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封闭型空间细胞培养板研制与验证 被引量:1
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作者 谭映军 施镠佳 +5 位作者 王春艳 聂捷琳 顾寅 于建茹 万玉民 李莹辉 《航天医学与医学工程》 CSCD 北大核心 2017年第2期92-97,共6页
目的为适用于空间特殊实验环境,并在细胞培养实验中更高效地使用试剂、提高细胞培养用品的污染防护能力,提出了一种内部流动路径可控、具备防渗漏、防污染能力的全透明和全封闭细胞培养板。方法基于有限元仿真对培养板核心结构—流路控... 目的为适用于空间特殊实验环境,并在细胞培养实验中更高效地使用试剂、提高细胞培养用品的污染防护能力,提出了一种内部流动路径可控、具备防渗漏、防污染能力的全透明和全封闭细胞培养板。方法基于有限元仿真对培养板核心结构—流路控制挡板进行了优化,以优化后的培养板为核心部件搭建细胞培养回路,并开展了中长周期细胞培养试验。结果最优化的三坝-纵向排列细胞培养板,可有效控制其内部流体的流动路径,进出口流速1 m L/min时流体剪切力仅4.8×10(-5)Pa,流动死区几乎为0,以该培养板为核心构建的细胞培养回路中培养的细胞可正常生长15 d。结论该细胞培养板,可使腔内新旧细胞培养试剂更换及残留气体排出更彻底,防渗漏防污染能力大大提升,试剂使用率提高,能满足空间实验常用典型细胞系的中长期培养需求,适合于我国目前及将来的空间医学生物学实验应用场合。 展开更多
关键词 细胞培养板 流路控制挡板 仿真优化
生长激素对促性腺激素释放激素拟似物处理后的青春期大鼠生长板软骨细胞增殖和表型的影响 预览 被引量:1
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作者 潘思年 张成喜 +3 位作者 李燕虹 马华梅 朱顺叶 杜敏联 《中华临床医师杂志(电子版)》 2010年第11期 57-62,共6页
目的研究生长激素(GH)对促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)处理后的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖和表型的影响。方法采用两步酶消化法分离培养经GnRHa处理后的5~8只雌鼠胫骨生长板软骨细胞,用四氮甲基唑蓝(MTT)、流式细胞仪... 目的研究生长激素(GH)对促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)处理后的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖和表型的影响。方法采用两步酶消化法分离培养经GnRHa处理后的5~8只雌鼠胫骨生长板软骨细胞,用四氮甲基唑蓝(MTT)、流式细胞仪测定细胞周期以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)和胶原Ⅱ(ColⅡ)的表达,观察不同作用时间和不同剂量的GH对软骨细胞增殖和表型的影响。结果 GH能促进体外培养GnRHa处理后的青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖,并存在一定的时效和量效关系。GH作用后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天组与对照组比较有统计学意义(P〈0.05),并以第4天时的促增殖效应最强。GH浓度低时(10ng/ml,20ng/ml)促增殖效应不明显(P〉0.05),而浓度增加至50ng/ml时促增殖效应开始显现(P〈0.05),至100ng/ml时促增殖效应最明显。GH亦能促进ColⅡ的表达,以GH作用后第4天,浓度为100ng/ml时ColⅡ的表达最强。结论 GH能以直接作用的方式促进体外培养的经GnRHa处理后的大鼠胫骨生长板软骨细胞的增殖和ColⅡ的表达,GH促增殖的剂量与临床应用剂量存在一致性,为GH克服GnRHa使用过程中所造成的生长减速提供了实验理论依据。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞培养技术 生长激素 生长板
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生长激素上调性激素抑制下青春期大鼠生长板原代软骨细胞表皮生长因子的表达 预览 被引量:6
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作者 潘思年 张成喜 +3 位作者 李燕虹 马华梅 朱顺叶 杜敏联 《中山大学学报:医学科学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期 496-502,共7页
