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姜黄素增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨敏感性的研究
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作者 徐杰伟 邱建 +2 位作者 董顺利 钟婧 叶国超 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1862-1864,共3页
目的探讨姜黄素对人胆管癌细胞株QBC939吉西他滨的增敏作用及其机制研究。方法将人胆管癌细胞QBC939培养后分为对照组、5μg/m1单药姜黄素组、0.625μg/m1单药吉西他滨组及5μg/m1姜黄素联合0.625μg/m1吉西他滨组,采用噻唑蓝(... 目的探讨姜黄素对人胆管癌细胞株QBC939吉西他滨的增敏作用及其机制研究。方法将人胆管癌细胞QBC939培养后分为对照组、5μg/m1单药姜黄素组、0.625μg/m1单药吉西他滨组及5μg/m1姜黄素联合0.625μg/m1吉西他滨组,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化,同时用Westernblot法检测相关蛋白核因子±κB(NF±κB)、细胞周期蛋白(Cyclin)B1、凋亡抑制蛋白(1AP)-1的表达改变。结果姜黄素联合吉西他滨处理人胆管癌细胞QBC939后12、24、48、72h的抑制率分别为(10.00±0.02)%、(23.10±0.03)%、(33.234±0.01)%、(48.304±0.05)%,显著高于对照组及单药组(P=0.001、0.000、0.000、0.000)。两药联合作用后能使(28.75±3.23)%的人胆管癌细胞QBC939被阻滞在G2/M期,显著高于单药姜黄素组及单药吉西他滨组[(14.494±2.20)%、(11.824±2.10)%;P=0.000],且细胞凋亡率为(13.644±3.40)%,显著高于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组[(4.534±0.56)%、(6.47±0.98)%、(9.874±1.12)%,P=0.000];姜黄素联合吉西他滨作用于人胆管癌细胞株QBC939后NF±κB及下游分子CyclinB1和IAP±1蛋白的相对表达量分别为0.3004±0.001、0.4074±0.036、0.4754±0.032,显著低于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组(P=0.000、0.001、0.003)。结论姜黄素可增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨的敏感性,其机制可能与NF±κB信号通路的抑制相关。 展开更多
关键词 胆管细胞癌 姜黄素 吉西他滨 人胆管癌细胞株QBC939 核因子-ΚB
Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立
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作者 左春霞 卞晓翠 +3 位作者 杨振丽 冯海凉 周芳颖 刘玉琴 《中华肿瘤杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期572-579,共8页
目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株,并验证Cas9的基因编辑活性,以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞(Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7)、人胆管癌细胞(RBE)和人胆囊癌... 目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株,并验证Cas9的基因编辑活性,以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞(Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7)、人胆管癌细胞(RBE)和人胆囊癌细胞(GBC-SD)中,分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1,挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后,通过基因组聚合酶链反应(PCR)和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry,流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞,再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA,细胞扩增后,通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株,其中表达Cas9-Neo的细胞35株,表达Cas9-Puro的细胞25株,表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示,同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下,同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry-EGFP+细胞。流式细胞仪检测结果显示,mCherry-EGFP+细胞占0.3%~93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株,其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。 展开更多
关键词 肝细胞癌 胆管癌 胆囊肿瘤 基因编辑 CRISPR/Cas9 细胞株
莪术醇诱导胆管癌细胞凋亡和调控细胞周期的体外研究
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作者 张金铎 苏刚 +6 位作者 逯娅雯 周昕玥 赵盛 把永江 唐增伟 孟文勃 李汛 《兰州大学学报:医学版》 CAS 2018年第1期65-70,共6页
