脑病毒中和试验,结果判定采用细胞病变观察方法并结合ELISA测定结果进行... 目的调查山西和河南省部分地区健康人群血清中流行性乙型脑炎(乙脑)病毒中和抗体水平。方法对采集的血清标本按1:10,1:20,1:40,1:80四个稀释度稀释后进行乙脑病毒中和试验,结果判定采用细胞病变观察方法并结合ELISA测定结果进行综合判定。结果调查结果显示,所测标本中乙脑病毒中和抗体保护率以临猗县最高(87.6%),其次是栾川县(58.2%)和万荣县(51.4%)。经χ2检验,临猗县与万荣县中和抗体保护率差异有统计学意义(χ2=42.812,P=0.000),临猗县的中和抗体保护率高于万荣县,栾川县与万荣县的中和抗体保护率差异无统计学意义(χ2=1.466,P=0.226)。两个年龄组(≤40岁和〉40岁)中和抗体保护率比较显示,临猗县差异无统计学意义(χ2=0.057,P=0.811),万荣县差异有统计学意义(χ2=5.505,P=0.019),栾川县差异无统计学意义(χ2=2.129,P=0.145)。结论三个县健康人群乙脑病毒中和抗体保护率不同,这可能与当地乙脑的流行状况以及疫苗的接种情况有关。 展开更多
关键词 流行性乙脑脑炎病毒 中和抗体 中和试验
具有中和活性抗人类腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定及应用 被引量:1
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作者 李思袖 张国成 +4 位作者 许东亮 聂晓晶 李小青 汪志华 张学红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期 1140-1142,共3页
目的:制备具有中和活性抗人类腺病毒(HAdv)单克隆抗体(mAb),并进行鉴定与应用。方法:以活的人类腺病毒3型(HAdv-3)滴鼻免疫BALB/c鼠,用细胞融合技术制备抗HAdv的mAb细胞株,采用中期分裂相秋水仙素阻抑法对mAb细胞株染色体进行分... 目的:制备具有中和活性抗人类腺病毒(HAdv)单克隆抗体(mAb),并进行鉴定与应用。方法:以活的人类腺病毒3型(HAdv-3)滴鼻免疫BALB/c鼠,用细胞融合技术制备抗HAdv的mAb细胞株,采用中期分裂相秋水仙素阻抑法对mAb细胞株染色体进行分析;使用鼠mAb亚型鉴定试剂盒进行抗体亚型鉴定,通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光技术进行特异性鉴定。建立HAdv-3感染动物模型,用获得的HAdv-3 mAb进行保护性研究。结果:细胞融合率为86%,抗HAdv抗体阳性孔率为51.4%。鉴定1株杂交瘤细胞(1A4),染色体数为98条,抗体亚类属IgG2a/κ,抗体腹水ELISA效价达10-5。ELISA、Western blot和间接免疫荧光证实该mAb特异性好。该mAb对HAdv-3感染动物有保护性作用。结论:成功地制备具有中和活性的抗HAdv mAb。该mAb识别的是HAdv六邻体蛋白,对HAdv-3感染动物有保护作用。 展开更多
关键词 腺病毒 单克隆抗体 中和活性
WSSV单抗的制备及其在红螯螯虾病毒病检测中的应用 预览 被引量:7
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +2 位作者 徐洋 曹铮 潘晓艺 《集美大学学报:自然科学版》 CAS 2009年第2期 120-125,共6页
将提纯的感染红螯螯虾的WSSV,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后取其脾细胞与SP2/0融合.间接ELISA筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,共获得7株针对WSSV的特异性单抗,分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10.细胞上清ELISA效价为1:1600—... 将提纯的感染红螯螯虾的WSSV,免疫BALB/c小鼠,三次免疫后取其脾细胞与SP2/0融合.间接ELISA筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,共获得7株针对WSSV的特异性单抗,分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10.细胞上清ELISA效价为1:1600—1:6400.抗体亚类鉴定结果表明:E2、G3、C4属于IgG1,C2、D5、F10属于IgG3,E3属于IgG2a亚类;单抗热稳定性试验表明7株单抗均是热稳定的.选取单抗G3和F10进行病毒中和试验,结果表明:在适宜的抗原浓度下,两株单抗均有较好的中和能力.选取单抗G3作为一抗建立了间接ELISA方法,通过对人工感染红螯螯虾WSSV的测定,初步证实该单抗可用于WSSV的检测. 展开更多
关键词 白斑综合征病毒 红螯螯虾 单克隆抗体 间接ELISA 中和试验
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