【目的】研究生长激素(GH)对性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞表皮生长因子(EGF)mRNA表达及其蛋白合成、分泌的影响。【方法】3周龄雌性SD大鼠开始注射促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)至7周龄,随后分离培养5~8只大... 【目的】研究生长激素(GH)对性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞表皮生长因子(EGF)mRNA表达及其蛋白合成、分泌的影响。【方法】3周龄雌性SD大鼠开始注射促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)至7周龄,随后分离培养5~8只大鼠胫骨生长板原代软骨细胞,分为时效组和量效组。采用四氮甲基唑蓝(MTT)以及免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA),观察不同剂量、不同干预时间的生长激素对性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖的影响。用RT-PCR法检测软骨细胞EGF mRNA的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定EGF的表达。【结果】生长激素以时效和量效作用方式对雌激素受抑的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖呈双相型影响。GH作用6h后软骨细胞的EGF mRNA表达显著增加(与0h比较P〈0.05),且从6h到24h间存在明显的时间依赖性(组间P〈0.05),在18h达到最高峰。GH作用12h后软骨细胞分泌入培养基中的的EGF表达显著增加(与0h比较P〈0.05),且从12h到48h间存在明显的时间依赖性(组间P〈0.05),在36h达到最高峰。量效关系显示50ng/mL浓度的GH开始能显著增加培养基中EGFmRNA和蛋白的表达,且从50ng/mL至1000ng/mL间存在明显的浓度依赖性(组间P〈0.05),在100ng/mL时表达达到最高峰。【结论】生长激素能促进性激素抑制下的离体青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖及EGF mRNA和蛋白的表达。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞培养 生长板 生长激素 表皮生长因子
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司坦唑醇对促性腺激素释放激素拟似物处理后的青春期大鼠生长板软骨细胞IGF-1 mRNA表达及其蛋白合成、分泌的影响 预览 被引量:1
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作者 朱顺叶 余振华 +4 位作者 马华梅 李燕红 潘思年 古玉芬 杜敏联 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2009年第1期 42-46,共5页
目的研究司坦唑醇(stanozolol,ST)对促性腺激素释放激素拟似物(gonadotropin releasing hormone agonist,GnRHa)处理后的离体青春期大鼠生长板软骨细胞胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)mRNA表达及其蛋... 目的研究司坦唑醇(stanozolol,ST)对促性腺激素释放激素拟似物(gonadotropin releasing hormone agonist,GnRHa)处理后的离体青春期大鼠生长板软骨细胞胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)mRNA表达及其蛋白合成、分泌的影响。方法将6只雌鼠的原代软骨细胞,分为时效组、量效组。根据是否用司坦唑醇干预,将时效组和量效组分为时效干预组,时效对照组;量效于预组,量效对照组,分别观察司坦唑醇的干预时限和剂量对促性腺激素释放激素拟似物处理后离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖的影响。采用软骨细胞增殖能力测定法(MTT)和免疫组化法检测不同剂量、不同时间点司坦唑醇处理的离体的青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达,荧光实时定量RT—PCR检测软骨细胞的IGF-1 mRNA表达。