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牛冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 预览
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作者 王莎莎 王吉 岳秉飞 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期69-73,共5页
目的建立特异灵敏的牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)荧光定量PCR检测方法,并对牛源性样本进行筛查。方法根据Genbank中登录的BCV的N基因序列设计Taq Man引物探针,建立基于Taq Man探针法的BCV PCR检测方法,对收集到的牛源样本进行BC... 目的建立特异灵敏的牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)荧光定量PCR检测方法,并对牛源性样本进行筛查。方法根据Genbank中登录的BCV的N基因序列设计Taq Man引物探针,建立基于Taq Man探针法的BCV PCR检测方法,对收集到的牛源样本进行BCV筛查,并对部分阳性样本的PCR产物进行测序鉴定。结果建立了能够特异检测BCV的Taq Man探针法荧光定量PCR检测方法,其标准曲线相关系数Slope为-3. 417,相关系数r2为0. 999,,扩增效率Eff为96. 195%。该方法检测BCV的敏感度为40 copies。使用该方法检测64份牛肛拭子样本检出率为1. 5%,检测33份牛源生物制品检出率为6%,部分阳性样本的PCR产物经测序比对为BCV核酸序列,说明BCV在国内牛群中流行,牛源相关生物制品中有感染BCV的潜在风险。结论经测序验证,建立的方法能够灵敏的检测样本中的BCV核酸,应加强牛源相关生物制品中BCV的监测,避免人感染BCV的潜在风险。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 TAQ Man探针法荧光定量PCR方法 检测和初步应用
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江浙部分地区牛病毒性腹泻病毒分子流行病学调查及BVDV-2型毒株分离鉴定 预览
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作者 姚志兰 傅宏庆 +1 位作者 崔平福 宗佳丽 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS 北大核心 2019年第1期40-46,102共8页
为了解江浙地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的流行情况,于2016~2017年在江浙部分地区采集了145份临床腹泻犊奶牛血清样品,并对其进行RT-PCR检测,对阳性样品的5′-UTR和Npro基因进行序列与遗传进化树分析。145份血清样品中共有19份样品为BVD... 为了解江浙地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的流行情况,于2016~2017年在江浙部分地区采集了145份临床腹泻犊奶牛血清样品,并对其进行RT-PCR检测,对阳性样品的5′-UTR和Npro基因进行序列与遗传进化树分析。145份血清样品中共有19份样品为BVDV阳性,阳性率为13.1%,其中江苏和浙江地区的阳性率分别为14.1%和11.9%。根据阳性样品的5′-UTR和Npro基因序列进行遗传进化树分析,18份样品为BVDV-1型,包括1a(n=2)、1b(n=6)、1c(n=2)、1m (n=7)和1q(n=1)亚型;1份样品为BVDV-2型,其5′-UTR和Npro基因序列分析均显示与我国吉林分离株BVDV-2SD1301同源性最高,分别为99.0%与97.0%。同时,对BVDV-2型阳性样品进行病毒分离、RTPCR检测和IFA鉴定,证实成功分离到1株非致细胞病变型(ncp)BVDV-2病毒,命名为BVDV-2JZ21。结果表明:江浙部分地区存在较高比例的BVDV感染,且基因型多样,其中BVDV-1b与1m亚型为该地区感染的主要亚型,分别占33.3%和38.9%。此外,该地区已存在BVDV-2感染。这一研究丰富了BVDV的分子流行病学数据,也为BVDV疫苗研制提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 分子流行病学 分型
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基于Label-free技术分析牛卵泡蛋白质组分及关键调控蛋白 预览
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作者 郝庆玲 景炅婕 +5 位作者 侯淑宁 许冬梅 赵成萍 朱芷葳 吕丽华 李鹏飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期983-992,共10页
旨在研究牛卵泡发育过程中蛋白质组表达变化并筛选卵泡发育关键调控蛋白,利用非标记(label-free)定量蛋白质组学技术对牛卵泡颗粒细胞(granulesa cells,GCs)蛋白质组分进行比较分析。采集牛发情周期优势卵泡(dominant follicles,DF)和... 旨在研究牛卵泡发育过程中蛋白质组表达变化并筛选卵泡发育关键调控蛋白,利用非标记(label-free)定量蛋白质组学技术对牛卵泡颗粒细胞(granulesa cells,GCs)蛋白质组分进行比较分析。采集牛发情周期优势卵泡(dominant follicles,DF)和从属卵泡(subordinate follicles,SF),分别分离GCs,并提取总蛋白,胰蛋白酶酶解,液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行蛋白质组分分析,数据库检索分析DF和SF中蛋白质表达情况,并应用生物信息学方法筛选牛卵泡发育关键调控蛋白。结果表明:本试验从30321个肽段中共成功鉴定出3409种蛋白质(FDR≤0.01),其中,DF中表达2895种蛋白质,SF中表达3102种蛋白质,获得差异表达蛋白质(差异倍数>2,P<0.05)259种,17种差异表达蛋白质可能与牛卵泡优势化过程相关,SERPINB2可能调控牛卵泡闭锁。该研究筛选获得的牛卵泡差异表达蛋白质和特异表达蛋白质,丰富了牛卵泡发育调控理论,为进一步研究卵泡闭锁及优势化奠定基础。 展开更多
关键词 优势卵泡 从属卵泡 LABEL-FREE 蛋白质组
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辽宁省牛副结核病血清学调查 预览
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作者 何利昆 吴运谱 +5 位作者 关乃鹏 马晓威 闫海滨 陈瑶 邓新 袁国辉 《现代畜牧兽医》 2019年第3期49-52,共4页