目的 通过体外实验观察莪术醇对人肝胆管癌RBE细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养RBE细胞,二甲氧唑黄(XTT)比色法检测不同浓度的莪术醇(12.5、25、50、75、100μg/m L)在不同时间段(24、48、72 h)... 目的 通过体外实验观察莪术醇对人肝胆管癌RBE细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其分子机制。方法 体外培养RBE细胞,二甲氧唑黄(XTT)比色法检测不同浓度的莪术醇(12.5、25、50、75、100μg/m L)在不同时间段(24、48、72 h)对RBE细胞增殖的抑制作用;多功能微孔板检测系统检测50、75、100μg/m L莪术醇处理后RBE细胞Caspase-3/7酶活性;流式细胞术检测75、100μg/m L莪术醇48 h作用后RBE细胞周期分布及凋亡率变化;蛋白免疫印迹法检测100μg/m L莪术醇处理RBE细胞48 h后细胞周期蛋白D1、核因子-κB(NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达水平。结果 莪术醇能显著抑制RBE细胞的增殖并诱导其凋亡,在50—100μg/m L范围内呈浓度和时间依赖性,100μg/m L的莪术醇作用48 h其抑制率可达56%;莪术醇处理RBE细胞48 h后Caspase-3/7荧光强度增加,酶活性增强,并能诱导RBE细胞发生G1期阻滞,伴随细胞周期蛋白D1、NF-κB、Bcl-2蛋白表达水平降低。结论 莪术醇能通过抑制细胞周期蛋白D1使肝胆管癌RBE细胞阻滞在G1期,抑制其增殖并通过激活线粒体凋亡途径诱导其凋亡。 展开更多
关键词 莪术醇 胆管癌 细胞周期 凋亡
抑瘤饮对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响及机制 预览
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作者 康晓亮 朱世高 +6 位作者 陈述海 孙兆伟 朱呈瞻 冯玉杰 褚国庆 杨堃 张炳远 《山东医药》 2018年第38期16-19,共4页
目的观察中药复方抑瘤饮对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法取胆管癌QBC939细胞,随机分为抑瘤饮低、中、高浓度组和对照组,抑瘤饮低、中、高浓度组分别加入6、8、12 mg/mL抑瘤饮,对照组加入PBS,培养24 h。采用Hoe... 目的观察中药复方抑瘤饮对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法取胆管癌QBC939细胞,随机分为抑瘤饮低、中、高浓度组和对照组,抑瘤饮低、中、高浓度组分别加入6、8、12 mg/mL抑瘤饮,对照组加入PBS,培养24 h。采用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态学改变;CCK-8法测算各组培养24、48 h的细胞增殖抑制率;流式细胞仪测算细胞凋亡率;Western blotting法检测凋亡相关蛋白PARP、Caspase-9、Caspase-12、Bax、Bcl-2表达。结果与对照组比较,抑瘤饮高浓度组细胞呈明显的形态学改变,细胞核染色质固缩,核内荧光分布不均匀,出现畸形核。抑瘤饮各浓度组细胞增殖抑制率均高于对照组,其中抑瘤饮高浓度组细胞增殖抑制率高于低、中浓度组,各组48 h时的细胞增殖抑制率高于24 h(P均<0.05)。抑瘤饮各浓度组细胞凋亡率均高于对照组(P均<0.05)。抑瘤饮各浓度组PARP、Caspase-9、Caspase-12、Bax蛋白表达均高于对照组,Bcl-2蛋白表达均低于对照组(P均<0.05)。结论抑瘤饮能够抑制胆管癌细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与Caspase的内源信号凋亡途径有关。 展开更多
关键词 胆管癌 抑瘤饮 细胞凋亡 细胞增殖 细胞凋亡相关蛋白
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siRNA靶向沉默ZFX基因对肝内胆管癌细胞生物学功能的影响 预览
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作者 张雪 刘国东 +4 位作者 林群 方强 谢坤 赵义军 刘付宝 《安徽医科大学学报》 北大核心 2018年第11期1667-1671,共5页
目的 探讨siRNA沉默X染色体连锁的锌指蛋白(ZFX)基因的表达后对肝内胆管癌细胞(HCCC-9810)的增殖、克隆、迁移及侵袭能力的影响。方法 通过脂质体lipofectamine 3000介导转染肝内胆管癌细胞株HCCC-9810,抑制ZFX基因在肝内胆管癌细... 目的 探讨siRNA沉默X染色体连锁的锌指蛋白(ZFX)基因的表达后对肝内胆管癌细胞(HCCC-9810)的增殖、克隆、迁移及侵袭能力的影响。方法 通过脂质体lipofectamine 3000介导转染肝内胆管癌细胞株HCCC-9810,抑制ZFX基因在肝内胆管癌细胞系中的表达,RT-PCR检测ZFX基因的mRNA表达水平的变化,Western blot检测ZFX基因的蛋白表达水平的变化。ZFX基因下调后分别用软琼脂克隆形成实验检测克隆形成能力,CCK-8增殖实验检测细胞增殖情况,Transwell检测细胞的迁移、转移情况。结果 RT-PCR及Western blot结果表明与Cell组、NC-siRNA组相比,ZFX-siRNA组有效降低了HCCC-9810细胞系ZFX的mRNA水平及蛋白水平的表达。克隆形成实验显示:ZFX基因沉默后,该细胞系克隆形成能力明显减弱。CCK-8增殖实验证明实验组细胞增殖能力明显降低。Transwell实验显示,Cell组、NC-siRNA组细胞迁移、转移能力明显高于ZFX-siRNA组细胞。各组实验中Cell组、NC-siRNA组之间均未见明显差异。结论 本实验siRNA成功降低肝内胆管癌细胞系HCCC-9810中ZFX基因的表达并证明ZFX的表达降低后与肝内胆管癌细胞的克隆形成、增殖、迁移、转移能力相关。推测ZFX在肝内胆管癌的发生发展中发挥重要的作用,可作为该基因治疗的新靶点。 展开更多
关键词 ZFX基因 肝内胆管细胞癌 细胞生物学
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微小RNA-218通过生存素对胆管癌细胞的作用
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作者 刘学青 梁云飞 +3 位作者 周泽高 王朝龙 吴卫中 刘三光 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1674-1677,共4页