酶联免疫吸附法(enzyme—linked immunosorbent assay,ELISA)测定胰岛素样生长因子-1的合成。结果司坦唑醇以时效和量效作用方式,对雌激素受抑的离体青春期大鼠生长板软骨细胞增殖呈双相型影响。在合适的剂量和疗程时,软骨细胞增殖效应可达最好效果。①司坦唑醇作用2h后,软骨细胞IGF-1 mRNA表达显著增加,与时效对照组基础值相比,差异有显著意义(P〈0.05),并存在较强的时间依赖性;作用8h时,达最高峰(为时效对照组基础值的3.8倍)。司坦唑醇的作用在(10^-10~10^-5)mol/L时,与软骨细胞的细胞核抗原增殖效应存在明显的剂量依赖性(组间比较,差异有显著意义,P〈0.05);在10^-7mol/L时,软骨细胞的增殖细胞核抗原表达达最高峰(为基础值的5.75倍)。②司坦唑醇作用自5h起,软骨细胞胰岛素样生长因子-1蛋白合成与时间点为0组比较,差异有显著意义(P=0.042);5h-20h时,作用存� 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞培养 生长板 司坦唑醇
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大鼠胫骨生长板软骨细胞的分离与培养鉴定 被引量:3
5
作者 余振华 朱顺叶 张珑娟 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1309-1310,共2页
目的探讨高效生长板软骨细胞分离方法和体外培养条件。方法采用二步酶消化法对6只SD大鼠胫骨生长板的软骨细胞进行分离,采用含炭吸附过的胎牛血清培养基培养,按5×10^5个/瓶的密度接种细胞并对软骨细胞进行形态学观察和鉴定,描... 目的探讨高效生长板软骨细胞分离方法和体外培养条件。方法采用二步酶消化法对6只SD大鼠胫骨生长板的软骨细胞进行分离,采用含炭吸附过的胎牛血清培养基培养,按5×10^5个/瓶的密度接种细胞并对软骨细胞进行形态学观察和鉴定,描绘原代软骨细胞在无激素培养基中的生长曲线。结果软骨细胞贴壁较慢,12h后开始附壁,第8天时90%融合,互相连接成“铺路石”样结构。原代软骨细胞胞质Ⅱ型胶原免疫着色强阳性,传代后染色减弱。结论本研究所采用的方法能高效快速获得原代软骨细胞,原代软骨细胞最接近体内生理状态,最适合进行实验研究。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞培养 生长板
适用于基因转染的细胞培养板的研制
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作者 季守平 王颖丽 章扬培 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2007年第3期264-267,共4页
目的:研制用于基因转染的细胞培养板。方法:用0.2%的明胶稀释LPEI,BPEI,Superfect,Lipofectamine2000等转染试剂并将它们固定在96孔细胞培养板上。以绿色荧光蛋白(GFP)基因和荧光素酶基因(Luciferase)为报告基因检测培养板的转染... 目的:研制用于基因转染的细胞培养板。方法:用0.2%的明胶稀释LPEI,BPEI,Superfect,Lipofectamine2000等转染试剂并将它们固定在96孔细胞培养板上。以绿色荧光蛋白(GFP)基因和荧光素酶基因(Luciferase)为报告基因检测培养板的转染效率,用MTT法检测转染24 h后的细胞毒性,将LPEI包被的培养板放置在37℃环境下进行稳定性研究。结果:所有试剂包被的培养板均有一定的基因转染效率,聚合物类试剂的效率高于脂质体类的Lipofectamine 2000。其中,LPEI包被的培养板的转染效率最高、细胞毒性最低。当LPEI的包被量为3.2μg/孔时,293细胞在转染24 h后的荧光素酶活性达3.0×108RLU/mg,细胞存活率为85%左右。LPEI包被的培养板在37℃保温14 d后基因转染效率无明显变化。结论:LPEI包被的转染平板具有转染效率高、细胞毒性低、稳定性好的优点。该平板具有操作简便、节省时间的优点,可用于进行大规模的基因转染研究。 展开更多
关键词 细胞培养板 基因 转染 细胞毒性 稳定性
尿沉渣倒置显微镜分析系统专用尿沉淀板的选择 预览
7
作者 程大林 蔡媛媛 陈宏础 《现代检验医学杂志》 CAS 2003年第2期 12-13,共2页
目的对倒置显微镜法检查尿沉渣使用的细胞培养板和酶标板进行比较,以寻找适合作为专用尿沉淀板的容器.方法采用倒置显微镜法对美国生产的细胞培养板和厦门生产的酶标板进行尿液细胞计数的对比观察.结果二者在尿沉渣计数结果上无显著性差... 目的对倒置显微镜法检查尿沉渣使用的细胞培养板和酶标板进行比较,以寻找适合作为专用尿沉淀板的容器.方法采用倒置显微镜法对美国生产的细胞培养板和厦门生产的酶标板进行尿液细胞计数的对比观察.结果二者在尿沉渣计数结果上无显著性差异(P>0.05).结论孔底直径一致、底面平整且透光性好的细胞培养板和酶标板都可以作为尿沉渣倒置显微镜分析系统的专用尿沉淀板. 展开更多