为了解辽宁省牛场副结核病的感染状况,采用ELISA方法对2017年间辽宁省14个地市奶牛场户的860份牛血清样品进行了副结核病抗体检测。结果显示:副结核阳性场占比44.2%,抗体阳性率为5.6%;奶牛场阳性率为5.5%,肉牛场阳性率为5.9%;不同饲养... 为了解辽宁省牛场副结核病的感染状况,采用ELISA方法对2017年间辽宁省14个地市奶牛场户的860份牛血清样品进行了副结核病抗体检测。结果显示:副结核阳性场占比44.2%,抗体阳性率为5.6%;奶牛场阳性率为5.5%,肉牛场阳性率为5.9%;不同饲养规模牛场的阳性率分别为:大型牛场1.8%、中型牛场7.7%、小型牛场8.6%。小型牛场的阳性率高于大、中型牛场。此次血清学调查采集样品的地理范围较广、样品的采集量较大,基本能够反映辽宁省牛场牛副结核病的感染情况,调查结果可为副结核病的预防和控制提供参考。 展开更多
关键词 副结核病 血清学 调查
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牛活体采卵技术的研究进展 预览
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作者 张文军 黄承俊 《现代畜牧兽医》 2019年第3期53-59,共7页
活体采卵技术是胚胎移植体系中重要组成成分,因其能在不影响个体正常生产的情况下重复提供可利用卵子而被人们广泛应用于生产实践。本文对近几年该技术及其影响因素等相关研究进行分析,以供相关人员借鉴和参考。
关键词 活体采卵 综述
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牛HSL基因的克隆和生物信息学分析 预览
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作者 刘燕 李赞 田万年 《畜牧与饲料科学》 2019年第6期9-12,共4页
旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛... 旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛各组织中的表达情况;利用生物信息学软件对其所编码的牛HSL蛋白进行分析。结果显示,获得的牛HSL基因CDS全长为2271bp,编码756个氨基酸,与GenBank登录的牛HSL基因同源性最高,为99.9%。HSL蛋白含有一个HSL-Nsuperfamily保守结构域,无信号肽结构,具有疏水性。半定量RT-PCR显示,HSL基因在检测的心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肝脏、大网膜、皮下脂肪、肌肉8种组织中均有表达,其中在大网膜和皮下脂肪中表达量较高,在肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、肌肉和心脏中度表达。该试验可为研究牛HSL蛋白的结构和功能提供参考。 展开更多
关键词 克隆 分析 HSL基因 生物信息学 表达谱
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Mycoplasma leachii causes bovine mastitis: Evidence from clinical symptoms, histopathology and immunohistochemistry 预览
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作者 CHANG Ji-tao YU De-bin +7 位作者 LIANG Jian-bin CHEN Jia WANG Jian-fa WANG Fang JIANG Zhi-gang HE Xi-jun WU Rui YU Li 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期160-168,共9页
Twelve quarters of six lactating cows were inoculated with Mycoplasma leachii strain GN407 through intramammary ductal infusion;another 12 quarters were inoculated with heat-inactivated M. leachii culture medium as ne... Twelve quarters of six lactating cows were inoculated with Mycoplasma leachii strain GN407 through intramammary ductal infusion;another 12 quarters were inoculated with heat-inactivated M. leachii culture medium as negative controls. Multidisciplinary procedures, including clinical assessment, etiology assessment, pathology and immunohistochemistry (IHC), were used to elucidate the pathogenicity of M. leachii in bovine mastitis. From post-inoculation days (PIDs) 3 to 9, 12 inoculated quarters developed mild to severe clinical mastitis and mammary tissue histopathological changes, including inflammatory cell infiltration and architectural destruction of mammary gland ducts. The M. leachii antigen was also detected by IHC in the mammary gland epithelial cells of the inoculated quarters as a weak signal on PID 6 and as a strong signal on PID 9. The control quarters also developed mild mastitis and histopathological changes on PID 9, and M. leachii was also detected by IHC. Throughout the experimental period, the quarters of the negative control cow were clinically and pathologically normal, and the M. leachii antigen was not detected. In conclusion, direct histological and immunohistochemical evidence confirmed that M. leachii causes clinical bovine mastitis through histopathological lesions induced by invasion of the pathogen into mammary gland cells and through inflammatory cell infiltration. 展开更多