目的检测微小RNA(miR)-218对胆管癌细胞的侵袭的影响及miR-218通过凋亡抑制基因生存素(Survivin)对胆管癌细胞的作用。方法培养两种胆管癌细胞株(CCLPl)和(QBC939),将miR-218mimics(miR-218激动剂)及阴性对照转染CCLPl和QBC... 目的检测微小RNA(miR)-218对胆管癌细胞的侵袭的影响及miR-218通过凋亡抑制基因生存素(Survivin)对胆管癌细胞的作用。方法培养两种胆管癌细胞株(CCLPl)和(QBC939),将miR-218mimics(miR-218激动剂)及阴性对照转染CCLPl和QBC939细胞,设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,采用BDMartigel基底膜基质胶侵袭室测定其侵袭性,每组随机抽取3个结果。将CCLPl和QBC939细胞分别共转染miR-218mimics和pMIR-Survivin、miR-218mimics和pMIR-Survivin-mut。分别设立miR-218组、阴性对照组及空白对照组,每组随机抽取3个结果,酶标仪检测荧光素酶活性,探讨miR-218与Survivin的相关性。结果CCLPl细胞株中miR-218组细胞数为(28.33±4.16)个,阴性对照组细胞数为(72.00±8.72)个,NC组细胞数为(74.33±4.04)个;QBC939细胞株中miR-218组细胞数为(7.33±2.08)个,阴性对照组细胞数为(22.00±4.36)个,NC组细胞数为(22.00±4.00)个;与阴性对照组和NC组比较,转染miR-218mimics处理能显著抑制胆管癌细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(CCLPl细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.000、0.004)。荧光素酶活性检测结果显示,QBC939野生型miR-218组荧光素酶活性为1.489±0.079,阴性对照组为2.825±0.068,NC组为2.747±0.081;QBC939突变型miR-218组荧光素酶活性为3.078±0.138,阴性对照组为2.944±0.144,NC组为2.807±0.090;CCLPl野生型miR-218组荧光素酶活性为1.322±0.039,阴性对照组为2.362±0.129,NC组为2.368±0.154;CCLPl突变型miR一218组荧光素酶活性为2.202±0.073,阴性对照组为2.274±0.250,NC组为2.202±0.073;野生型的3’端非编码区(3’UTR)的报告基因载体的荧光素酶活性与其阴性对照组及空白对照组比较显著下降,差异有统计学意义(CCLPl细胞株和QBC939细胞株其P值分别为0.0 展开更多
关键词 胆管癌 微小RNA-218 生存素 细胞侵袭
细梗香草总皂苷联合5-氟尿嘧啶抗胆管癌作用及其机制研究 预览
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作者 汪洋 张筱凤 +4 位作者 汪静 金杭斌 黄海琇 王雨承 杨建锋 《浙江中医药大学学报》 CAS 2018年第12期989-995,1005共8页
[目的]研究细梗香草总皂苷(Lysimachia capilliposide,LC)单独使用及与5-氟尿嘧啶(5-fluomuracil,5-Fu)联用对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响,并初步探究其机制。[方法]分别以0~32μg·mL^-1的LC和0~l 000μg·m^-1的5-Fu培... [目的]研究细梗香草总皂苷(Lysimachia capilliposide,LC)单独使用及与5-氟尿嘧啶(5-fluomuracil,5-Fu)联用对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响,并初步探究其机制。[方法]分别以0~32μg·mL^-1的LC和0~l 000μg·m^-1的5-Fu培养QBC939细胞48h,以3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑内盐[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl]-5-(3-carboymethoxyphenyl)-2-(4-sulropllenyl)-2H-etrazolium inner salt,MTS]法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度(half maximalinhibitory concentmtion,IC50)。根据所得IC50,在QBC939细胞中同时加入不同浓度5-Fu和LC,计算联合作用指数(combined index,CI),确定两药联用浓度,并将细胞分为空白对照组、5-Fu单药组、LC单药组和联合用药组。Annexin V/PI法检测各组细胞凋亡比例和周期分布。westem blot检测天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶-3(cysLeine aspamc acid specmc protease-3,caspase-3)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymemse,PARP)的蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,5-Fu和LC均抑制QBc939细胞增殖,并且两药联用有协同作用。5-Fu和Lc可显著增加QBC939细胞凋亡比例(P<0.05),且联合用药组凋亡细胞比例高于LC或5-Fu单药组p<0.01)。5-Fu增加G1期细胞比例,降低G2期细胞比例(P<0.05),而LC对细胞周期无明显影响。5-Fu、LC及两药联用可明显增加caspase-3表达,降低PARP表达(P<0.05,P<0.01)。[结论]LC可抑制胆管癌细胞增殖,与5-Fu有协同作用。LC诱导胆管癌细胞凋亡,但不影响细胞周期,其机制可能与上调caspase-3表达、下调PARP表达有关。 展开更多
关键词 胆管癌 细梗香草总皂苷 5-氟尿嘧啶 凋亡 细胞周期 PARP CASPASE-3
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微RNA-224在体外对胆管癌细胞抗凋亡及促进增殖的作用
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作者 卢华军 刘小方 《中华肝胆外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期417-421,共5页