关键词 尿沉渣倒置显微镜分析系统 专用 尿沉淀板 选择 细胞培养板 酶标板
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不同无血清培养方式提取SHG44人脑胶质瘤干细胞的比较研究 预览 被引量:2
8
作者 孙红军 荔志云 《国际神经病学神经外科学杂志》 北大核心 2016年第3期193-197,共5页
目的筛选较理想的SHG44人脑胶质瘤干细胞的培养方法。方法采用无血清培养基(含EGF、FGF、B27)以培养皿、培养瓶及悬浮细胞培养板为载体培养SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133、Nestin联合Bcl-2标记进行免疫荧光鉴定,并对比其倒置显微... 目的筛选较理想的SHG44人脑胶质瘤干细胞的培养方法。方法采用无血清培养基(含EGF、FGF、B27)以培养皿、培养瓶及悬浮细胞培养板为载体培养SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133、Nestin联合Bcl-2标记进行免疫荧光鉴定,并对比其倒置显微镜下细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目。结果培养皿和培养瓶初次富集的SHG44胶质瘤干细胞球呈较大不规则形,经二、三次纯化后发现第二与三次纯化后的大部分胶质瘤干细胞呈不规则分化状,大部分胶质瘤干细胞球呈分散、较小、不规则形生长,但第三次比第一、二次有更少的胶质瘤干细胞球却呈更规则球形生长;悬浮细胞培养板提取、纯化的干细胞呈类圆形,基本全部形成胶质瘤干细胞球,且第三次比第一、二次纯化的干细胞球呈更大更规则球形生长;经统计分析悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球较培养皿和培养瓶纯化的胶质瘤干细胞球大且数目多(P〈0.05);对于悬浮培养板,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P〈0.05),且呈更规则球形。结论无血清培养基以悬浮细胞培养板为载体纯化胶质瘤干细胞是较理想的方法。 展开更多
关键词 胶质瘤细胞 胶质瘤干细胞 无血清悬浮培养 悬浮细胞培养板 CD133 NESTIN
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SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定 预览 被引量:2
9
作者 孙红军 荔志云 《西北国防医学杂志》 CAS 2016年第7期424-427,共4页
目的:探讨SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定方法。方法:采用以6孔悬浮细胞培养板为载体的无血清DMEM/F12培养基(含EGF、FGF、B27)提取与纯化SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定,并在倒置显微镜下... 目的:探讨SHG44人脑胶质瘤干细胞的提取、纯化与鉴定方法。方法:采用以6孔悬浮细胞培养板为载体的无血清DMEM/F12培养基(含EGF、FGF、B27)提取与纯化SHG44人脑胶质瘤干细胞,通过CD133联合Nestin标记进行免疫荧光鉴定,并在倒置显微镜下观察细胞形态及干细胞球的形态、大小及数目。结果:SHG44人脑胶质瘤干细胞能在含无血清DMEM/F12培养基的6孔悬浮细胞培养板中存活、增殖并形成干细胞球;悬浮培养3d初步形成呈巢状悬浮生长的胶质瘤干细胞团,7d后干细胞球大小、形态基本不变。经统计分析,悬浮培养板培养纯化的胶质瘤干细胞球,随着纯化次数增加,胶质瘤干细胞球更大、数目更多(P<0.05),且呈更规则球形。结论:本研究成功提取、纯化、鉴定出SHG44胶质瘤干细胞,并进行传代扩增培养;Cyagen悬浮细胞培养板可作为筛选胶质瘤干细胞的理想载体。 展开更多
关键词 SHG44胶质瘤干细胞 无血清悬浮培养 悬浮细胞培养板 CD133 巢蛋白
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一种在盖玻片上进行组织切片原位杂交的方法 预览
10
作者 王松岩 张世仪 +1 位作者 锁志明 刘洁 《基础医学与临床》 CSCD 1998年第1期 79,78,共2页