关键词 MYCOPLASMA leachii BOVINE MASTITIS PATHOGENICITY HISTOPATHOLOGY IMMUNOHISTOCHEMISTRY
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干扰lnc4351对牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的影响 预览
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作者 张俊星 朱菲菲 +4 位作者 李燕 陈明明 刘新峰 郭宏 丁向彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期747-755,共9页
为探究长链非编码RNA(lncRNA)对牛骨骼肌卫星细胞增殖及分化的影响,本研究以牛骨骼肌卫星细胞及已建立的体外成肌诱导分化模型为基础,以前期高通量测序获得的牛骨骼肌卫星细胞分化前后表达差异倍数较大的一个预测lncRNA为靶标,对其进行... 为探究长链非编码RNA(lncRNA)对牛骨骼肌卫星细胞增殖及分化的影响,本研究以牛骨骼肌卫星细胞及已建立的体外成肌诱导分化模型为基础,以前期高通量测序获得的牛骨骼肌卫星细胞分化前后表达差异倍数较大的一个预测lncRNA为靶标,对其进行生物信息学分析及亚细胞定位,命名为lnc4351。设计合成lnc4351的siRNA,转染牛骨骼肌卫星细胞,采用EdU染色的方法检测干扰lnc4351对细胞增殖的影响;对转染siRNA的牛骨骼肌卫星细胞进行体外成肌诱导分化,观察肌管的形成状态,同时采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测分化标志因子MyoG和MHC基因的mRNA及蛋白水平的表达变化,研究干扰lnc4351对细胞分化的影响。结果显示,lnc4351位于牛的14号染色体,不具有蛋白编码潜能,是一个未报道过的lncRNA,在牛骨骼肌卫星细胞的细胞质和细胞核内均有分布,主要存在于细胞核;干扰lnc4351表达后,EdU阳性细胞比率显著下降(P<0.05),说明下调lnc4351表达显著抑制了牛骨骼肌卫星细胞的增殖;下调lnc4351表达后肌卫星细胞经诱导分化产生的肌管量呈现增多趋势,分化标志因子MyoG和MHC的蛋白水平显著或极显著上调(P<0.05;P<0.01),说明干扰lnc4351能够促进牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。本研究结果表明,干扰lnc4351表达可以抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖并促进其成肌分化过程,为进一步开展lncRNA对牛骨骼肌发育的调控机制及肌肉发育相关研究提供参考。 展开更多
关键词 lncRNA 骨骼肌卫星细胞 细胞增殖 成肌分化
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西门塔尔牛耳皮肤成纤维细胞的体外培养 预览
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作者 詹同彤 倪和民 +1 位作者 郭勇 王相国 《中国农学通报》 2019年第3期47-50,共4页
供体动物细胞体外培养模式的建立是动物克隆研究与生产的必要条件。本试验先利用组织块培养再利用胰酶消化纯化的方法培养西门塔尔牛耳皮肤成纤维细胞,进而为牛体细胞核移植做准备。结果表明,先组织块培养后再消化纯化的方法获得的牛耳... 供体动物细胞体外培养模式的建立是动物克隆研究与生产的必要条件。本试验先利用组织块培养再利用胰酶消化纯化的方法培养西门塔尔牛耳皮肤成纤维细胞,进而为牛体细胞核移植做准备。结果表明,先组织块培养后再消化纯化的方法获得的牛耳皮肤成纤维细胞形态良好,传代后的细胞成活率较高,贴壁良好,且牛耳皮肤细胞的增殖情况符合体外培养细胞正常生长增殖的一般规律。因此,利用组织块培养后再消化纯化是一种获得牛耳皮肤成纤维细胞简单而有效的方法,能够作为牛体细胞核移植技术中供体细胞制备方法。 展开更多
关键词 成纤维细胞 组织块培养法
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G8P[1]型牛轮状病毒的分离鉴定及序列分析 预览
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作者 葛雨 冉旭华 闻晓波 《现代畜牧兽医》 2019年第4期12-16,共5页
为了对大庆地区患有腹泻疾病的舍饲牛进行病原鉴定,通过RT-PCR方法对病料进行检测,将轮状病毒阳性样品接种MA104细胞进行病毒分离,扩增分离株VP7、VP4片段,将扩增产物纯化后连接在pMD18-T载体上,转化到大肠杆菌TOP10感受态细胞中进行亚... 为了对大庆地区患有腹泻疾病的舍饲牛进行病原鉴定,通过RT-PCR方法对病料进行检测,将轮状病毒阳性样品接种MA104细胞进行病毒分离,扩增分离株VP7、VP4片段,将扩增产物纯化后连接在pMD18-T载体上,转化到大肠杆菌TOP10感受态细胞中进行亚克隆,将鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定,并利用DNA Star与GenBank上的参考序列进行同源性分析。结果表明,从样品中分离到1株BRV毒株,将其命名NX23。核苷酸序列分析表明,分离株NX23属于G8P[1]型轮状病毒,确认了G8P[1]型牛轮状病毒在我国的流行,为我国BRV分子进化及其RV分子流行病学的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 轮状病毒 VP7 VP4 序列分析
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MCPIP1 mediates inflammatory responses induced by lipopolysaccharide and lipoteichoic acid in bovine mammary epithelial cells
11
作者 Shaopei Qi Lixue Wang +3 位作者 Xiao Chang Yanfen Zhang Yong Zhang Ming-Qing Gao 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期150-158,共9页
Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1(MCPIP1)is a kind of zinc finger RNA binding protein,which exerts immune responses in a variety of cell types.However,the role of MCPIP1 in bovine mammary epithelial c... Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1(MCPIP1)is a kind of zinc finger RNA binding protein,which exerts immune responses in a variety of cell types.However,the role of MCPIP1 in bovine mammary epithelial cells during mastitis has not been studied.In this study,we explored the functions of MCPIP1 in the inflammatory process induced by virulence factors of pathogens in bovine mammary alveolar cell-T(MAC-T)cell line.Our results showed that MCPIP1 was significantly highly expressed both in the mammary tissue of dairy cows with mastitis and in inflammatory MAC-T cells induced by lipopolysaccharide(LPS)or lipoteichoic acid(LTA).Furthermore,we found that overexpression of MCPIP1 in MAC-T cells abated the LPS-induced increase at the gene expression levels of inflammatory mediators tumor necrosis factor-α-α,interleukin(IL)-1β,IL-6 and IL-8,enhanced the LPS-and LTA-induced inhibition of epithelial proliferation and promoted the LPS-and LTA-induced oxidative and DNA damage.These findings indicated that MCPIP1 has an enormous potential in regulating the inflammatory response of bovine mammary epithelial cells during infection and may provide an effective therapeutic target for bovine mastitis to reduce the damage caused by inflammatory reactions. 展开更多
关键词 MCPIP1 BOVINE MAMMARY EPITHELIAL cell inflammatory response DNA DAMAGE OXIDATIVE DAMAGE
低水平葡萄糖对奶牛乳腺上皮细胞促炎症因子表达的影响 预览
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作者 张金友 黄鹤 +4 位作者 李伟 韩欢胜 甘文平 宋伟红 卫喜明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1525-1531,共7页
本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上... 本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上皮细胞分离纯化后,分别在含有0.25、1.00和4.50mg/mL葡萄糖的完全培养液中培养24h,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞中相关基因的表达。结果表明,上述基因的mRNA相对表达量在各葡萄糖浓度之间没有明显差异(P>0.05)。其中TNF-α和LYZ在各浓度葡萄糖中的表达量均非常少,iNOS的表达量居中,而IL-6、LF和CXCL8在各浓度组中的表达量相对较高。试验结果提示,葡萄糖浓度的减少并没有直接影响乳腺上皮细胞中TNF-α、LYZ、iNOS、IL-6、LF和CXCL8mRNA的基础性表达;乳腺上皮细胞在未受到感染的情况下,能够表达一定数量的iNOS、IL-6、LF和CXCL8,这些因子可以作为先天性免疫防御的储备,在受到感染的情况下能迅速应对病菌的入侵。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 葡萄糖 炎症
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牛人工授精所需有效精子数的研究 预览
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作者 王大鹏 王化青 +3 位作者 王玲玲 李傲楠 黄承俊 高磊 《现代畜牧兽医》 2019年第5期26-28,共3页
为了探索不同数量有效精子与受胎率之间的关系,试验用200万、400万、600万、800万有效精子数冻精输配母牛。结果表明,600万与800万有效精子数受胎率比较差异不显著(P>0.05),400万和200万有效精子数受胎率显著低于800万(P<0.05)。... 为了探索不同数量有效精子与受胎率之间的关系,试验用200万、400万、600万、800万有效精子数冻精输配母牛。结果表明,600万与800万有效精子数受胎率比较差异不显著(P>0.05),400万和200万有效精子数受胎率显著低于800万(P<0.05)。该结果可为相关单位进一步优化细管冻精生产提供参考。 展开更多
关键词 冷冻精液 有效精子数 受胎率
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The past, present and future of bovine pluripotent stem cells:a brief overview
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作者 Xiuchun TIAN 《农业科学与工程前沿:英文版》 2019年第1期3-7,共5页