目的探讨微RNA-224(miR-224)在人胆管癌(CC)细胞凋亡与增殖中的调控机制以及在胆管癌细胞中是否存在miR-224-HOXD10-PAK4传导通路。方法利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定CC和癌旁正常组织中miR-224的表达量。胆管癌QBC939细... 目的探讨微RNA-224(miR-224)在人胆管癌(CC)细胞凋亡与增殖中的调控机制以及在胆管癌细胞中是否存在miR-224-HOXD10-PAK4传导通路。方法利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定CC和癌旁正常组织中miR-224的表达量。胆管癌QBC939细胞株病毒转染分为两组:细胞转染阴性对照组(NC组),细胞转染目的基因miR-224-down组(DOWN组)。记录NC组和DOWN组中QBC939细胞凋亡率及细胞克隆形成数。利用RT—PCR和蛋白印迹(Western blotting)检测NC组和DOWN组QBC939细胞中miR-224、AP15、PAK4、HOXD10的表达。结果(1)CC组织中miR-224的表达显著高于癌旁正常组织(P〈0.05)。(2)DOWN组QBC939细胞的miR-224表达显著低于NC组。DOWN组QBC939细胞凋亡率显著高于NC组。DOWN组QBC939细胞的克隆形成率显著低于NC组。(3)RT—PCR和Western blotting实验证实DOWN组QBC939细胞中AP15、HOXD10的表达明显高于NC组。(4)DOWN组QBC939细胞中PAK4的表达显著低于NC组。结论miR-224有体外抗QBC939细胞凋亡及促进QBC939细胞增殖的作用,是细胞增殖的重要调节因子。QBC939细胞中存在miR-224-HOXD10-PAK4信号传导通路。 展开更多
关键词 胆管癌 微RNA-224(miR-224) 细胞凋亡 增殖 信号传号 凋亡抑制因子(AP15) P21-活化激酶4(PAK4) 同源异型合D(HOXD10)
木香烃内酯对人胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制
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作者 林雪晶 刘春颖 +3 位作者 彭章晓 孙斌 吴孟超 苏长青 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期687-692,共6页
目的:探讨木香烃内酯(costunolide,Cos)对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法:以不同质量浓度(0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml)Cos 作用RBE细胞,通过CCK-8 法、流式细胞术分别检测Cos 对细胞增殖能力和... 目的:探讨木香烃内酯(costunolide,Cos)对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法:以不同质量浓度(0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml)Cos 作用RBE细胞,通过CCK-8 法、流式细胞术分别检测Cos 对细胞增殖能力和周期分布的影响,Annexin V-FITC/PI 双染法、Transwell 小室实验分别检测Cos 对细胞凋亡和迁移侵袭的影响,qRT-PCR检测与侵袭相关因子MMP2、MMP9 mRNA的表达,Western blotting 检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:Cos 能够显著抑制RBE细胞的增殖活性(P〈0.05 或P〈0.01),阻滞细胞周期于S、G2/M期,同时诱导RBE细胞的凋亡(P〈0.01)、且呈质量浓度依赖性,Transwell及qRT-PCR 结果显示Cos 能够显著抑制RBE 细胞的侵袭能力、降低侵袭相关转录因子MMP2 和MMP9 mRNA的表达,Western blotting 结果显示Cos 明显抑制p-AKT、Bcl-2、MMP2 及MMP9 的表达,但促进Bax 的表达。结论:Cos 通过抑制PI3K/AKT信号通路降低胆管癌RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力。 展开更多
关键词 木香烃内酯 胆管癌 RBE细胞 细胞增殖 迁移 侵袭 PI3K/AKT信号通路
超声靶向破坏载氧微泡技术对缺氧微环境下胆管癌细胞生长影响 被引量:1
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作者 齐灿 黄强 刘臣海 《中华肿瘤防治杂志》 北大核心 2017年第23期1645-1650,1655共7页
目的胆管癌细胞在缺氧微环境中能够快速增殖、侵袭和转移,超声靶向破坏微泡技术改变了肿瘤缺氧微环境。本研究旨在探讨超声靶向破坏载氧微泡技术对缺氧微环境下胆管癌细胞增殖、凋亡的影响。方法以DSPC+DPPE-MPEG 5000为外壳,通过机械... 目的胆管癌细胞在缺氧微环境中能够快速增殖、侵袭和转移,超声靶向破坏微泡技术改变了肿瘤缺氧微环境。本研究旨在探讨超声靶向破坏载氧微泡技术对缺氧微环境下胆管癌细胞增殖、凋亡的影响。方法以DSPC+DPPE-MPEG 5000为外壳,通过机械振荡法制作载氧微泡,运用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧微环境。体外培养胆管癌细胞株QBC939和RBE,通过超声靶向破坏载氧微泡技术改变胆管癌生存的缺氧微环境,噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。结果通过DSPC+DPPE5000的机械振荡法能够制作出平均粒径为1.91μm和载氧浓度为(2.57±0.82)×10-3 mg/mL的载氧微泡,QBC939和RBE细胞在CoCl2模拟缺氧微环境中能够快速生长,QBC939细胞对照组和CoCl2组A值分别为1.91±0.07和1.67±0.04,t=-7.855,P=0.001 4;RBE细胞对照组和CoCl2组A值分别为2.81±0.04和1.84±0.04,t=-30.514,P=0.000 1,差异均有统计学意义。但相比于缺氧组细胞,实验组胆管癌细胞生长明显受到抑制(均P〈0.05),凋亡率上升(均P〈0.05),且具有剂量依赖性。细胞周期分析缺氧组S期细胞比例明显升高,增殖指数PI明显升高,差异具有统计学意义(均P〈0.05),但缺氧组与微泡组间差异无统计学意义。结论胆管癌细胞能够在缺氧微环境下快速生长,而超声靶向破坏载氧微泡能够纠正细胞的缺氧微环境,促进细胞凋亡,抑制胆管癌细胞增殖,但该作用不依赖于细胞周期的调控。 展开更多
关键词 载氧微泡 缺氧微环境 胆管癌细胞 细胞凋亡 细胞周期
沉默EZH2表达抑制胆管癌QBC939细胞增殖及其机制 被引量:1
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作者 梁珊凤 李春艳 +4 位作者 黎昭兰 邹鹏建 关心 韩晓容 何关生 《实用医学杂志》 北大核心 2017年第10期1584-1588,共5页