划出大小合适的圆形玻片,经处理后,贴附上制备的冰冻组织发片并放入细胞培养板孔中。经固定及预处理后即可在板孔中进行原位杂交的一切步骤。本方法简便易行,重复性好,并可节省较多试剂,为组织切片原位杂交提供了一种经济可靠的方法。
关键词 原位杂交 盖玻片 冰冻组织切片 组织切片
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冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究 预览 被引量:12
11
作者 李景原 王太霞 +2 位作者 杨相甫 张晋豫 李贺敏 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期 938-941,共4页
用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬凌草愈伤组织,并探讨了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响。结果表明:从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以MS+2,4-D 1mg/L+NAA 0.5mg... 用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术,诱导出冬凌草愈伤组织,并探讨了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响。结果表明:从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织,以MS+2,4-D 1mg/L+NAA 0.5mg/L培养基较好,愈伤组织诱导率高达96.80%。用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低,而以悬浮培养15~18d的单细胞为材料,接种密度为5×10^3个/毫升时,进行条件培养和看护培养,植板率达21.63%。本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬凌草素细胞株时参考。 展开更多
关键词 冬凌草 愈伤组织 细胞培养 中医药疗法 组织培养 细胞悬浮培养
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动态压应力对生长板软骨前体干细胞PTHrP及细胞外基质mRNA表达的影响 被引量:8
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作者 祁军 陈安民 +4 位作者 张虹 李贵刚 张迪 李昆朋 郭风劲 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第5期382-386,共5页
目的 研究动态压应力对体外培养的大鼠生长板软骨前体干细胞甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)以及软骨特性细胞外基质mRNA表达的影响.方法 免疫磁珠分选并体外培养大鼠软骨前体干细胞,用自行设计制作的可控细胞压力加载装置对细胞进行不同... 目的 研究动态压应力对体外培养的大鼠生长板软骨前体干细胞甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)以及软骨特性细胞外基质mRNA表达的影响.方法 免疫磁珠分选并体外培养大鼠软骨前体干细胞,用自行设计制作的可控细胞压力加载装置对细胞进行不同强度(30 mmHg、60 mmHg、90mmHg)和持续时间(1 h、6 h、24 h)的压应力刺激,未刺激组为对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测各组细胞的PTHrP以及软骨特性细胞外基质(Ⅱ型胶原、X型胶原以及aggreean)mRNA表达并进行半定量分析.结果 生长板软骨前体干细胞在30 mmHg、60 mmHg、90 mmHg动态压力培养环境下,各时间点PTHrP、Ⅱ型胶原以及aggrecan mRNA表达水平明显增强并高于对照组(P〈0.05);Ⅱ型胶原以及aggrecan mRNA表达水平于6h达高峰,PTHrP mRNA的表达水平随时间增加而增强,24 h仍有较高水平的表达;且压力值越大,相同时间点mRNA相对表达量越高.X型胶原表达水平较低且与对照组比较差异无统计学意义(P〉0.05).结论 适当的动态压应力能有效促进体外培养的大鼠软骨前体干细胞Ⅱ型胶原及aggreean mRNA表达,PTHrP在此力学信号转导过程中可能起重要的作用. 展开更多
关键词 压应力 生长面 干细胞 甲状旁腺激素相关蛋白质 细胞外基质
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