Although the pursuit of bovine embryonic stem cells started more than 26 years ago for the purpose of gene-targeting, true pluripotent stem cells in this economically important species are still elusive. With the rapi... Although the pursuit of bovine embryonic stem cells started more than 26 years ago for the purpose of gene-targeting, true pluripotent stem cells in this economically important species are still elusive. With the rapid advances in genome-editing and cloning using homologously recombined somatic cells, the need for pluripotent stem cells for precise genetic modi?cation in any species became questionable. With the pig being the better model for human regenerative biology, the identi?cation of the commonalities and uniqueness of the pluripotency circuitry across mammalian species may be the main objective for studying pluripotent stem cells in the bovine. 展开更多
关键词 BOVINE EMBRYONIC induced PLURIPOTENT stem cells
Factors affecting early embryonic development in cattle:relevance for bovine cloning
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作者 Yanna DANG Kun ZHANG 《农业科学与工程前沿:英文版》 2019年第1期33-41,共9页
Female infertility represents a major challenge for improving the production ef?ciency in the dairy industry. Historically, fertility has declined whereas milk yield has increased tremendously due to intensive genetic... Female infertility represents a major challenge for improving the production ef?ciency in the dairy industry. Historically, fertility has declined whereas milk yield has increased tremendously due to intensive genetic selection. In vivo evidence reveals about 60% pregnancy loss takes place during the ?rst month following fertilization. Meanwhile, early embryo development is signi?cant for somatic cell nuclear transfer in cattle as a large proportion of cloned embryos fail to develop beyond periimplantation stage. Oocyte quality is of utmost importance for the early embryo to develop to term for both fertilized and cloned embryos. Epigenetic reprogramming is a key process occurring after fertilization and critical roles of epigenetic modi?ers during preimplantation development are now clear. Incomplete epigenetic reprogramming is believed to be a major limitation to cloning ef?ciency.Treatment of cloned embryos with epigenetic modifying drugs(e.g., Trichostatin A) could greatly improve cloning ef?ciency in both mice and cattle. Recently, the rapid progress in high-throughput sequencing technologies has enabled detailed deciphering of the molecular mechanisms underlying these events. The robust ef?ciency of genomic editing tools also presents an alternative approach to the functional annotation of genes critical to early development. 展开更多
关键词 BOVINE CLONING EMBRYO development SOMATIC cell nuclear transfer X-inactive speci?c TRANSCRIPT
脂肪因子Chemerin对牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响 预览
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作者 段银平 薛瑛 +3 位作者 周爽 张敏 张宾 李惠侠 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期145-151,共7页