目的:探讨沉默EZH2基因表达对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及其机制。方法:设计并合成靶向EzH2的siRNA体外转染QBC939细胞,以实时荧光定量PCR和Western Blot法检测mRNA及蛋白表达水平,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖能力... 目的:探讨沉默EZH2基因表达对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及其机制。方法:设计并合成靶向EzH2的siRNA体外转染QBC939细胞,以实时荧光定量PCR和Western Blot法检测mRNA及蛋白表达水平,通过MTT法和平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老情况,以Western Blot法检测H3K27me3、P14ARF、P16INK4a、P53、P21、E2F1蛋白表达变化。结果:靶向siRNA可有效沉默EZH2表达,显著抑制细胞体外增殖能力。与对照组相比,实验组细胞G1/S期比值显著升高,出现G1期阻滞,而凋亡率未见明显差异;β-半乳糖苷酶染色阳性,呈衰老特征;衰老通路的P14ARF、P16INK4a、P53、P21蛋白表达上调,而H3K27me3、E2F1蛋白表达下调。结论:沉默EZH2表达可显著抑制QBC939细胞的体外增殖能力,其机制可能与调控衰老通路有关。 展开更多
关键词 EZH2基因 siRNA 胆管癌 细胞增殖 细胞衰老
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胆管细胞癌与不同分化程度肝细胞癌CEUS特征的对比研究 预览 被引量:2
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作者 杨伯文 廖锦堂 +1 位作者 王译斌 田婷 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2017年第5期713-717,共5页
目的比较肝内胆管细胞癌(ICC)和不同分化程度肝细胞癌(HCC)CEUS表现对ICC和不同分化程度HCC的鉴别诊断价值。方法回顾性分析经病理证实的34例ICC(ICC组)和136例不同分化程度的HCC患者高、中、低分化(HCC组)的常规超声及CEUS表现... 目的比较肝内胆管细胞癌(ICC)和不同分化程度肝细胞癌(HCC)CEUS表现对ICC和不同分化程度HCC的鉴别诊断价值。方法回顾性分析经病理证实的34例ICC(ICC组)和136例不同分化程度的HCC患者高、中、低分化(HCC组)的常规超声及CEUS表现,并评价CEUS始退时间对ICC的诊断效能。结果 ICC组在门静脉早期开始消退的比例(24/34,70.59%)均高于各HCC组,在门静脉中期开始消退的比例(0/34)和在门静脉晚期/延迟期开始消退的比例(4/34,11.76%)均低于中、高分化HCC组,差异均有统计学意义(P均〈0.008)。低分化HCC组在门静脉中期开始消退的比例(16/41,39.02%)高于高分化HCC组(P〈0.008)。CEUS诊断ICC的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率、阳性似然比及阴性似然比分别为82.35%(28/34)、91.18%(124/136)、70.00%(28/40)、95.38%(124/130)、89.41%(152/170)、9.4、0.2。ICC及低、中、高分化HCC组病灶CEUS始增时间分别为(13.03±3.49)s、(13.80±3.04)s、(14.89±4.12)s、(16.00±3.38)s,差异有统计学意义(F=4.369,P〈0.05),ICC组始增时间早于高分化HCC组(P〈0.05)。结论不同分化程度HCC和ICC的CEUS表现存在差异,CEUS对其鉴别诊断有一定的参考价值。 展开更多
关键词 胆管癌 肝细胞 超声检查 造影剂 细胞分化
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Akt通过磷酸化p27诱导胆管癌细胞生长 预览
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作者 王锋 胡启立 +7 位作者 李健 赵严 刘华 汤茂春 夏小俊 孟宏波 宋振顺 徐晓蓉 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期268-273,共6页
目的探讨Akt和p27蛋白控制胆管癌细胞生长的分子机制。方法利用突变载体、突变失活载体以及位点突变基因的转染技术,流式细胞仪检测PI3K、转染各类载体对胆管癌细胞周期的影响,免疫印迹、免疫荧光检测PI3K抑制剂、转染各类载体对P27蛋... 目的探讨Akt和p27蛋白控制胆管癌细胞生长的分子机制。方法利用突变载体、突变失活载体以及位点突变基因的转染技术,流式细胞仪检测PI3K、转染各类载体对胆管癌细胞周期的影响,免疫印迹、免疫荧光检测PI3K抑制剂、转染各类载体对P27蛋白表达及分布的影响。结果 PI3K抑制剂LY294002引起胆管癌细胞株G1期细胞周期阻滞,并引起p27蛋白入核;Akt能通过诱导p27蛋白出细胞核而解除LY294002的G1期细胞周期阻滞;Akt通过磷酸化野生型p27蛋白第157位苏氨酸逆转细胞周期阻滞。结论 Akt通过磷酸化p27第157位苏氨酸来诱导p27细胞内重定位于细胞质,促进胆管癌细胞的生长。 展开更多
关键词 胆管癌 P27 AKT 磷酸化 细胞周期
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HMGA2 siRNA对胆管癌RBE细胞生物学行为的影响 预览
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作者 修鹏 王贵阳 +2 位作者 辛诚 高建新 李可为 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第22期27-29,共3页
目的观察HMGA2 siRNA对胆管癌RBE细胞生物学行为的影响。方法将常规培养的胆管癌RBE细胞分为观察组和对照组,每组6个复孔。观察组加入HMGA2 siRNA,对照组加入空白对照siRNA。采用CCK8法计算两组增殖速率。采用流式细胞术检测两组细胞凋... 目的观察HMGA2 siRNA对胆管癌RBE细胞生物学行为的影响。方法将常规培养的胆管癌RBE细胞分为观察组和对照组,每组6个复孔。观察组加入HMGA2 siRNA,对照组加入空白对照siRNA。采用CCK8法计算两组增殖速率。采用流式细胞术检测两组细胞凋亡率。采用细胞迁移实验检测两组细胞迁移能力。采用流式细胞数检测两组细胞周期分布。结果 ①细胞增殖速率:观察组、对照组细胞增殖速率分别为0.30±0.01、0.49±0.03观察组低于对照组,P〈0.05。②细胞凋亡率:观察组、对照组早期凋亡率分别为18.71%±0.61%、11.90%±1.01%,总凋亡率分别为25.73%±0.19%、18.66%±0.97%,观察组早期、总凋亡率均高于对照组,P均〈0.05。③细胞迁移能力:观察组、对照组穿膜细胞数分别为15.0±0.6、40.7±1.5,观察组低于对照组(P〈0.05)。④细胞周期分布:观察组、对照组S期细胞比例分别为35.34%±1.95%、23.82%±0.95%,观察组高于对照组(P〈0.05)。结论 HMGA2 siRNA可以抑制胆管癌RBE细胞增殖和迁移、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期阻于S期。 展开更多