[目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL^-1)处理24h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含... [目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL^-1)处理24h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含量变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR分析凋亡与自噬相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、P62和Atg7mRNA表达,Westernblot技术检测凋亡与自噬相关蛋白表达情况。[结果]与对照组相比,Chemerin处理卵巢颗粒细胞后,细胞中ROS和MDA含量显著上升(P<0.05),SOD和GSH-px活性极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Bax和Caspase-3mRNA及蛋白表达水平显著升高,P62和Atg7mRNA等的表达也显著上调(P<0.05)。[结论]Chemerin可通过调控相关基因的表达诱导牛卵巢颗粒细胞凋亡并伴随自噬的发生。 展开更多
关键词 CHEMERIN 自噬 凋亡 卵巢颗粒细胞
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Crystal Structure and Bovine Serum Albumin Binding Studies of Methyl 4-(2,4-Dichlorophenyl)-2,7,7-trimethyl-5-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahydroquinoline-3-carboxylate 预览
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作者 彭化南 谢嘉霖 +3 位作者 陈熙 郑劼 徐和涛 刘华华 《结构化学》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期242-250,166共10页
The title compound,methyl 4-(2,4-dichlorophenyl)-2,7,7-trimethyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydroquinoline-3-carboxylate (C20H21Cl2NO3,1) was synthesized and the crystal structure was determined by single-crystal X-ray dif... The title compound,methyl 4-(2,4-dichlorophenyl)-2,7,7-trimethyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydroquinoline-3-carboxylate (C20H21Cl2NO3,1) was synthesized and the crystal structure was determined by single-crystal X-ray diffraction.It crystallizes in tetragonal system,space group P(4)21c with a =16.076(3),b =16.076(3),c =14.750(2) (A),V=3811.8(14)(A)3,Z=8,R =0.0377 and wR =0.0845.The interactions between compound 1 and bovine serum albumin (BSA) were investigated using fluorescence spectroscopy.The results revealed that compound 1 can effectively quench the intrinsic fluorescence of BSA by static quenching mechanism.The thermodynamic parameters revealed that the action forces between compound 1 and BSA were mainly van der Waals forces and hydrogen bonds.According to F(o)rster's non-radioactive energy transfer theory,the binding distance between compound 1 and BSA had been determined.Furthermore,the synchronous fluorescence showed that compound 1 has few effects on the microenvironment and conformation of BSA in the binding process. 展开更多
关键词 1 4-DIHYDROPYRIDINE crystal structure BOVINE serum ALBUMIN fluorescence QUENCHING
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Scaffolds Prepared with Bovine Hydroxyapatite Composites by 3D Printing
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作者 刘康 张祥林 +4 位作者 ZHOU Kui SHI Lei CHEN Zhichao LI Wenchao CHEN Penghua 《武汉理工大学学报:材料科学英文版》 SCIE EI CAS 2019年第1期230-235,共6页
The bovine hydroxyapatite(BHA) was applied to prepare biological tissue engineering scaffolds by the method of extrusion freeforming. To achieve this goal, BHA were added to sodium alginate(SA) solution to form a slur... The bovine hydroxyapatite(BHA) was applied to prepare biological tissue engineering scaffolds by the method of extrusion freeforming. To achieve this goal, BHA were added to sodium alginate(SA) solution to form a slurry system in appropriate proportion. The resulting mixtures were