关键词 胆管癌 HMGA2 SIRNA 细胞增殖 细胞凋亡 细胞迁移 细胞周期
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沉默信息调节因子1对胆管癌细胞生物学特性的作用 被引量:3
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作者 廖婉玉 张斌 +4 位作者 方诚 杨燕 张舒 丁希伟 邹晓平 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期542-548,共7页
目的了解沉默信息调节因子1(SIRT1)在胆管癌细胞中的表达水平,探讨其对胆管癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR和Western印迹法比较人胆管癌细胞QBC939和HuCCT1与正常胆管上皮细胞HIBEpiC中SIRT1 mRNA和蛋白的... 目的了解沉默信息调节因子1(SIRT1)在胆管癌细胞中的表达水平,探讨其对胆管癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR和Western印迹法比较人胆管癌细胞QBC939和HuCCT1与正常胆管上皮细胞HIBEpiC中SIRT1 mRNA和蛋白的表达。将QBC939和HuCCT1分成阴性对照组、转染序列1组和转染序列2组,分别转染阴性对照小干扰RNA、针对SIRT1的小干扰RNA序列1和小干扰RNA序列2,采用实时定量PCR和Western印迹法鉴定干扰效果。转染后应用细胞计数试剂盒和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。采用Western印迹法检测凋亡相关蛋白生存素、B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax)基因、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP),以及上皮标志物上皮型钙黏蛋白和间质标志物神经型钙黏蛋白、波形蛋白的表达情况。统计学处理采用t检验。结果胆管癌细胞QBC939和HuCCT1中SIRT1的mRNA表达水平分别比正常胆管上皮细胞HIBEpiC升高(3.30±0.43)和(4.55±0.50)倍,差异均有统计学意义(t=7.29、9.79,P均〈0.05);胆管癌细胞中SIRT1的蛋白表达水平升高与mRNA相似。转染SIRT1小干扰RNA后,胆管癌细胞中sIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著降低。HuCCT1细胞的转染序列1组和转染序列2组的细胞生存率在转染后72h分别为(19.72±1.39)%和(27.48±2.67)%,均低于阴性对照组的(84.65±3.18)%,差异均有统计学意义(t=37.42、27.54,P均〈0.05);HuCCT1细胞中转染序列1组和转染序列2组早期凋亡细胞比例分别为(19.43±1.72)%和(19.80±0.86)%,均高于阴性对照组的(5.43±0.31)%,差异均有统计学意义(t=11.30、22.23,P均〈0.05);HuCCT1细胞中转染序列1组和转染序列2组24h穿过微孔膜的细胞� 展开更多
关键词 胆管上皮癌 沉默信息调节因子-1 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞运动
过表达核心蛋白聚糖基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响 被引量:2
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作者 王伟林 余翔 +5 位作者 李泉 毛永欢 沈佳佳 骆霞岗 闻浩 喻春钊 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期69-71,共3页
目的 观察过表达核心蛋白聚糖(DCN)基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Westernblot检测DCN蛋白的表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DC... 目的 观察过表达核心蛋白聚糖(DCN)基因对胆管癌细胞周期及凋亡的影响.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-DCN和空载体pEGFP-N1转入人胆管癌细胞株QBC939,Westernblot检测DCN蛋白的表达,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DCN mRNA的表达,克隆形成实验计算克隆形成率,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果 RT-qPCR示过表达DCN相对空载体上调32.34倍;Western blot结果示过表达组DCN上调2.00倍.pEGFP-DCN转染组细胞克隆形成数[(210.9±19.3)个]显著低于空质粒转染组[(608.7±56.3)个],差异有统计学意义(P<0.05).转染pEGFP-DCN细胞与空载体比较,细胞增殖能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞周期检测显示,胆管癌细胞转染pEGFP-DCN后G1~ Go期细胞比例明显升高,而G2~S期细胞减少,细胞周期被阻滞在G1~Go期,凋亡分析转染pEGFP-DCN的QBC939细胞较转染空载体细胞凋亡显著增加,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3明显增高,而B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平明显降低(0.787±0.068比1.276±0.157).结论 转染DCN能够显著抑制胆管癌细胞的增殖,明显促进胆管癌细胞凋亡,而DCN促进胆管细胞凋亡与上调Caspase-3和下调bcl-2蛋白相关. 展开更多
关键词 胆管癌 核心蛋白聚糖 细胞周期 脱噬作用
Prognostic role of neutrophil-lymphocyte ratio in operable esophageal squamous cell carcinoma
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作者 Hao Duan Xu Zhang +9 位作者 Fei-Xiang Wang Mu-Yan Cai Guo-Wei Ma Hong Yang Jian-Hua Fu Zi-Hui Tan Yu-Qi Meng Xia-Yu Fu Qi-Long Ma Peng Lin 《世界胃肠病学杂志:英文版(电子版)》 SCIE CAS 2015年第18期5591-5597,共7页
AIM: To determine the prognostic significance of preoperative serum neutrophil-lymphocyte ratio(NLR) in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC).METHODS: Data from 371 eligible patients with ESCC who had undergone sur... AIM: To determine the prognostic significance of preoperative serum neutrophil-lymphocyte ratio(NLR) in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC).METHODS: Data from 371 eligible patients with ESCC who had undergone surgery with curative intent at our institution between October 2000 and May 2007 were retrospectively recruited for analysis. The cutoff value of NLR was 3.0 as determined by the receiver operating characteristic curve, which discriminated between survival and death; the area under the curve was 0.709, and the sensitivity and specificity were 66.1% and 69.1%, respectively, at the cutoff point. The correlation between the NLR and clinicopathological characteristics was analyzed using a χ2 test. The prognostic influence of the NLR and other clinicopathological factors on cancer-specific survival(CSS) and recurrence-free survival(RFS) was studied using the Kaplan-Meier method. To evaluate the independent prognostic value of NLR, multivariate Cox regression models were applied.RESULTS:The median age of the patients was 57.0years,and 276/371(74.4%)patients were male.The NLR was≤3.0 in 80.1%(297/371)of the patients,and the remaining 19.9%(74/371)had an NLR>3.0.Median postoperative follow-up was 66.0 mo[interquartile range(IQR):49.0-76.0 mo],with a follow-up rate of 94%.Follow-up was not significantly different between patients with an NLR≤and>3.0(63.13±1.64 vs 61.52±3.66,P=0.711).However,higher preoperative serum NLR was associated with significantly increased risks of higher pathological tumor status(P=0.007).A significant,independent association between high preoperative serum NLR and poor clinical outcome was identified in a multivariate analysis for CSS(HR=1.591;P=0.007)and RFS(HR=1.525;P=0.013).Moreover,when patients were stratified by pathological tumor-node-metastasis(TNM)staging,the adverse effects of preoperative serum NLR on CSS(HR=2.294;P=0.008)and RFS(HR=2.273;P=0.008)were greatest in those patients with stageⅢA disease.CONCLUSION:Preoperative serum NLR is a useful prognostic marker to c 展开更多
关键词 Esophageal SQUAMOUS cell carcinoma Neutrophil-lymphocyte RATIO Prognosis Radical ESOPHAGECTOMY
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十字孢碱对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响
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作者 何政 郑军 《医药导报》 CAS 北大核心 2014年第10期1314-1318,共5页