fabricated to be a kind of controllable and porous scaffolds followed with cross-linking in 5% calcium chloride(CaCl2) solution for 24 h. After that, the scaffolds were sintered in air at 1 000, 1 100, 1 200 and 1 300 ℃ for 5 h. Scanning electron microscopy(SEM) and X-ray diffraction(XRD) studies were performed on the scaffolds to analyze its microstructure and constituent. To explore the effect of sintering temperature on scaffolds, the compressive strength, volume shrinkage and water absorptivity of BHA-SA composite scaffolds after sintering were investigated. The research tests indicated the feasibility of applying BHA powder to 3D printing. Besides, the scaffolds sintered in a respectively lower temperature possess much more pores and performed higher water absorptivity, which means better cellular affinity. And scaffolds sintered between 1 100 and 1 200℃ presents higher compressive strength. 展开更多
关键词 BOVINE bone HYDROXYAPATITE ball MILLING SINTERING 3D PRINTING CONTROLLABLE scaffolds
牛LncRNA-133a对骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响 预览
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作者 李燕 陈明明 +5 位作者 张俊星 张林林 李新 郭宏 丁向彬 刘新峰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期143-153,共11页
【目的】探讨长链非编码RNA LncRNA-133a对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化过程的影响。【方法】利用测序样品3、6、9月龄胎牛及24月龄成年和牛骨骼肌肌肉组织,qRT-PCR法检测LncRNA-133a的组织时序表达谱。构建牛骨骼肌卫星细胞的体外成肌诱... 【目的】探讨长链非编码RNA LncRNA-133a对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化过程的影响。【方法】利用测序样品3、6、9月龄胎牛及24月龄成年和牛骨骼肌肌肉组织,qRT-PCR法检测LncRNA-133a的组织时序表达谱。构建牛骨骼肌卫星细胞的体外成肌诱导分化模型,模拟牛骨骼肌的生长发育过程,qRT-PCR法检测LncRNA-133a和肌细胞分化标记因子MyoG、MHC的细胞时序表达谱。利用过表达LncRNA-133载体(pCDNA3.1-EGFP-LncRNA-133a)或LncRNA-133a抑制物(si-LncRNA 133a)转染牛骨骼肌卫星细胞,qRT-PCR法检测转染效率以及各转染处理组LncRNA-133a、MyoD、MyoG及MHC基因mRNA的表达水平,Western blotting检测MHC基因的蛋白表达水平;同时,通过EdU细胞增殖检测、免疫荧光蛋白染色技术检测牛骨骼肌卫星细胞增殖阶段的细胞增殖量和分化阶段的肌管融合程度。【结果】组织表达谱分析发现LncRNA-133a在3月龄胎牛肌肉组织中表达量最高,6月龄胎牛肌肉组织中次之,9月龄胎牛及成年牛肌肉组织中表达量最低,时序表达呈下降趋势;利用成功构建的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导分化模型,进行LncRNA-133a、MyoG、MHC的细胞时序表达谱分析,结果发现在牛骨骼肌卫星细胞分化过程中(D0-D3),肌分化标记因子MyoG、MHC的表达水平逐渐升高,LncRNA-133a的表达在分化阶段呈上升趋势,且分化48 h时(D2)表达量最高;成功构建的过表达LncRNA-133a或抑制LncRNA-133a的牛骨骼肌卫星细胞模型,在增殖期(D0):与对照组相比,过表达LncRNA-133a处理组EdU增殖染色检测得到EdU阳性细胞数显著增加(P<0.01),而LncRNA-133a抑制处理组EdU阳性细胞数显著减少(P<0.01);在分化48 h时(D2):与对照组相比,LncRNA-133a过表达处理组肌细胞分化标记因子MyoD、MyoG及MHC的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),Western blotting检测MHC蛋白表达量显著增加(P<0.01),且MHC蛋白的免疫荧光蛋白染色检测观察到融合肌管的体积占比� 展开更多
关键词 LncRNA-133a 骨骼肌卫星细胞 增殖 分化
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陕西某奶牛场牛出血性败血症的诊断和治疗 预览
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作者 郑卫民 曹平 +1 位作者 杨璐 王斌 《畜牧兽医杂志》 2019年第2期86-87,89共3页
2018年10月,陕西省渭南市某奶牛场8头牛出现呼吸道症状,死亡1头。接诊后,对死亡奶牛进行剖检无菌采集病料样品,经染色镜检、病原分离培养、生化试验、PCR扩增和16s-rRNA序列比对确定所分离细菌为多杀性巴氏杆菌;将分离菌株菌液0.2mL腹... 2018年10月,陕西省渭南市某奶牛场8头牛出现呼吸道症状,死亡1头。接诊后,对死亡奶牛进行剖检无菌采集病料样品,经染色镜检、病原分离培养、生化试验、PCR扩增和16s-rRNA序列比对确定所分离细菌为多杀性巴氏杆菌;将分离菌株菌液0.2mL腹腔注射小鼠后,小鼠于注射后18h死亡,并从死亡小鼠肝脏、肺脏均分离到多杀性巴氏杆菌;抗生素敏感试验表明,分离菌株对复方新诺明、四环素、万古霉素、多西环素、氨苄西林耐药,对庆大霉素、头孢曲松、头孢哌酮敏感。 展开更多
关键词 奶牛 出血性败血症 多杀性巴氏杆菌
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