目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制药十字孢碱(STS)对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测STS对QBC-939细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察STS对QBC-939细胞超微结构的影响;流式细胞术检... 目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制药十字孢碱(STS)对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测STS对QBC-939细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察STS对QBC-939细胞超微结构的影响;流式细胞术检测STS对QBC-939细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白质印迹法检测STS对QBC-939细胞周期蛋白cyclin B1、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdk1)和磷酸化周期蛋白依赖性激酶(p-Cdk1)表达的影响。结果 STS能显著抑制QBC-939细胞的增殖(P〈0.05),抑制作用呈浓度依赖性,对QBC-939细胞的半数抑制浓度(IC50)24 h为334 nmol·L^-1,48 h为118 nmol·L^-1。透射电镜观察发现,STS能诱导QBC-939细胞出现典型的凋亡小体。Annexin V-FITC/PI双标法检测0,12,24和48 h凋亡率分别为(10.16±4.52)%,(22.35±2.19)%,(34.27±2.30)%和(59.70±5.97)%。流式细胞术检测发现,与对照组相比,STS可显著诱导QBC-939细胞凋亡率增加(P〈0.05),并引起G0/G1期细胞比例减少,而G2/M期细胞比例增加(P〈0.05)。蛋白质印迹法检测发现,经STS处理后的QBC-939细胞cyclin B1和Cdk1蛋白表达明显降低(P〈0.05),而p-Cdk1蛋白表达则明显增加(P〈0.05)。结论 STS可显著抑制人胆管癌QBC-939细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制QBC-939细胞生长并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 十字孢碱 蛋白激酶C抑制药 胆管癌 细胞周期 凋亡 QBC-939细胞
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抑制Dicer基因对胆管癌细胞株TFK-1增殖、迁移和侵袭的影响 被引量:1
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作者 田礼 承文龙 陈勇军 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期524-527,共4页
目的 探讨抑制Dicer基因后对胆管癌细胞株TFK-1增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 设计合成针对Dicer基因的RNAi序列,应用脂质体介导方法转染至胆管癌细胞株TFK-1,实时PCR与蛋白印迹检测Dicer表达,CCK8法、划痕实验和Transwell实验检测... 目的 探讨抑制Dicer基因后对胆管癌细胞株TFK-1增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 设计合成针对Dicer基因的RNAi序列,应用脂质体介导方法转染至胆管癌细胞株TFK-1,实时PCR与蛋白印迹检测Dicer表达,CCK8法、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染Dicer-siRNA组的Dicer基因mRNA水平在转染后48 h明显降低(P<0.01);蛋白水平在96 h明显降低(P<0.01);转染Dicer-siRNA序列组的细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强.结论 抑制Dicer基因在胆管癌细胞TFK-1中的表达能够增强细胞的增殖、迁移和侵袭能力. 展开更多
关键词 胆管癌细胞 增殖 迁移 侵袭
异硫氰酸苯乙酯诱导胆管癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的实验研究 预览 被引量:1
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作者 尹小斌 王伟 +1 位作者 李奇为 王坚 《中国现代普通外科进展》 CAS 2013年第7期505-508,共4页
目的:探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对人胆管癌QBC-939细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:PEITC处理QBC-939细胞后,采用MTT法检测细胞活力;运用流式细胞技术检测细胞凋亡率;Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态;使用... 目的:探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对人胆管癌QBC-939细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:PEITC处理QBC-939细胞后,采用MTT法检测细胞活力;运用流式细胞技术检测细胞凋亡率;Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态;使用流式细胞技术检测细胞周期。设置对照组:加入和药物等体积的DMSO。结果:20、30、40、50μmol/L的PEITC作用于QBC-939细胞24h后,细胞活力分别为(88.07±2.40)%、(68.02±4.04)%、(52.57±1.91)%、(36.37±3.42)%,较对照组明显降低(P〈O.05);30μmol/L的PEITC处理QBC-939细胞12、18、24、48h后,细胞活力分别为(90.74±2.96)%、(78.22%±4.85)%、(69.67±4.58)%、(40.48±2.59)%,较对照组明显降低(P〈0.05)。QBC-939细胞经30μmol/L和50umol/L的PEITC作用处理24h后,细胞凋亡率分别为(30.51±2.77)%、(58.62±3.75)%,较对照组显著升高(P〈0.05);GJM期的细胞比例从(5.06±1.86)%上升到(16.96±2.71)%、(26.68±1.85)%,差异有统计学意义(P〈O.05)。结论:PEITC可通过诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞而发挥抗胆管癌作用,并具有时间-剂量依赖性。 展开更多
关键词 异硫氰酸苯乙酯 胆管癌 细胞凋亡 细胞周期
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